Caracterizacin e identificacin de microorganismos mediante

tcnicas moleculares
1. Antecedentes
La caracterizacin de los microorganismos supone un notable avance en seguridad microbiolgica del
proceso industrial tanto en la Industria Alimentaria como en Biofarmacologa y Salud Pblica, ya que
permite establecer la fuente de contaminacin de una forma mucho ms precisa y por tanto identificar
las cepas implicadas y establecer su trazabilidad.
Los mtodos moleculares de caracterizacin basados en la amplificacin de fragmentos repetidos no
codificantes (REP-PCR) mediante una tcnica automatizada, constituyen un mtodo rpido, fiable y
sencillo de genotipado molecular de cepas bacteriana y fngicas. La capacidad de identificar los
microorganismos a nivel de cepa y al mismo tiempo establecer un anlisis comparativo de las diferentes
cepas analizadas constituye un notable ahorro de tiempo para identificar el potencial contaminante
alimentario y por tanto erradicar el foco contaminante.

2. Metodologa
Aislamiento e identificacin del microorganismo a nivel de
familia y/o gnero
Extraccin del ADN bacteriano mediante lisis trmica de los
microorganismos, detergentes y lisis mecnica en una solucin
de microesferas. Unin del ADN a filtros de slica, lavado y
elucin en tampn Tris.
Lectura espectrofotomtrica del ADN a una longitud de onda
de 260 y 280 nm para su cuantificacin. Ajuste del ADN a una
concentracin de 25 ng/l.
REP-PCR Amplificacin de fragmentos repetidos de regiones no
codificantes del genoma del microorganismo.
Deteccin de los amplicones mediante un bioanalizador
(2100 Bioanalyzer. Agilent) y el uso de un chip con una matriz
de microfluidos.
Interpretacin de los resultados mediante un
software de anlisis va web (Diversilab System v.3)

potente

Tipificacin:
permite
el
anlisis
comparativo entre cepas para ver similitudes
y diferencias.

Clasificacin: identificacin de las cepas mediante

la comparacin de los perfiles genticos con una
base de datos.

Aplicaciones:
Estudios epidemiolgicos
Trazabilidad de patgenos y alterantes en la
cadena alimentaria.
Autentificacin de microorganismos de inters
(cultivos iniciadores, fermentos, probiticos)

Aplicaciones:
Confirmacin de resultados analticos.
Identificacin de serotipos (Salmonella, Listeria
monocytogenes)
Identificacin de especies microbianas.

3. Plazo de entrega
El plazo de entrega de resultados es de forma habitual de 10 das. No obstante, existe la posibilidad de
realizar la analtica mediante un servicio de urgencia de forma que los resultados estaran en un plazo de
24 h.

4. Otras tcnicas
Ainia dispone de diversas metodologas para el anlisis de las cepas de Salmonella. Entre ellas podemos
citar:
1. Dispone de un servicio de identificacin de microorganismos mediante PCR- secuenciacin. No
obstante, debido a que el poder de discriminacin a nivel de serotipo es menor que la REP-PCR
su aplicacin fundamental es la identificacin de microorganismos a nivel de especie.
2.

Electroforesis en campo pulsado (PFGE). Dicha tcnica se considera el mtodo de referencia en

la tipificacin de microorganismos. No obstante, debido a su mayor laboriosidad y complejidad
hace que utilicemos dicha tcnica como mtodo de confirmacin de perfiles genticos dudosos.