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RESUMEN
El antagonismo entre microorganismos mediado por
antibiosis, es un fenmeno ampliamente registrado en la
literatura cientfica. En los organismos sensibles sus efectos
generalmente se estudian a nivel celular, y resultan en la
formacin de halos de inhibicin de crecimiento, pero, rara
vez, se estudian cambios generales en las colonias. Este
estudio utiliz anlisis de imgenes para detectar variaciones
morfolgicas en las colonias de la bacteria Bacillus mycoides,
enfrentadas a otros aislamientos productores de antibiosis.
Los resultados indicaron diferencias significativas en
patrones de crecimiento de colonias de B. mycoides,
cuando se enfrent a diferentes aislamientos bacterianos
productores de antibiosis. Esos cambios no siempre
fueron paralelos a los observados en las reas de la zona
de inhibicin. Estos resultados sugieren que la medicin
tradicional de halos de inhibicin pueden subestimar las
diferencias entre aislamientos bacterianos para generar
antibiosis. As, como los mecanismos de respuesta en
los microorganismos antagonizados. Igualmente, el
anlisis de imgenes ofrece una herramienta sensible para
estudiar la naturaleza de relaciones antagnicas entre
microorganismos y, como apoyo a programas de bsqueda
de microorganismos cultivables eficientes.
ABSTRACT
BEYOND THE INHIBITION ZONE:
MORPHOLOGICAL VARIATIONS
QUANTIFICATION FOR IMAGE ANALYSES
IN ANTIBIOSES TESTS
The antagonism between microorganisms mediated by
antibioses is a widely reported phenomenon in scientific
literature. In sensitive organisms, its effects are generally
studied at a cellular level and result in the formation of
growth inhibition zones. However, the general changes
in the colonies are rarely studied. This study used image
analyses to detect morphological variations in the
Bacillus mycoides, bacteria colonies facing other isolations
producing antibioses. The results indicated significant
differences in growth patterns of B. mycoides, confronted
with other bacterial isolates producing antibioses. These
changes not always were parallel to those observed in the
inhibition zone. These results suggest that the traditional
measurement of inhibition zones might overlook the
differences between bacterial isolates to generate antibioses
as well as the response of mechanisms in antagonized
microorganisms. Similarly, image analysis offers a sensitive
tool for the study of the nature of antagonic relations
between microorganisms and serves as a support for
programs searching efficient cultivable microorganisms.
Est investigacin se benefici con la participacin de Elizabeth Meneses, Marcela Ramrez y Vernica Ypez, quienes prestaron ayuda durante
el desarrollo de esta investigacin y la correccin de este manuscrito.
INTRODUCCIN
La competencia entre microorganismos del
suelo, mediada por antibiosis es un fenmeno
bien establecido. La presencia de antibiosis entre
microorganismos tradicionalmente se evala en
pruebas in vitro, que han sido clave para el desarrollo
de bioproductos que controlan patgenos de plantas
y animales (Cook & Baker, 1983). Un criterio comn
para la seleccin de microorganismos cultivables
productores de antibiticos se basa en la deteccin
de zonas de inhibicin de crecimiento de otros
microorganismos, pero se presta menos atencin
a las variaciones morfolgicas de las colonias de
los microorganismos sensibles en la prueba. Este
aspecto es importante, debido a que, las variaciones
morfolgicas de las colonias en varios tipos de
bacterias representan las estrategias de respuesta
global frente a la presencia de antibiosis (Ben-Jacob
& Cohen, 2000).
El suelo alberga mltiples especies de bacterias
y hongos productores de antibiticos (Dennis &
Webster 1971; Gottlieb 1976; Beer et al., 1990;
Haas & Keel 2003; McSpadden, 2004; Tsviya et al.,
2010). En las pruebas in vitro para detectar halos de
inhibicin entre dos microorganismos enfrentados,
los efectos sobre el microorganismo antagonizado se
han concentrado en el estudio de clulas expuestas
al antimicrobiano en la zona de inhibicin, y se han
identificado cambios en viabilidad, morfologa y
fisiologa de las clulas (Pastor & Cantn, 1999).
Sin embargo, una colonia puede responder en
forma concertada a la presencia de antibiticos y su
sensibilidad es diferente a la de clulas individuales
(Ben-Jacob & Cohen, 2000).
Este fenmeno se ha estudiando en varios tipos de
bacterias del gnero Bacillus que forman colonias
complejas. En esas colonias las clulas bacterianas
presentan mecanismos de comunicacin clula a
clula que, alteran la arquitectura general de la colonia
(Ibdem). Esa forma de la colonia representa una
respuesta concertada a cambios ambientales, y es
MATERIALES Y MTODOS
Aislamientos bacterianos
Se seleccionaron cuatro asilamientos de bacterias
productoras de antibiosis denominadas: T1, T2, T3 y
T4, y un aislamiento de Bacillus mycoides, de colecciones
de microorganismos obtenidas previamente de
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Anlisis estadstico
Los valores de dimensin fractal, densidad de
crecimiento, rea de la zona de inhibicin y parmetros
de textura, se sometieron a pruebas de distribucin y
homogeneidad de varianzas para probar los supuestos
del anlisis de varianza. Debido al no cumplimiento
de supuestos, los datos se sometieron a una prueba
no paramtrica de Kruskall-Wallis. Adicionalmente
se estimaron valores de error estandar para los
promedios de cada tratamiento como medida de
Figura 1.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Las reas de las zonas de inhibicin y los patrones de
crecimiento de B. mycoides, a los nueve das y a las 12
h (Figura 1), respectivamente, variaron dependiendo
del aislamiento bacteriano productor de antibiosis.
La mayor inhibicin del crecimiento de B. mycoides,
se present con el aislamiento T4 y la menor con el
aislamiento T3. Los aislamientos T1 y T2, presentaron
zonas de inhibicin similares entre ellos, e intermedias
a las de T3 y T4 (Figura 2).
Secciones de la imagen de la colonia de B. mycoides que se tomaron para anlisis a las 12 h (izquierda) y
10 das (derecha) de crecimiento.
Figura 2.
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Las zonas de inhibicin se midieron nueve das despus del inicio de la prueba. Los patrones de crecimiento se estimaron
en fotografas digitales 12 h despus de iniciada la prueba. En los anlisis de dimensin fractal y densidad para el
aislamiento T4 solo se incluyeron dos repeticiones ya que el crecimiento de B. mycoides fue completamente inhibido en
las otra dos repeticiones. Los valores no se incluyeron en el anlisis estadstico.
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Figura 3.
Para el aislamiento T4 solo se incluyeron dos repeticiones ya que el crecimiento de B. mycoides fue
completamente inhibido. Los valores no se incluyeron en el anlisis estadstico.
Figura 4.
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Aspecto general del crecimiento de B. mycoides, hacia la zona de inhibicin segn el aislamiento bacteriano
enfrentado (de izquierda a derecha aislamientos T1 a T4).
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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Abrmoff, M. D., Magalhaes, P. J. (2004). Image processing with ImageJ. In: Biophotonics international, No. 11 (7). pp.
36-43.
Barry, D., McGee, S. (2009). Relating fractal dimension to branching behaviour in filamentous microorganisms. In:
ISAST Transactions on Electronics and Signal Processing, No. 4 (1). pp. 71-76.
Beer, A., Smith, R. S. (2009). Paenibacillus dendritiformis bacterial colony growth depends on surfactant but not on
bacterial motion. In: Journal of bacteriology, No. 191 (18) p. 5758.
Ben-Jacob, E., Cohen, I. (2000). Bacterial cooperative organization under antibiotic stress. In: Physica A, No. 282
(1-2). pp. 247-282.
Boddy, L., Wells, J. M. (1999). Fractal analysis in studies of mycelium in soil. In: Geoderma, No. 88 (3-4). pp. 301-328.
Bolton, R. G. & Boddy, L. (1993). Characterization of the spatial aspects of foraging mycelial cord systems using
fractal geometry. In: Mycological research, No. 97 (6). pp. 762-768.
Castrilln, W. S. (2011). Efecto del subcultivo sucesivo de bacterias en el desempeo posterior en el suelo. Tesis para optar al ttulo
de Zootecnista, Departamento de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Colombia, Medelln.
Cook, R. J. & Baker, K. F. (1983). Nature and practice of biological control of plant pathogens. In: American
Phyopathological Society, ST. PAUL, MN (USA).
Dennis, C. & Webster, J. (1971). Antagonistic properties of species-groups of Trichoderma: I. Production of nonvolatile antibiotics. In: Transactions of the British Mycological Society, No. 57 (1) pp. 25-39.
Di Franco, C., Beccari, E., Santini, T., Pisaneschi, G., Tecce, G. (2002). Colony shape as a genetic trait in the patternforming Bacillus mycoides. In: BMC microbiology, No. 2. pp. 33-48.
Golinski, M. R., Boecklen, W. J. (2008). Two dimensional fractal growth properties of the filamentous fungus
Cryphonectria parasitica: the effects of hypovirus infection. In: Journal of Basic Microbiology, No. 48 (5). pp. 426-429.
Gottlieb, D. (1976). The production and role of antibiotics in soil. In: The Journal of antibiotics, No. 29 (10). p. 987.
Haas, D. & Keel, C. (2003). Regulation of antibiotic production in root-colonizing Pseudomonas spp. and relevance for
biological control of plant disease. In: Annual review of phytopathology, No. 41 (1). pp. 117-153.
Haralick, R. M., Shanmugam, K. (1973). Textural features for image classification. In: Man and Cybernetics, No. 3 (6).
pp. 610-621.
Hernndez, F. & Rodrguez, E. (1993). El fenmeno de swarming y otros tipos de desplazamiento bacteriano.
En: Revista Costarricense de Ciencias Mdicas, No. 14. pp. 45-51.
Karperien, A. (1999-2007). FracLac for ImageJ, version 2.5. En: http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/fraclac/FLHelp/
Introduction.htm [consultado el 7 de junio de 2011].
McSpadden Gardener, B. B. (2004). Ecology of Bacillus and Paenibacillus spp. in agricultural systems. In: Phytopathology,
No. 94 (11). pp. 1252-1258.
16
Muoz, L. M. (2010). Desempeo relativo de microorganismos en diferentes suelos y costo metablico de la produccin de antibiticos. Tesis
para optar al ttulo de Ingeniera Biolgica, Departamento de Biologa, Universidad Nacional de Colombia, Medelln.
Pastor, A. & Cantn, E. (1999). Interacciones de las bacterias y el antimicrobiano durante la fase de efecto postantibitico. Revista
Espaola de Quimioterapia Vol.12 No. 4 . En lnea. http://www.seq.es/seq/html/revista_seq/0499/revista.html.
Sirota-Madi, A., Olender, T. (2010). Genome sequence of the pattern forming Paenibacillus vortex bacterium reveals
potential for thriving in complex environments. In: BMC Genomics, No. 11. pp. 710-726
Smith, D. J., Earl, A. J. (1990). The multifunctional peptide synthetase performing the first step of penicillin biosynthesis
in Penicillium chrysogenum is a 421,073 dalton protein similar to Bacillus brevis peptide antibiotic synthetases. In: The
EMBO Journal, No. 9 (9). p. 2743.
Thomas, C. R. & Paul, G. C. (1996). Applications of image analysis in cell technology. In: Current Opinion in Biotechnology,
No. 7 (1) pp. 35-45.