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FACULTAD DE SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

FISIOLOGICAS

Fecha: 01-04-2014
Plan: 3647 Bacteriologa y
Laboratorio Clnico

PRCTICA DE LABORATORIO N
2

Martha Solrzano

Enzimologa: Parte 1

Gustavo Estrada. 1341850

PROCEDIMIENTO
Se prepararon distintas soluciones con base en los patrones descritos en las
Tablas 1 y 2 para evidenciar la influencia que tienen la temperatura y el cambio
de pH en la enzima Fosfatasa alcalina (FAL)
1) Efecto de la temperatura
- Se prepararon las soluciones segn los datos que suministra la Tabla 1.
- Antes de adicionar la enzima, se incubaron los tubos con los otros reactivos
por ms de 3 minutos en las diferentes temperaturas.
- Culminado el tiempo de incubacin, se agreg 0.1mL de la enzima a cada
tubo (con una diferencia de 3 minutos entre cada tubo) y rpidamente se
registr su Absorbancia.
- Los datos observados en la Tabla 1, corresponden a los registros obtenidos
por el Grupo 1 de la prctica, puesto que fueron los datos que ms se ajustaron
a los datos tericos reportados en el momento.
Tabla 1. Datos de preparacin de las distintas soluciones y de las absorbancias
registradas, influenciadas por las distintas temperaturas de tratamiento.
TUBO (ml)
SOLUCIN
Buffer B. pH 9.6
Agua destilada
p-NF 2.0mM
Temperatura C
Ex Enzima FAL
Absorbancia

Blanc
o
0.3
2.7
------25C
0.1

0.3
2.4
0.3
4C
0.1
0.15
4

0.3
2.4
0.3
30C
0.1
0.18
5

0.3
2.4
0.3
37C
0.1
0.23
2

0.3
2.4
0.3
50C
0.1
0.06
5

5
0.3
2.4
0.3
100C
0.1
0.091

1) Efecto del pH
- Se prepararon las soluciones segn los datos que suministra la Tabla 2.
- Antes de adicionar la enzima, se incubaron los tubos con los otros reactivos por
ms de 3 minutos a 37C.
- Culminado el tiempo de incubacin, se agreg 0.1mL de la enzima a cada tubo
(con una diferencia de 3 minutos entre cada tubo) y rpidamente se registr su
Absorbancia.
- Los datos observados en la Tabla 2, corresponden a los registros obtenidos por
el Grupo 5 (Nuestro grupo) de la prctica, puesto que fueron los datos que ms se
ajustaron a los datos tericos reportados en el momento.
Tabla 2. Datos de preparacin de las distintas soluciones y de las absorbancias
registradas, influenciadas por los distintos valores de pH.

SOLUCIN
Buffer 0.3 mL
Agua destilada
p-NF 2.0mM
Enzima FAL
Absorbancia

TUBO (ml)
1
pH
3.4
2.4
0.3
0.1
0.026

2
pH
7.0
2.4
0.3
0.1
0.044

3
pH
9.2
2.4
0.3
0.1
0.087

4
pH 9.6
2.4
0.3
0.1
0.092

5
pH
10.4
2.4
0.3
0.1
0.076

6
pH
10.8
2.4
0.3
0.1
0.065

CONCLUSIONES

La grafica No. 1 presenta un comportamiento bastante extrao que puede


deberse a errores personales o de manejo de instrumentacin. A pesar de
ello en la grfica se puede evidenciar que la temperatura ptima para el
funcionamiento de la enzima es 37C, pues a temperaturas extremas como
4C y 100C la enzima esta desnaturalizada y no puede cumplir su funcin.
Por otro lado se puede analizar que la temperatura optima del
funcionamiento de la enzima corresponde a nuestra temperatura corporal,
lo que tiene mucho sentido cuando se piensa en que la actividad enzimtica

en nuestro cuerpo debe ser optima, de no ser as, el ser humano puede
presentar mltiples fallas en su organismo.

La grafica No. 2 presenta un comportamiento curvilneo caracterstico de la


enzima fosfatasa alcalina, aunque se deben tener en cuenta posibles
errores personales o de manejo de instrumentacin. Sin embargo, se
observ que el pH ptimo en el cual la enzima desempea de mejor
manera sus funciones es pH 9.6, por lo tanto, a valores de pH por debajo o
por encima de este valor, la funcin de la enzima se ve disminuida.
Por otro lado, tiene relacin el pH obtenido con el sitio donde se encuentra
la enzima, ya que al ser una fosfatasa alcalina se espera que se encuentre
en un medio que determine un rango de pH alcalino considerable. El pH
normal para todos los tejidos y fluidos en el cuerpo, excepto el estmago,
es alcalino. Las secreciones digestivas del hgado y su bilis estn entre 7.1
y 9.0. La bilis de la vescula est entre 5.0 y 7.7. Si cualquiera de estos
sistemas de pH no est en el rango ptimo, las enzimas digestivas y
metablicas en esas reas y rganos funcionarn bajo nivel ptimo y se
experimentar una baja en la salud. Con la excepcin de la sangre, todos
estos sistemas tienen un vasto rango de pH, en parte, para que puedan
cambiar el pH para mantener el balance en el pH de la sangre, que debe
mantenerse entre 7.35 y 7.45. [1]
Por tal razn, La fosfatasa alcalina es una hidrolasa con muy poca
especificidad de sustrato y se encuentra presente en casi todos los tejidos
del cuerpo, especialmente, en epitelio intestinal, tbulos renales, hueso,
hgado y placenta. Su localizacin celular es la membrana. Los individuos
de los grupos sanguneos B y O secretores tienen la isoenzima intestinal
aumentado en sus sueros. [2]

BIBLIOGRAFA
[1] http://www.holadoctorfeldman.com.ar/dietaalcalina.html
[2] http://www.infobioquimica.com/wrapper/CDInterpretacion/te/bc/194.htm

ANEXOS

Grafica 1. Absorbancia vs Temperatura

Grafica 2. Absorbancia vs pH