CENTRO UNIVERSITRIO FRANCISCANO

PR-REITORIA DE PS-GRADUAO, PESQUISA E EXTENSO

REA DE CINCIAS TECNOLGICAS
Curso de Mestrado em Nanocincias

VALNIR DE PAULA

BIODISTRIBUIO DE NANOPARTCULAS MAGNTICAS

UTILIZANDO CAMPO MAGNTICO EM RATOS

Santa Maria, RS
2011

ii

VALNIR DE PAULA

BIODISTRIBUIO DE NANOPARTCULAS MAGNTICAS

UTILIZANDO CAMPO MAGNTICO EM RATOS

Dissertao

de

Mestrado,

apresentada

ao

Programa de Ps-Graduao em Nanocincias

do Centro Universitrio de Santa Maria, como
requisito parcial para obteno do ttulo de
Mestre em Nanocincias.
Orientadora: Profa Dr SOLANGE BINOTTO FAGAN
Co-orientadora: Profa Dr SOLANGE C. S. M. HOELZEL

Santa Maria, RS
2011

iii

P324b

Paula, Valnir de
Biodistribuio de nanopartculas magnticas utilizando
campo magntico em ratos / Valnir de Paula ; orientao
Solange Binotto Fagan ; co-orientao Solange C. S. M.
Hoelzel Santa Maria : Centro Universitrio Franciscano,
2011.
62 f. : il.
Dissertao (Mestrado em Nanocincias) Centro
Universitrio Franciscano, 2011
1. Ressonncia magntica nuclear 2. Agentes de contraste
3. Sistema fagocitrio I. Fagan, Solange Binotto
II. Hoelzel,Solange C. S. M. III. Ttulo

CDU 537.635:62-181.4

iv

AGRADECIMENTOS

Acima de tudo, agradeo fervorosamente a Deus, por me abenoar com sade e

permitir que eu esteja inserido em um meio cientfico, cercado por profissionais de alto grau
de capacitao, dos quais me orgulho muito.
minha esposa Ana e aos meus filhos Isadora e Leonardo, que compreenderam e
me apoiaram em todos os momentos, inclusive naqueles em que a minha presena junto a eles
no era possvel, pelo inevitvel envolvimento com o trabalho.
Ao Dr Jos Knoll Palma, mdico radiologista do servio de radiologia do Hospital
de Caridade Dr Astrogildo de Azevedo, de Santa Maria que, ao incentivar o desenvolvimento
deste trabalho, permitiu que o equipamento de ressonncia magntica fosse utilizado e prestou
inestimvel auxlio ao participar da anlise das imagens.
minha amiga e colega de mestrado, Francine Rodrigues Ianiski, que por inmeras
vezes emprestou-me a sua experincia com cobaias para auxiliar na manipulao das mesmas
durante os experimentos.
Ao meu colega e amigo Jos Carlos Gama, que participou diretamente de todas as
etapas do experimento, prestando grande ajuda na obteno das imagens durante muitas
madrugadas, horrio em que o equipamento estava disponvel a este trabalho.
Ao professor Sergio Roberto Mortari, pelo apoio e caracterizao das amostras de
nanopartculas na Universidade Federal de Santa Maria.
Ao professor Luis Otvio de Souza Bulhes, pelo trabalho de caracterizao das
amostras de nanopartculas no Laboratrio de Nanocincias da Unifra.
professora Eliana Martins Lima, da Universidade Federal de Gois, pela
grandiosa contribuio, determinante para a viabilizao do trabalho, fornecendo as
nanopartculas magnticas utilizadas.
professora Solange Hoelzel, minha co-orientadora, pelo empenho despendido e
importantes orientaes prestadas do decorrer dos experimentos.
Finalmente, agradeo professora Solange Binotto Fagan, minha orientadora,
primeiramente pela proposio do tema e pelas valiosas orientaes, mas principalmente por
sua constante motivao na busca pelo conhecimento e desenvolvimento cientfico, que
transcende do seu perfil e afeta muito positivamente seus alunos.

vi

RESUMO
A utilizao de produtos de escala nanomtrica nas mais diversas reas, inclusive na
medicina, uma realidade crescente. As nanopartculas magnticas (NPMs), por serem
capazes de apresentar efeito expressivo de magnetizao quando expostas a um campo
magntico externo, tm sido foco de vrios estudos e, entre as suas aplicaes est o uso
como agente de contraste em imagens de ressonncia magntica nuclear. Esta tcnica fornece
imagens baseadas no comportamento nuclear dos tomos das estruturas anatmicas, as quais
podem ser melhor destacadas pelo uso de agentes de contraste. As NPMs representam uma
classe alternativa aos atuais agentes de contraste, paramagnticos, com vantagens do ponto de
vista fsico, pois destacam ainda mais o comportamento magntico dos prtons de diferentes
tecidos. Isto mais evidente no fgado, bao e sistema linftico, cujas clulas de defesa
endocitam estas NPMs, tornando o parnquima sadio escuro (hipossinal), de forma que
eventuais leses se sobressaeam nas imagens, facilitando a sua identificao.
O objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de contrastao dos rgos do sistema
fagocitrio, injetando-se doses de NPMs que variaram de 0,46 a 7,2 mg/Kg em ratos, por via
endovenosa caudal e submetendo-os a imageamento por ressonncia magntica nuclear. As
NPMs foram divididas em 2 grupos, ambos com ncleo de magnetita, variando-se o
revestimento, que no grupo 1 foi de dextrana e o do grupo 2, de cido olico. O efeito
desejado foi que os rgos do sistema fagocitrio apresentassem algum grau de perda de sinal
nas imagens, indicando que as NPMs foram internalizadas pelas clulas desses rgos. Com o
agente de contraste usual, paramagntico, que no entra nas clulas, o efeito de hiperssinal
no sistema vascular e em rgos hipervascularizados. Comparou-se as imagens obtidas de
sequncias T1 TSE e T2 TSE com as de controle, obtidas antes da injeo. Os resultados
obtidos evidenciaram que, tanto as NPMs revestidas com dextrana, quanto s revestidas com
cido olico causaram efeito de hipossinal nas imagens, que variaram de fraco a acentuado,
dependendo da dose administrada, principalmente em sequncias T2 TSE. As NPMs
revestidas com dextrana apresentaram maior eficincia, considerando que os efeitos de
hipossinal ocorreram com doses menores do que as revestidas com cido olico. Pode-se
concluir, considerando o evidente efeito de hipossinal apresentado pelos rgos do sistema
fagocitrio, que h potencial de aplicao destas NPMs como agente de contraste em estudos
de ressonncia magntica.
Palavras chave: Ressonncia magntica nuclear, agentes de contraste, sistema fagocitrio

vii

ABSTRACT
The use of nanoscale products in several areas, including medicine, is a growing
reality. The magnetic nanoparticles (MNPs) for being able to present a significant effect of
magnetization when exposed to an external magnetic field, have been the focus of several
studies, and among their applications is their use as contrast agent in magnetic resonance
images. This technique provides images based on the nuclear behavior of the atoms of
anatomical structures, which can be best highlighted by the use of contrast agents, usually
paramagnetic.
The MNPs represent an alternative to the current class of paramagnetic contrast agents
for nuclear magnetic resonance, used for a long time, with advantages from a physical point
of view, because they highlight even more the magnetic behavior of protons in different
tissues, especially liver, spleen and lymphatic system, whose defense cells endocyte these
MNPs, making healthy parenchyma dark (hyposignal), so that any injuries stand out in the
images, facilitating their identification.
This study has aimed to assess the contrast degree of the organs of the phagocyte
system, injecting NPMs doses ranging from 0.46 to 7.2 mg/kg in rats, by caudal intravenous
flow and subjecting them to nuclear magnetic resonance imaging. The MNPs was divided into
two groups, both with a core of magnetite, varying the coating, which has been dextran in
group 1, and oleic acid in group 2. The expected effect was that the organs of the phagocyte
system would have some degree of signal loss in the images, indicating that the NPMs were
internalized by the cells of these organs. With the usual contrast agent, paramagnetic, which
does not enter cells, the effect is the hypersignal in the vascular system and in
hypervascularized organs. We have compared the images obtained from T1 TSE and T2 TSE
sequences with the control obtained before injection.
The results have shown that both dextran coated MNPs and the ones coated with oleic
acid have caused the hyposignal effect in the images, ranging from weak to strong, depending
on the administered dose, especially in T2 TSE sequences. The dextran coated MNPs have
shown higher efficiency, considering that the hyposignal effects have occurred with lowers
doses, compared to the effects caused by NPMs coated with oleic acid. It can be concluded,
given the evident hyposignal effect presented by the organs of the phagocyte system, the
potential application of MNPs as a contrast agent in magnetic resonance studies.
Keywords: Magnetic resonance imaging, contrast agents, phagocyte system

viii

LISTA DE FIGURAS
Figura 1

Magneto em barra mostrando os polos norte e sul e suas linhas de campo.

Figura 2

Comportamento dos momentos magnticos dos tomos em materiais diversos.

Figura 3

Monodomnios magnticos em um material ferromagntico.

Figura 4

Grfico demonstrativo da curva de histerese dos materiais ferromagnticos e

superparamagnticos quando sujeitos a um campo externo H.

Figura 5

Estrutura espinlio inversa de magnetita.

Figura 6

Estrutura qumica da Dextrana.

Figura 7

Diagrama qualitativo relacionando o tempo de residncia no sangue com o

tamanho da partcula.

Figura 8

Gerao de um dipolo magntico a partir do prton do hidrognio.

Figura 9

Magnetizao resultante da aplicao de um campo magntico externo sobre

uma populao de ncleos de hidrognio.

Figura 10

Representao da curva de recuperao T1 e curva de declnio T2.

Figura 11

Corte axial do abdmen ao nvel heptico, de sequncia ponderada em T1.

Figura 12

Corte axial do abdmen ao nvel heptico, de sequncia ponderada em T2.

Figura 13

Esquema representando a localizao das bobinas de gradiente no interior do

equipamento de RM.

Figura 14

Utilizao de bobinas receptoras em exames de RM.

Figura 15

Imagens axiais comparativas, de seqncia T1 TSE, ao nvel do fgado, antes e

10 min ps injeo de 1,3mg/Kg de NPMs.

Figura 16

Imagens axiais comparativas, ao nvel do fgado, antes e 10 min aps a injeo

de 1,3 mg/Kg de NPMs.

Figura 17

Imagens em seqncia T2 TSE no plano coronal, antes e aps 10 min aps a

injeo de 1,3 mg/Kg de NPMs.

Figura 18

Imagens axiais comparativas em seqncia T2, ao nvel do fgado, antes e 10

min aps a injeo de 0,6 mg/Kg de NPMs.

Figura 19

Imagens axiais comparativas, do mesmo experimento, ao nvel do bao (setas).

Figura 20

Imagens axiais comparativas, ao nvel do fgado, 20 min aps a injeo de 0,6

mg/Kg de NPMs e 40 min aps a injeo.

Figura 21

Imagens axiais comparativas, ao nvel do fgado, sem agente de contraste e 10

min aps a injeo de 0,3 mg/Kg de NPMs .

ix

Figura 22

Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do fgado, sem agente de

contraste e 10 min aps a injeo de 1,3 mg/Kg de NPMs .

Figura 23

Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do bao, sem agente de contraste

e 10 min aps a injeo de 1,3 mg/Kg de NPMs .

Figura 24

Imagens comparativas em T2, no plano coronal, sem agente de contraste e 10

min aps a injeo de 1,3 mg/Kg de NPMs .

Figura 25

Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do fgado. A: sem agente de

contraste e B: 10 min aps a injeo de 2,6 mg/Kg de NPMs .

Figura 26

Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do bao, sem agente de contraste

e 10 min aps a injeo de 2,6 mg/Kg de NPMs

Figura 27

Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do fgado, sem agente de

contraste e 10 min aps a injeo de 2,6 mg/Kg de NPMs

Figura 28

Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do bao, sem agente de contraste

e 10 min aps a injeo de 2,6 mg/Kg de NPMs

Figura 29

Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do fgado, sem agente de

contraste e 10 min aps a injeo de 5,2 mg/Kg de NPMs

Figura 30

Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do bao, sem agente de contraste

e 10 min aps a injeo de 5,2 mg/Kg de NPMs

Figura 31

Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do fgado, sem agente de

contraste e 10 min aps a injeo de 5,2 mg/Kg de NPMs .

Figura 32

Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do bao, sem agente de contraste

e 10 min aps a injeo de 5,2 mg/Kg de NPMs .

LISTA DE ABREVIATURAS

IRM

Imagem

por ressonncia magntica

NP

Nanopartculas

NPMs

Nanopartculas magnticas

NPSPMs

Nanopartculas

PNS

Stimulation of peripheral nerves

RF

Radiofrequncia

RMN

Ressonncia magntica nuclear

SAR

Specific absortion rate

SMF

Sistema mononuclear fagocitrio

SPIO

Superparamagnetic Iron Oxide

SER

Sistema Reticuloendotelial

Tc

Temperatura de Curie

TE

Tempo de Eco

TR

Tempo de relaxao

TSE

Turbo spin eco

USPIO

Ultra small particle iron oxide

VME

Vetor de magnetizao efetiva

superparamagnticas

xi

LISTA DE TABELAS

Tabela 1

Classificao dos materiais quanto aos valores de susceptibilidade e

permeabilidade magnticas

Tabela 2:

Agentes de contraste baseados em NPMs, disponveis no mercado americano ou

em fase de estudo

Tabela 3:

Parmetros de aquisio e reconstruo das sequncias de imagens

Tabela 4:

Nveis de perda de sinal em fgado e bao em relao s doses injetadas de

NPMs revestidas com dextrana

Tabela 5:

Nveis de perda de sinal em fgado e bao em relao s doses injetadas de

NPMs revestidas com cido olico

xii

SUMRIO
1

INTRODUO.......................................................................................................... 1

REFERENCIAL TERICO....................................................................................... 4
2.1 Fundamentos do magnetismo............................................................................

2.2 Nanopartculas Magnticas (NPMs).................................................................. 10

2.2.1 Tcnicas de obteno de NPMs................................................................

11

2.2.2 Revestimentos........................................................................................... 12
2.2.3 Caracterizao das NPMs.........................................................................

14

2.2.4 Aplicaes das NPMs na medicina........................................................... 15

2.2.5 Mecanismos de interao biolgica.......................................................... 16
2.2.6 Toxicidade................................................................................................

18

2.2.7 Excreo celular........................................................................................ 19

2.3 Princpios Fsicos da Imagem por Ressonncia Magntica............................... 19
2.3.1 Relao do Hidrognio com um campo magntico externo.....................

20

2.3.2 Formao do contraste de imagem de RMN............................................

21

2.3.3 Localizao espacial e recepo do sinal de RF.......................................

24

2.3.4 Sequncias de pulso e tempos de repetio e de eco................................

25

2.3.5 Fatores de segurana em RMN................................................................. 26

2.4 Uso de Agentes de Contraste em Ressonncia Magntica................................

27

2.4.1 Agentes de contraste paramagnticos.......................................................

27

2.4.2 Agentes de contraste superparamagnticos..............................................

28

METODOLOGIA......................................................................................................

30

RESULTADOS E DISCUSSES.............................................................................. 33
4.1 Administrao de NPMs revestidas com dextrana............................................

33

4.2 Administrao de NPMs revestidas com cido olico......................................

37

CONCLUSES..........................................................................................................

43

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.......................................................................

44

ANEXO A
ANEXO B
ANEXO C

1 INTRODUO
O interesse por materiais em escala nanomtrica cresce extraordinariamente, em
decorrncia do seu potencial de aplicao nas mais diversas reas da cincia e tecnologia. Os
pesquisadores tm adquirido a habilidade de trabalhar a nvel molecular, de forma a criar
estruturas complexas, com controle de sua organizao (FAGAN et al, 2007).
Na medicina, a aplicao desta tecnologia em sistemas de distribuio de frmacos,
com base na utilizao de nano e micropartculas, decorre de vantagens significativas, tais
como a capacidade de segmentar locais especficos do corpo, a reduo da quantidade de
medicamento necessria para atingir uma determinada concentrao na proximidade do alvo e
a reduo da concentrao do frmaco nos locais onde a sua presena no desejada,
minimizando os efeitos colaterais. Todos esses benefcios justificam o crescimento
exponencial do nmero de publicaes relacionadas entrega de frmacos utilizando
nanopartculas (AMTENBRINK, RECHENBERG e HOFMANN, 2009).
As propriedades das nanopartculas magnticas (NPMs) permitem que elas sejam
utilizadas em diversas aplicaes na rea mdica, que podem ser classificadas em diferentes
grupos. O primeiro grupo a ser considerado o de agentes magnticos de contraste em
imagem por ressonncia magntica. Um segundo grupo engloba agentes de hipertermia, onde
as partculas magnticas so aquecidas seletivamente atravs da aplicao de um campo
magntico de alta freqncia, que podem agir realizando a ablao trmica de tumores. Um
terceiro grupo abrange ainda vetores magnticos, que podem ser dirigidos por meio de um
gradiente de campo magntico externo para um determinado local, como no caso da entrega
de frmacos em locais pr-estabelecidos do organismo (ARRUEBO et al, 2007).
Entre o vasto leque de materiais em nanoescala sendo investigados para uso
biomdico, as NPMs ganharam grande ateno devido s suas propriedades magnticas
intrnsecas, que permitem o acompanhamento atravs de imagem por ressonncia magntica
(IRM). Nesta classe de nanopartculas incluem-se o xido de ferro metlico, bimetlico e
nanopartculas superparamagnticas (NPSPMs). Esta ltima classe possui

como

caractersticas o seu baixo perfil de toxicidade e superfcie reativa, que pode ser facilmente
modificada com revestimentos biocompatveis (VEISEH et al, 2009).
O controle da biocompatibilidade depende da manipulao das propriedades fsicas,
qumicas e bioqumicas da superfcie das nanopartculas (NPs), que constituem questes
importantes nos projetos de dispositivos biomdicos.

O presente trabalho visou integrar a tecnologia existente de campos magnticos

potentes, utilizados no diagnstico por imagem, nanocincia, ramo do conhecimento em
ampla expanso, cujas aplicaes aumentam a cada dia.
A ressonncia magntica nuclear, que um mtodo de imagem baseado no
comportamento diferente da magnetizao dos prtons de diferentes tecidos, tem assumido
grande importncia em relao a outras tcnicas de obteno de imagem. Esta tcnica fornece
imagens baseadas no comportamento das estruturas anatmicas, as quais podem ser melhor
destacadas pelo uso de agentes de contraste, em geral paramagnticos, que alteram o
comportamento dos prtons, realando estas estruturas. As NPMs, especialmente as menores
que 10 nm, representam uma classe alternativa aos agentes de contraste paramagnticos para
ressonncia magntica nuclear, com vantagens do ponto de vista fsico, pois destacam ainda
mais o comportamento magntico dos prtons de diferentes tecidos (BERRY e CURTIS,
2003).
Como os estudos ainda so incipientes nesta rea, utilizou-se nanopartculas com
propriedades superparamagnticas, ou seja, aquelas cujas propriedades so potencializadas em
funo de seus diminutos stios magnticos. Com revestimento biocompatvel adequado, elas
foram utilizadas para estudar a sua eficincia no realce de estruturas anatmicas. Este objetivo
foi alcanado atravs da administrao de NPMs em ratos, com a posterior submisso destes
imageamento por ressonncia magntica.
Como caractersticas desejveis, um agente de contraste endovascular deve
apresentar um pequeno volume de distribuio e uma intensidade de sinal alto e estvel no
sistema vascular para a durao do procedimento de imagem. Aps o diagnstico, o agente
deve deixar o corpo. Sua concentrao no sangue deve diminuir ao longo do tempo,
caracterizado por uma meia-vida curta (WEINMANN, 2002).
Neste trabalho, optou-se pelo ncleo das NPMs de xido de ferro, especificamente a
magnetita (Fe3O4), tendo em vista a sua alta susceptibilidade magntica. A dextrana e o cido
olico foram os materiais de escolha a serem utilizados como revestimento biocompatvel das
NPMs. A dextrana, por ser capaz de solubilizar-se em meio aquoso e ao mesmo tempo
encapsular molculas hidrofbicas no seu interior (CUNHA e BARRETO, 2007).
Considerando a disponibilidade tambm de NPMs com revestimento de cido olico, estas
tambm foram utilizadas no trabalho, com o objetivo de comparar seus efeitos com as
primeiras.
Com isto, foi avaliado o comportamento das NPMs no organismo, identificando os
seus stios de fixao, atravs do realce nas imagens de RM, possibilitando a anlise das suas

potenciais aplicaes em imagenologia, assim como na vetorizao de frmacos, em funo

dos rgos alvo identificados.
Como forma de atingir este objetivo, as principais etapas realizadas no decorrer do
trabalho foram: (i) administrao das nanopartculas magnticas nos ratos por via endovenosa
caudal; (ii) submisso dos ratos, antes e aps a administrao das nanopartculas, a gradientes
de campo magntico, por meio de ressonncia magntica; (iii) avaliao da aplicao das
NPMs como meio de contraste para a obteno de imagens por ressonncia magntica; (iv)
avaliao das imagens obtidas dos ratos cujas nanopartculas foram administradas, por
mdicos radiologistas; (v) determinao dos rgos-alvo das nanopartculas magnticas para
possveis aplicaes clnicas e (vi) a comparao dos resultados obtidos com os dados da
literatura.
A utilizao de nanopartculas magnticas como agentes de contraste para imagem
por ressonncia magntica ainda incipiente e poucos trabalhos relatam este tipo de aplicao
(ARRUEBO, 2007;

BERRY, 2003;

COROT, 2006; DI MARCO, 2007; OGHABIAN,

2010). Essa linha de estudos merece ateno especial, considerando que a nfase de
contrastao dos tecidos diferente daquela obtida pelos agentes de contraste tradicionais.
O desenvolvimento deste projeto justifica-se, portanto, pela possibilidade de
utilizao da nanotecnologia na obteno imagens diagnsticas mais elucidativas. Com o
conhecimento das propriedades das nanopartculas magnticas e do seu comportamento no
meio biolgico, podem surgir vrias condies em que o seu uso, alm das aplicaes em
imagem, torne os tratamentos mais independentes dos efeitos adversos, ocasionados pela
forma tradicional de distribuio de frmacos no organismo.
Considerando-se que o trabalho apresentado depende diretamente das propriedades
magnticas e fsico-qumicas, do comportamento decorrente da escala nanomtrica das
partculas utilizadas, assim como a sua interao com o meio biolgico, fica evidente o carter
interdisciplinar das reas do conhecimento envolvidas.
Nos captulos seguintes, abordaremos os tpicos diretamente relacionados com o
desenvolvimento deste trabalho. No captulo 2, abordaremos os princpios de campo
magntico, nanopartculas magnticas e imageamento por ressonncia magntica. No captulo
3 esto descritos os recursos materiais e a metodologia utilizada. No captulo 4 so
apresentados os resultados e discusses e, no captulo 5, as concluses.

2 REFERENCIAL TERICO
2.1 FUNDAMENTOS DO MAGNETISMO
Os primeiros relatos de fenmenos magnticos remontam da antiguidade. Em uma
regio da sia Menor, chamada Magnsia, pastores observaram que um tipo de rocha, hoje
conhecida como magnetita (Fe3O4), atraa fragmentos de ferro. A primeira grande aplicao
tecnolgica do magnetismo foi a bssola, instrumento de orientao fundamental na poca
dos grandes descobrimentos (MACHADO, 2002). O primeiro tratado, De Magnete, datado de
1600, foi escrito por Gilbert, considerado o pai do magnetismo. Ele foi o primeiro a dizer que
a Terra era um grande magneto (NOVAK, 2000).
O surgimento do mtodo cientfico e a substituio da metafsica pela matemtica,
entre 1600 e 1700 (Galileu, Newton e outros), alm do estabelecimento da teoria da
Eletricidade (Coulomb, 1750), fez nascer a eletrodinmica, com Oersted (~1800) e depois
Biot, Savart, Arago, Weber e Ampere. Ampere introduziu a noo de campo magntico e
sugeriu que o magnetismo era devido a correntes microscpicas. No final do sculo XIX,
Faraday, um fsico experimental, foi o primeiro a utilizar o termo campo magntico. Sua
principal contribuio foi a sua lei da induo. Maxwell, que era um fsico terico, formulou
matematicamente as observaes de Faraday e forneceu toda a base da eletrodinmica com
suas equaes (NOVAK, 2000).
O campo magntico produzido por cargas eltricas em movimento. O comportamento de um campo magntico gerado por uma carga em movimento est contido na lei de
Biot-Savart, relacionada aos dois cientistas franceses, cujo estudo resultou na equao 1, que
descreve essa lei:

qvsen
B 0
4 r 2

(1)

onde r a distncia partir da carga, o ngulo formado entre v e r e 0 a constante de
permeabilidade magntica, cujo valor 0 = 1,257x10-6 N/A2.
A unidade do campo magntico o Tesla (T); o Sistema Internacional de Unidades
define T como sendo a induo magntica uniforme que produz uma fora constante de 1
N/m2 em um condutor retilneo, situado no vcuo e percorrido por uma corrente eltrica
invarivel de 1 A, sendo perpendiculares entre si as direes da induo magntica, da fora e
da corrente.

Qualquer magneto constitui sempre um dipolo, ou seja, um de seus lados ou extremidades ter um comportamento magntico de atrao ou de repulso, chamados plos norte e
plo sul (Figura 1). Mesmo que se divida o magneto ao meio, as extremidades resultantes
passaro a conter tambm dois plos. Por mais que continuemos a dividir cada fragmento
restante em dois, os plos norte e sul sempre estaro presentes. Este fato mostra que no
existem monopolos magnticos, assim como no existe uma carga magntica, como acontece
na eletricidade. Esta afirmao descrita matematicamente na equao 2, pela 3 lei de
Maxwell para o magnetismo.

.B 0 ,

(2)

cuja interpretao mostra que o divergente do campo magntico nulo porque todas as linhas
de campo que entram em uma superfcie gaussiana tambm saem dela. Na forma integral,
temos:

B.nda 0

(3)

Figura 1: Magneto em barra mostrando os plos norte e sul e suas linhas de campo (HEWITT,
2002).
Cargas eltricas em rotao tambm do origem a campos magnticos. A fonte mais
simples de campo magntico o chamado dipolo magntico. Se uma corrente I circula em
torno de uma rea A, gera-se um vetor, chamado momento magntico:

IA

(4)

em que A um vetor de mdulo igual rea A, orientado perpendicularmente superfcie. O

eltron possui, alm da sua carga eltrica, um momento de dipolo magntico bem determina-

do, chamado de spin. O valor desse momento chamado de magnton de Bohr, que a unidade fundamental de momento magntico e vale, em unidades do SI, B=9,27.10

-24

Am2.

A soma dos momentos magnticos de dipolo em um volume V, dividida por esse

volume, nos leva a outra importante grandeza, a magnetizao:

1
M i
V i

(5)

A grandeza que caracteriza um material magntico segundo sua resposta a um campo

magntico aplicado chama-se susceptibilidade magntica (). Muitas vezes, os materiais
apresentam uma resposta no linear, de modo que deve-se tomar o limite nulo da excitao
(campo aplicado). A susceptibilidade magntica depende da temperatura, do campo e da
posio da amostra. De acordo com a susceptibilidade magntica e, em conseqncia, da
resposta que os materiais apresentam ao serem expostos a um campo magntico, eles podem
ser classificados em diamagnticos, paramagnticos, ferrimagnticos, ferromagnticos ou
antiferromagnticos, conforme demonstrado na Tabela 1.
Nos materiais diamagnticos, aqueles cujos tomos ou ons no possuem momento
dipolar atmico, a ao de um campo magntico externo provoca uma alterao nas correntes
eletrnicas, o que faz aparecer um pequeno momento magntico de polaridade contrria do
campo magntico aplicado, acabando por repelir as suas linhas de fora. Quando a aplicao
do campo cessa, o material deixa de possuir esse momento provisrio (FEYNMAN,
LEIGHTON e SANDS, 1963).
Tabela 1: Classificao dos materiais quanto aos valores de susceptibilidade (),
permeabilidade () e momentos magnticos ( )
Material
Diamagntico
Paramagntico
Ferromagntico
Ferrimagntico
Antiferromagntico

0 (n)
0 (f)
0
0
0

(Am2)
1
1
1
1
1

opostos a B
aleatrios
paralelos
antiparalelos
antiparalelos

Os materiais paramagnticos, que possuem momentos magnticos atmicos que no

interagem entre si, so fracamente atrados por campos magnticos externos e tornam-se
magnticos apenas enquanto estiverem sob a ao desse campo. Alguns exemplos da tabela
peridica so o magnsio, o molibdnio, o ltio e o tntalo.
O ferrimagnetismo surge em alguns materiais cermicos em que os ons tm
diferentes momentos magnticos, de forma que surge um momento magntico resultante. Os

materiais ferrimagnticos naturais so conhecidos genericamente por ferritas, sendo a

magnetita, a mais conhecida, uma vez que um mineral nativo em muitas regies do planeta.
Os materiais que so fortemente atrados por um im so classificados como
ferromagnticos, tais como ferro, cobalto e quase todos os tipos de ao. O ferromagnetismo
o mais evidente dos fenmenos magnticos. Representa a orientao dos dipolos magnticos
(domnios magnticos) em relao a um campo magntico externo, e mantm esta orientao
mesmo quando o campo magntico retirado. Por esta propriedade de reter orientao
magntica, eles se tornam imantados e so muito usados para gravao de memria
magntica, motores, fabricao de ims permanentes, etc. Os slidos ferromagnticos
apresentam susceptibilidade magntica muito superior a 1 ( >>1). Contudo, as flutuaes de
origem trmica tendem a desalinhar aleatoriamente seus domnios magnticos, enfraquecendo
a sua interao e, desta forma, os materiais ferromagnticos s o so abaixo de uma
determinada temperatura crtica (KNIGHT, 2009).
O antiferromagnetismo o ordenamento magntico de todos os momentos
magnticos de um material na mesma direo mas, em sentido inverso. Para um material ser
descrito como antiferromagntico, este efeito tem que percorrer todo o material. Existe uma
propriedade semelhante a dos materiais ferromagnticos no que diz respeito a altas
temperaturas, relacionada ao ponto no qual o antiferromagnetismo perde suas propriedades e
se torna paramagntico, que chamada de temperatura de Nel. Ao submeter um material
antiferromagntico a um campo magntico intenso, alguns de seus domnios se alinham
paralelamente a ele, mas ao mesmo tempo que se alinham em paralelo com os domnios
vizinhos. A Figura 2 mostra o esquema do comportamento dos momentos magnticos de
alguns destes materiais (KOROLEVA e KHAPAEVA, 2009).

Figura 2: Comportamento dos momentos magnticos dos tomos em materiais (A)

diamagnticos, (B) paramagnticos, (C) anti-ferromagnticos, (D) ferrimagnticos e (E)
ferromagnticos.
Geralmente necessrio um campo magntico muito intenso para alinhar o momento
magntico em todo o material. Em alguns casos, pode at haver imantao devido a um

campo magntico muito forte. Alguns exemplos de materiais antiferromagnticos so o cromo

e o mangans (REITZ, MILFORD E CHRISTY, 1982).
Uma caracterstica importante sobre os materiais magnticos que, acima de uma
determinada temperatura, eles perdem suas propriedades magnticas, pois o calor provoca um
desordenamento na disposio das suas partculas. Esta temperatura, que constante para
cada substncia, denominada temperatura de Curie (Tc) ou ponto de Curie. Esta transio
reversvel atravs do resfriamento do material. Quando T << Tc, os momentos magnticos ()
de um ferromagneto esto praticamente alinhados na escala microscpica. No entanto, numa
amostra macroscpica, o momento magntico muito menor que o de saturao, sendo
necessrio a aplicao de um campo externo para satur-la. Isto ocorre tanto em policristais
como em monocristais. A explicao disso que cada cristal composto de pequenas regies,
chamadas de domnios magnticos (Figura 3), em que todos os momentos magnticos esto
alinhados, resultando em um momento magntico total de cada domnio grande, mas fazendose a soma sobre todos os domnios, fica prximo de zero. Diz-se que a amostra se encontra
desmagnetizada. O processo de magnetizao envolve mudanas na estrutura de domnios
(movimento das paredes que separam os domnios) e na direo da magnetizao de cada
domnio (MACHADO, 2002).

Figura 3: Esquema demonstrando os monodomnios magnticos em um material

ferromagntico, orientados ao acaso. Sem interferncia externa, os dipolos magnticos
alinham-se nas direes dadas pelas setas (EYRE, 2006).
O comportamento magntico de uma partcula pode ser extremamente sensvel em
relao ao tamanho e a temperatura. Os materiais de dimenses macroscpicas sempre
procuram ficar numa configurao de mnima energia potencial e, para tanto, os momentos
magnticos dos domnios ficam em orientaes aleatrias. No entanto, existe um tamanho
crtico para o qual esse tipo de configurao no mais energeticamente vantajosa, que da
ordem de algumas dezenas de nanometros. Quando esse tamanho alcanado, a partcula
passa para um estado denominado de monodomnio, permanecendo, espontaneamente

magnetizada. Nesse estado de magnetizao permanente, o momento magntico total a

soma vetorial de todos os momentos atmicos, resultando em um momento magntico gigante
(EYRE, 2006).
Pequenas partculas magnticas exibem fenmenos nicos, tais como tunelamento
quntico da magnetizao, ocasionando o superparamagnetismo, que um dos principais
fenmenos observados na nanoescala. Quando um material ferromagntico fragmentado at
uma nanopartcula, a curva de histerese tpica desaparece e o sistema entra em um regime
pelo qual a magnetizao totalmente reversvel (SOUZA FILHO e FAGAN, 2011).
Quando o campo magntico aplicado em um material ferromagntico for aumentado
at a saturao e em seguida for diminudo, a densidade de fluxo B (weber/m2) no diminui
to rapidamente quanto o campo H (weber/m2 ). Dessa forma, quando H chega a zero, ainda
existe uma densidade de fluxo remanescente, Br. Para que B chegue a zero, necessrio
aplicar um campo negativo, chamado de fora coercitiva. Se H continuar aumentando no
sentido negativo, o material magnetizado com polaridade oposta. A reduo do campo
novamente a zero deixa uma densidade de fluxo remanescente, -Br, e, para reduzir B a zero,
deve-se aplicar uma fora coercitiva no sentido positivo. Aumentando-se mais ainda o campo,
o material fica novamente saturado, com a polaridade inicial. Esse fenmeno que causa o
atraso entre densidade de fluxo e campo magntico chamado de histerese magntica,
enquanto que o ciclo traado pela curva de magnetizao chamado de ciclo de histerese
(Figura 4). A histerese magntica no ocorre com materiais paramagnticos. Nesse caso, ao
retirar o campo externo aplicado, a magnetizao retorna ao estado inicial. No caso de
materiais superparamagnticos, o comportamento da magnetizao semelhante, porm, com
uma resposta de magnetizao muito superior dos materiais paramagnticos.

Figura 4: Curvas de histerese dos materiais ferromagnticos e das respostas diferentes da

magnetizao (B) dos materiais para e superparamagnticos quando sujeitos a um campo
externo H. As unidades das duas grandezas o Tesla.

10

2.2 NANOPARTCULAS MAGNTICAS (NPMS)

A nanotecnologia, por definio, est relacionada manipulao da matria em
uma escala em que os materiais revelam caractersticas exclusivas, ou seja, no encontradas
quando o mesmo material analisado em escala macroscpica. A origem das propriedades de
induzida pelo tamanho em nanomateriais depende basicamente dos fenmenos de superfcie
e efeitos de confinamento quntico. A razo superfcie vs volume aumenta rapidamente
quando o tamanho das partculas diminui. Quando um determinado material tem pelo menos
uma dimenso reduzida a nanoescala, os vetores de onda eletrnica tornam-se quantizados e
o sistema apresenta seu nveis de energia discretos (SOUZA FILHO e FAGAN, 2011).
Tais mudanas traduzem-se pela apresentao de tolerncia temperatura, variedade
de cores, alteraes da reatividade qumica, da condutividade eltrica, ou

por exibir

interaes de intensidade extraordinria. Em geral, tais peculiaridades ocorrem quando as

dimenses das partculas no ultrapassam os 100 nanometros. Estas caractersticas justificam
o interesse tecnolgico em relao aos nanomateriais, que j so fabricados em escala
comercial para emprego em vrios produtos como cosmticos, tintas, revestimentos, tecidos,
catalisadores ou para proporcionar mais resistncia aos materiais (AMTENBRINK,
HOFMANN e MONTET, 2010).
As NPMs apresentam caractersticas que as tornam um importante recurso em
potencial na rea mdica. Primeiro, elas possuem tamanhos controlveis, que variam de
alguns nanometros at dezenas de nanometros, o que as coloca em dimenses que so
menores ou comparveis a uma clula (10 a 100 m), um vrus (20 a 450 nm), uma protena
(5-50 nm) ou um gene (2 nm de largura 1-100 nm de comprimento). Isto significa que elas se
equivalem em tamanho a uma entidade biolgica de interesse. Na verdade, elas podem ser
revestidas com molculas biolgicas para que possam interagir com ou se vincular a uma
entidade biolgica e assim fornecer um meio controlado de marc-lo ou abord-lo
(PANKHURST, CONNOLLY e JONE 2003).
Com revestimento de superfcie adequado, as NPMs podem permanecer dispersas
em solventes apropriados, formando suspenses homogneas, chamado fluidos magnticos.
Fluidos magnticos podem ser submetidos a um campo magntico externo, possibilitando a
aquisio de imagens por ressonncia magntica para o diagnstico mdico (LIU, 2011).
A magnetita, que o material constituinte do ncleo das NPMs utilizada no presente
trabalho, tem a particularidade de conter tanto ons Fe2+ quanto Fe3+, dentro de uma estrutura
espinlio inversa. Trinta e dois nions de oxignio formam uma clula unitria cbica,
centrada na face, com um comprimento da aresta de 0,839 nm. Nesta clula unitria, ons de

11

ferro esto localizados em 8 stios tetradricos, cercados por 4 ons de oxignio, e 16 stios
octadricos, rodeados por 8 ons de oxignio. Os stios tetradricos so ocupados
exclusivamente por ons Fe3+, enquanto ons Fe2+ e Fe3+ ocupam alternadamente posies
octadricas (Figura 5).

Figura 5: Estrutura espinlio inversa de magnetita. (a) Ilustrao da parte frontal de uma
clula unitria cbica. (b) Organizao ferrimagntica da magnetita (Extrado de GOSSUIN,
2009).
Esta organizao , por vezes, expressa na frmula para magnetita Fe3+ [Fe2+ Fe3+]O4
e maghemita Fe3+ [(Fe3+)5/3 V1/3]O4, onde V representa uma vacncia de ction (GOSSUIN,
2009). No tpico seguinte so discutidas as tcnicas de sntese das nanopartculas.

2.2.1 Tcnicas de Obteno de NPMs

A produo das NPMs ocorre a partir de metais de ferro e cobalto puro e ligas de
CoPt3, FePt, FeZn, e de xidos de ferro, incluindo a magnetita (Fe3O4) e maghemita (Fe2O3). Os xidos de ferro tambm podem ser dopados para aumentar suas propriedades
magnticas para formar MFe2O4, onde M um ction bivalente, tais como ons de Mn2+,
Fe2+, Co2+ ou Ni2+ (VEISEH et al, 2009). Quando o ncleo destas nanoestruturas possui
dimenso menor que 25 nm, a NPM adquire caracterstica superparamagntica, estado em que
ela somente apresenta magnetizao quando submetida a um campo magntico externo.
Vrios mtodos de sntese de nanopartculas magnticas tm sido relatados. A
metodologia mais utilizada envolve a co-precipitao alcalina de ons ferrosos e frricos em
soluo aquosa, na presena de um agente estabilizador (como dextrana, por exemplo). Uma
boa estabilizao da magnetizao tambm pode ser atingida aps a sntese atravs da

12

adsoro nica na superfcie destes agentes. No entanto, em se tratando de sntese qumica,

ainda um desafio obter partculas magnticas com uma populao monodispersa em grande
escala para usos clnicos (DI MARCO, 2007).
A sntese de nanopartculas superparamagnticas um processo complexo, devido
sua natureza coloidal. O primeiro desafio na obteno do produto qumico principal consiste
na definio de condies experimentais, levando a uma populao monodispersa de gros
magnticos de tamanho adequado. O segundo ponto crtico a escolha de um processo
reprodutvel, podendo ser industrializado, sem qualquer processo complexo de purificao.
Vrios processos foram adaptadas para a produo de nanopartculas magnticas a partir de
tcnicas de soluo ou de aerossol ou em fase de vapor (COROT et al, 2006)
Novos processos tambm devem fornecer o xido de ferro caracterizado por um
elevado grau de cristalinidade e, conseqentemente, uma alta magnetizao de saturao. O
revestimento precisa ser otimizado para simplificar o processo e prevenir de forma eficaz a
qualquer agregao e sedimentao das nanopartculas superparamagnticas para fornecer
uma soluo estvel para injeco ou um p liofilizado que fcil de reconstituir.
A decomposio de ferro (III) acetilacetonato em ter dibenzil na presena de cido
olico tem sido usada para sintetizar nanopartculas de xido de ferro monodispersas.
(GUARDIA et al, 2009).
2.2.2 Revestimentos
O uso in vivo das nanopartculas exige que elas sejam revestidas, para minimizar os
efeitos indesejados com o meio biolgico (LACAVA e MORAIS, 2004). Estes revestimentos
de superfcie, geralmente compostos por pequenas molculas orgnicas e polmeros, servem
para evitar aglomerao de xido de ferro dos ncleos, possibilitar a manipulao qumica
para viabilizar vetorizao de frmacos e limitar a interao de clulas no-especficas. Para
atender a essas funes de revestimento, um grupo diversificado de polmeros tm sido
investigados,

incluindo

polietilenoglicol

(PEG),

dextrana,

ciclodextrina,

quitosana

(polissacardeo catinico), polietilenoimina (PEI) e outros (VEISEH et al, 2009).

As dextranas so formadas a partir da sacarose, atravs do crescimento de bactrias
pertencentes aos gneros Leuconostoc, Streptococcus e Lactobacillus. No entanto, a maioria
das dextranas sintetizada pela bactria da espcie Leuconostoc mesenteroides. Assim como
a maioria dos polmeros solveis em gua, as molculas administradas com baixo peso
molecular (menor que 10 kDa) so eliminados do organismo por filtrao glomerular. Para as
dextranas com massas molares superiores a 40 kDa, a sua metabolizao ocorre pela ao da

13

enzima dextranase (dextrano 1,6-glucosidase, presente em rgos como o fgado, bao, rins e
clons) que os degrada em glicose (BELDER, 2003).
As dextranas, cuja estrutura molecular est apresentada na Figura 6,
utilizadas em aplicaes biomdicas devido sua biocompatibilidade,

so muito

baixo custo e

facilidade na sua modificao. Dentro destas aplicaes destacam-se o desenvolvimento de

agentes de contraste para imaginologia mdica, sobretudo com o objetivo de aumentar o
tempo de reteno destes compostos na circulao. Estudos sobre a estabilidade qumica de
dextranas clnicas em pH 4,5 a 7, quando armazenado por vrios anos em temperaturas entre
4 a 40 C, revelou que a dextrana tem excelente estabilidade (BELDER, 2003).

Figura 6: Estrutura qumica da dextrana (adaptado de BELDER, 2003).

Outra substncia, a ciclodextrina (CD) constitui uma classe de excipientes
farmacuticos compostos por unidades de D-glucopiranose, que unidas originam estruturas
cclicas troncocnicas. A estrutura espacial cnica e a orientao dos grupos hidroxlicos para
o exterior conferem a estes acares cclicos propriedades fsico-qumicas nicas, sendo
capazes de solubilizar-se em meio aquoso e ao mesmo tempo encapsular no interior da sua
cavidade molculas hidrofbicas. Na rea farmacutica, este excipiente tem sido explorado
principalmente no incremento da solubilidade, estabilidade e biodisponibilidade de
medicamentos (HILDEBRAND et al, 2006 e MESSNER et al, 2010).
O mecanismo de fixao de superfcie do revestimento polimrico ou monomrico
deve ser investigado atravs de tcnicas de caracterizao de superfcie para descrever a
natureza e a fora da superfcie vinculativa (hidrognio, pseudo-covalentes, inicas). As
propriedades fsico-qumicas de superfcie das NPMs muito pequenas (dimetros menores que
15 nm, ou

USPIOs, do ingls, ultra small superparamagnetic iron oxide) interferem

fortemente na sua capacidade de ser internalizadas pelos macrfagos e outras clulas

fagocticas aps a administrao intravenosa. Portanto, a presena do revestimento

14

fundamental para modular o destino das USPIOs, controlando suas propriedades eltricas de
superfcie (ARIAS et al, 2006).
Em geral, os agentes de revestimento que so adsorvidos fisicamente (por interaes
eletrostticas ou delimitao pelo hidrognio) mostram estabilidade limitada em comparao
com os agentes de revestimento que so adsorvidos quimicamente. A estabilidade do
revestimento tambm depende da quantidade de interaes qumicas que cada molcula
individual ou macromolcula pode estabelecer com a superfcie das nanopartculas. Como
resultado, cada interao entre o revestimento e a superfcie de xido de metal tem que ser
analisada e discutida em uma base individual (DI MARCO et al, 2007).

2.2.3. Caracterizao de NPMs

A metodologia mais importante de caracterizao da estrutura das nanopartculas a
difrao de raios X, com as duas fontes de radiao: sncrotron e convencional. A anlise
trmica, Mossbauer e espectroscopia de infravermelho fornecem informaes adicionais teis
(DI MARCO et al, 2007).
A maioria destas tcnicas requer a secagem das amostras que, para aplicaes
biolgicas, precisam estar dispersas em um lquido. A secagem da amostra

ou a sua

colocao em uma superfcie mida pode induzir mudanas significativas sobre as

caractersticas fsico-qumicas das USPIOs, como a ocorrncia de agregao irreversvel das
partculas. Assim, os resultados obtidos podem no refletir com preciso a natureza das
espcies na disperso do lquido. As nanopartculas podem ser caracterizadas como uma
suspenso lquida, principalmente por pequenos ngulos de espalhamento de raios X ou de
nutrons (DI MARCO et al, 2007).
O potencial zeta desempenha um papel importante na caracterizao eletrocintica
das interfaces slido-lquido, sendo definido como o potencial eltrico no plano de
cisalhamento, tambm conhecido como plano de escorregamento. O potencial zeta tambm
pode ser descrito como uma funo da densidade superficial de carga, no plano local de
cisalhamento, e a estrutura de superfcie e um parmetro muito importante no que diz
respeito a muitas caractersticas de materiais dispersos.
Uma propriedade fundamental das superfcies de xido de metal a sua tendncia
para construir uma carga de superfcie quando em contato com a gua. Isso vai induzir efeitos
eletrostticos nas vizinhanas da partcula carregada. Em soluo, a presena de uma carga
lquida sobre uma partcula afeta a distribuio de ons circundantes, resultando em um
aumento na concentrao de contra-ons (ons de carga oposta partcula) nas proximidades

15

da partcula. Isto implica que a dupla camada determinada pela fora inica da soluo.
Assim, h dificuldade para diferenciar a mudana no plano de corte de medidas de potencial
zeta em diferentes condies de concentrao de eletrlitos. Como conseqncia, potencial
zeta () no pode ser medido diretamente, e sim calculado a partir de tcnicas experimentais
(fluxo atual ou potencial, mobilidade eletrofortica e a condutividade eltrica) com a ajuda de
abordagens tericas. Existe um mtodo alternativo baseado no ultra-som que est rapidamente
se tornando importante. O mtodo de ultra-som tem uma grande vantagem sobre as tcnicas
tradicionais baseadas na luz, porque capaz de caracterizar os sistemas concentrados, sem
diluio. Na verdade, os mtodos baseados em luz exigem, em geral, as suspenses de
diluio extrema, a fim de tornar a amostra suficientemente transparente para a medio.

2.2.4 Aplicaes das NPMs na Medicina

As nanopartculas magnticas obedecem s leis de Maxwell e podem ser
manipuladas por um gradiente de campo magntico externo. Esta ao distncia, combinada
com a intrnseca penetrabilidade de campos magnticos em tecidos humanos, abre muitas
aplicaes que envolvem o transporte e/ou imobilizao de nanopartculas magnticas, ou de
marcar magneticamente entidades biolgicas. Dessa forma, isto pode ser feito para entregar
um pacote, como um frmaco anticncer ou um grupo de tomos de radionucldeos, em uma
regio-alvo do corpo, como um tumor.
As NPMs podem tambm ser usadas para responder a um campo magntico varivel
no tempo, com resultados relacionados a transferncia de energia do campo de excitao.
Neste caso, a partcula pode ser usada para aquecer, o que leva sua utilizao como agentes
de hipertermia, fornecendo quantidades txicas de energia trmica para quimioterapia aos
rgos-alvo, tais como tumores, ou como radioterapia e agentes de reforo, onde um
moderado grau de aquecimento dos tecidos resulta na destruio mais eficaz das clulas
malignas (PANKHURST, CONNOLLY e JONE, 2003).
Outra aplicao ainda incipiente de NPMs est relacionada sua utilizao como
agente de contraste de imagem no mtodo de ressonncia magntica. As NPMs tm em
comum a sua absoro especfica do sistema fagocitrio e, se elas no so inteiramente
capturadas pelo fgado e bao, podem ser amplamente avaliadas como marcadores de
ressonncia magntica para o diagnstico de doenas inflamatrias e degenerativas associadas
alta atividade fagoctica dos macrfagos (COROT et al, 2006).
Estas e muitas outras aplicaes potenciais esto disponveis na biomedicina, como
resultado das propriedades fsicas especiais das NPMs.

16

2.2.5 Mecanismos de interao biolgica

A farmacocintica e a captao celular in vivo das NPMs, incluindo a sua
capacidade de interagir com as barreiras biolgicas, esto em grande parte relacionados com
as suas propriedades fsico-qumicas, incluindo a morfologia, tamanho, hidrofobicidade, carga
e outras propriedades de superfcie. Essas propriedades so determinadas pelos tipos,
estruturas e orientaes dos materiais que as compem (VEISEH et al, 2009).
Uma vez que uma NP entra na corrente sangunea, processos opositores ativam o
sistema mononuclear fagocitrio (SMF) de resposta. Dependendo da biodegradabilidade e
tamanho, algumas das NPs presentes nas vesculas lisossmicas em clulas de Kupffer, no
fgado, podem ser incorporadas bile e removidas nas fezes. Outras NPs sero filtradas pelos
rins e eliminadas na urina. Em geral, as NPs menores esto sujeitas a rpida eliminao renal,
ao passo que as maiores mostram captao pelo fgado, bao, e medula ssea (Figura 7 ).
Partculas grandes so removidas pelas clulas capazes de fagocitose, ou seja, macrfagos ou
clulas dendrticas, enquanto pequenas partculas podem ser removidas por clulas capazes de
endocitose (Linfcitos B e T). Se as NPs magnticas so biodegradveis, os produtos de
decomposio podem ser tomados por qualquer clula por meio de pinocitose (ARRUEBO et
al, 2007).
Partculas magnticas menores do que 4 nm so removidas pelas clulas do SMF,
principalmente no fgado (60-90%) e bao (3-10%). Partculas maiores que 200 nm so
geralmente filtradas pelo bao, cujo ponto de corte se estende at 250 nm, enquanto que as
partculas maiores que 100 nm so fagocitadas por clulas principalmente do fgado.
Em geral, quanto maiores as partculas, mais curta a sua meia vida no plasma. Este
clearance de partculas pelas clulas de Kupffer podem ser, por outro lado, til para o
tratamento de doenas do fgado, como cncer ou leishmania,
hansenase, etc, embora seja importante considerar

tuberculose, listeriose,

que, simultaneamente, implica na

destruio de um nmero significativo de clulas de defesa do paciente (KIM et al, 2007).

17

Figura 7: Diagrama qualitativo relacionando o tempo de residncia no sangue com o tamanho

da partcula (adaptado de ARRUEBO et al, 2007).
Para nanopartculas de xido de ferro, sua meia-vida no sangue dose-dependente.
Essa caracterstica j foi demonstrada por vrios sistemas de nanopartculas e est relacionada
a uma saturao progressiva do consumo de macrfagos no fgado ou outros rgos ricos em
macrfagos, como o bao e a medula ssea. No entanto, o ligeiro aumento da meia-vida
encontrada no intervalo de doses clnicas no causa impacto relevante em termos de imagens
clnicas em funo do perfil global da farmacocintica dos compostos. A meia-vida das
USPIO no sangue geralmente maior nos seres humanos do que em animais. Por exemplo,
em doses de 30 ou 45 mol Fe/kg, a meia-vida no sangue de ferumoxtran-10 de 2 a 3 horas
em ratos e de 24 a 36 horas em seres humanos. Uma vez que o acesso das USPIOs aos rgos
facilitado por um tempo prolongado de permanncia no sangue, experimentos com imagens
de animais, geralmente so feitos usando altas doses de USPIO (200-1000 mol Fe / kg) em
comparao com a dose clnica humana de 45 mol Fe / kg (COROT et al, 2006).
A principal indicao clnica para as nanopartculas de xido de ferro foi de imagem
heptica. Depois da injeo intravenosa, SPIOs so rapidamente fagocitadas por macrfagos
hepticos especializados, as clulas de Kupffer, resultando em uma queda na intensidade do
sinal de ressonncia magntica e, portanto, gerando imagens com sinal hipointenso,
principalmente por causa de um efeito de susceptibilidade. A magnitude da diminuio da

18

intensidade do sinal determinada por uma variedade de parmetros, incluindo a dose

administrada e a seqncia de pulso (COROT et al, 2006).
Como as clulas de Kupffer esto exclusivamente no parnquima heptico saudvel,
as SPIOs aumentam o contraste entre tecidos saudveis e doentes, desprovidos destas clulas.
Portanto, tumores no demonstram uma reduo permanente da intensidade do sinal aps a
administrao de xido de ferro, pois esto desprovidas de macrfagos. As diferenas em
contraste tambm pode ser devido atividade suprimida de clulas de

Kupffer como

resultado do crescimento do tumor. Tumores de fgado ou metstases muito pequenas, da

ordem de 2 a 3 mm podem ser detectadas (SEMELKA, 2001)

2.2.6 Toxicidade
Para administrao endovenosa de NPMs, a regra geral que elas sejam no
txicas, no imunognicas e de um tamanho que evita a embolizao dos ductos capilares.
Embora a mudana no foco do desenvolvimento de partculas de micro a nanoescala seja
essencial para os avanos na biologia moderna, medicina e produo industrial,
ele carrega um potencial nocivo sobre os organismos e o ambiente (KIM et al, 2006). A falta
de informao sobre a toxicidade de nanopartculas pode resultar em srios problemas. Por
isso, necessrio que especialistas e pesquisadores em toxicologia, qumica e outros campos
estejam conscientes da importncia de analisar os aspectos positivos dos nanomateriais,
evitando seus potenciais efeitos txicos (OBERDORSTER, G., OBERDORSTER, E. e
OBERDORSTER, J., 2005). Vrias tcnicas de encapsulamento de partculas magnticas
esto em desenvolvimento, de forma que os sistemas obtidos tornem-se efetivos carreadores
de drogas, com especificidade tumoral para a liberao controlada de agentes. Alm de apresentar baixos nveis de toxicidade, as nanopartculas devem tambm possuir um elevado
momento de saturao, que permita minimizar as doses requeridas (CASTRO et al, 2010).
At o momento, a importante ligao entre a concentrao intracelular de
nanopartculas e os efeitos citotxicos no foi completamente analisada, e esses so muitas
vezes expressos em termos da quantidade de nanomaterial presente no meio de incubao.
Para a maioria das aplicaes biomdicas, a concentrao intracelular de nanopartculas de
importncia primordial.
Os efeitos txicos das nanopartculas devem ser medidos em momentos nos quais as
clulas contm partculas intactas,

partculas parcialmente degradadas e completamente

degradadas. Tambm importante relatar que quando nanopartculas interagem com as

clulas, stios de ligao polivalentes na sua superfcie podem provocar ligaes cruzadas das

19

protenas da superfcie celular e, assim, interferir com os processos biolgicos normais. Os

locais polivalentes de ligao tambm pode resultar em um aumento da afinidade de ligao
(avidez) para receptores da superfcie celular. Assim, as interaes multivalentes devido
ligao de ligantes a nanopartculas podem aumentar a avidez em at 4 vezes (IVERSEN,
SKOTLAND e SANDVIG, 2011).

2.2.7 Excreo celular

Todos os trabalhos que envolvem a excreo de nanopartculas pelas clulas
concluem que a sua exocitose muito mais lenta do que endocitose. Considerando que a taxa
de endocitose parece ser mais rpida para as partculas de 20-50 nm, a taxa de exocitose
diminui com o aumento de tamanho de partculas (IVERSEN, SKOTLAND e SANDVIG,
2011). A frao de nanopartculas endocitadas varia para diferentes linhagens celulares. O
percentual de nanopartculas celulares sendo exocitadas em de 1 h em clulas HeLa foi de
aproximadamente 35, 10 e 5% para as nanopartculas de 14, 50 e 74 nm, respectivamente
(CHITHRANI e CHAN, 2006). Uma questo em aberto tambm o que acontece com as
nanopartculas liberadas a partir de clulas que foram mortas, por exemplo, aquelas que
sofreram interao com nanopartculas contendo frmacos (IVERSEN, SKOTLAND e
SANDVIG, 2011).

2.3 PRINCPIOS FSICOS DA IMAGEM POR RESSONNCIA MAGNTICA (IRM)

Compreender os princpios fsicos envolvidos na formao da imagem por
ressonncia magntica implica na abordagem de fenmenos que ocorrem em escala
subatmica. Um tomo com nmero de massa mpar, ou seja, nmero de prtons diferente do
nmero de nutrons, apresenta um movimento de giro do seu ncleo em torno do prprio
eixo. As leis do eletromagnetismo determinam a relao entre a carga eltrica em movimento
e a induo de um campo magntico (Figura 8). Pode-se assim associar ao momento
magntico um vetor de magnetizao efetiva (VME), possibilitando um tratamento
matemtico apropriado (WESTBROOK e KAUT, 2000).

20

Figura 8. Representao da gerao de um dipolo magntico a partir do prton do hidrognio,

que carregado positivamente e gira em torno de seu prprio eixo, com um momento
magntico associado (adaptado de MAZZOLA, 2009).

Embora o embasamento fsico da RMN j tenha sido descrito em 1946, apenas

partir da dcada de 70 que o desenvolvimento tecnolgico permitiu a sua aplicao na rea
mdica. O mtodo de imagem por ressonncia magntica (IRM) surgiu em 1973, utilizandose algoritmos de reconstruo de imagens desenvolvidos para a tomografia computadorizada
por raios X. Em 1975, so estabelecidas as bases da RMN, empregadas por mtodos de
codificao de fase e freqncia em conjunto com a Transformada de Fourier.

2.3.1 Relao do hidrognio com um campo magntico externo

A IRM o resultado da interao do forte campo magntico produzido pelo
equipamento com os prtons de hidrognio do tecido humano, criando uma condio para que
possamos enviar um pulso de radiofreqncia (RF) e, aps, coletar a RF modificada, atravs
de uma bobina ou antena receptora. Este sinal coletado processado e convertido numa
imagem ou informao. Os principais tomos que compem o tecido humano so: hidrognio,
oxignio, carbono, fsforo, clcio, flor, sdio, potssio e nitrognio. Estes tomos, exceto o
hidrognio, possuem no ncleo atmico prtons e nutrons. Apesar de outros ncleos
possurem propriedades que permitam a utilizao em IRM, o hidrognio o escolhido por
trs importantes motivos: (i) o mais abundante no corpo humano, (ii) as caractersticas de
ressonncia magntica nuclear se diferem bastante entre o hidrognio presente no tecido
normal e no tecido patolgico e (iii) o prton do hidrognio possui o maior momento magntico e, portanto, a maior sensibilidade a RMN (MAZZOLA, 2009 e CABAL et al, 2009).
As propriedades de ressonncia magntica tm origem na interao entre um tomo e
um campo magntico externo. um fenmeno em que partculas contendo momento angular
e momento magntico exibem um movimento de precesso quando esto sob ao de um

21

campo magntico (B0). A influncia do campo magntico externo B0 faz com que aparea
uma oscilao adicional em torno do eixo de rotao do prton, denominado como
movimento de precesso, o que faz com que os momentos magnticos descrevam um
movimento circular em torno do eixo de B0. O percurso de oscilao chamado trajetria de
precesso e a velocidade com que o VME oscila em torno de B0 definida como freqncia
de precesso. O valor da freqncia de precesso descrito pela equao de Larmor:

= B0 .

(6)

onde B0 a potncia do campo magntico em Tesla e a razo giromagntica, que por sua
vez expressa a relao entre o momento angular e o momento magntico de cada ncleo ativo
em RM (WESTBROOK e KAUT, 2000).
A energia necessria para causar movimento de precesso no prton de hidrognio
corresponde faixa de radiofreqncia (RF) do espectro eletromagntico. Para que ocorra a
ressonncia, necessrio que seja aplicado um pulso de energia RF exatamente com a
freqncia de Larmor do VME do hidrognio (Figura 9B). A energia da onda de
radiofreqncia aos ncleos traduz-se por uma oscilao da magnetizao total M em relao
sua posio inicial. O valor do ngulo de oscilao uma funo da amplitude e da durao
do pulso de excitao. Chamamos de pulso de 30, 90 ou 180 uma onda de radiofreqncia
de intensidade e durao tais que, imediatamente aps o pulso, a magnetizao M forme um
ngulo de 30, 90 ou 180com o campo B0. Outros ncleos ativos no entram em RM por
no possurem a mesma freqncia de precesso do hidrognio (DOYON e CABANIS,
2000).

Figura 9: Em A est est representada a magnetizao resultante da aplicao de uma campo

magntico externo sobre uma populao de ncleos de hidrognio. Em B, com a aplicao
adicional de um pulso de RF, o eixo de precesso forado a se distanciar do alinhamento
original.

22

2.3.2 Formao do contraste da imagem de RMN

Quando o pulso de RF removido, os ncleos de hidrognio "relaxam" de volta ao
seu estado original. Este processo pode ser medido por sua relaxao longitudinal (T1) ou
relaxao transversal (T2), ambas podendo gerar uma imagem de RM. A variao do
relaxamento corresponde s taxas de contraste da imagem, permitindo a discriminao entre
os tipos de tecido (VEISEH, 2009).
Durante o relaxamento, o VME libera a energia de RF absorvida e retorna o seu
alinhamento com B0. O relaxamento leva a recuperao da magnetizao no plano
longitudinal e ao declnio da magnetizao no plano transverso (xy).
O contraste das imagens de RMN , portanto, conseqncia principalmente dos
mecanismos de recuperao T1 e declnio T2. No tecido adiposo, por exemplo, os momentos
magnticos dos ncleos lipdicos relaxam e recuperam rapidamente sua magnetizao
longitudinal. Desta forma, o tempo T1 do tecido adiposo curto e sua imagem caracterstica
hiperintensa em T1. Ao contrrio, na gua os momentos magnticos demoram mais para
relaxar e recuperar a magnetizao longitudinal e, portanto, o tempo T1 da gua longo e sua
caracterstica de imagem hipointensa em T1. Da mesma forma, o declnio T2 do tecido
adiposo curto, e o tempo T2 da gua longo, mostrando imagens hipointensas e
hiperintensas, respectivamente.

Figura 10: Representao da curva de recuperao T1 (A) e curva de declnio T2 (B).

A recuperao T1 causada pela liberao da energia dos ncleos em suas
vizinhanas. Com a energia liberada, os ncleos recuperam a sua magnetizao longitudinal.
A razo de recuperao um processo exponencial. T1 o tempo necessrio para a
recuperao de 63% da magnetizao longitudinal do tecido (Figura 10A). O declnio T2
causado pela troca de energia entre os ncleos vizinhos, devido interao dos campos
magnticos dos ncleos entre si. tambm denominada relaxamento spin-spin e acarreta o
declnio da magnetizao no plano transverso, cuja razo tambm um processo exponencial.

23

T2 o tempo necessrio para a perda de 63% da magnetizao transversa (Figura 10B)

(WESTBROOK e KAUT, 2000).
Resumindo, o tecido adiposo tem um tempo T1 e T2 curtos e a gua tem tempos T1
e T2 longos. Para se obter imagens com sinais intensos, deve haver um grande componente de
magnetizao transversal, para que este possa induzir um forte sinal na bobina receptora. Um
componente de magnetizao transversal pequeno produz um sinal fraco na bobina receptora;
as imagens ponderadas em T1 apresentam tecido adiposo hiperintenso (brilhante) e a gua
hipointensa (escura); as imagens ponderadas em T2 mostram tecido adiposo hipointenso
(escuro) e a gua hiperintensa (brilhante). Os tecidos de sinais intermedirios devem ficar
com T1 ou T2 entre os sinais do tecido adiposo e da gua. Uma imagem ponderada em T1
(Figura 11) aquela em que o contraste depende predominantemente das diferenas entre os
tempos T1 do tecido gorduroso e da gua, enquanto que uma imagem ponderada em T2
(Figura 12) aquela em que o contraste depende predominantemente das diferenas entre os
tempos T2 do tecido adiposo e da gua (WESTBROOK e KAUT, 2000).

Figura 11: Corte axial do abdmen ao nvel heptico, de sequncia ponderada em T1 (cortesia
de DIX, Diagnstico por Imagem, Santa Maria - RS).

Figura 12: Corte axial do abdmen ao nvel heptico, de sequncia ponderada em T2 (cortesia
de DIX, Diagnstico por Imagem, Santa Maria - RS).

24

2.3.3 Localizao espacial e recepo do sinal de RF

A localizao espacial de um elemento de volume da imagem de RM feita por meio
de gradientes de campo magntico aplicados por bobinas localizadas nos trs eixos
cartesianos, em composio com o campo magntico principal. H trs deles no scanner,
chamados de magnetos de gradiente X, Y e Z (Figura 13), cada um orientado ao longo de um
plano diferente. Estes magnetos so bem menos potentes do que o magneto principal, mas so
responsveis pela preciso das imagens da regio anatmica estudada, que so geradas em
cortes. Eles modificam o campo magntico em pontos muito especficos e trabalham em
conjunto com os pulsos de RF, produzindo as imagens atravs da codificao da distribuio
espacial dos prtons da gua. Os planos de corte, de acordo com o magneto gradiente que
estiver ativado, podero ser axiais (transversais ao corpo) coronais (que dividem o corpo em
regies anterior e posterior) ou sagitais (que dividem o corpo em regies direita e esquerda).
Tambm possvel, atravs da combinao entre os magnetos de gradiente, gerar as fatias de
imagem

em qualquer plano, o que um dos pontos fortes da RM como ferramenta

diagnstica (HAAGA et al, 1996).

Figura 13: Esquema representando a localizao das bobinas de gradiente no interior do

equipamento de RM (adaptado de http://www.magnet.fsu.edu/education/tutorials/ magneta
cademy/mri/fullarticle.html).
Na avaliao visual das imagens por RM, os sinais observados vo de muito intensos
(branco) at a ausncia de sinal (preto), passando por uma gama de sinais intermedirios (tons
de cinza). Estes sinais, de tonalidades que variam do branco ao preto, representam diferentes
tipos de tecidos, por exemplo, tecido adiposo, msculo, tecido nervoso, etc. que possuem

25

VME individuais. Um determinado tecido tem um sinal muito forte, caso possua um grande
componente transverso de magnetizao, capaz de gerar um grande sinal na bobina receptora.
A deteco da magnetizao nuclear efetuada ao colocarmos no plano
perpendicular a B0, chamado plano de medida, uma bobina de deteco ou antena. O
movimento de rotao da magnetizao transversal d origem, na antena, a uma corrente
eltrica induzida, que podemos medir aps amplificao e que constitui o sinal da RM.
Um tecido envia um sinal fraco bobina receptora quando ele possui um
componente transverso de magnetizao de pequena amplitude. J a densidade de spin de
hidrognio (H) um parmetro que descreve a quantidade relativa de hidrognio detectvel
em cada elemento de volume. As densidades de spin de hidrognio de fluidos, tais como
lquido cefalorraquidiano e urina, so mais elevados, seguidos das densidades de spin de H
nos tecidos moles, que so 60 a 90% daquela verificada nos fluidos. As densidades de spin de
osso cortical e do ar so praticamente zero.
Em geral, a regio anatmica em estudo fica envolvida ou muito prxima de uma
bobina de recepo (Figura 14), cujo papel principal melhorar a captao do sinal de RF
emitido pelos ncleos de hidrognio (DOYON e CABANIS, 2000).

Figura 14: Utilizao de bobinas receptoras em exames de RM. A: Exame de RM de joelho,

B: Exame de crnio (retirado de documentao publicitria de Philips Medical Systems)

2.3.4 Sequncias de pulso e tempos de repetio e de eco

Um evento fsico importante para a coleta do sinal que gera a imagem de RM a
formao de ecos. Este fenmeno a base para as sequncias de pulso. Se os prtons forem
excitados com um pulso de RF inicial e, aps um determinado tempo t, for enviado um

26

segundo pulso, alm do surgimento de sinal na bobina aps o primeiro pulso, haver o
surgimento de um segundo sinal. Este segundo sinal um eco do primeiro e aparece na
bobina num tempo igual a 2 t. O surgimento do eco um processo natural e ocorre devido a
refasagem dos momentos magnticos, induzida pelo segundo pulso de RF. O momento em
que o eco ir surgir pode ser controlado atravs dos tempos e de aplicao dos pulsos, porm
a defasagem e refasagem ser dependente dos tipos de tecido em questo (MAZZOLA, 2009).
A seqncia de pulso mais comumente usada em exames clnicos de RM a de
spin-eco. A seqncia spin-eco forma um sinal mensurvel pela aplicao de um pulso de
180 a meio caminho entre o pulso inicial de 90 e o centro de medio de sinal (o spin eco).
Este pulso elmina os efeitos de no homogeneidade do campo magntico em cada voxel,
tornando a defasagem transversal entre excitao e medio de sinal dependente apenas do
declnio T2 (HENDRICK, 1994).
Sendo o intervalo de tempo t entre a aplicao de dois pulsos ir determinar o
surgimento do eco em 2 t. O tempo de eco (TE) o intervalo de tempo entre a aplicao do
pulso inicial de RF de 90 e o pico do eco. O tempo entre sucessivos pulsos de RF de 90
chamado de TR, ou tempo de repetio. Enquanto o TE determina o quanto de relaxao no
plano longitudinal estar presente no eco, o TR estabelece o quanto de magnetizao longitudinal se recuperou entre sucessivos pulsos de 90 (MAZZOLA, 2009).
Para coletar dados suficientes para formar uma imagem planar, a seqncia de pulso
spin-eco deve ser repetida muitas vezes, cada uma com uma quantidade diferente de
codificao de fase. O nmero mnimo de repeties determinado pelo nmero de voxels
distintos na direo desejada da codificao de fase. Uma caracterstica a destacar como a
recuperao T1 afeta o sinal medido em spin-eco de imagem (HENDRICK, 1994).

2.3.5 Fatores de segurana em RMN

O uso de comutao rpida e gradientes elevados pode levar estimulao de nervos
perifricos (PNS) durante o escaneamento. A posio e a natureza do PNS difere para cada
indivduo e pode causar uma sensao de formigamento ou de contrao superficial. O nvel
de PNS esperado exibido como um dos parmetros do protocolo de cada exame e expresso
como uma porcentagem do nvel de limiar mdio para a sua ocorrncia, calculado pelo
sistema para a seqncia preparada para o paciente (PHILIPS, 2007).
Os procedimentos de RM sempre envolvem a emisso de energia de radiofreqncia
(RF) e isso pode aquecer o paciente, o que implica em respeitar um nvel seguro para a
imposio da chamada taxa de absoro especfica (SAR). SAR a energia de RF absorvida

27

pelo paciente por unidade de massa, expressa em watts por kg (W/kg). Recomenda-se usar
nveis elevados de SAR (acima de 2,5 W/kg) somente se for absolutamente necessrio. No
painel do equipamento, exibida uma porcentagem que se refere ao quanto do limiar para o
incio de sintomas de aquecimento do paciente para um determinado protocolo de
escaneamento.

2.4 USO DE AGENTES DE CONTRASTE EM RESSONNCIA MAGNTICA

Assim como na radiologia convencional e na tomografia computadorizada, o mtodo
de imagem por RM utiliza, dependendo do estudo que estiver sendo realizado, um agente
adicional de contrastao das estruturas anatmicas de interesse, administrado por via
endovenosa. A grande diferena entre os meios de contraste utilizados em mtodos de
imagem que utilizam radiao ionizante (raios-x) e a IRM que os primeiros possuem a
funo de aumentar a densidade fsica do sangue, enquanto que no segundo caso, o agente de
contraste interfere na magnetizao das molculas localizadas em determinados tipos de
tecido. O uso de agentes de contraste tem constitudo uma parte importante da prtica clnica
estabelecida h mais de 20 anos (SEMELKA e HELMBERGER, 2001).

2.4.1 Agentes de contraste paramagnticos

Os agentes de contraste para ressonncia magntica atualmente em uso so os
quelatos paramagnticos (tomos de gadolnio quelatado). A interao localizada desses
agentes com os prtons das molculas de gua potencializa o contraste da imagem, reduzindo
os tempos de relaxao T1 ou T2. Em geral, estes agentes so substncias que alteram as
propriedades magnticas de tecidos vizinhos, clulas ou molculas. Os agentes exgenos de
contraste mais usados so o gadolnio-dietileno cido triamina pentaacetic e gadolnio-1,
4,7,10 tetraazaciclododecano cido 1,4,7,0 triacetic (Gd (DTPA) e Gd (DOTA),
respectivamente). A utilidade do uso de agente de contraste exgeno est na necessidade de
alcanar uma alta concentrao na rea de interesse, mantendo a concentrao mais baixa
possvel, em reas no relacionadas. Os ligantes coordenados com o on paramagntico reduz
sua toxicidade e aumenta a sua meia-vida no sangue, aumentando significativamente o
contraste. A conjugao destes ligantes de baixo peso molecular de polmeros biocompatveis,
tais como poliamidas, polissacardeos e albuminas geralmente melhoram as suas
caractersticas biofsicas e farmacolgicas (KIM et al, 2007).
O gadolnio (Gd-DTPA) considerado um agente paramagntico e diminui o tempo
de relaxamento T1 e T2. Em geral, o Gd-DTPA acelera a velocidade com que os prtons da

28

gua se alinham ao campo magntico principal. Isso resulta em um maior sinal de RM e maior
contraste, principalmente em reas onde o gadolnio atravessa a barreira hematoenceflica
(BHC). O agente de contraste permanece confinado ao meio intravascular por um perodo de
tempo, exceto se a BHC tiver sido lesada por processos patolgicos. O Gd-DTPA geralmente
usado com seqncias de pulso ponderadas em T1 (HAAGA, 1996). Normalmente o meio
de contraste paramagntico administrado por via intravenosa, freqentemente em bolus e
seguido ou no por injeo de soluo salina. A dose administrada varia entre 0,1 mmol/kg e
0,2 mmol/kg (LEOPOLDINO et al, 2005)
O gadolnio tem comportamento farmacolgico semelhante ao meio de contraste
iodado, utilizado em tomografia, ou seja, atua como um agente extracelular, difundindo-se
rapidamente do compartimento intravascular para o espao intersticial. Cerca de 80% da dose
deixa o compartimento vascular nos cinco primeiros minutos aps a injeo. Por esse motivo,
a aquisio das imagens de RM contrastada deve ser rpida, quando o objetivo do estudo
vascular. O gadolnio no entra nas clulas nem metabolizado pelo organismo, sendo
excretado por filtrao glomerular, com meia-vida biolgica de aproximadamente 90 minutos
(CALDANA et al, 2004).

2.4.2 Agentes de contraste superparamagnticos

NPSPMs so tipicamente mais eficazes ao diminuir o tempo de relaxamento T2 e
no T1. Esta tcnica pode oferecer uma resoluo espacial de 10-100 m, sem limitaes de
imagens de profundidade (FRULLANO e MEADE, 2007).
Os agentes de contraste constitudos de partculas de xido de ferro so
seletivamente absorvidos pelas clulas sistema retculo-endotelial (SRE) no fgado, bao e
medula ssea e resulta em perda de sinal em sequncias de imagem T2, devido aos efeitos de
susceptibilidade do ferro. Esta classe de agente de contraste tambm denominado xido de
ferro superparamagntico. Leses que contm um nmero insignificante de clulas do SRE
permanecem em grande parte sem ser afetadas pelo agente, enquanto o fgado normal
apresenta baixo sinal em T2. Isto proporciona um aumento da deteco de leses, em
comparao com imagens sem o uso do agente (SEMELKA e HELMBERGER, 2001).
O estudo de NPMs para uso em ambiente clnico estudado h um longo tempo. O
produto Feridex, produzido pela empresa Bayer HealthCare Pharmaceuticals Inc., que
constitudo de NPMs de primeira gerao, foi aprovado pelo FDA para a deteco de doenas
de fgado em 1993. Estudos relatam ter usado estas NPMs com dimetro entre 100 e 250 nm,
para deteco de doenas hepticas (TANIMOTO, MUKAI e KURIBAYASHI, 2006).

29

Uma nova gerao de NPMs oferece vantagens significativamente maiores do que

seus antecessores, como o fato delas possuirem revestimentos de polmero complexo e
permanecerem monodispersas em soluo. Alm disso, elas possuem uma meia-vida longa na
corrente sangunea, distribuio de tamanho uniforme, de 30 a 50 nm e maior relaxatividade
(OGHABIAN e FARAHBAKHSH, 2010).
Segundo a empresa Bayer HealthCare Pharmaceuticals Inc, que produz o agente de
contraste Feridex, estudos de imagem em ratos mostraram uma importante reduo

da

intensidade do sinal de RM do fgado, nas primeiras 24 horas aps a administrao, seguido

por um retorno gradual ao normal ao longo de 7 dias. Estes estudos tambm mostraram que o
ferro contido no fluido tornou-se parte do ferro contido no organismo. Estudos histolgicos
nos ratos mostraram que o ferro estava no SRE, tendo desaparecido entre 7 a 14 dias. Em
estudos clnicos humanos, no houve diferena na perda de intensidade de sinal em imagens
obtidas entre 0 e 3,5 horas aps a infuso. O retorno do sinal de intensidade normal ocorreu
entre 1 e 2 dias (BAYER, 2007). Na Tabela 2 esto apresentados alguns exemplos de agentes
de contraste, relacionando a sua situao de uso comercial e o respectivo tamanho das NPMs.

Tabela 2: Agentes de contraste baseados em NPMs, disponveis no mercado americano ou em

fase de estudo (adaptado de OGHABIAN e FARAHBAKHSH, 2010).
Nome
Situao
Tamanho da partcula
Lumirem, Gastromark, Ferumoxsil
Feridex, Endoren, Ferumoxide
Resovist (Ferrixan)
Sinerem, Combidex, Ferumoxtran
Clariscan

Aprovado
Aprovado
Fase III
Fase III
Descontinuado na fase II

> 300 nm
80 150 nm
62 nm
20 40 nm
20 nm

Outro agente de contraste, o Resovist, foi concebido para ser utilizado para a
deteco de leses focais em imagens de ressonncia magntica. Este composto possui ncleo
de ferro, com uma concentrao de 0,5 mmol/ml. O dimetro hidrodinmico das partculas
revestidas, esto na faixa entre 45 e 60 nm. Os ingredientes ativos so partculas de xido de
ferro superparamagnticas, revestidas com carboxidextrana. Um estudo feito na Alemanha
comparou a eficincia de internalizao celular do Resovist com outras NPMs, combinados
com diferentes revestimentos (SCHLORF et al, 2011). Este agente de contraste apresentou
forte absoro, comparado aos demais produtos estudados.

30

3 METODOLOGIA
A execuo das etapas experimentais do trabalho envolveu o uso de cobaias, que
foram anestesiadas e submetidas a imageamento em um equipamento de ressonncia
magntica, antes e aps a injeo venosa de diferentes doses de NPMs. As imagens obtidas
foram analisadas com o objetivo de avaliar o nvel de contrastao para cada dose.
As cobaias utilizadas foram ratos machos adultos, da linhagem Wistar, com peso
variando de 350 a 500g, obtidos no biotrio do curso de medicina veterinria da Universidade
Federal de Santa Maria. Os animais foram mantidos em uma sala separada, em ciclo de
claro/escuro de 12 h, a uma temperatura ambiente de 22(2) C, umidade relativa do ar entre
30 e 50%, com livre acesso a comida e gua. Estes animais foram usados de acordo com a lei
no 11.794, de 8 de outubro de 2008, que regulamenta o inciso vii do 1o do art. 225 da
constituio federal, estabelecendo procedimentos para o uso cientfico de animais (BRASIL,
2008).
Foram utilizadas, como agente de contraste de imagem, NPMs, obtidas junto
Laboratrio de Nanotecnologia Farmacutica e Sistemas de Liberao de Frmacos
da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal de Gois (ANEXO C). Estas NPMs
possuem ncleo de magnetita (Fe3O4) e foram divididas em dois lotes. Um dos lotes possui
revestimento de dextrana, cujo dimetro mdio, medido no Laboratrio do Centro
Universitrio Franciscano, de 76,1 nm. O outro lote possui revestimento de dupla camada de
cido olico e um dimetro polimodal de 48 nm (40,7%), 98,2 nm (34,8%) e 607,7 nm
(24,5%) (Anexo A). A concentrao de ferro no fluido magntico foi medida no laboratrio
de qumica da Universidade Federal de Santa Maria, atravs da tcnica de espectrometria de
emisso ptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES, Spectro Ciros CCD, Spectro
Analytical Instruments), utilizando a linha 259,941 nm. A concentrao medida de magnetita
da amostra revestida com dextrana foi de 9,02 g/L, enquanto que para a amostra revestida
com cido olico, a concentrao medida foi de 9,03g/L (Anexo B).
O equipamento de ressonncia magntica utilizado, cedido pelo servio de
radiodiagnstico do Hospital de Caridade Dr. Astrogildo de Azevedo, Santa Maria, marca
Philips, modelo Achieva, com campo de 1,5 T (Tesla), verso 2.5. A bobina receptora de
sinais utilizada para o estudo uma Sense wrist 4, normalmente utilizada para realizao de
exames de punho de seres humanos.
Numa primeira etapa, executou-se seqncias de imagens experimentais de
ressonncia magntica de um rato, para fins de ajuste dos parmetros tcnicos do
equipamento, objetivando a otimizao destas imagens. O rato foi anestesiado com uma

31

soluo composta por 1mL de cloridrato de cetamina a 10% e 1 mL de cloridrato de xilazina a

2%, diludos em 8 mL de soluo fisiolgica. A dose aplicada foi de 5,3 mL da soluo por
quilograma, por via intraperitoneal.

Aps vrias sries de imagens adquiridas, foram

otimizadas as sequncias em T1 TSE e T2 TSE. Foi estudada a regio do abdmen, com

interesse especial para fgado e bao. Para cada protocolo, as imagens foram adquiridas nos
planos de corte axial e coronal.
A etapa seguinte envolveu a administrao das NPMs nos ratos, por via endovenosa
intracaudal, e submisso dos mesmos aquisio das respectivas imagens. Para isso os ratos
foram divididos em 6 grupos, sendo cada grupo composto por de 3 animais. Desta forma,
doses de 0,46 mg/Kg, 0,92 mg/Kg e 1,82 mg/Kg de NPMs revestidas com dextrana foram
administradas em cada grupo de 3 ratos. Essas doses corresponderam a 0,05; 0,1 e 0,2 mL/Kg
respectivamente.
Considerando que a contrastao dos rgos foi menor quando as NPMs revestidas
com acido olico, as doses para este lote foram maiores: 1,82 mg/Kg, 3,6 mg/Kg e 7,2
mg/Kg. O nmero total de ratos utilizados nos experimentos vlidos foram de 18 animais.
Para cada rato foram realizadas as seqncias de imagens j descritas, antes e aps
10, 20, 30 e 40 minutos aps a administrao das NPMs. Os principais parmetros de
protocolo de imagem para as aquisies axiais, ajustados para o objetivo do estudo, so
apresentados na Tabela 3.
Tabela 3: Parmetros de aquisio e reconstruo das sequncias de imagens
Parmetro

Sequncia T1 TSE

Sequncia T2 TSE

Tempo de scan

6:06 min

06:59

Matriz de resoluo

236x190

232x189

70 mm

70 mm

0,16/0,16/2 mm

0,2/0,2/2 mm

Tempo de eco (TE)

22 ms

80ms

Tempo de repetio (TR)

473 ms

1.871 ms

Porcentagem de scan

80,7%

81,5%

Espessura de corte

2 mm

2 mm

SAR

1,6W/Kg

3W/Kg

PNS

59%

52%

Campo de viso
Voxel de reconstruo

32

A etapa seguinte do trabalho envolveu a anlise das imagens, com a participao de

um mdico radiologista com larga experincia em imagem por ressonncia magntica,
verificando-se principalmente o grau de contrastao dos rgos, especialmente fgado e bao.
Nesta etapa, utilizou-se o programa de visualizao de imagens mdicas Clear Canvas
Workstation, verso 2.0, de propriedade de Clearcanvas Inc. Toronto, Canad.

33

4 RESULTADOS E DISCUSSES
Apresentamos aqui os resultados obtidos atravs da anlise comparativa das
seqncias de imagens adquiridas antes e aps a administrao de diferentes doses de NPMs
nos dois grupos de ratos: o que recebeu NPMs revestidas com dextrana e outro, que recebeu
NPMs revestidas com cido olico.
Buscou-se eleger a seqncia que resultasse num grau de perda de sinal
(escurecimento) adequado deteco de eventuais focos patolgicos. Esta forma de anlise
baseia-se no fato de que leses tumorais so desprovidas de clulas fagocitrias, o que
siginifica que os tumores no so afetados pelas NPMs e portanto ficariam evidenciados em
relao ao parnquima sadio do fgado e bao.

4.1 ADMINISTRAO DE NPMs REVESTIDAS COM DEXTRANA

Para a realizao de imagens em seqncias T1 TSE, no houve qualquer diferena
na contrastao heptica na aquisio aps a injeo de NPMs em relao a seqncia sem a
injeo. Isto pode ser constatado nas imagens comparativas mostradas na Figura 15. Este
resultado no mudou para nenhuma das concentraes de NPMs injetadas. Isto demonstra que
as NPMs no alteraram o tempo de relaxao em T1.

Figura 15: Imagens axiais comparativas, de sequncia T1 TSE, ao nvel do fgado, antes (A) e
10 min ps injeo de 1,82 mg/Kg de NPMs (B).
As imagens obtidas 10 minutos aps a injeo de 1,82 mg/Kg de NPMs
apresentaram acentuado hipossinal em sequncia T2 TSE para fgado e bao (Figura 16).
Aparentemente esta dosagem foi excessiva, considerando que o parnquima heptico
praticamente desapareceu. Tambm verificou-se que os tecidos da parede abdominal,
constitudos basicamente por msculos e gordura, tambm apresentaram hipointensidade

34

Figura 16: Imagens axiais comparativas, ao nvel do fgado, antes (A) e 10 min ps injeo
de 1,82 mg/Kg de NPMs (B). O fgado (seta maior), o msculo (seta menor) e a gordura
(seta pontilhada) apresentaram hipossinal evidenciado na imagem B.
O acentuado efeito de hipossinal para essa dose, tambm em seqncia T2 TSE,
novamente fica evidente nas imagens obtidas no plano coronal. Pode-se comparar, na Figura
17, que o fgado (setas maiores) e o bao (setas menores) sofreram drstica reduo de sinal.

Figura 17: Imagens em seqncia T2 TSE no plano coronal, antes (A) e aps 10 min aps a
injeo de 1,82 mg/Kg de NPMs (B).
Com a injeo de uma dose de 0,92 mg/Kg, parece ter havido um efeito moderado,
ou seja, hipossinal controlado em fgado e bao, sem saturao. Nas imagens mostradas na
Figura 18, de cortes axiais adquiridos em seqncia T2, observa-se que o fgado apresentou
hipossinal na imagem B em relao imagem de pr-injeo, mostrada em A.

35

Figura 18: Imagens axiais comparativas em seqncia T2, ao nvel do fgado, antes (A) e 10
min ps injeo de 0,92 mg/Kg de NPMs (B).
O efeito de hipossinal para a dose de 0,92 mg/Kg tambm ocorreu no bao, conforme
pode ser observado na imagem B da Figura 19. Este resultado tambm era esperado, uma vez
que, assim como o fgado, o bao possui clulas do sistema de defesa que endocitam as
NPMs.

Figura 19: Imagens axiais comparativas, do mesmo experimento, ao nvel do bao (setas).
As seqncias de imagens executadas tardiamente injeo das NPMs demonstraram que a meia vida biolgica do fluido longa. Na Figura 20 esto apresentadas as
imagens adquiridas com 20 minutos (imagem A) e 40 minutos (imagem B) aps a injeo das
NPMs. Observa-se que praticamente no h variao da aparncia do parnquima heptico se
comparadas as seqncias adquiridas nos trs tempos ps-injeo (10, 20 e 40 minutos).

36

Figura 20:. Imagens axiais comparativas, ao nvel do fgado. A: 20 min aps a injeo de
0,92 mg/Kg de NPMs e B: 40 min aps a injeo.
Para a dose de 0,46 mg/Kg, o tecido heptico apresentou regies com moderado
hipossinal em seqncia T2 TSE, executada 10 minutos aps a injeo das NPMs,
permanecendo outras regies sem esse efeito, como pode ser visto na Figura 21. Esta
caracterstica manteve-se nas seqncias tardias de 20, 30 e 40 minutos.

Figura 21:. Imagens axiais comparativas, ao nvel do fgado. A: Sem agente de contraste e B:
10 min aps a injeo de 0,46 mg/Kg de NPMs .
As ponderaes sobre o aspecto e o grau de contrastao das imagens foi endossado
pelo mdico radiologista. Os resultados encontrados so indicativos de que o efeito esperado
das NPMs no sistema fagocitrio ocorreu.
O fato de ter havido efeito de hipossinal tambm em msculos e gordura da parede
abdominal ainda deve ser investigado, j que esse efeito ocorre basicamente pela endocitose
das NPMs pelas clulas de defesa.

37

4.1 ADMINISTRAO DE NPMs REVESTIDAS COM CIDO OLICO

Nas Figuras 22 a 24 esto apresentadas as imagens de seqncias obtidas antes e

aps a injeo de 1,82 mg/Kg de NPM revestidas com cido olico. Percebe-se que houve
perda de sinal no fgado, aps a injeo. Como a perda de sinal no muito acentuada, algumas
estruturas vasculares ainda podem ser identificadas. Entretanto, o bao parece no ter sofrido
o mesmo efeito, ou seja, no apresentou diferena de sinal em relao seqncia de controle
para essa dosagem.

Figura 22:. Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do fgado. A: sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 1,82 mg/Kg de NPMs .

Figura 23. Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do bao (setas). A: sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 1,82 mg/Kg de NPMs .

38

Figura 24. Imagens comparativas em T2, no plano coronal. As setas cheias marcam a
imagem do fgado e as setas pontilhadas, a imagem do bao. A: sem agente de contraste e B:
10 min aps a injeo de 1,82 mg/Kg de NPMs .
O efeito de perda de sinal do fgado ficou mais acentuado para a dose de 3,6 mg/Kg,
conforme mostrado na Figura 25. J o bao apresentou efeito moderado de perda de sinal,
nitidamente de forma menos intensa que o tecido heptico (Figura 26).

Figura 25. Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do fgado. A: sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 3,6 mg/Kg de NPMs .
Todas as imagens comparativas esto com as janelas de visualizao (nvel de brilho
e contraste) semelhantes, de forma a no haver comprometimento da anlise em decorrncia
deste fator.

39

Figura 26. Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do bao (setas). A: sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 3,6 mg/Kg de NPMs .
Para a aquisio de imagens em seqncia T1, a dose de 3,6 mg/Kg apresentou o
efeito de realce negativo do fgado (Figura 27). Entretanto, o bao foi apenas levemente
realado (Figura 28).

Figura 27. Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do fgado (setas). A: sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 3,6 mg/Kg de NPMs.

Figura 28. Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do bao (setas). A: Sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 3,6 mg/Kg de NPMs.

40

Para a dose de 7,2 mg/Kg, o efeito de perda de sinal tanto heptico quanto esplnico
foram acentuados. O parnquima destes rgos praticamente desaparece, conforme verificado
nas Figuras 29 (fgado) e 30 (bao).

Figura 29. Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do fgado. A: Sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 7,2 mg/Kg de NPMs.

Figura 30. Imagens axiais comparativas em T2, ao nvel do bao (setas). A: Sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 7,2 mg/Kg de NPMs.

Para a seqncia de imagens adquiridas em T1 TSE, a dose de 5,2 mg/Kg resultou

tambm na contrastao de fgado e bao, embora de forma menos acentuada que na
seqncia em T2 TSE. A Figura 31 mostra a comparao ao nvel heptico para esta
seqncia enquanto que o efeito sobre o bao est evidenciado na Figura 32.

41

Figura 31. Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do fgado. A: Sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 7,2 mg/Kg de NPMs .

Figura 32. Imagens axiais comparativas em T1, ao nvel do bao (setas). A: Sem agente de
contraste e B: 10 min aps a injeo de 7,2 mg/Kg de NPMs.
Conforme observado nas imagens obtidas, as NPMs revestidas com dextrana
resultaram em efeitos de hipossinal nas imagens hepticas e esplnicas com menor dose
injetada, se estas imagens forem comparadas com o lote revestido com cido olico. Um dos
parmetros que podem ter influenciado nos resultados que as NPs revestidas com dextrana
so de natureza hidroflica, enquanto que as NPs revestidas

com cido olico so

hidrofbicas. Considerando tambm que vrias caractersticas fsico-qumicas variaram entre

os dois lotes, como PH, dimetro mdio e potencial zeta, difcil determinar qual ou quais
fatores foram determinantes para as diferenas verificadas.
Os resultados da anlise das imagens, realizada em conjunto com um mdico
radiologista, com grande experincia em ressonncia magntica, est resumido nas Tabelas 4
e 5, apresentadas a seguir.

42

Tabela 4: Nveis de perda de sinal em fgado e bao em relao s doses injetadas de NPMs
revestidas com dextrana
Seqncia de
Dose
Fgado
Bao
Imagem
0,46 mg/Kg
0,92 mg/Kg
1,82 mg/Kg

T1 TSE

desprezvel

desprezvel

T2 TSE

moderado

moderado

T1 TSE

moderado

moderado

T2 TSE
T1 TSE

acentuado
fraco

fraco
fraco

T2 TSE

acentuado

acentuado

Tabela 5: Nveis de perda de sinal em fgado e bao em relao s doses injetadas de NPMs
revestidas com cido olico
Dose
Seqncia de Imagem
Fgado
Bao
1,82 mg/Kg
3,6 mg/Kg
7,2 mg/Kg

T1 TSE

fraco

desprezvel

T2 TSE

moderado

fraco

T1 TSE

acentuado

fraco

T2 TSE

acentuado

moderado

T1 TSE

acentuado
acentuado

fraco
acentuado

T2 TSE

No houve uma eleio sobre qual o melhor nvel diagnstico de hipossinal, tendo
em vista que o presente trabalho no envolveu a aplicao de NPMs em animais com leses a
serem diagnosticadas. Entretanto, as imagens que apresentaram um padro entre moderado e
acentuado de perda de sinal certamente possuem melhores condies de evidenci-las.
Em face aos efeitos observados, com evidente eficcia da aplicao de NPMs como
agente de contraste em imagens de ressonncia magntica, fica claro que h espao para que
outros trabalhos possam complementar os resultados deste, explorando aspectos que no
tenham sido contemplados.

43

5 CONCLUSES

No decorrer deste trabalho foram avaliados, atravs de imageamento por ressonncia

magntica, os efeitos de perda de sinal de radiofreqncia das imagens dos rgos do sistema
fagocitrio de ratos, aps a injeo de NPMs, comparativamente com as imagens obtidas
antes da injeo.
Fgado e bao apresentaram evidente efeito de contraste negativo (hipossinal),
principalmente em sequncias T2 TSE, aps a administrao endovenosa de NPMs. Este
resultado implica que, em havendo leses tumorais nesses rgos, estas, por estarem
desprovidas de clulas fagocitrias, tornar-se-o mais visveis nas imagens de ressonncia
magntica, facilitando a sua localizao e, portanto, o diagnstico.
Como o lote de NPMs revestido com dextrana apresentou melhor eficincia, ou seja,
produziu o efeito desejado com menor dose injetada, esta opo de revestimento mostra-se
mais favorvel s aplicaes em imagenologia ou, com as devidas funcionalizaes, pode
servir a propsitos teraputicos, carreando frmacos para os rgos-alvo citados.
Portanto, ao comprovar a eficcia da aplicao diagnstica de NPMs, sintetizadas e
caracterizadas em laboratrios nacionais, o presente trabalho evidencia o potencial que as
instituies brasileiras possuem de produzir solues que hoje so do domnio apenas de
grandes laboratrios de empresas estrangeiras.
Os estudos toxicolgicos e a administrao das NPMs em ratos aps a induo e
tumores hepticos um caminho natural a seguir em trabalhos futuros. Se tais estudos
apontarem que as NPMs do tipo que foram utilizadas neste trabalho possam ser aplicadas
tambm em seres humanos, a criao de um produto comercial poderia ser vislumbrada.

44

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48

ANEXO A
Caracterizaes das NPMs efetuadas no laboratrio de nanocincias do
Centro Universitrio Franciscano UNIFRA.

PARTE 1: NANOPARTCULAS MAGNTICAS REVESTIDAS COM DEXTRANA

1.1.

Potencial Zeta : -8,95 mV (Desvio padro: 11 mV)

Figura A.1: Grfico dos valores de potencial zeta

1.2.
1.3.
1.4.

ndice de polidisperso (PDI): 0,27

PH: 6,6
O dimetro mdio, obtido aps 3 medidas com 19 amostragens cada, foi de 76,12 nm

49

PARTE 2: NANOPARTCULAS MAGNTICAS REVESTIDAS COM CIDO OLICO

2.1. Potencial zeta: -23,7 mV, com desvio padro de 15,5 mV

1.5. ndice de polidisperso (PDI): 0,52

1.6. PH: 8,9
1.7. O dimetro mdio, obtido aps 3 medidas com 19 amostragens cada, foi polimodal,
apresentando 3 picos com medidas de 48,6 nm, 98,2 nm e 607,7 nm. Essas medidas
corresponderam a 40,7%, 34,8% e 24,5%, respectivamente.

Equipamentos utilizados:
1) PHmetro, marca Digimed, modelo DM-22, fabricado por Digicron Analytical
2) Zetasizer, modelo Nano 2S, fabricado por Malvern Instruments

50

ANEXO B
Caracterizaes das NPMs efetuadas no laboratrio de Qumica da
Universidade Federal de Santa Maria.
Magnetita com Dextrana:
Fe = 6.537,4 mg L-1 ou 6,537 g L-1

Magnetita com cido Oleico

Fe = 6.461,4 mg L-1 ou 6,461 g L-1

Praticamente a mesma concentrao de ferro nos dois.

PROCEDIMENTO:
As amostras foram preparadas da seguinte forma: em tubo de polietileno (Sarsted, 15
mL) foram adicionados 0,05 mL da amostra juntamente com 3 mL de HNO3 com
concentrao 5 mol L-1 (MERCK, bidestilado) e aquecido em forno de microondas (5 vezes
de 10 segundos cada, com intervalo de 30 segundos para esfriar). Aps as solues foram
aferidas a 5 mL com gua purificada em sistema Milli-Q.
A tcnica utilizada para a determinao do ferro foi espectrometria de emisso ptica com
plasma indutivamente acoplado (ICP OES, Spectro Ciros CCD, Spectro Analytical
Instruments), utilizando a linha 259,941 nm. A operao do equipamento foi conforme
instrues do fabricante.

51

ANEXO C
Caracterizaes das NPMs efetuadas no laboratrio de Qumica da
Universidade Federal Gois.
- Difratograma de Raio X da PM do FMAO-AO ( antes do revestimento)
(Fe2O4)

(311)

250

200

Intensity

150

(511) (440)

(220)
100

(400)
(422)
50

20

30

40

50

60

70

(2 ) Degree

- Curva de magnetizao do FMAO-AO (Amostras j revestidas feitas em triplicata)

- Espectro de Infra vermelho do FMAO-AO