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UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE ENFERMERA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BSICAS
CTEDRA DE MICROBIOLOGA

MDULO DE PRCTICAS
DE MICROBIOLOGA
PARA EL ESTUDIANTE DE
ENFERMERA
SEGUNDO SEMESTRE

Autores:

Dra. Mara Antonia de la Parte Prez

Dra. Mara del Pilar Hurtado Rico
Lic. Jean Jacques Pitteloud

2
Caracas, octubre de 2011
CONTENIDO
Pgina

I.

Informacin relativa a la Conducta en el Laboratorio de Microbiologa

II.

Objetivos terminales de la asignatura ...................................................

III.

Diagrama de un microscopio ptico ....................................................

IV.

Instructivo para el uso del microscopio ptico .....................................

V.

Informacin relativa a la asignatura: programacin y evaluacin .......

VI.

Morfologa bacteriana y mtodos de coloracin ...................................

11

VII.

Obtencin de muestras biolgicas para estudio microbiolgico............

31

VIII.

Diagnstico Microbiolgico de las Infecciones urinarias ....................

45

IX.

Mtodos de esterilizacin en los servicios de salud............................

64

X.

Higiene en el medio hospitalario ........................................................

71

OCTUBRE 2011
INFORMACIN IMPORTANTE PARA RECORDAR Y DIRIGIR
NUESTRA CONDUCTA DURANTE LAS PRCTICAS EN EL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
1. Las prcticas de Microbiologa tendrn lugar una vez a la semana en los
laboratorios de prctica o en las aulas designadas a tal fin, los das lunes en el
horario programado de 09:00 a 11:50, de acuerdo a la programacin semestral de la
Ctedra publicada en la cartelera y los alumnos sern agrupados y asignados al
profesor de prcticas correspondiente, segn las necesidades y recursos de la
Asignatura.
2. Para los encuentros terico-prcticos es indispensable asistir con bata de
laboratorio debidamente abotonada y limpia; tambin llevar lapiceros de color rojo y
azul.
3. Una vez iniciada la prctica el alumno no podr salir del Laboratorio o del Aula, sin
el permiso del (de la) profesor(a).
4. El mesn de trabajo deber estar libre de cualquier objeto que no forme parte de la
prctica. Las carteras, libros y objetos personales deben estar guardados en los
lugares destinados para tal fin. Si tiene dudas al respecto solicite informacin al (a
la) profesor(a).
5. No est permitido fumar, comer, beber, maquillarse o peinarse dentro del ambiente
de los salones de clase y en los laboratorios.
6. En el caso de que se produzca algn accidente en el laboratorio, avise de inmediato
al (la) profesora.
7. Si un material de trabajo (ejemplo, cultivo bacteriano, colorantes, u otro) entra en
contacto con piel, mucosas o herida, lave de inmediato con abundante agua y
notifique el hecho al (la) profesor(a).
8. Es obligatorio lavarse las manos con agua y jabn al terminar cada ejercicio
prctico.
9. Los estudiantes debern estudiar y aprender el captulo correspondiente al tema de
la sesin semanal de prctica o disertacin, antes de asistir a la misma.
10. Realizada la evaluacin escrita preliminar, el profesor har una introduccin y una
demostracin respecto a la manera de trabajar y conducirse en el Laboratorio de
Microbiologa, sealar las normas que deban cumplirse durante cada sesin en
particular y los riesgos a los que se expone el alumno si no se cumplen
cuidadosamente las normas y recomendaciones indicadas.
11. Las inasistencias a las Sesiones de Prcticas, justificadas o no, son irrecuperables,
as como la nota de evaluacin de la misma
12. Con 25% de inasistencias a las sesiones Prcticas y Disertaciones, (ms de dos
sesiones) se perder la asignatura por inasistencia. Este evento retira el derecho al
examen de reparacin de la asignatura.

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Antes de retirarse del ambiente del Laboratorio, compruebe que su lugar de
trabajo queda en perfecto orden y el banco guardado debajo del mesn.
OBJETIVOS TERMINALES DE LA ASIGNATURA
Al concluir el programa terico-prctico, el alumno estar en capacidad de:
1. Asumir la existencia en la naturaleza de microorganismos invisibles al ojo desnudo y
reconocer la importancia de los microorganismos en su interaccin positiva y negativa
con el ser humano sano y enfermo, en cada una de las etapas de su vida evolutiva.
2. Interpretar la importancia para el profesional de Enfermera, del conocimiento
general de la Bacteriologa, Micologa y Virologa, as como la identificacin y
prevencin de las Infecciones de Transmisin Sexual y las Hepatitis virales.
3. Interpretar la importancia de la flora normal residente en los diferentes rganos y
sistemas del ser humano.
4. Interpretar
los
fenmenos resultantes de la interaccin hospedador-agente
patgeno, considerando las variables: mecanismos de defensa del hospedador,
mecanismos de agresin del parsito, medio ambiente y mecanismos de transmisin.
5.

Describir los mecanismos de defensa del organismo ante la agresin microbiana y

las alteraciones de la respuesta inmunitaria que conducen a estados patolgicos
del
hospedador, relacionados con las enfermedades infecciosas
del humano.

6. Diferenciar entre infeccin, enfermedad infecciosa y portador asintomtico.

7. Describir las caractersticas estructurales y funcionales de bacterias, hongos y virus
productores de enfermedad en el humano.
8. Describir la etiologa y patogenia de las enfermedades infecciosas, especialmente
aquellas con elevadas cifras de morbilidad y/o mortalidad en Venezuela.
9. Describir los signos y sntomas clnicos generales ms resaltantes o
caractersticos de las enfermedades infecciosas.
10. Elegir los exmenes de laboratorio ms usuales que complementan el
diagnstico de las enfermedades infecciosas ms frecuentes en nuestro medio.
11. Describir la preparacin del paciente para los exmenes de laboratorio ms
frecuentes en bacteriologa, micologa y virologa, as como dominar las tcnicas de
recoleccin de muestras para los estudios bacteriolgicos, micolgicos, y

5
virolgicos ms frecuentemente utilizados para el diagnstico de las enfermedades
infecciosas.
12. Aplicar los criterios adecuados para la obtencin y envo de las muestras para
exmenes microbiolgicos que permitan
el
diagnstico
definitivo de las
enfermedades
infecciosas.
13. Identificar las medidas de prevencin y control de las enfermedades infecciosas,
para su aplicacin en la comunidad, la familia y el individuo, especialmente las
infecciones hospitalarias. En relacin con las tcnicas de desinfeccin, esterilizacin
e higiene, as como el efecto de la aplicacin de estas medidas preventivas en la
morbilidad y/o mortalidad por estas enfermedades y los beneficios que se obtienen
de la aplicacin de medidas preventivas.
14. Asumir su responsabilidad en las actividades que compartir con el Equipo
de Salud, como parte de una atencin integral, en todo lo relacionado con la
patologa infecciosa de nuestro medio.
15. Valorar la necesidad de permanecer actualizado en sus conocimientos sobre la
microbiologa y la patologa infecciosa, mediante la lectura de textos y otras
publicaciones, partiendo de la premisa que la Microbiologa es una
disciplina
dinmica con verdades de corta duracin.
16. Participar en la educacin del hombre sano y enfermo para la prevencin de las
enfermedades infecciosas, siendo modelo y ejemplo en su centro laboral y en la
comunidad.
17. Participar activamente en la realizacin de tareas individuales y grupales
permitan auto-desarrollarse.

que le

18. Aplicar el mtodo cientfico en la solucin de problemas inherentes a la

Microbiologa.
19. Integrar los conocimientos microbiolgicos a TODAS las actividades del ejercicio de la
Enfermera, siempre con orientacin ecolgica e interdependencia sistmica.
20. Promocionar con la prctica los valores ticos en relacin con el ser humano y el
ambiente.

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MICROSCOPIO PTICO

INSTRUCTIVO RECOMENDADO PARA LECTURA ANTES DE CADA UNA DE

LAS PRCTICAS DONDE SE REQUIERA EL USO DEL MICROSCOPIO PTICO

1.

Retire la cubierta del microscopio si est cubierto.

2.

Identifique cada una de sus partes segn el esquema que aparece en la pgina
anterior de este "Mdulo de Prcticas". Esta actividad debe realizarse antes de
cada una de las prcticas.

3.

Para la observacin microscpica de los microorganismos a estudiar usted

encontrar la preparacin montada sobre la platina de su microscopio y SOLO
deber ajustar el enfoque movilizando NICAMENTE el tornillo micromtrico. Si
no consigue el ajuste con este NICO paso, avise a su profesor quien le facilitar
ayuda. EN NINGN MOMENTO DEBE MOVILIZAR EL TORNILLO
MACROMTRICO.

4.

Cada una de las observaciones al microscopio debern anotarse en sus

apuntes con el dibujo explicativo que le permita recordar cada uno de los detalles
visualizados. Esta tarea le ayudar para el estudio posterior.

5.

Si presenta alguna duda en relacin el uso correcto del microscopio, no dude en

consultar a su profesor-facilitador.

INTRODUCCIN
La asignatura Microbiologa est incluida en el programa destinado a la
formacin del profesional de la Enfermera de la Facultad de Medicina de la
Universidad Central de Venezuela, como curso fundamental para su aplicacin a lo
largo de todas las actividades del egresado, considerando la importancia de las
enfermedades infeccionas en nuestras comunidades, en el hospital y otros centros de
atencin para la salud.
El curso de Microbiologa incluye tambin las tcnicas de higiene hospitalaria, la
evaluacin de la efectividad de los desinfectantes ms comunes y la aplicacin de las
Precauciones Estndar para la prevencin de infecciones laborales.
Este material de apoyo para el(la) alumno(a) tiene como objetivo servir de base
para la preparacin de las actividades prcticas comprendidas en el programa de la
asignatura.
El propsito del Laboratorio de Microbiologa, consiste en el aislamiento e
identificacin de un microorganismo, implicado en la produccin de una enfermedad
infecciosa. De ah que sea necesario establecer un protocolo que permita la adecuada
obtencin y transporte de las diferentes muestras biolgicas para el estudio
microbiolgico, ya que el xito o fracaso de los resultados obtenidos estarn
estrechamente relacionados con estos dos procedimientos fundamentales.
ESTRATEGIAS INSTRUCCIONALES APLICABLES PARA TODAS LAS SESIONES
PRCTICAS Y DISCUSIONES SEMINARIALES
Mtodos:

Exposicin y discusin

Tcnicas:

Demostracin
Discusin
Interrogatorio
a) Oral
b) Escrito

Actividades del docente:

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Al inicio de cada sesin prctica el profesor en su funcin de facilitador, realizar
una introduccin al tema y explicar en forma demostrativa durante 10 a 15 minutos,
los objetivos de la actividad a iniciarse.
Al finalizar la prctica, iniciar ejercicios de retroalimentacin dentro del grupo
para aclarar dudas y fijar conocimientos.
Actividades del alumno:
Para una mejor comprensin y aprovechamiento del curso es necesario:
-

Asistencia puntual a las sesiones prcticas programadas para el semestre segn

el calendario pautado.

Lectura previa del contenido de la prctica correspondiente y ejercicios

recomendados en el material de apoyo.

Estudio y preparacin de la prctica correspondiente.

Estudio y preparacin de la actividad de discusin o disertacin correspondiente.

Realizar las consultas necesarias, bibliogrficas o a los profesores de la

asignatura, para completar la compresin del contenido de la prctica o
disertacin antes de asistir a la sesin correspondiente.

Elaborar las preguntas que hayan surgido durante el estudio previo para aclarar
dudas durante la sesin prctica, actividad o de discusin.

Al finalizar el profesor la Introduccin a la Sesin, el alumno realizar las actividades

recomendadas para cada una de las prcticas programadas.
Recursos:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)

Pizarrn
Retroproyector para lminas de acetato
Proyector de diapositivas u otro audiovisual
Sistema de "Data-Show"
CD o pendrive o memoria con el material de proyeccin
Instrumentos del laboratorio microbiolgico
Lminas de acetato u otro audiovisual disponible
Presentaciones en Power Point
Material biolgico, medios de cultivo, reactivos y preparaciones en
lminas portaobjetos para demostracin.
j) Pelculas y/o videos

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Evaluacin:
Diagnstica - se comprobar si el alumno ha ledo, estudiado y comprendido el
contenido terico de la prctica.
Formativa - se relacionar el contenido prctico con el contenido terico impartido
previamente.
Sumativa - la nota total estar formada por: las notas parciales obtenidas en la
evaluacin escrita (prueba corta), la preparacin previa de la misma, la participacin y
actividades individuales realizadas y las respuestas de las preguntas de autoevaluacin recomendadas para la sesin prctica, incluidas en el material de apoyo.
BIBLIOGRAFA A CONSULTAR PARA AMPLIAR CONOCIMIENTOS:
1. Carmona O, Gmez MJ, Montes T, Marcano C y Mario F.
Mdica de Divo. McGraw-Hill . Interamericana.
2.

Microbiologa

Nez MJ, Gmez MJ y Carmona O. Microbiologa Mdica (Tomos I y II)

Publicaciones U.C.V.

3. Stuart Walker T. Microbiologa. McGraw-Hill Interamericana.

4. Brooks GF, Butel JS y OrnstonLN. Microbiologa Mdica de Jawetz,
Melnick y Adelberg. Editorial Manual Moderno. 16. Edicin.
5. Volk WA. Microbiologa Bsica. Editorial Harla. 7. Edicin.
6. Kenneth J. Ryan/C.George Ray (Champoux-Drew-Neidhardt-Plorde) Sherris
Microbiologa Mdica Editorial McGraw-Hill. 4 edicin.
7. Murray RP, Rosenthal KS, Pfaller MA. Microbiologa Mdica. ElsevierMosby. Barcelona.

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8. Microbiologa Mdica. Ctedra de Microbiologa. Escuela de Medicina Lus
Razetti. Facultad de Medicina. UCV. Caracas.

PRACTICAS 1 y 2
MORFOLOGA BACTERIANA Y MTODOS DE COLORACIN
OBJETIVOS PRINCIPALES:
Al finalizar la prctica el estudiante estar en capacidad de realizar un extendido
para observacin de las bacterias en fresco y para coloracin as como de reconocer
las bacterias segn su morfologa y respuesta a la coloracin de Gram y Ziehl Neelsen,
en base a observaciones al microscopio.
OBJETIVOS ESPECFICOS:
Al finalizar la prctica, el estudiante estar en capacidad de:
a) Demostrar el uso correcto del microscopio como instrumento fundamental en
Microbiologa, en base al manejo del aparato.
b) Demostrar la tcnica y procedimiento de elaboracin de un frotis en fresco a
partir de un medio de cultivo slido o lquido, utilizando el material previsto para
la prctica.
c)

Demostrar la tcnica y procedimiento de la coloracin de un extendido por el

mtodo de Gram, utilizando el material previsto para la prctica.

d) Describir la afinidad tintorial, morfologa y agrupacin de las bacterias mediante

la observacin microscpica.
e) Identificar las bacterias segn su morfologa y la respuesta a la coloracin de
Gram.
f)

Identificar las bacterias segn la respuesta a la decoloracin cida.

CONTENIDOS:

13
1.
2.
3.
4.

Preparacin de frotis
Observacin de las bacterias al fresco
Examen microscpico previa coloracin del frotis
Examen microscpico de preparaciones teidas:
- Coloracin de Gram
- Coloracin de Ziehl Neelsen

ACTIVIDADES:
1. Manejo del material del Laboratorio de Microbiologa
2. Preparacin de extendidos a partir de un cultivo bacteriano en medio slido o
lquido e incluso de una muestra clnica directa.
3. Tincin de extendido (frotis) segn el mtodo de Gram
4. Tincin de extendido (frotis) segn el mtodo de Zielh Neelsen
5. Observacin microscpica de las lminas preparadas.
EVALUACIN:
Prctica No. 1. Prueba corta escrita sobre el contenido de la prctica.
Prctica No. 2. Evaluacin de la observacin microscpica de extendidos problema
que incluyen material conocido en la prctica No.1.
Para otros aspectos sobre evaluacin refirase al contenido especfico sobre ese
aspecto al inicio de esta publicacin.
Mdulo compilado actualizado y digitalizado por la profesora Mara Antonia de la
Parte Prez - octubre de 2011

14

INTRODUCCIN:
La palabra Microbiologa es un trmino muy amplio que significa el estudio de los
organismos vivientes que individualmente son demasiado pequeos para observarse a
simple vista. Incluye el estudio de las bacterias (bacteriologa), los virus (virologa), las
levaduras y hongos (micologa), los protozoarios (protozoologa). Estas formas de vida
se conocen con el nombre de microorganismos.
Las bacterias son un grupo heterogneo de organismos unicelulares. Su
apreciacin no es posible a simple vista por lo que se recurre al uso del microscopio
ptico, ya conocido y estudiado por ustedes, el cual a travs del empleo conjunto de
sus objetivos y oculares permite la amplificacin de la imagen. Los oculares estn
fabricados con diferentes amplificaciones, 5X, 10X, y 15X, (significando X el nmero de
veces que se ha aumentado el tamao actual). El empleado ms frecuentemente es el
ocular 10X. Un objetivo 10X aumenta tambin 10 veces la imagen del objeto en
estudio. De manera que podemos concluir que el aumento resultante ser el producto
de la multiplicacin del poder de amplificador del objetivo y ocular empleados para el
momento.
El objetivo de inmersin en aceite permite una mayor resolucin y se emplea
casi de manera exclusiva para el estudio de las bacterias. Amplifica la imagen cerca de
97 veces y si estamos empleando un ocular 10X la amplificacin total del objetivo ser
de 970X.
Las bacterias son microscpicas y de mucho menor tamao que los protozoarios
y hongos verdaderos. Los virus son ultramicroscpicos y por lo tanto imperceptibles al
microscopio ptico siendo necesario el empleo del microscopio electrnico para su
apreciacin.
La medida microscpica la constituye el micrmetro (m), constituyendo sta la
milsima parte de un milmetro. Para establecer una relacin tenemos que la cabeza
de un alfiler tiene un dimetro aproximado de casi dos milmetros, y por lo tanto 2000
m. Un protozoario tpico tiene casi 200 m de largo y por lo tanto 10 de estos

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organismos alineados uno detrs del otro, pudieran alcanzar el dimetro de la cabeza
de un alfiler.
Algunas bacterias comunes miden 1 m de longitud y por lo tanto 2000 de ellas
podran alcanzar el tamao de la cabeza de un alfiler.
El microscopio ptico, al amplificar la imagen hasta 1000 veces o ms, permite
una buena visualizacin de la mayora de las bacterias, pero muestra pocos de sus
detalles.

CMO SE IDENTIFICAN LAS BACTERIAS?

1.
2.
3.
4.

Para iniciar el proceso de identificacin se requiere un mnimo de informacin:

Tamao, forma y disposicin del microorganismo.
Reaccin con la tincin de Gram
Motilidad
Tamao y aspecto de toda la colonia bacteriana

Aunque miles de especies son diferentes por muchos factores, muchas bacterias o
grupos de ellas tienen algunas caractersticas en comn.
Al microscopio ptico la diferencia ms simple entre las bacterias es su estructura y
forma o morfologa, con las cuales se inicia el estudio de las bacterias. La pared
celular rgida determina la forma de una bacteria. Su aspecto al microscopio es uno de
los rasgos de mayor importancia utilizados en su identificacin.
Se consideran tres tipos de morfologa en las bacterias:
- clulas ms o menos esfricas conocidas como cocos,
- otras alargadas o cilndricas denominadas bacilos y
- otras en forma de espiral o saca-corchos.
Existen sin embargo bacterias que tienen formas variables y se les designa
pleomrficas (muchas formas).
Los cocos existen diferentes disposiciones y la agrupacin especfica de las clulas
puede ser caracterstica de algunos gneros. As tenemos que pueden disponerse en
pares (diplococos), en cadenas cortas o largas (estreptococos), agrupaciones
irregulares o racimos por multiplicacin en dos o ms planos.

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COCOS EN RACIMOS
Ej. ESTAFILOCOCO

COCOS EN CADENA
Ej. ESTREPTOCOCO

COCOS EN PARES
UNIDOS POR LOS
EXTREMOS

DIPLOCOCOS
Ej. NEISSERIA

La morfologa de los bacilos difiere de una especie a otra de acuerdo a sus

proporciones. Algunos son largos y muy delgados. Si presentan extremos afilados se
les considera fusiformes. Otros tienen aspecto filamentoso. Otros son casi tan anchos
como largos parecindose entonces a los cocos y reciben por tanto el nombre de
cocobacilos. Los vibriones son bastones curvos que parecen comas. En ocasiones
crecen juntos en serpentina o en hebras en forma de S.
A diferencia de los cocos, los bacilos solo se dividen en un plano, observndose
como clulas nicas, en pares o cadenas cortas o largas.

EXTREMOS
CUADRADOS
EJ. BACILLUS

EXTREMOS
.REDONDEADOS
EJ. SALMONELLA

EN PALILLO DE
TAMBOR
CORYNEBACTERIUM

FUSIFORME
FUSOBACTERIUM

EN COMA
VIBRIO

Las formas espirales constituyen una gran variedad de bacterias cilindradas que
no son rectas como los bacilos, sino enrolladas en diferentes grados constituyendo as

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los espirales propiamente (espirales o hlices como sacacorchos), y las espiroquetas,
con las mismas caractersticas pero capaces de flexionarse y moverse por ondulacin.

ESPIROQUETA
ESPIRAL EXTENDIDA Ej. BORRELIA

ESPIROQUETA
ESPIRAL APRETADA Ej. TREPONEMA

Aunque la forma de una bacteria est determinada por su gentica, condiciones

externas pueden alterar en forma radical la morfologa de una clula bacteriana. Por
otra parte a medida que envejece la bacteria sta puede hincharse o revelar
ramificacin siendo stas manifestaciones de involucin.
Las bacterias pueden ser mviles o no. La movilidad es posible a travs de
apndices largos en forma de hebras denominados flagelos. De acuerdo al nmero y
localizacin de sus flagelos los cuerpos de las clulas bacterianas se clasifican en:

A. MONOTRICO O
POLAR

B. ANFITRICO

C. LOFOTRICO

D. PERITRICO

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Algunas bacterias presentan una movilidad deslizante, se mueven sobre las
superficies por ondas de contraccin producidas en el citoplasma, pero este
mecanismo es menos importante.
Las bacterias en su estado natural son difciles de apreciar con el microscopio
ptico debido a que la mayor parte de ellas son casi incoloras cuando se observan
individualmente, an cuando el cultivo presente su color particular. Debido a que el
empleo de colorantes que se combinan qumicamente para teir las bacterias las mata,
a veces es necesario observarlas vivas, sin emplear an mtodos de tincin y as poder
apreciar si son mviles o no.
El examen microscpico de las bacterias al fresco (sin colorear) facilita la
observacin del movimiento bacteriano mientras que coloreado o teido, permite
determinar la forma, tamao, disposicin, presencia de cpsula, formacin de esporas
y disposicin y nmero de flagelos.
La observacin microscpica al fresco se puede hacer en campo claro, campo
oscuro o por contraste de fase.
En la microscopa en campo claro los rayos de luz viajan desde la muestra a travs del
vidrio y el aceite rpidamente lo que permite una imagen clara.
En el campo oscuro un condensador especial que produce un cono tubular de
luz visible permite que no llegue luz al ojo a menos que se refleje por algn objeto que
se encuentre en el campo microscpico pudiendo hacerse visibles las estructuras que
proporcionen un contraste insuficiente con el medio que las rodea. Esta tcnica es
particularmente valiosa para la observacin de bacterias vivas, particularmente
aquellas que son tan delgadas que se acercan al lmite de resolucin del microscopio
compuesto.
La microscopa por contraste de fases es el medio ideal para observar la materia
viviente en su estado natural, debido a que las ondas luminosas que pasan a travs de
un organismo transparente, emergen en fases diferentes dependiendo de las
propiedades de los elementos que atraviesan. Un sistema ptico especial convierte
esta diferencia de fase en una diferencia de intensidad apareciendo unas estructuras
ms oscuras que otras.
Las bacterias se observan ms frecuentemente en preparaciones coloreadas o
teidas que en el estado natural, debido a que se hace ms fcil apreciarlas y
estudiarlas.
Se pueden emplear tinciones que pongan de manifiesto la estructura de la pared
celular de acuerdo a su comportamiento frente a las coloraciones de Gram y de ZiehlNeelsen.

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PREPARACIN DEL FROTIS:
El frotis o extendido, es una capa delgada de material biolgico a estudiar, que
se extiende en una lmina portaobjetos para su estudio microscpico, pudiendo
obtenerse a partir de muestra de secreciones, excreciones, lesiones y de los mismos
cultivos.
La confeccin del frotis comprende:
1. Toma previa de una muestra del material a estudiar. La observacin del
microorganismo ser posible en la medida que la muestra contenga no menos de
10 microorganismos por mL.
2. La lmina portaobjeto a emplear limpia, sin grasa se pasa por la lmina del
mechero.
3. Colocar una gota de solucin fisiolgica estril en su centro.
4. Se toma el asa de alambre o platino, se esteriliza en la llama del mechero, se deja
enfriar sin contactarla con objeto alguno y se toma una partcula del material que se
va a estudiar. Este material se dispersa en la gota colocada previamente y se
busca obtener un extendido delgado. Si el material a estudiar se encuentra ya en
un medio lquido no es necesaria la gota de solucin fisiolgica previa y se coloca
directamente la gota del material en medio lquido.
5. Esterilizar el asa nuevamente en la llama del mechero.
Si se quiere observar un frotis en fresco este es el momento, previa colocacin de
una laminilla cubreobjeto. Se visualiza directamente con objetivo de inmersin. Si la
bacteria es mvil en este momento podr apreciarse en movimiento.
5

El movimiento se puede a observar de manera ms satisfactoria en los cultivos

jvenes, de 18-24 horas o menos, debido a que las bacterias tienden a hacerse
inmviles en los cultivos viejos.
Si se prepara el frotis con el objeto de colorearlo entonces:
6. Dejar que el frotis seque espontneamente al aire ambiental.
7. Pasar la cara inferior de la lmina varias veces rpidamente sobre la llama del
mechero de manera de fijarlo, evitando la sobre exposicin al calor.
De esta forma el frotis se encuentra listo para ser coloreado.
TINCIN DEL FROTIS O EXTENDIDO
Los colorantes se combinan qumicamente con el protoplasma bacteriano; el
proceso mismo de la tincin mata la bacteria, lo que significa que el proceso en s es
bastante violento y puede producir artefactos.
Los colorantes ms frecuentemente usados son sales. Las clulas bacterianas
son ricas en cidos nucleicos, los cuales portan cargas negativas en forma de grupos

20
fosfato; estos se combinan con los colorantes bsicos con carga positiva. Los
colorantes cidos no tien la clula bacteriana y pueden ser usados para proporcionar
un color de contraste.
Los colorantes alcalinos ms frecuentemente empleados son el cristal violeta, la
safranina y el azul de metileno.
Los colorantes bsicos tien la clula uniformemente. Sin embargo se pueden
emplear tcnicas especiales para diferenciar flagelos, cpsulas, paredes celulares,
membranas celulares, grnulos, ncleos y esporas.
Los colorantes cidos no tien la clula bacteriana y por lo tanto se emplean
para resaltar aquellas clulas que no se tien. Como la bacteria es incolora en
contraste con un fondo coloreado, esta tcnica es de mucho valor para observar la
forma de las clulas. Debido a que las cpsulas no se tien con las tcnicas
convencionales, estas clulas se suspenden en una solucin de tinta china la cual al no
poder penetrarla proporciona un fondo negro en el que las cpsulas se observan como
un rea clara.
PREPARACIN DEL FROTIS

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Esquema tomado de una Gua Prctica de la Ctedra

de Microbiologa de la Escuela de Medicina JM Vargas. UCV

TINCIN SIMPLE

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Es el tipo de tincin ms sencilla. Consiste en cubrir el frotis, previamente fijado,
con una de las siguientes coloraciones: violeta de genciana, cristal violeta, safranina,
azul de metileno, fucsina bsica fenicada u otro colorante alcalino. Despus de 30-60
segundos se lava la laminilla bajo el chorro de agua y se seca el frotis con suma
precaucin, estando entonces listo para su visualizacin microscpica, emplendose el
objetivo de inmersin en aceite, previa colocacin de una gota de aceite directamente
sobre el frotis teido y descendiendo este objetivo hacia el aceite y la lmina.
COLORACIN DE GRAM
En 1884 el dans Christian Gram desarroll una tincin especial, la ms til y
comnmente usada en bacteriologa. Es una tincin diferencial y por lo tanto permite
distinguir a las bacterias en dos grandes grupos, grampositivas y gramnegativas,
facilitando mucho su identificacin.
PROCEDIMIENTO PARA LOGRAR UNA TINCIN DE GRAM.
1. Colorear con violeta de genciana o cristal violeta durante un minuto y luego lavar la
lmina con agua destilada preferiblemente.
2. Cubrir el frotis con Yodo de Gram (yoduro de potasio) durante un minuto, y lavar la
lmina de nuevo.
3. Manteniendo sujeta la lmina entre el pulgar y el ndice, colquela de manera de
obtener un ngulo de 45 con la superficie de trabajo, dejando gotear el alcoholacetona, que acta como decolorante, hasta que esta solucin de lavado deje de
salir teida con el colorante azul o morado durante 10-15 segundos. Lavar de
nuevo con agua.
4. Cubra el frotis con safranina durante un minuto y lave nuevamente.
5. Coloque el frotis en posicin vertical de manera de escurrir el exceso de agua y
permitir que seque espontneamente al aire.
6. Coloque el aceite de inmersin y observe la lmina al microscopio con objetivo de
100X y ocular de 10X, lo que permitir un aumento de 1000X.
De no llevarse a efecto el procedimiento de la manera indicada pudieran obtenerse
reacciones grampositivas o gramnegativas falsas.
Resulta crtico en particular el tiempo de decoloracin ya que un tiempo mayor lleva
a resultados errneos.

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COLORACIN DE GRAM

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Esquema tomado de una Gua
Prctica de la Ctedra de
Microbiologa
FUNDAMENTOS DE LA COLORACIN
DE GRAM de la Escuela de
Medicina JM Vargas. UCV.

ESQUEMA DE LA PARED BACTERIANA COMPARANDO

LA PARED DE GRAMPOSITIVOS Y GRAMNEGATIVOS

La diferencia fundamental entre una bacteria grampositiva y una bacteria

gramnegativa radica fundamentalmente en la pared, responsable de la forma
bacteriana.
Los grampositivos poseen ms del 60% de su pared compuesta por mureina y el
resto est representado por cidos teicoicos principalmente. Esta armazn murenica
impide que el decolorante destruya la pared y por lo tanto disuelva la unin salina
lograda por el cristal violeta y el yodo con los componentes cidos (ribosoma y cido
desoxirribonucleico del filamento cromosmico). En las bacterias gramnegativas, la
murena representa menos del 10% de los componentes de la pared, pero sta es rica
en componentes grasos, especialmente lipoprotenas y lipopolisacridos, componentes
fundamentales de la membrana externa que conforma el espacio periplasmtico de la
pared.
La escasa murena y la abundancia de lpidos permiten una accin disolvente
poderosa del alcohol, solo o asociado a la acetona. La disolucin de la pared permite
que el alcohol llegue a la intimidad del citoplasma bacteriano, arrastrando el colorante

25
violeta quedando la bacteria decolorada.
El colorante safranina empleado
posteriormente en la ltima etapa de la tincin teir de rojo o rosado a la bacteria
previamente desteida.
Algunas bacterias no se colorean con Gram y por lo tanto no se clasifican como
Gram positivas o Gram negativas, debido a que tienen envolturas distintas a las ya
conocidas. Ejemplo de este tipo de bacterias lo constituyen las micobacterias, que
debido a su alto contenido de lpidos, que incluyen ceras y cidos grasos en su pared,
ellas se colorean con colorantes especiales a base de fucsina bsica en la coloracin
de Ziehl-Neelsen. Las espiroquetas, organismos de forma espirilar, tampoco se
colorean con la tcnica de Gram, utilizndose entonces colorantes a base de plata.
UTILIDAD DE LA COLORACION DE GRAM
Constituye uno de los recursos diagnsticos ms importantes en medicina. Esta
tcnica es considerada como la ms sencilla, confiable, sensible, especfica y menos
costosa para el diagnstico de las enfermedades infecciosas. Entre sus ventajas ms
resaltantes tenemos:
1. REPRESENTA LA PRIMERA Y MAS IMPORTANTE ETAPA DEL DIAGNOSTICO
BACTERIOLOGICO DE INFECCIONES COMUNES.
Una vez tomada la muestra de lquidos corporales o exudados inflamatorios
(lquido cefalo-raqudeo, lquido articular, pleural o peritoneal, orina, esputo, lavado
bronquial, secrecin purulenta o exudados inflamatorios de piel o mucosas), parte de
ella se deber utilizar para la preparacin del frotis para la coloracin de Gram. Ello
permitir identificar presuntivamente, pero en forma muy precoz, los agentes causales
del proceso. En escasos minutos se obtendr valiosa informacin sobre la posible
etiologa del cuadro infeccioso del paciente en estudio. En la mayora de los casos se
ve coincidir los resultados aportados por el cultivo luego de 24-72 horas de enviada la
muestra al laboratorio de bacteriologa.
2. PERMITE UNA ORIENTACION TERAPEUTICA INMEDIATA.
El examen microscpico es la primera etapa y la ms importante del diagnstico
microbiolgico, ya que orienta en cuanto a la etiologa infecciosa de las enfermedades.
Con la presuncin diagnstica aportada por la coloracin de Gram se orientar el
tratamiento mediante la seleccin de los antibiticos adecuados que sean activos frente
a la bacteria sospechada y el proceso infeccioso particularmente enfrentado.
3. PERMITE PRESUMIR BACTERIURIA SIGNIFICATIVA.
La confeccin de un frotis realizado con orina recin emitida, tomada
aspticamente, o sea previniendo el contacto con microorganismos, y sin centrifugar, a
partir de un paciente con sntomas de infeccin urinaria, luego de coloreado por el

26
mtodo de Gram, permite presumir la existencia de bacterias en orina. Para llegar a
esta presuncin diagnstica ser necesario visualizar una o ms bacterias por campo
microscpico, generalmente bacilos gramnegativos o tener recuentos iguales o
superiores a 100.000 unidades formadoras de colonias (UFC) por mL de orina
cultivada.(Consultar la prctica sobre el Dx. Microbiolgico de las Infecciones Urinarias)
La presencia de leucocitos polimorfonucleares neutrfilos sugiere la existencia de
infeccin activa, cistitis o pielonefritis. Con esta orientacin el mdico puede iniciar un
tratamiento, previo a los resultados del estudio bacteriolgico, lo que beneficia al
paciente no solo en el tratamiento precoz de su infeccin sino al mejorar el pronstico
de un posible rin infectado que afortunadamente ha recibido el beneficio de un
tratamiento antimicrobiano precoz.
4. SEALA LA PROPORCION DE BACTERIAS CON TIPOS MORFOLOGICOS
DIFERENTES EN CASO DE ESTAR PRESENTE UNA INFECCION MIXTA.
Los procesos infecciosos son producidos por un agente especfico o por la accin
sinrgica de dos o ms microorganismos. Esta ltima eventualidad se presenta en
enfermedades como las infecciones intra-abdominales.
Es ampliamente conocido el carcter polimicrobiano de las infecciones causadas
por bacterias anaerobias, solas o en asociacin con aerobias. En estos casos, permite
instalar un tratamiento que cubra el espectro de los diferentes gneros bacterianos
sospechados mediante la coloracin de Gram.
5.

PERMITE CLASIFICAR LAS URETRITIS GONOCOCCICAS (UG) Y LAS NO

GONOCOCCICAS (UNG) O INESPECIFICAS.

El diagnstico de gonorrea aguda en el varn se realiza por el hallazgo de

diplococos gramnegativos intracelulares, en frotis de secrecin uretral coloreados por la
tcnica de Gram. Este diagnstico ofrece una alta sensibilidad y especificidad no
superada por ningn otro procedimiento bacteriolgico conocido. Debe reconocerse sin
embargo, que el Gram nunca fue suficientemente sensible como tcnica para
diagnosticar la gonorrea en la mujer.
La presencia de 5 o ms leucocitos por campo microscpico en un frotis de
secrecin uretral indica que existe una uretritis. La ausencia de diplococos
gramnegativos tpicos intra y extra celulares permite hacer diagnstico de uretritis no
gonoccica (UNG) o inespecfica imponindole la investigacin de otros
microorganismos, causales de UCG.
En uretritis gonoccica ms del 95% de los elementos formes demostrados en el
frotis son polimorfonucleares mientras que en la no gonoccica estas clulas
representan un porcentaje menor (< 80%).
6. PERMITE LA CLASIFICACION PRESUNTIVA DE LAS DIARREAS

27
BACTERIANAS EN DOS GRUPOS: TOXIGENICAS E INVASORAS.
Durante muchos aos se ha empleado la coloracin de un extendido de material
fecal de pacientes con azul de metileno, especialmente nios, para la investigacin de
leucocitos fecales. Tambin son demostrables con la coloracin de Gram y sugiere la
existencia de una diarrea bacteriana producida por bacterias capaces de invadir la
mucosa intestinal como las del gnero Salmonella, Escherichia coli invasora, Yersinia y
Campilobacter.
La ausencia de leucocitos polimorfonucleares sugiere la existencia de virus
(rotavirus) o de bacterias toxignicas (E.coli, Shigella, Vibrio y otras), adems de las
bacterias que tradicionalmente son causantes de intoxicaciones alimentarias como
Staphylococcus aureus.
La mayora de las diarreas de los nios son producidas por virus o bacterias
toxignicas lo que permite inferir que en la mayora de los casos no se demostrarn
leucocitos en las heces, lo que en cierta forma, hace de la presencia de ellos un criterio
importante para sealar el carcter de un proceso diarreico.
7. PERMITE CONOCER LA CALIDAD DE LA MUESTRA PATOLOGICA.
Esta coloracin permite evaluar la calidad de la muestra que ha sido tomada de un
paciente. Tenemos que por ejemplo en la muestra de esputo la presencia de leucocitos
polimorfonucleares neutrfilos predominantes sugiere que se trata de una muestra
aceptable pues evidencia que proviene del rbol respiratorio inferior. Por el contrario, la
presencia de clulas epiteliales indica contaminacin por saliva, lo que seala el
escaso valor de la muestra no solo para su evaluacin microscpica sino para la
realizacin de cultivos. En pacientes con cuadro clnico de infeccin urinaria, la
realizacin de un frotis de la orina recin emitida y aspticamente obtenida, permite, no
solo presumir bacteriuria significativa sino que seala en ocasiones la posibilidad de
contaminacin en el momento de la recoleccin, hacindose entonces obligante la
repeticin de la obtencin de la muestra de orina, enfatizando la necesidad de asepsia
rigurosa previa.
8. CONTRIBUYE AL DIAGNOSTICO DE VAGINITIS INESPECIFICA
Uno de los motivos ms frecuentes de consulta mdica es el flujo vaginal. La
mayora son producidos por Trichomonas vaginalis o Candida spp. Ambos agentes
producen las llamadas vaginitis especficas, diagnosticadas por el examen en fresco
del flujo vaginal. Sin embargo, en un grupo importante de pacientes no se demostrar
ninguno de estos dos agentes. Esto sumado a otros criterios clnicos y de laboratorio,
hacen el diagnstico de vaginitis inespecfica o vaginosis, donde estn involucrados
distintos microorganismos.

28
9. ORIENTACION SOBRE LA NECESIDAD DE TECNICAS MICROBIOLOGICAS
ESPECIALES
La presencia de tipos morfolgicos bacterianos diferentes en un frotis de cualquier
muestra patolgica sugiere la presencia de bacterias anaerobias, las cuales no crecen
en presencia de oxgeno y requieren de cultivo en anaerobiosis.
10. PUEDE SER EL UNICO PROCEDIMIENTO DIAGNOSTICO DISPONIBLE
11. ES LA BASE DE LA TAXONOMIA BACTERIANA
El criterio ms importante para la clasificacin de las bacterias es el carcter
morfolgico y tintorial que presentan ante la coloracin de Gram.
LIMITACIONES DE LA COLORACION DE GRAM
A pesar de las grandes virtudes indicadas anteriormente, deben tenerse en cuenta sus
limitaciones:
1. No permite identificar especficamente ciertas estructuras bacterianas como la
cpsula, los flagelos y las esporas.
2. Tampoco proporciona buenos resultados en la investigacin de micobacterias y
hongos, salvo las formas levaduriformes o unicelulares de algunas especies que se
comportan como grampositivas.
Aun cuando no constituye una limitacin como tal, tenemos que variaciones de la
tcnica pueden llevar a errores de interpretacin de imgenes microscpicas pudiendo
entonces seleccionarse medicamentos que no sern efectivos contra el verdadero
agente causal.
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
La tincin cido alcohol resistente conocida tambin como coloracin de ZiehiNeelsen es tambin una tincin diferencial y se emplea principalmente como ayuda
para identificar organismos del gnero Mycobacterium, donde se incluye los agentes
causales de la lepra y la tuberculosis. Las micobacterias son consideradas cidoresistentes y tienen una pared bacteriana que no tiene una buena respuesta a la
coloracin de Gram. Se dice que son cido resistentes porque no se decoloran con una
mezcla de alcohol cido despus de su tincin con fucsina cida fenicada. Esta
propiedad se relaciona con la elevada concentracin de lpidos cerosos (cidos
miclicos) en su pared celular.
Cuando la micobacteria se tie con fuscina bsica fenicada (colorante rojo) sus
propiedades qumicas retienen el colorante aunque se lave el frotis con alcohol cido,

29
procedimiento que elimina la tincin de prcticamente todos los organismos del frotis.
La muestra se tie con azul de metileno para contraste, pudiendo entonces apreciarse
a los organismos cido alcohol resistentes presentando una coloracin roja mientras
que todas las otras clulas no cido alcohol resistentes se presentan coloreadas de
azul por el azul de metileno.
Usando esta tincin en un frotis de esputo, se puede diferenciar la presencia de
Mycobacterium tuberculosis u otras especies de Mycobacterium de otros organismos
presentes normalmente en la boca y vas respiratorias.
PROCEDIMIENTO:
1. Una vez preparado el frotis este se deja secar a temperatura ambiente para luego
fijarlo al calor.
2. Se cubre el frotis durante 5 minutos con fucsina bsica fenicada.
3. Se calienta la preparacin hasta que se produzca emisin de vapores.
4. Se decolora con alcohol cido hasta que ste adquiera una coloracin rosada.
5. Se lava con abundante agua
6. El contraste se establece al cubrir ahora la preparacin con azul de metileno
durante 30 segundos.
7. Se lava nuevamente y se deja secar.
COLORACIN DE ZIEHL- NEELSEN

30

Esquema tomado de una

Gua Prctica de la Ctedra de
Microbiologa de la Escuela de
Medicina JM Vargas. UCV.
CULTIVO
La observacin microscpica de frotis teidos mediante las coloraciones
analizadas, sugiere la presencia de organismos con caractersticas particulares que al
ser relacionadas con la muestra de donde fueron obtenidas, nos permiten presumir que
se trata de un microorganismo determinado.
Este procedimiento por si solo no permite la identificacin de las especies
bacterianas. El diagnstico definitivo se establece mediante el cultivo.
De manera que la identificacin bacteriana (y de hongos, como veremos en la
unidad correspondiente) es posible a travs de la visualizacin microscpica en una
primera fase, para apreciar su morfologa y en una segunda fase a travs de su
siembra en medios de cultivo para su recuperacin.
Un cultivo es un medio que se utiliza para recuperar bacterias o levaduras de
una muestra biolgica. Este medio proporciona los nutrientes para el crecimiento
bacteriano o mictico. El mtodo consiste en poner en contacto una fraccin de la
muestra sospechosa con un medio adecuado que le permita crecer y multiplicarse,

31
Generalmente en 24 horas, ms o menos, el medio cultivo se encuentra cubierto por
grupos o colonias visibles a simple vista, cada colonia compuesta por millones de
organismos que se originaron de una misma clula.
Este procedimiento nos permite apreciar el aspecto de las colonias a travs de
su forma, elevacin, bordes, tamao, superficie, estructura, consistencia, color y
transparencia. Tambin las propiedades metablicas y la actividad bioqumica y de
resistencia a agentes fsicos, qumicos y biolgicos.
Se han desarrollado varias frmulas de medios de cultivo que favorecen el
crecimiento de especies particulares. La temperatura, el pH y la atmsfera afectan el
crecimiento de estos seres vivos.
En la prctica mdica cuando se toma un material biolgico a partir de
secreciones, excreciones o directamente de una lesin, los microorganismos no se
presentan solos, an cuando sean los nicos causantes del proceso, sino que vienen
acompaados de otros microorganismos, considerados como flora normal, o agentes
invasores secundarios, lo cual dificulta la tarea diagnstica. Por lo tanto, la primera fase
del trabajo consiste en aislar la bacteria antes de identificarla. Para lograrlo el
laboratorio dispone de tcnicas adecuadas que permiten obtener colonias bacterianas
aisladas, a fin de someterlas a las distintas fases de estudio que aseguran su
reconocimiento. Cuando se obtiene el cultivo puro, es necesario establecer su identidad
haciendo uso de una serie de pruebas. Un cultivo puro contiene una sola especie. Para
asegurar la pureza de los cultivos se deben esterilizar todos los medios y equipos que
se utilizan en el manejo de los mismos.
Un procedimiento complementario lo constituye la prueba de sensibilidad o
antibiograma la cual se emplea para valorar la susceptibilidad de las bacterias
presentes en un proceso infeccioso, de acuerdo a la respuesta de crecimiento que
puedan alcanzar stos en presencia de determinados antibiticos.
MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA EN EL CURSO DE LA ASIGNATURA
COCOS:
GRAM-POSITIVOS:

GRAM NEGATIVOS:

ESTAFILOCOCOS
ESTREPTOCOCOS
DIPLOCOCOS (NEUMOCOCO)

DIPLOCOCOS (MENINGOCOCO)
(GONOCOCO)

32

BACILOS:
GRAM POSITIVOS:

BACILLUS
CLOSTRIDIUM

GRAM POSITIVOS:

CORYNEBACTERYUM (No forman

LISTERIA
Esporas)

GRAM NEGATIVOS:

(Forman Esporas)

HAEMOPHILUS
BORDETELLA
LEGIONELLA
ESCHERICHIA
ENTEROBACTER
SALMONELLA
SHIGELLA
VIBRIO
PSEUDOMONAS
BACTEROIDES

ESPIROQUETAS:
FLEXIBLES
BACTERIAS CIDO RESISTENTES
PREGUNTAS DE AUTO EXAMEN

TREPONEMA
MYCOBACTERIUM

1. Analice las semejanzas de las caractersticas de la pared de las bacterias

grampositivas y gramnegativas.
3. Busque las diferencias de las caractersticas de la pared de las bacterias
grampositivas y gramnegativas.
4. Escriba los pasos necesarios para la elaboracin de un extendido a partir de la
secrecin de herida.
5. Escriba los pasos necesarios para realizar la coloracin de Gram de un frotis o
extendido previamente elaborado.
6. Diga cundo es de utilidad la realizacin de una coloracin de Ziehl-Neelsen.

33
7. Realice una lista que incluya 5 ejemplos de bacterias grampositivas.
8. Realice una lista que incluya 5 ejemplos de bacterias gramnegativas
9. Escriba dos causas de falsos grampositivos y dos de falsos gramnegativos.
10. Escriba dos ejemplos de bacterias con morfologa de cocos
11. Escriba dos ejemplos de bacterias con morfologa de bacilos
12. Escriba los componentes de la batera de lquidos requeridos para la coloracin de
Gram.
13. Escriba los componentes de la batera de lquidos requeridos para la coloracin de
Ziehl Neelsen.
14. Haga un dibujo esquemtico que explique la anatoma de la pared de una bacteria
gramnegativa.
15. Haga un dibujo esquemtico que explique la anatoma de la pared de una bacteria
grampositiva.
16. Haga una lista con 5 situaciones clnicas donde la coloracin de Gram resulte til.
17. Haga una lista de dos enfermedades que pudieran diagnosticarse con la coloracin
de Ziehl Neelsen.

PRCTICA 3
OBTENCIN DE MUESTRAS BIOLGICAS PARA EL
DIAGNSTICO MICROBIOLOGICO
OBJETIVO PRINCIPAL:
Al finalizar esta prctica el estudiante estar en capacidad de conocer y aplicar
los diferentes pasos para la obtencin de muestras biolgicas destinadas al diagnstico
microbiolgico de las enfermedades infecciosas producidas por bacterias, virus, hongos
y parsitos, con nfasis en la preparacin del paciente para la toma de la muestra,
identificacin y procura del transporte de la misma, seguimiento de los resultados e
informacin y anlisis de stos en conjunto con el mdico tratante.
OBJETIVOS ESPECFICOS:

34
Al finalizar la prctica, el estudiante estar en capacidad de:
1. Demostrar la capacidad de informar al paciente la necesidad de obtener la
muestra.
2. Describir la preparacin del paciente para la obtencin de una muestra
especfica.
3. Enumerar el equipo necesario para la obtencin de una muestra especfica.
4. Demostrar capacidad para la obtencin de las muestras no invasivas.
5. Demostrar capacidad para asistir o cooperar con el operador en la obtencin de
muestras que requieran de procedimientos invasivos.
6. Describir los datos de identificacin que deben acompaar a la muestra.
8. Enumerar las diferentes precauciones de conservacin, transporte y manejo de
las muestras biolgicas.
9. Demostrar la necesidad del seguimiento de la muestra hasta obtener los
resultados.
10. Informar de los resultados y proceder a su anlisis en conjunto con el mdico
tratante.

CONTENIDOS:
-

Datos requeridos en la solicitud de la obtencin de la muestra

Generalidades sobre la obtencin de muestras biolgicas
Procedimientos especficos para la obtencin de muestras de:
Sangre, lquido cefalo-raqudeo (LCR), heces, esputo, lquidos: pleural, peritoneal,
articular, otros.
Piel, pelo, uas.
Secreciones de: lceras, heridas, abscesos (colecciones purulentas), vaginales,
uretrales, prosttica, otras.
Requerimientos y precauciones especficos para la obtencin de una muestra y su
transporte para recuperar bacterias anaerobias.
Identificacin del recipiente contentivo de la muestra.
Requerimientos especficos de transporte

35

ACTIVIDADES:
Procedimientos para la obtencin de:
- muestra para hemocultivo
- muestra de secreciones
- muestra de LCR
- muestra de piel, pelo y uas
- muestra de un absceso en la superficie corporal
- muestra de heces
- muestra de esputo
EVALUACIN:
Prctica No. 3 Prueba corta escrita sobre el contenido de la prctica.
Para otros aspectos sobre evaluacin refirase al contenido especfico sobre ese
aspecto al inicio de este mdulo.

INTRODUCCIN
El diagnstico de las enfermedades infecciosas se basa en el estudio de los
sntomas y signos clnicos, as como en la demostracin de la presencia de su agente
productor, o de la huella que ste ha dejado en su contacto con el sistema inmune del
individuo. El diagnstico clnico es en muchos casos bastante demostrativo, pero an
as, este diagnstico presuntivo deber ser confirmado en el laboratorio. Hay casos en
que por las manifestaciones clnicas se puede llegar al diagnstico sindromtico
(meningitis, pleuritis, neumona, otitis, uretritis, pielonefritis) y solo el laboratorio puede
llegar a un verdadero diagnstico del agente causal. En todos casos la nica
confirmacin es un diagnstico clnico etiolgico que lo ofrece el laboratorio de
microbiologa que busca descubrir la etiologa o el origen de la infeccin.

36
El diagnstico microbiolgico est basado en los hallazgos obtenidos por examen
microscpico y cultivo. Se har siempre lo ms precozmente posible ya que un retraso
puede ser perjudicial para el propio enfermo, as como para la comunidad, pues el
enfermo puede ser una fuente de contagio para los que le rodean.
Una muestra obtenida en forma adecuada es el paso ms importante en el
diagnstico de una infeccin, debido a que los resultados de las pruebas de diagnstico
de enfermedades infecciosas dependen de la seleccin, el tiempo y el mtodo de
obtencin de muestras. El fracaso en el aislamiento del agente causal muchas veces
no se debe a tcnicas inadecuadas; a menudo se debe a una mala toma de muestra, a
deficiencias en su conservacin o en el transporte, es por esto que es necesario
comprender los requisitos y las consecuencias no seguir adecuadamente los
procedimientos.
Debe establecerse una buena comunicacin con el laboratorio y su personal de
manera de conocer las exigencias del laboratorio en cuanto a la toma, envo,
materiales e instrucciones adecuados y poder coordinar los distintos eventos, incluso
conocer el horario de recepcin de muestras, de existir alguno en particular.
Es esencial la estrecha colaboracin entre el mdico, el profesional de enfermera y
el laboratorio.
En el campo de las enfermedades infecciosas los resultados de las pruebas de
laboratorio dependen en gran parte de la calidad de la muestra, el tiempo y el cuidado
con el que fue recolectada y la habilidad tcnica y experiencia del personal de
laboratorio. Al solicitar las pruebas el mdico tratante informar al personal del
laboratorio acerca de la condicin clnica y el diagnstico presuntivo (tipo infeccin o
agente patolgico del que se sospeche).
Muchos microorganismos patgenos proliferan lentamente y pueden transcurrir
das y an semanas antes de que sean aislados e identificados y el tratamiento no
puede diferirse. Despus de obtener las muestras apropiadas y de informar al
laboratorio del diagnstico clnico sospechado, el mdico debe iniciar el tratamiento
adecuado con medicamentos dirigidos contra el microorganismo considerado como
posible causante del padecimiento. A medida que el personal del laboratorio comienza
a obtener informacin de carcter clnico puede informar al mdico, que entonces
revalorar el diagnstico y la evolucin clnica del paciente para, de ser necesario,
hacer cambios o ajustes en el tratamiento.
SOLICITUD DE LA TOMA DE LA MUESTRA
La solicitud de la muestra biolgica que hay que investigar posee gran
importancia. Debe especificar el nombre, apellidos y edad del paciente, el mdico

37
solicitante y el centro, servicio, sala o consulta al que pertenece. Dos fechas son de
gran utilidad: la del comienzo de la enfermedad y la de obtencin de la muestra.
En segundo trmino se especificar la naturaleza de la muestra que hay que
analizar (exudado, esputo, frotis, otros) y el lugar exacto de la toma, en el caso de por
ejemplo, lesiones de piel, u otras y si aquella se ha realizado por alguna tcnica
especial (esputo extrado por aspiracin bronquial, puncin de absceso).
Dos datos que se olvidan frecuentemente pero que no deben faltar son 1) el
diagnstico clnico de presuncin, el cual va a orientar sobre las tcnicas a seguir y
cultivos a realizar, y 2) la precisin de si el paciente est siendo tratado con antibiticos,
cuales son stos y cuanto tiempo hace de la ltima administracin.
Los datos microbiolgicos deben correlacionarse con la informacin clnica para
llegar a una interpretacin significativa de los resultados.
La recuperacin de bacterias y hongos es ms significativa si el agente es
aislado de un sitio normalmente desprovisto de microorganismos (un rea normalmente
estril). De manera que cualquier tipo de microorganismo aislado a partir de sangre,
lquido cefalorraqudeo (LCR), lquido sinovial o cavidad pleural es un hallazgo con gran
valor diagnstico. Muchas regiones del cuerpo tienen una flora microbiana normal que
puede ser alterada por influencias endgenas o exgenas. La obtencin de
microorganismos potencialmente patgenos de las vas respiratoria, gastrointestinal o
genitourinaria, de heridas o de la piel debe considerarse en el contexto de la flora
normal de cada sitio particular.
Existen reglas generales que se aplican a todas las muestras:
1) La cantidad debe ser adecuada, suficiente para asegurar un examen completo y
adecuado.
2) La muestra debe obtenerse del sitio donde sea ms probable que se presente el
microorganismo en determinada etapa de la enfermedad, de manera que esta sea
representativa (por ejemplo: esputo y no saliva).
3) Hay que evitar que se contamine la muestra usando solo equipo estril y
precauciones de asepsia.
4) Deben conocerse y emplearse tcnicas adecuadas para su recoleccin
5) Es necesario asegurar la adecuada obtencin de muestras para diagnosticar
infecciones bacterianas y fngicas, antes de administrar agentes antimicrobianos.
Si la muestra para el cultivo ha sido recogida despus de la iniciacin de la terapia
antibacteriana, el laboratorio debe ser informado para que pueda tomar las medidas
correspondientes.

38
6) Debe enviarse la muestra al laboratorio y examinarse con prontitud. En algunos
casos puede ser til el empleo de un medio especial de transporte.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
El tipo de muestras que se vaya a tomar se determina por el cuadro clnico; si los
signos y sntomas son sugestivos de la alteracin de un sistema orgnico, las muestras
se obtienen de esa fuente. En ausencia de signos o sntomas localizados, primero se
toman muestras repetidas de sangre para cultivo (hemocultivo) y entonces se
considera en secuencia otros sitios, dependiendo en parte de la probabilidad de
afectacin de un sistema orgnico dado en un paciente en particular, y en parte, de la
facilidad para obtener las muestras.
El material clnico que probablemente contiene una flora microbiana abundante,
en la mayora de los casos, puede mantenerse en el refrigerador durante varias horas
antes de su cultivo si no puede ser procesado inmediatamente. La refrigeracin no
solo conservar la viabilidad de la mayora de los patgenos sino que reducir al
mnimo el crecimiento de microorganismos comensales, que si estn presentes en
nmero excesivo complicarn el crecimiento del agente que realmente nos interesa y
que en este caso es ms importante. Cuanto ms rpido se transfiera un agente que
acaba de abandonar el ambiente protector de su husped a un medio de cultivo
apropiado, mayores sern las probabilidades de su supervivencia y posterior
multiplicacin. No refrigerar la muestras de LCR debido a que las bacterias
productoras de meningitis son muy sensibles a las temperaturas fras y podra
dificultarse su recuperacin.
OBTENCIN DE MUESTRAS ESPECFICAS
SANGRE
Dado que la bacteriemia con frecuencia augura un padecimiento que pone en
peligro la vida, su deteccin oportuna es esencial. El hemocultivo es el procedimiento
sencillo ms importante que se hace en el laboratorio de microbiologa para detectar la
infeccin generalizada producida por bacterias. Proporciona informacin valiosa para el
tratamiento de pacientes febriles, con enfermedad aguda o con sntomas y signos
localizados. Es esencial en aquellos en quien se sospeche una endocarditis infecciosa,
an en casos en que el paciente no muestre indicios de un padecimiento agudo o de
gravedad.
La obtencin del agente infeccioso de la sangre constituye una ayuda
inapreciable en la determinacin del tratamiento antimicrobiano, por lo que deben
efectuarse todos los esfuerzos posibles para aislar el microorganismo causal. El
nmero de muestras de sangre que deben extraerse y el perodo durante el cual ello
deber hacerse depender en parte de la gravedad del padecimiento clnico. En las

39
infecciones hiperagudas (septicemia por gramnegativos con choque, o septicemia por
estafilococos) es apropiado cultivar dos muestras de sangre obtenida de sitios
anatmicos distintos en un perodo de diez minutos. En otras infecciones bactermicas
(endocarditis) debern obtenerse tres muestras durante un lapso que va desde algunas
horas hasta 24 horas. Un total de tres (3) hemocultivos descubren la bacteria
infectante en ms del 95% de los pacientes bactermicos.
En personas sanas, las muestras de sangre obtenidas en forma apropiada son
estriles. La contaminacin de los hemocultivos con flora cutnea normal se debe
generalmente a errores durante la recoleccin.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
Obtenga el equipo para hemocultivo y hgase asistir por un ayudante
Emplear solo equipo estril y estrictas tcnicas de asepsia y antisepsia.
Requerimientos:
Guantes de examen y guantes estriles
Mechero de alcohol o a gas
Solucin jabonosa
Campos estriles
Alcohol isoproplico 70%
Tintura de yodo al 2%
Inyectadora estril con aguja
Aguja estril adicional
Frasco con medio de transporte
Cura para cubrir el sitio de venopuncin
Contenedor para desechar el material no punzante utilizado
Contenedor de paredes rgidas con desinfectante para descartar el material punzante
1) Haga un lavado de manos adecuado
2) Explique al paciente el procedimiento y colquelo en posicin adecuada y cmoda
3) Coloque un torniquete y localice al tacto una vena fija
4) Colquese los guantes de examen
5) Prepare la piel aplicando solucin jabonosa, en crculos que se irn ensanchando
desde el sitio propuesto para la puncin. Repita la operacin con alcohol. Luego
aplique el yodo si el paciente no es alrgico al elemento.
6) Colquese guantes estriles
7) Despus de preparada piel no debe tocarse. Solo lo har con los guantes
estriles.
8) Efecte la venopuntura, extrayendo 10cc en el caso de adultos y 2 a 5 cc en caso
de nios, segn la edad y el peso corporal.
9) Coloque cura en el sitio de la venopuncin y vea que el paciente queda cmodo
10) Retire la aguja de la jeringa de extraccin y coloque una aguja estril.
11) Esterilice a la llama del mechero el tapn o la boca del recipiente que alojar la
muestra.

40
12) Inocule la sangre en frasco estril con medio de transporte o el adecuado para
hemocultivo tanto para aerobios como anaerobios.
13) Identifique adecuadamente la muestra
14) Enve con rapidez la muestra al laboratorio o colquela en incubadora a 37C hasta
tanto pueda ser enviada al laboratorio.
15) Descarte los materiales utilizados en recipientes seguros
LIQUIDO CEFALORRAQUDEO (LCR)
La meningitis tiene uno de los primeros lugares en las urgencias mdicas, y es
esencial un diagnstico oportuno, rpido y preciso. Este depende de tener siempre en
mente la posibilidad de su presencia, asegurar la obtencin adecuada de buenas
muestras y examinarlas con prontitud. Debido a que el riesgo de muerte o de dao
cerebral irreversible es grande, a no ser que se inicie el tratamiento de inmediato.
El objetivo ms urgente en el diagnstico es la diferenciacin entre la meningitis
bacteriana purulenta aguda, la meningitis asptica (viral) y la meningitis tuberculosa.
La decisin inmediata se basa en la cuenta de clulas, el contenido de glucosa y
protenas del LCR (simultneamente con la determinacin de glucosa en sangre o
glicemia) y los resultados de la bsqueda de microorganismos a la microscopa.
EQUIPO NECESARIO Y PROCEDIMIENTO (para detalles de la tcnica investigar el
procedimiento en los textos de Medicina y Enfermera)
Tan pronto como se sospeche una infeccin del Sistema Nervioso Central (SNC)
deben tomarse muestras de sangre para hemocultivo y se extraer una muestra a
travs de la puncin lumbar con tcnica asptica estricta y teniendo cuidado de no
hacer una extraccin muy rpida del lquido. Este lquido se colecta en 3-4 porciones
de 2-5cc cada una e tubos estriles, numerndose cada uno de ellos de acuerdo al
orden de extraccin.
Debe llevarse al laboratorio lo antes posible ya que microorganismos como
Neisseria meningitidis e incluso Haemophilus influenzae son muy lbiles y pueden ser
irrecuperables por cambios de temperatura o almacenamiento prolongado. Debe
tambin cultivarse la muestra rpidamente. El LCR obtenido debe mantenerse a
temperatura ambiente o a temperatura corporal; no debe ser refrigerado para
conservarlo mientras es procesado. El diagnstico de meningitis tuberculosa requiere
de cultivos en medios especiales.
OBTENCIN DE LA MUESTRA DE ORINA (ser tratada en la prctica relativa al
diagnstico microbiolgico de las infecciones urinarias).
HECES
Las muestras de heces pueden obtenerse de materia fecal fresca o de
hisopados rectales. Si la muestra puede llegar al laboratorio dentro de las siguientes 2

41
horas despus de obtenida, deben enviarse 1-2gr de heces en envases apropiados. Si
hubiera demora de ms de 2 horas en sembrar la muestra, sta debe enviarse al
laboratorio en medios de transporte, lquido o semi-slido. En ambos casos deber
tomarse de la materia fecal emitida ciertos elementos de apariencia patolgica (moco,
pus, sangre, u otros). En el caso de que se realice hisopado rectal para la obtencin de
la muestra, el hisopo se introduce 2,5-5cms a travs del ano, se le hace girar y se retira
cuidadosamente. Tambin se enva en medio de transporte apropiado.
Cuando se sospeche diarrea de tipo invasiva se har determinacin de piocitos y
leucocitos al campo microscpico para as confirmar esta presuncin. Deben utilizarse
tcnicas especiales para buscar protozoarios, parsitos y helmintos y sus huevos.
Pueden ser necesarios estudios microscpicos repetidos de de muestras de heces en
fresco o de emisin reciente en series de tres o ms muestras.
ESPUTO
La obtencin de la muestra de esputo requiere de la colaboracin del paciente y
no es posible obtenerla de nios o personas que no sean capaces de expectorar. En el
caso de nios pequeos, obtendremos muestras de sus secreciones respiratorias
deglutidas, mediante la obtencin del contenido gstrico en ayunas.
MATERIALES Y TCNICA
La recoleccin se hace de preferencia en frascos de boca ancha, estriles,
procurando que el frasco no se contamine y evitando la saliva o el moco de las vas
respiratorias superiores. Es casi inevitable la contaminacin con saliva por lo que se le
pide al paciente que previa expectoracin escupa aparte para evitar as una muestra
con saliva. Se prefiere el esputo matinal por su mayor contenido de microorganismos.
Para la recoleccin se recomienda enjuagar la boca previamente con agua
estril. Lo importante de la muestra es que su origen sea verdaderamente bronquial,
explicndole al paciente y ayudndolo con hidratacin, la posicin adecuada y
percusin torcica para la obtencin de una buena muestra. La cantidad de muestra
requerida oscila entre 2 5 cc. En la gran mayora de los casos los estudios de esputo
se hacen para investigar la presencia del bacilo de la tuberculosis (BK).
MUESTRAS PARA LA RECUPERACIN DE BACTERIAS ANAEROBIAS
La gran mayora de las bacterias que constituyen la flora humana normal son
anaerobias. Cuando se desplazan de sus sitios normales hacia el interior de tejidos y
aberturas pueden producir infecciones de origen endgeno (de la flora normal del
paciente).
Los sitios ms importantes de infeccin anaerbica son: aparato respiratorio,
sistema nervioso central (SNC), abdomen, sangre, tejidos blandos. No son muestras
adecuadas para la recuperacin de bacterias anaerobias: esputo, muestras obtenidas
por broncoscopia o aspiracin con tubo nasotraqueal, orina.

42
En general el material para cultivo de anaerobios se obtiene mejor con la ayuda
de una jeringa y aguja pues debe provenir de un espacio cerrado. Debe para esto
expulsarse todo el aire de la jeringa y aguja. Debe tenerse especial cuidado para evitar
la inclusin de la flora normal muy numerosa. La mnima contaminacin de la muestra
puede llevar a resultados errneos. Previamente se hace limpieza del rea adyacente
al proceso anaerbico con antisptico con la friccin suficiente como para realizar a la
vez una limpieza mecnica, comenzando en el centro y extendindose en crculos
crecientes, repitiendo varias veces empleando un nuevo hisopo cada vez. El alcohol
(70%) es satisfactorio para la piel pero se necesitan dos minutos de contacto. El yodo
(2%) y yodo-povidona actan ms rpidamente (un minuto) y son efectivos contra
organismos formadores de esporas. La obtencin de lquidos normalmente estriles
(como lquido sinovial, pleural o LCR) por aspiracin con aguja percutnea debe ser
precedida siempre por la cuidadosa antisepsia de la piel.
LIQUIDO PLEURAL, PERITONEAL Y OTROS EXUDADOS Y TRASUDADOS
Previa rigurosas condiciones de asepsia y antisepsia de la piel relacionada con
la puncin con aguja estriles, dejando que el material llegue por si solo al frasco o
tubo colector.
Estas infecciones pueden deberse tanto a bacterias aerobias como anaerobias y
por lo tanto debe eliminarse cualquier burbuja de aire al tomar la muestra. En caso de
que no se disponga de medios de transporte para anaerobios, la muestra se llevar lo
ms pronto posible al laboratorio en la misma jeringa en la que fue tomada, para ser
procesada.
HERIDAS, LCERAS Y ABSCESOS
El pus de los abscesos de tejidos blandos, cerrados y sin drenar, con frecuencia
contiene una sola variedad de microorganismos como agente causal; los ms comunes
son estafilococos, estreptococos o bacilos entricos gramnegativos. Debido a que en
los abscesos abdominales y los contiguos a las superficies mucosas, as como en las
heridas abiertas, comnmente se encuentran una multitud de microorganismos, es
difcil decidir cuales son significativos en estas situaciones. Cuando las lesiones
purulentas profundas drenan hacia las superficies exteriores a travs de un seno o
fstula, la flora de estas ltimas no debe confundirse con la de la lesin profunda.
En la mayora de los casos se aislar el agente causal si la muestra es tomada y
transportada adecuadamente al laboratorio. El examen bacteriolgico de pus de
lesiones cerradas o profundas debe incluir el cultivo para anaerobios.
Para la toma de la muestra debe evitarse el uso de anestsicos locales y previa
asepsia y antisepsia rigurosa se aspira con jeringa y aguja gruesa. Debe eliminarse
cualquier burbuja de aire que favorezca la aerobiosis. De no constituir un riesgo se
puede obturar la punta de la aguja con un tapn.

43
Las muestras de heridas abiertas del piel o lceras suelen contaminarse con
bacterias de piel o mucosas y, en general, el uso del hisopo para recolectar material de
estas zonas, es de ilimitado valor bacteriolgico. Sin embargo, de ser necesario su uso,
habr de desinfectarse la parte externa con solucin yodada y obtener la muestra de la
parte activa de la regin profunda de la herida previo lavado con solucin fisiolgica.
OIDOS Y OJOS
Para los primeros se hace limpieza y desinfeccin y el material se toma con
hisopos. Los ojos se humedecen con suero fisiolgico para tomar el material de la
conjuntiva.
NARIZ, NASOFARINGE Y FARINGE
Se usan hisopos de varillas o alambres curvos tratando que la muestra no se
contamine con saliva o con las paredes anteriores de las fosas nasales. Los hisopos se
colocan en tubos estriles debidamente tapados o sumergidos en medio de transporte.
SECRECIONES VAGINALES
Las muestras apropiadas para el diagnstico de infecciones del aparato genital
femenino dependen del sitio de infeccin y del microorganismo que se sospeche.
Debido a que muchos dan origen a infecciones clnicamente indistinguibles es
importante que en la hoja clnica se incluya la enfermedad que se sospeche a fin de
facilitar el procesamiento de la muestra. Ante la sospecha de una infeccin vaginal o
uterina, la muestra se toma antes de la introduccin del espculo vaginal, humedecido
solo con agua destilada estril, ya que la mayor parte de los lubricantes son
bacteriostticos. Luego se procede a tomar la muestra con hisopos estriles
(infecciones de la parte inferior del aparato genital) y se enva al laboratorio en medios
de transporte o bien mediante aspiracin con aguja y jeringa (infecciones de la parte
superior del aparato genital). Aunque no es lo ideal, los hisopos pueden usarse para
tomar muestras de procesos infecciosos de la parte superior del aparato genital.
SECRECIONES URETRALES Y PROSTATICAS
El pus uretral puede tomarse directamente u obtener algunas gotas
comprimiendo la uretra; estas se depositan en placa de Petri. En caso de lquido
prosttico, se ordena la miccin, y la muestra lograda por masajes de la prstata se
deposita en un envase estril. Cuando se trate de cultivos, siempre se har limpieza y
desinfeccin locales. (Corresponde a la prctica de diagnstico microbiolgico de las
infecciones urinarias).
TOMA DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO MICOLGICO
- Para diagnstico de las dermatofitosis
- Para diagnstico de las dermatomicosis
- Para diagnstico de las micosis profundas localizadas

44
-

Para diagnstico de las micosis sistmicas

(Vase el mdulo terico de Micologa)

TOMA DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO VIROLGICO
El diagnstico de laboratorio de las infecciones virales se basa en tres mtodos
generales:
Deteccin directa de antgenos o estructuras virales obtenidas a partir de tejidos
infectados o libres en muestras de lquidos, por ejemplo la demostracin de material
gentico del virus mediante mtodos de reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR).
Aislamiento de identificacin del virus, habitualmente en cultivos de clulas.
Demostracin de anticuerpos especficos durante el curso de una infeccin o
enfermedad.
Este ltimo procedimiento es el ms frecuentemente empleado, se corresponde con
lo que se conoce como serologa y consiste en la demostracin de la presencia de un
aumento progresivo y significativo de anticuerpos especficos en muestras tomadas en
la fase aguda y de convalescencia. La primera muestra se toma al comienzo de los
sntomas, la segunda 4-6 semanas despus.
La confirmacin serolgica de infeccin aguda es de un aumento de cuatro veces o
ms del ttulo de anticuerpos de los ttulos en la fase de convalescencia con respecto a
la fase aguda.
La visualizacin ultramicroscpica (microscopa electrnica) de los distintos
agentes, el hallazgo de corpsculos de inclusin en preparaciones teidas o usando
anticuerpos fluorescentes, son procedimientos muy valiosos pero de empleo mucho
manos frecuente.
La posibilidad de hacer diagnstico virolgico, al igual que en bacteriologa,
depende de cmo se efecte la recoleccin del material y de su mantenimiento antes
de que la muestra sea procesada. Toda vez que se remite una muestra, esta debe
acompaarse de la informacin adecuada en relacin con la identificacin del paciente,
fuente de la muestra y fecha en que fueron obtenidas. Un breve resumen clnico debe
especificar la fecha de inicio de la enfermedad, tipo de enfermedad sospechada y
principales hallazgos clnicos. Tambin debe informar si el paciente ha recibido
vacunas virales en fecha reciente.
Las muestras deben conservarse refrigeradas a 2-6C o transportarse en hielo. Si
hay demora en el procesamiento deben congelarse preferiblemente a 70C.

45
Adems de su labilidad al calor y a la acidez, muchos virus no toleran el
desecamiento. Es por esto que los hisopados de superficies mucosas, raspados de
piel y tejidos se coloca en un medio de transporte que proporciones estabilidad.
Dado que los agentes virales no son afectados por los agentes antimicrobianos
usuales, pueden obtenerse cultivos an cuando ya se haya iniciado tratamiento para
potenciales patgenos bacterianos.
Las muestras que se envan con el propsito de aislar el virus, llevar a cabo
pruebas serolgicas y realizar exmenes histolgicos son: Sangre, suero, orina, heces,
lquido vesicular, secrecin ocular, lquidos de lavado de nariz y garganta, esputo,
LCR, piezas de biopsia sin fijar y trozos de tejido u rganos obtenidos en la necropsia.
Deben remitirse al laboratorio a la brevedad posible y en frascos, tubos o cualquier
envase adecuado, colocados en termos o cajas de metal o cartn convenientemente
acondicionados, a fin de poner hielo seco o comn, con el propsito de garantizar la
viabilidad del agente o la conservacin del poder de los anticuerpos.
Cuando por cualquier razn se imposibilite el pronto traslado del material, este debe
conservarse en refrigeracin o congelacin. No se aadir sustancia antisptica o
fijadora alguna. En el caso de sueros, estos deben separarse del cogulo.
TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
En el examen microbiolgico de las muestras clnicas es esencial que el envase
que las contiene no contribuya con su propia flora bacteriana. Adems, la flora original
no debe multiplicarse, ni disminuir debido a una permanencia prolongada del paciente
en la sala o a una refrigeracin prolongada en el laboratorio. De manera que debe
usarse un recipiente estril y la muestra debe sembrarse tan pronto como sea posible.
Se han diseado una variedad de recipientes para la recoleccin de muestras y
su estudio bacteriolgico. Muchas de ellas pueden ser usadas repetidamente luego de
su limpieza y esterilizacin, mientras que otras deben ser incineradas luego de su
empleo. Adems de la placa de Petri de Pyrex y su versin moderna, las placas de
plstico descartables y pre-esterilizadas, el equipo de recoleccin ms usado es el
hisopo de madera con punta de algodn formando parte de una unidad para cultivo
estril, junto al medio de cultivo temporal.
El hisopo humedecido una vez tomada la muestra se introduce dentro del medio.
Una variante de esta unidad con hisopo lo constituye el Culturette, que consiste en un
tubo plstico con un hisopo estril con extremo de polister y una pequea ampolla de
vidrio que contiene un medio de cultivo modificado. La unidad se retira de su sobre
estril y el hisopo se emplea para la toma de la muestra. Una vez hecho esto se coloca
el hisopo nuevamente dentro del tubo y a travs de este se rompe la ampolla por

46
presin de los dedos lo que permitir que el medio de cultivo entre en contacto con el
hisopo. Este medio de transporte proporcionar suficiente humedad durante hasta 72
horas a temperatura ambiente. La finalidad de este tipo de unidades consiste en
brindar un medio de transporte que prolongue la viabilidad de los microorganismos
cuando exista la posibilidad de una demora entre la recoleccin de la muestra y su
posterior cultivo. Estos medios mantienen un pH favorable previniendo a la vez la
deshidratacin de las secreciones y autodestruccin enzimtica durante el transporte.
ENVIO DE MUESTRAS AL LABORATORIO
En ocasiones es necesario enviar muestras a un laboratorio de referencia. Por
ejemplo, si no existe un centro de diagnstico virolgico en reas cercanas ser
necesario enviar la muestra a baja temperatura para conservar su viabilidad. Esto es
vlido sobre todo para materiales que contienen virus, como LCR, hisopos rectales y
de garganta, heces y tejidos, que deben ser refrigerados inmediatamente. Deben
tomarse precauciones especiales en el envo, envasndose en un recipiente hermtico,
bien tapado, que se coloca dentro de un segundo recipiente hermtico irrompible. El
espacio entre ambos debe contener suficiente material absorbente como para retener
el contenido total en caso de rotura o prdidas. Estos se colocan dentro de un envase
para envos que debe tambin ser impermeable. El envase externo debe ser
identificado y debe sealarse que se trata de material biomdico. Si de antemano se
tiene conocimiento que la muestra procede de algn paciente infectado con virus de
Hepatitis B o con virus de Inmunodeficiencia Humana, debe ser identificado como
material biolgico contaminado con el agente especfico.
Estas precauciones deben ser tomadas inclusive desconociendo si el paciente
est infectado o no, considerando a todo paciente potencialmente infeccioso de manera
de as tomar de manera rutinaria las precauciones universales y minimizar as las
situaciones por dems riesgosas en las que existe la posibilidad de exposicin
ocupacional.

PREGUNTAS DE AUTO-EVALUACIN
1. Escriba las caractersticas mnimas que debe poseer una buena muestra
biolgica para el estudio microbiolgico

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2. Mencione cuatro tipos de muestras biolgicas de las estudiadas con mayor
frecuencia
3. Para efectos de la toma de muestra para hemocultivo indicar:
a) Todos los materiales necesarios
b) Descripcin del procedimiento a seguir
4. Enumere las precauciones necesarias para la toma de muestra para la
recuperacin de bacterias anaerobias
5. Escriba los detalles importantes para la obtencin de una buena muestra de lquido
cefalo-raqudeo para el diagnstico de meningitis bacteriana y viral.
6. Escriba el procedimiento adecuado para la obtencin de una muestra de esputo.
7. Escriba el procedimiento correcto para la identificacin de las muestras biolgicas.
8. Escriba el procedimiento correcto para el transporte de las muestras biolgicas.
9. Escriba la importancia de realizar el seguimiento al resultado del examen microbiolgico de una muestra enviada al laboratorio.

PRCTICA 4
DIAGNSTICO MICROBIOLGICO DE LAS INFECCIONES URINARIAS

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El aparato o sistema urinario comprende dos riones, cada uno de los cuales
tiene un urter que conduce orina a la vejiga nica. La orina se vaca desde la vejiga a
travs de la uretra. Con la excepcin de la porcin externa (distal) de la uretra, todo el
sistema urinario es estril. (Revisar la anatoma y la fisiologa del Sistema Urinario en
los textos de Morfofisiologa).
A pesar de que la orina vesical en condiciones normales no contiene
microorganismos, los primeros 20 cc de orina emitidos por personas normales de
cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias. stas proceden de la flora normal
de la uretra anterior, prepucio, regin vulvovaginal o de contaminacin fecal.
Microbiolgicamente existe infeccin de las vas urinarias cuando en la orina,
uretra, vejiga, rin o prstata se detectan microorganismos patgenos.
Las infecciones del tracto urinario estn confinadas a la uretra (uretritis) vejiga
(cistitis), riones (pielonefritis) y prstata (prostatitis). Uretritis y cistitis se corresponden
con ITU baja y pielonefritis y prostatitis con ITU alta.
ETIOLOGIA
Muchos microorganismos son capaces de causar infeccin urinaria, y entre ellos
se destacan las enterobacterias, presentes en el tracto gastrointestinal, de las cuales
Escherichia coli es el agente etiolgico ms frecuente, causando alrededor del 80% de
las infecciones urinarias no complicadas. Otras enterobacterias como Klebsiella spp.,
Proteus mirabilis y Enterobacter spp, tambin causan infecciones urinarias, pero en
menor proporcin. Proteus y Klebsiella, predisponen a la formacin de clculos y son
los agentes que ms a menudo se aislan en pacientes con litiasis. En mujeres jvenes
con infecciones bajas Staphylococcus saprophyticus es un agente etiolgico frecuente
(10-15%).
En infecciones complicadas del tracto urinario o en infecciones adquiridas en el
ambiente hospitalario donde la instrumentacin es ms frecuente, aunque E. coli es el
patgeno ms frecuentemente aislado, otras bacterias como Klebsiella, Proteus,
Enterobacter, Enterococos, Pseudomonas, Providencia, Serratia y Morganella se aslan
con frecuencia. Candida y otras especies de hongos colonizan con frecuencia la orina
de enfermos cateterizados o diabticos.
Otros
microorganismos que son agentes etiolgicos ocasionales son
Salmonella, Acinetobacter, Micoplasmas, Chlamydia, Ureoplasma urealyticum,
estafilococos coagulasa negativo, los adenovirus, Mycobacterium spp.
En algunos pacientes con infecciones urinarias complicadas, con sondas
vesicales por largo tiempo o con clculos, la etiologa puede ser polimicrobiana.

49
PATOGENIA
Las infecciones urinarias como todas las infecciones se inscriben en el marco de
la relacin dinmica entre el hospedero humano y un microorganismo determinado, de
manea que se considera tienen un origen multifactorial en el que intervienen tanto
factores del hospedero humano como factores del microorganismo.
Desde el punto de vista del hospedero humano tenemos que existen diversos
mecanismos de defensa inespecficos que mantienen prcticamente libre de bacterias
el tracto urinario.
En circunstancias normales las bacterias que asientan en la vejiga son
eliminadas rpidamente. Esto se debe en parte al flujo urinario y a las propiedades
antibacterianas directas de la propia orina y de la mucosa de la vejiga. La orina ejerce
accin de lavado que al fluir continuamente impide el establecimiento de bacterias.
Tambin son importantes factores como el pH, la baja tensin de O 2, ausencia de
glucosa, la osmolaridad y la concentracin de urea urinaria que inhiben el crecimiento
de gran parte de las bacterias, la presencia de uromucoide que atrapa las bacterias y
las secreciones prostticas que tienen un efecto antibacteriano.
Los
polimorfonucleares neutrfilos de la pared de la vejiga tambin parecen desempear un
papel en la depuracin de la bacteriuria. Otras defensas naturales son los mecanismos
antiadherencia de las bacterias.
Circunstancias en el hospedero como interrupcin del flujo urinario, presencia de
reflujo vesicoureteral, clculos, obstrucciones mecnicas o volmenes residuales de
orina, alteran los factores de defensa mencionados anteriormente y hacen ms factible
la colonizacin e infeccin del tracto urinario por microorganismos.
La ruta ascendente es aceptada como la ms comn en la patognesis de
infecciones de las vas urinarias. Se inicia a partir de una fuente rectal de bacterias
patgenas que migran por el perin causando colonizacin periuretral. Una vez
establecidos en la uretra, los microorganismos ganan acceso a la vejiga donde se
reproducen originando bacteriuria y/o invaden el tejido originando cistitis, o bien
ascienden por los urteres hacia el rin causando pielonefritis. Las infecciones de la
uretra y vejiga se consideran superficiales (o mucosas), mientras que la prostatitis y
pielonefritis indican invasin tisular.
Probablemente hay un pequeo nmero de bacterias periuretrales que con
frecuencia consiguen llegar a la vejiga, hecho favorecido en algunas mujeres por el
masaje uretral durante el coito. Que despus se produzca o no la infeccin de la vejiga
depender de la interaccin entre la virulencia de la cepa, la cuanta del inculo y los
mecanismos defensivos locales y generales del husped.
Otras rutas alternas, incluyen:

50
A. La va hematgena (estafilococos o Candida entre otros) en enfermos debilitados
como recin nacidos y algunos adultos, bien sea por enfermedades crnicas o por
haber sido tratados con inmunosupresores. La pielonefritis por estafilococos puede ser
consecuencia de una bacteriemia originada por focos infecciosos distantes, alojados en
hueso, piel, endotelio u otros sitios.
B. Inoculacin directa en tejidos adyacentes durante ciruga renal.
C. Diseminacin linftica producida en el rea en torno a la vejiga hasta llegar al rin
pero son mucho menos comunes, principalmente las ltimas.
Desde el punto de vista del microorganismo y especficamente en relacin con la
virulencia microbiana, o sea la capacidad de producir infecciones y enfermedad, existen
factores especiales que hacen que una bacteria particular tenga ms habilidad que
otras para causar infecciones en el tracto urinario.
Escherichia coli es responsable del 80% de las infecciones agudas en enfermos
sin sondas, clculos o anomalas urolgicas. La elevada frecuencia de Escherichia coli
como agente responsable de infecciones urinarias se explica por sus caractersticas
especiales que lo hacen un buen patgeno urinario. No todos los E. coli tienen la
misma capacidad de infectar las vas urinarias ntegras. As tenemos que a muchos de
los microorganismos aislados se les demuestra la presencia de cpsula con poder
antifagoctico y de resistencia a los cambios inflamatorios. Se ha establecido adems
relacin entre la estructura del lipopolisacrido (O) de la E. coli y su capacidad de
producir infecciones urinarias.
La adherencia de las bacterias a las clulas uroepiteliales es una primera etapa
decisiva para el inicio de la infeccin.
Las estructuras de la E. coli ms estudiadas en relacin con la patognesis de
las infecciones urinarias son las fimbrias, apndices superficiales, estructuras
filamentosas presentes en la superficie externa de la bacteria, las cuales tienen
propiedades adherentes al reconocer receptores especficos en las clulas del tracto
urinario, evitando de esta manera la accin del lavado que ejerce el flujo urinario.
Se piensa que la adherencia bacteriana est asociada a su vez con la
inflamacin de las vas urinarias. Esta situacin permite que los lipopolisacridos
(antgeno O) de la pared bacteriana estn ms cerca de las clulas uroepiteliales y que
el contacto entre ellas sea prolongado.
La cpsula induce resistencia a los cambios inflamatorios esenciales para
combatir estas infecciones.

51
FACTORES PREDISPONENTES PARA EL DESARROLLO DE INFECCIONES
URINARIAS
En cuanto al sexo tenemos que la longitud de la uretra femenina (apenas 2,5
cm) parece ser un factor importante en la marcada predisposicin a sufrir infecciones
urinarias, adems de la proximidad de la uretra al ano y la colonizacin de la vagina por
miembros de la flora fecal. En las mujeres hay una particular tendencia a la
colonizacin durante ciertas pocas del ciclo menstrual.
En mujeres con infecciones recurrentes, el rea periuretral se encuentra
frecuentemente colonizada por bacterias gramnegativas, principalmente E. coli. En
hombres adultos por el contrario se considera que el origen de infecciones recurrentes
es la presencia de microorganismos en la prstata an cuando las secreciones
prostticas son bactericidas.
En los varones, la prostatitis o la obstruccin uretral por hipertrofia prosttica son
factores predisponentes importantes de bacteriuria. La falta de circuncisin es un
factor de riesgo en neonatos y adultos jvenes.
Las relaciones sexuales y la manipulacin uretral facilitan el ascenso de los
microorganismos hacia la vejiga. El uso de diafragmas y espermaticidas al alterar
profundamente la flora nativa del introito determina un aumento significativo de la
colonizacin vaginal por E. coli y un mayor riesgo de infeccin urinaria.
La homosexualidad pudiera ser predispone a un mayor riesgo de cistitis,
probablemente como consecuencia del coito anal, pero no lo es per se.
Dependiendo de las condiciones socioeconmicas, las infecciones urinarias se
detectan en 2 a 8% de las embarazadas. Las infecciones urinarias del embarazo,
especialmente las que comprometen las vas altas, pueden dar lugar a una mayor
prevalencia de prematuridad y de mortalidad del recin nacido.
El cateterismo vesical antes o despus del parto, pudiera ser causal de infeccin
urinaria.
Cualquier obstruccin u obstculo al flujo urinario (tumor, estrechez, clculo o
hipertrofia prosttica) determina una frecuencia considerablemente elevada de
infeccin de las vas urinarias. La infeccin, asociada a la obstruccin de las vas
urinarias, pudiera conducir a una rpida destruccin del tejido renal.
Disfuncin neurgena de la vejiga. Los procesos que interfieren con la
inervacin de la vejiga, como lesiones de la mdula espinal, la tabes dorsalis, la
esclerosis mltiple, la diabetes u otras enfermedades pueden acompaarse de

52
infeccin urinaria. El uso de catteres vesicales para drenar la vejiga, favorecen la
infeccin urinaria.
El reflujo vesicoureteral es una condicin en la cual hay reflujo o trnsito
retrgrado de la orina desde la vejiga hacia los urteres y a veces hasta la pelvis renal.
Se produce durante la miccin o al elevarse la presin en la vejiga. La alteracin
vesicoureteral facilita el reflujo de bacterias y de esta forma la infeccin de las vas
superiores. Es frecuente en nios con anomalas morfolgicas de las vas urinarias y
en nios anatmicamente normales con vas urinarias infectadas. En este ltimo grupo
el reflujo desaparece a medida que se avanza en edad y probablemente se deba a
causas distintas a la infeccin urinaria a largo plazo. Las lesiones renales guardan
correlacin con un reflujo intenso, no con la infeccin.
El cateterismo vesical (o paso de una sonda a travs de la uretra hasta la vejiga)
predispone a que de manera mecnica se arrastren agentes patgenos directamente a
la vejiga a partir de la uretra o de las mismas sondas contaminadas. En este tipo de
infeccin de adquisicin hospitalaria la frecuencia en varones y hembras es equivalente
y se han relacionado principalmente con el uso de sondas fijas.
Los factores que se asocian con mayor riesgo de infeccin son: sexo femenino,
mayor duracin del cateterismo, enfermedad subyacente grave, desconexin de la
sonda y el tubo de drenaje, cuidados deficientes de la sonda, y ausencia de
antimicrobianos sistmicos.
La infeccin se produce cuando las bacterias alcanzan la vejiga bien subiendo
por la columna de orina en la luz del catter o ascendiendo por la vaina mucosa situada
por fuera del catter. Los patgenos nosocomiales llegan al catter del paciente o al
sistema recolector de orina en las manos del personal, en soluciones o irrigadores
contaminados y a travs de instrumental o desinfectantes contaminados. La entrada
de las bacterias en el sistema del catter suele producirse por la unin entre el catter y
el tubo colector o por la bolsa de drenaje, ascendiendo las bacterias intraluminalmente
hasta la vejiga en 24-72 horas.
Es frecuente que la flora intestinal del paciente emigre a la piel del perin y a la
zona periuretral y llegue a la vejiga por la superficie externa del catter. Esta va es
particularmente frecuente en mujeres. Las bacterias crecen en la superficie interna de
la sonda en forma de pelculas biolgicas y producen costras que constan de bacterias,
glicoclices bacterianos, protenas de la orina del paciente y sales urinarias. Estas
costras ofrecen un refugio a las bacterias y pueden protegerlas de los antimicrobianos y
fagocitos.
Existen cada vez ms indicios de que los factores genticos del husped
influyen en la susceptibilidad a la infeccin urinaria.

53
Sabiendo que una infeccin es el resultado del desequilibrio entre la virulencia
bacteriana y los factores del husped es bueno tener presente que cuando hay
bacterias muy virulentas se produce infeccin, independientemente de si el hospedero
tiene o no una anomala pre-existente en las vas urinarias. Por otra parte, si hay
anomalas graves de vas urinarias como obstruccin, cicatriz renal, malformaciones
tac, no se requieren ni muchas bacterias ni demasiados factores de virulencia
bacteriana para que se produzca la infeccin.
En los enfermos con anomalas estructurales o funcionales de las vas urinarias,
las infecciones estn motivadas por cepas bacterianas carentes de esas propiedades
uropatognicas, dejando por sentado que esas propiedades no son necesarias para
provocar la infeccin de unas vas urinarias anmalas.
EPIDEMIOLOGIA
Las infecciones urinarias tienen caractersticas epidemiolgicas diferentes de
acuerdo al grupo de edad, al sexo y otras condiciones.
En RN y menores de 1 ao, la prevalencia oscila entre O y 3.6%, siendo ms
frecuente en varones que en hembras. En varones el origen es ms frecuentemente
hematgeno, mientras que en las hembras es ascendente y buen nmero de los casos
asociados a malformaciones del tracto urinario. En lactantes mayores y escolares son
ms frecuentes en las hembras, en proporcin 30:1 con respecto a los varones. Se
piensa que alrededor de 5-6% de las nias en edad escolar sufren por lo menos un
episodio de bacteriuria y en 20% de ellas pudiera estar asociado a reflujo
vesicoureteral. En adultos las infecciones urinarias son ms frecuentes en las mujeres,
aumentando la prevalencia a medida que aumenta la edad (3,5% en mujeres jvenes a
10% en mujeres mayores de 70 aos). En el sexo femenino aumenta su incidencia a
partir del inicio de la actividad sexual y el embarazo. La inmensa mayora de las
infecciones sintomticas agudas se dan en mujeres jvenes y son raras en varones
menores de 50 aos.
En el sexo masculino las infecciones urinarias son raras antes de los 50 aos de
edad cuando aumenta su frecuencia debido principalmente a obstruccin de origen
prosttico o a instrumentacin en pacientes hospitalizados. La prevalencia de
infecciones urinarias en hombres homosexuales puede ser tan elevada como 5%,
indicando que constituyen un grupo de riesgo de sufrir este tipo de infeccin.
La bacteriuria sintomtica es ms frecuente en ancianos tanto varones como
hembras.
Otros grupos de adultos con un riesgo mayor de infecciones urinarias son los
pacientes diabticos, los transplantados renales y en general pacientes que sean
sometidos a instrumentacin del tracto urinario.

54
Epidemiolgicamente las infecciones de las vas urinarias deben dividirse en las
que acompaan al cateterismo (hospitalarias) y las ajenas al mismo (ambulatorias o de
la comunidad). En ambos casos pueden ser sintomticas o asintomticas.
Las infecciones urinarias:
Constituyen la primera causa de infecciones hospitalarias y el 90% de ellas
estn asociadas a cateterismo, especialmente con sistemas abiertos.
El riesgo de cateterismo vesical es mayor en: ancianos, inmunosuprimidos,
debilitados, anormalidades anatmicas, embarazadas.
Constituyen la segunda causa de complicaciones en la UCI, despus de las
infecciones respiratorias.
MANIFESTACIONES CLINICAS
Las infecciones (altas y bajas) pueden producirse conjuntamente o en forma
separada y pueden ser sintomticas o asintomticas.
CISTITIS
Esta infeccin de la vejiga es causada por el ascenso de grmenes por la uretra,
ante la presencia de agentes de origen intestinal en la vagina.
Los sntomas ms destacados de cistitis son dolor tipo disuria y en la regin
suprapbica que pudiera irradiarse hacia la columna. Adems miccin imperiosa,
escasa y frecuente. La orina suele volverse turbia a simple vista, maloliente y en el
30% de los casos sanguinolenta. Generalmente no se acompaa de fiebre y si la hay
esta es discreta.
En las mujeres existe el SINDROME URETRAL AGUDO que consiste en la
presencia de disuria, miccin imperiosa y poliaquiuria en ausencia de bacteriuria
significativa. Clnicamente este cuadro es difcil de distinguir de la cistitis. El
antecedente adicional de un cambio de pareja sexual, si sta ha tenido una uretritis
gonoccica o por clamidias debe hacer sospechar una infeccin por contagio sexual,
igual que lo sera la presencia de una cervicitis mucopurulenta. El cultivo es negativo.
Se debe descartar infecciones por agentes de transmisin sexual (gonococo, C.
trachomatis, y herpes simple).
PIELONEFRITIS
Esta entidad clnica reviste mayor gravedad que las anteriores debido a que en
este caso hay infeccin de uno o ambos riones. Se caracteriza por la presencia de

55
fiebre alta precedida de escalofros y dolor en la regin lumbar (de costado). Adems,
malestar general, vmito y algunas veces diarrea. Los sntomas aparecen rpidamente
en unas horas. En algunos pacientes predominan signos y sntomas por gramnegativos. Durante la fase aguda de la enfermedad puede haber hematuria, y de
persistir sta despus de remitir las manifestaciones agudas, hay que pensar en un
clculo, un tumor o una tuberculosis.
La pielonefritis es una enfermedad con tendencia a las recaidas peridicas en el
curso de los aos.
La infeccin de las vas urinarias puede eventualmente dar origen a bacteriemia
con signos clnicos de sepsis.
INFECCIONES URINARIAS ASOCIADAS A CATETERES VESICALES
10-15% de los pacientes hospitalizados con catteres uretrales permanentes
tienen bacteriuria. El riesgo de infeccin est prximo a 5% de cada cateterismo.
Clnicamente la mayora de las infecciones asociadas a sondas originan
sntomas mnimos, ninguna fiebre y con frecuencia se resuelven al retirar el catter. Se
ha comprobado que las vas urinarias cateterizadas son el punto de partida que con
mayor frecuencia origina bacteriemia por bacterias gramnegativas en enfermos
hospitalizados.
Son consideradas INFECCIONES URINARIAS COMPLICADAS:
Bacteriuria asociada a trastornos dinmicos, obstructivos o neurolgicos (reflujo
vesico-ureteral, vejiga neurognica, cuerpos extraos, litiasis), catteres, enfermedad
renal intrnseca, diabetes, enfermedad renal poliqustica.
En infecciones urinarias complicadas los factores de virulencia per se no tienen
un papel muy importante.
DIAGNOSTICO
La clnica prevalente har sospechar infeccin urinaria alta o baja.
El
diagnstico clnico debe ser confirmado por exmenes paraclnicos, basados
inicialmente en el examen simple o general de orina y de ser requerido, el urocultivo.
El examen bacteriolgico de la orina se hace principalmente en quienes se
sospeche infeccin urinaria, insuficiencia renal o hipertensin.
Tambin en
embarazadas durante el primer trimestre del embarazo, en aquellos en quienes se
sospeche infeccin generalizada y en los que presenten fiebre de origen desconocido.

56
Pueden obtenerse un sinfn de datos a partir del examen microscpico simple de
orina. Un frotis de orina sin centrifugar, tomada de la porcin media eliminada, teido
con Gram, que muestre bacilos gramnegativos, es diagnstico de infeccin urinaria.
La centrifugacin breve de la orina sedimenta con facilidad las clulas de pus,
que pueden arrastrar consigo bacterias y por lo tanto ayudar al diagnstico
microscpico de la infeccin. Puede haber clulas de pus sin bacterias y clulas
bacterianas sin pus.
La presencia de numerosas clulas epiteliales escamosas, lactobacilos o flora
mixta sugiere una recoleccin incorrecta de la orina.
Debido a que es necesario distinguir entre microorganismos contaminantes de
los de importancia etiolgica, solo el examen cuantitativo de la orina puede producir
resultados significativos.
Para un examen de orina apropiado es necesario:
a) RECOLECCION APROPIADA DE LA MUESTRA
b) EXAMEN MICROSCOPICO
c) CULTIVO
La orina secretada por el rin es estril salvo que dicho rgano est infectado.
La orina vesical en condiciones normales no contiene microorganismos. Los primeros
20-25 cc de orina emitidos siempre presentan bacterias que proceden de la flora
corriente de la uretra anterior, prepucio, regin vulvovaginal o de contaminacin fecal.
Basados en esto, a la hora de la toma de la muestra es necesario desechar la primera
porcin de orina emitida, sin dejar de orinar, de manera de mantener la accin del flujo
urinario que arrastrar dichas bacterias a lo largo del trayecto de salida.
a) De acuerdo a la circunstancia la RECOLECCION se hace a travs de distintas
tcnicas como son:
TECNICA DE LA PORCION MEDIA DEL CHORRO
Es la tcnica de empleo mas frecuente. El mismo paciente toma la muestra y s
por esto que requiere conocer el procedimiento de manera de garantizar as un
resultado confiable.
Esta tcnica impone los siguientes requisitos:
El paciente debe tener como mnimo tres a cuatro horas de retencin de orina.
La muestra ms representativa es la primera orina de la maana.
El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres
das anteriores a la recoleccin, exceptuando los casos de control de tratamiento
y pacientes gravemente enfermos. De tomarse una muestra en estas

57
condiciones debe notificarse al laboratorio el tratamiento que el paciente viene
recibiendo.
La toma de la muestra, por lo explicado anteriormente, requiere de una cuidadosa
limpieza de los genitales externos.
En la mujer:
Lavado cuidadoso de los genitales externos con agua y jabn. Separando los
labios mayores se realiza limpieza en sentido anteroposterior (de adelante hacia
atrs) con gasas estriles y solucin jabonosa o germicida, cuidando de no pasar
nuevamente la gasa empleada de atrs adelante y as no contaminar el rea ya
tratada, dada la proximidad del ano. Se repite esto ltimo empleando nuevas gasas
estriles.

Se enjuaga abundantemente con agua previamente hervida y se seca bien el

rea con nuevas gasas estriles o con una toalla limpia recin planchada.
Manteniendo los labios mayores y menores separados, se inicia la miccin sin
detenerla en ningn momento, recogiendo en un envase estril la porcin media de
la miccin, siendo suficientes unos 40-50 mL de orina.
En el hombre:
Lavado cuidadoso de los genitales externos, con especial nfasis del glande y
prepucio bien con jabn o solucin jabonosa germicida.

58
Se enjuaga abundantemente con agua que haya sido hervida previamente y se
seca el glande hacia el prepucio bien sea con gasas estriles o con una toalla
lavada y limpia recin planchada.
Con el prepucio retrado se inicia la miccin en forma ininterrumpida hasta
finalizar, recogiendo en un envase estril la porcin media de la miccin, siendo
suficientes 30-40 mL de orina
En cualquiera de los dos casos, una vez recogida la muestra se tapa el envase
cuidando de no contactar el interior de la tapa con la mano u objeto alguno y as
contaminarla.
Esta tcnica no es apropiada para nios que no tienen control vesical,
recurrindose entonces a la
TECNICA DE RECOLECCION PARA LACTANTES
Se procede a hacer limpieza de los genitales como descrito anteriormente,
segn sea el caso.
El recolector de orina destinado para estos casos es una abolsa estril que a
travs de su extremo libre adhesivo permite su fijacin a la piel de manera de
recoger en su interior la orina emitida. Se mantiene adherida hasta que el nio
orine pero de no hacerlo en los siguientes 30 minutos debe ser retirada y debe
repetirse el procedimiento empleando una nueva abolsa recolectora. Una vez
obtenida la muestra requerida se retira la bolsa y se ponen en contacto los extremos
adhesivos de manera de sellarla.
Debe tenerse especial cuidado de no tocar el interior de la bolsa en momento
alguno.
Pudiera ser necesario estimular la miccin bien sea a travs de la administracin
oral de lquidos o masaje paravertebral en la regin lumbosacra.

59

En ciertas condiciones pudiera justificarse el cateterismo o sondeo vesical o la

aspiracin suprapbica.
PUNCION ASPIRACION SUPRAPUBICA
Constituye una tcnica realizada por el mdico, generalmente en relacin con
un proceso obstructivo a nivel de la uretra que impide la emisin de orina a partir de la
vejiga. No constituye un procedimiento de rutina, sin embargo debemos conocerlo. Es
una tcnica empleada en la poblacin peditrica muy joven. En este caso la orina se

60
obtiene, en forma asptica por puncin y aspiracin de la vejiga llena o repleta
(palpable) a travs de la pared abdominal en su regin suprapbica.

Para esto es necesario la limpieza del rea una vez determinado el sitio de
puncin con el empleo de guantes. Inicialmente la limpieza se hace con agua y jabn o
alcohol en forma concntrica de adentro hacia fuera y luego con solucin de yodopovidona de la misma forma, siempre con el empleo de guantes y campos estriles.
Con nuevos guantes estriles se procede a la puncin y aspiracin de la muestra,
manteniendo la misma en la inyectadora o vacindola en un recolector estril de orina
tomando las previsiones para no contaminarla.
CATETERISMO VESICAL
Pudiera estar indicado en aquellos casos en lo que resulta imposible o muy difcil
la emisin voluntaria de orina, por que existe un proceso obstructivo que impide su
emisin, por que se requiere un monitoreo muy minucioso de la diuresis o en estados
post-operatorios de la esfera urolgica, entre otras indicaciones.
De acuerdo al motivo de su indicacin el cateterismo puede ser momentneo,
permitiendo la salida inmediata de la orina y el retiro inmediato del catter empleado, o

61
puede prolongarse en el tiempo y por lo tanto constituir un sistema cerrado en conjunto
con una bolsa recolectora de la orina a la cual se conecta el catter empleado.
La instalacin de sonda acarrea el riesgo de introducir microorganismos a la
vejiga, pero en algunas ocasiones es inevitable su indicacin.
Es necesaria la limpieza de la zona genitourinaria como descrito en la tcnica de
la porcin media del chorro, pero en este caso el paciente se encuentra acostado y en
el caso de la mujer la tcnica se desarrolla en posicin ginecolgica mientras que en el
hombre se realiza en posicin decbito dorsal con las piernas algo separadas.
Para la limpieza es necesario el empleo de guantes estriles que se desechan
una vez culminada la misma. Se procede entonces al cateterismo propiamente dicho
con otro par de guantes estriles y el empleo de una sonda de calibre adecuado para la
uretra del paciente, lo cual por lo general depende de su edad y del gnero. Se
colocan campos estriles alrededor del rea genitourinaria y otra persona proveer la
sonda a partir del empaque evitando el contacto de la misma con cualquier elemento
que pudiera contaminarla. Esta se toma con los guantes estriles, se lubrica su
extremo de manera de facilitar su paso por la uretra y que ste resulte lo menos
traumtico posible. El ayudante tiene a la mano el recolector estril de orina y una vez
que se inicie la salida de orina a travs del catter (una vez que ste alcanza la vejiga)
es desechada la primera porcin emitida en una rionera u otro contenedor destinado
para este fin, recogiendo entonces la porcin media del chorro con el recolector estril.

62

Catter vesical en el gnero femenino

Catter vesical en el gnero masculino

Si el cateterismo no es posible o no se ha procedido debidamente de manera de

garantizar un procedimiento libre de contaminacin, ste solo podr repetirse
empleando un nuevo equipo estril.
De no requerirse ya el catter ste es retirado de inmediato. De no ser as, se
conecta a una bolsa colectora a travs de su unin establecindose entonces un
sistema cerrado en el que la orina alcanza la bolsa y se acumula a medida que sale
libremente.
En un SISTEMA CERRADO de recoleccin la muestra debe obtenerse por
aspiracin estril, con aguja y jeringa a partir de la sonda y no de la bolsa de
recoleccin. La orina se recoge despus de desinfectar la pared de la sonda en su
punto de unin con el tubo de drenaje. Se aspira la orina por medio de puncin en la
sonda con una aguja 21. En ningn momento deber tomarse la muestra de la bolsa
recolectora.
La bolsa colectora SIEMPRE debe mantenerse por debajo del nivel de la vejiga
del paciente de manera de que no haya paso retrgrado de orina de la bolsa a la
vejiga, lo cual implicara el desarrollo de infeccin urinaria de no existir sta
previamente.

63

SISTEMA CERRADO DE RECOLECCIN DE ORINA

CONSERVACION DE LA MUESTRA
Debido a que muchas especies de microorganismos se multiplican con rapidez
en la orina a temperatura ambiente o corporal dado que es un excelente medio de
cultivo, es necesario que las muestras se procesen lo antes posible una vez recogidas.
Deben enviarse al laboratorio previa colocacin del envase en un recipiente que
contenga cubos de hielo. Este procedimiento permitir que el nmero de bacterias
permanezca relativamente constante por un tiempo considerable, pero lo ideal sera su
procesamiento durante las siguientes 4 horas despus de emitidas.

64
EXAMEN MICROSCPICO
Representa el examen o evaluacin directa de la orina no centrifugada a travs
de la coloracin de Gram. Un frotis de orina sin centrifugar, teido con Gram, tomada
de la porcin media del chorro, que muestre bacilos gramnegativos, indica que se trata
de infeccin urinaria.
La deteccin de una o ms bacterias o uno o ms leucocitos por campo, en un
frotis teido, observados con objetivo de inmersin se correlaciona con recuentos en el
cultivo mayores de 100.000 colonias o UFC (unidades formadoras de colonias) por mL
de orina y con piuria.
La orina normal contiene un pequeo nmero de clulas y de otros elementos
formes desprendidos de toda la longitud del sistema urinario. Al existir alteraciones,
estas clulas estn aumentadas y pueden ayudar a localizar el sitio y el tipo de la
lesin.
Por ejemplo, un nmero excesivo de hemates puede indicar infeccin, tumor,
clculos o inflamacin. Un exceso de leucocitos puede indicar infeccin u otras
enfermedades inflamatorias. El hallazgo de alguna bacteria en el sedimento de orina
centrifugada no necesariamente significa infeccin urinaria pero el hallazgo de
bacterias en una muestra de orina fresca, no centrifugada, se asocia a menudo a
cultivos de orina con ms de 10 5 microorganismos/mL de orina eliminada y sugiere
infeccin urinaria. Pueden encontrarse adems cristales de diversas sales (oxalato,
fosfato, uratos) o frmacos (sulfamidas por ejemplo) cuando sus concentraciones y el
pH urinario exceden de los lmites de su solubilidad.
Los cilindros son masas cilndricas de mucoprotenas en las cuales pueden estar
atrapados elementos celulares, protenas o gotas de grasa y su presencia en el
sedimento de la orina distingue enfermedad renal primaria de las enfermedades de las
vas inferiores. Los cilindros pueden ser hemticos (glomerulonefritis), bacterianos
(infeccin bacteriana), de leucocitos (sugestivos de infeccin pero tambin presentes
en glomerulonefritis)
La centrifugacin breve de la orina sedimenta con facilidad las clulas de pus
que pueden arrastrar consigo bacterias.
El sedimento urinario se obtiene a partir de la centrifugacin de unos 15 cc de
orina recin emitida bien sea a 1500 rpm durante 10 minutos o 3000 rpm durante 5
minutos.
PIURIA: es la presencia en el sedimento urinario de ms de 5 glbulos blancos
(piocitos o leucocitos sin degenerar por campo microscpico de gran aumento.

65
BACTERIURIA: significa bacterias en la orina. Casi todas las infecciones bacterianas
de las vas urinarias se caracterizan por la presencia de grandes cantidades de
bacterias en la orina. El estudio cuantitativo de las bacterias en la orina se realiza
mediante el urocultivo y se informan de la siguiente manera:

No hubo desarrollo bacteriano

Menos de 10.000 colonias por mL se interpreta como contaminacin
Entre 10.000 y 100.000 colonias debe repetirse
Ms de 100.000 colonias por mL sugestivo de infeccin urinaria

La bacteriuria asintomtica se define como bacteriuria importante, pero menor de

100.000 UFC/mL en ausencia de manifestaciones clnicas de infeccin activa., y no se
trata a menos que estemos en presencia de una paciente embarazada (por riesgo de
aborto, embarazo prematuro o sepsis neonatal), procedimiento quirrgico de la esfera
urolgica o de un paciente diabtico, entre otros.
Puede haber clulas de pus sin bacterias, y a la inversa, bacteriuria sin piuria.
Debido a la colonizacin por bacterias de la uretra, suele ser difcil definir si los
microorganismos aislados a partir de orina tomada a partir de una sonda son de origen
urinario o uretral.
La presencia de numerosas clulas epiteliales escamosas, lactobacilos o flora
mixta sugiere una recoleccin incorrecta de la orina y por lo tanto contaminacin. En
relacin con esto es bueno tener presente la flora corriente local, uretral y de genitales
externos, que comprende entre otros: Staphylococcus aureus y
Staphylococcus
epidermidis, Lactobacilus sp., Difteroides, Candida spp, algunas especies de
Escherichia y otros bacilos gramnegativos.
UROCULTIVO
El cultivo bacteriolgico de la orina es indispensable en el diagnstico de las
infecciones urinarias ya que por medio de este se puede evaluar la etiologa, la
severidad de la infeccin de acuerdo al recuento de colonias y la sensibilidad del
agente aislado a diversos antibiticos cuando se realiza el antibiograma. Tambin se
estudian las propiedades bioqumicas del agente. Constituye el medio diagnstico
definitivo.
La orina recolectada en forma apropiada, se cultiva en cantidades medidas
sobre medios slidos y las colonias que aparecen despus de la incubacin se cuentan
para indicar el nmero de bacterias por mililitro.
Para que el cultivo de la orina sea significativo debe efectuarse en forma
cuantitativa. El hallazgo de 10 5 microorganismos/mL en una muestra de orina

66
recolectada apropiadamente es una fuerte prueba de infeccin activa de las vas
urinarias.
Se ha establecido que recuentos mayores o iguales a 100.000 colonias por mL
en un urocultivo de la primera orina recogida en la maana representa infeccin en un
95% de los casos (de repetirse en dos pruebas). Recuentos menores de 10.000
colonias por mL indican contaminacin uretral o vaginal, y recuentos entre 10.000 y
100.000 colonias necesitan ser evaluadas en conjunto con la informacin clnica para
as definir su significado. Lo expuesto permite diagnosticar correctamente la mayora
de las pielonefritis y cistitis. Sin embargo, en algunos pacientes con verdaderas
infecciones urinarias, factores como el tipo de muestra y las circunstancias en las que
se recoge, el tipo de agente, sus condiciones clnicas, pueden contribuir a recuentos
bajos.
En los enfermos con sntomas la infeccin puede ir acompaada de un menor
nmero de bacterias (10 a 10 por cc). En las muestras de orina obtenidas por
puncin-aspiracin suprapbica o en el cateterismo de entrar y salir o en las
procedentes de enfermos con cateterismo permanente, la presencia de bacteriuria de
cualquier agrado un recuento de colonias de 10 2 a 104 microorganismos por mL indica
por lo general la presencia de infeccin.
2

Si el nmero de bacterias cultivadas resulta menor al estimado para al estimado

para establecer infeccin urinaria, pudieran estar indicados exmenes repetidos de la
orina para establecer la presencia de infeccin.
Las puntas de sonda de Foley vesical no son recomendables para cultivo, ya
que siempre estn contaminadas con bacterias colonizantes de la uretra. Su cultivo es
un error en el cual se incurre con mucha frecuencia. La diuresis acuosa o una miccin
anterior disminuyen los recuentos de bacterias en la orina.
El significado de un aislamiento urinario en el laboratorio debe basarse en
informacin tal como el nmero y tipo de bacterias aisladas, el tipo de muestra obtenida
y la informacin clnica proporcionada por el paciente, lo que permitir entonces la
correcta interpretacin de los resultados informados por el laboratorio. Es por esto que
por ejemplo, en algunos casos, 2 o ms colonias pudieran no ser contaminacin y
corresponderse en cambio con infeccin en un paciente inmunosuprimido.
Si los cultivos son negativos en presencia de signos clnicos de infeccin
urinaria, debe tomarse en cuenta el sndrome uretral agudo u otros procesos.
Existen dos procedimientos a seguir en el examen cuantitativo o recuento de
colonias:
a) Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias

67
b) Mtodo del asa calibrada
METODO DE CONTEO EN PLACA O RECUENTO DE COLONIAS
Diferencia bacteriuria verdadera de contaminacin. Se realiza de la siguiente manera:
-

Se homogeniza la muestra mediante agitacin

Se diluye la muestra 1:100, colocando 0,1 mL de orina en 9,9 ml de caldo o de
suero fisiolgico estriles.
A partir de esta dilucin 1:100 se preparan diluciones 1:1000 y 1:10.000
Se deposita 1 ml de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales
se vaca un sobre de medio Cled, agar-tripticasa, fundidos y enfriados a 45C.
Mediante rotacin suave, se favorece la distribucin homognea de la siembra.
Se incuban todas las siembras a 37C durante 24-48 horas
Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300
colonias. Contadas estas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva
para as obtener la cuenta total.

METODO DEL ASA CALIBRADA

Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar
sangre o agar CLED en una muestra de orina sin centrifugar, empleando asa de platino
calibrada (4mm de dimetro), despus de incubar las siembras a 37 durante 24-48
horas, se cuenta el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por
100, ya que la asada de platino es equivalente a 0,01 mL de orina.
MEDIDAS PREVENTIVAS PARA LA INFECCIN URINARIA
Ingesta de abundantes lquidos de manera de favorecer la miccin.
Evacuacin de la vejiga despus del coito, principalmente mujeres. La miccin
posterior al coito reduce el riesgo de cistitis al favorecer la expulsin de las bacterias
introducidas durante el acto sexual.
Las mujeres deben realizar limpieza posterior a la miccin de adelante hacia atrs y
as evitar contaminacin procedente del rea ano-rectal. Es recomendable el uso
de blumers de algodn para prevenir alergias a fibras sintticas.
Las infecciones de las vas urinarias asociadas a catteres pueden prevenirse o
reducirse usando el sistema estril de drenaje cerrado, con medidas de asepsia al
introducir el catter y en todas las manipulaciones del mismo, usando pomadas
antispticas para el meato y cumpliendo las normas que minimizan la infeccin
cruzada. A pesar de las precauciones, la mayora de los pacientes cateterizados
durante ms de dos semanas presentan bacteriuria. En la bacteriuria asintomtica
no se ha determinado la necesidad de tratamiento, ni la duracin del mismo. La
retirada del catter y un breve ciclo de antibiticos a los que los microorganismos
sean sensibles es la mejor medida y casi siempre elimina la bacteriuria.

68

Algunos pacientes hospitalizados o no, debido a lesin medular espinal,

incontinencia u otros factores, requieren cateterismo urinario a largo plazo o
semipermanente, que practicado adecuadamente reduce la incidencia de bacteriuria
y de las complicaciones asociadas.

PRCTICA No. 5
CONTROL DEL MUNDO MICROBIANO - METODOS DE ESTERILIZACIN
Autor: Lic. Jean Jacques Pitteloud
La esterilizacin puede definirse como un proceso que elimina o aniquila
cualquier microorganismo presente en la superficie de un material o dentro de un
lquido. Dicha definicin representa, sin embargo, una simplificacin, dado que el
concepto real de esterilizacin es una probabilidad estadstica mnima de conseguir un
microorganismo vivo en un objeto. Dicha probabilidad se expresa generalmente en
forma logartmica (log de base 10) como la probabilidad de conseguir
un
microorganismo vivo a partir de una poblacin de un milln o ms individuos.
Los mtodos de esterilizacin tradicionalmente usados en el mbito hospitalario
son los siguientes:
a) el calor seco, a saber el calor de 160 a 180oC generado por un horno
b) el calor hmedo con saturacin de vapor, mediante el uso de aparatos especiales
llamados autoclaves
c) el xido de etileno, gas levemente txico con propiedades esterilizantes, utilizado
en condiciones definidas

69
d) la radiacin gamma , procedimiento utilizado por las compaas que producen los
materiales descartables de plstico.
Para cada uno de los procedimientos mencionados, existen normas establecidas
referentes a las condiciones de uso, el tiempo de accin, las limitaciones y/o
contraindicaciones , el tipo de material que puede esterilizarse, etc...
Los procedimientos publicitados como "esterilizacin en fro" no ofrecen las
garantas de los procedimientos tradicionales, particularmente porque no incluyen las
condiciones para preservar la esterilidad del material tratado, luego del proceso de
esterilizacin. Por lo tanto, en la medida de las posibilidades, conviene utilizar los
mtodos tradicionales para asegurar el adecuado tratamiento del material y el
mantenimiento de las condiciones de esterilidad hasta el uso del mismo.
La Metodologa utilizada para lograr la esterilizacin del material depende de
varios factores, entre los cuales cabe mencionar:
1. La efectividad del procedimiento
2. La duracin de la totalidad del proceso
3. La inocuidad para el material y para el usuario
4. El costo
Los cuatro factores mencionados deben de tomarse en cuenta a la hora de
seleccionar el procedimiento. Las preguntas que el personal mdico o paramdico
debe de hacerse antes de empezar cualquier proceso de esterilizacin son las
siguientes:
1. El material necesita estar estril?
2. El material aguantar las condiciones a las cuales va a ser expuesto?
3. Podr el material No estar disponible por el perodo de tiempo que durar el
procedimiento completo?
4. El procedimiento escogido es el menos costoso y/o ms inocuo para lograr igual
resultado?
5. Cules son los riesgos para el material y/o para los usuarios?
Slo una actitud crtica y razonada permitir alcanzar todas las ventajas de uno u
otro mtodo y evitar accidentes o despilfarros.
GENERALIDADES RELATIVAS A LOS METODOS DE ESTERILIZACION
CALOR SECO:
El calor seco generado por un horno permite la esterilizacin de ciertos
materiales, tales como metal, vidrio, talco, aceites, etc. a travs de la exposicin a

70
temperaturas elevadas (160 -180OC)por perodos de tiempo entre 150 - 45 minutos (el
tiempo depender de la temperatura!)
150 minutos a 150oC
130 minutos a 160oC
60 minutos a 170oC
45 minutos a 180oC
Una de las limitaciones del procedimiento es que la exposicin del material a
tales temperaturas puede ocasionar - a la larga - deterioros significativos. Por ejemplo,
el filo de los instrumentos cortantes, la resistencia de los textiles, etc. tienden a perder
sus cualidades. Dicho mtodo presenta muchas limitaciones por las altas temperaturas.
CALOR HMEDO :
Los aparatos que permiten tratar el material por el calor hmedo van desde la
sencilla olla de presin hasta el autoclave ms sofisticado completamente
automatizado. El principio de la esterilizacin por el calor hmedo es la exposicin del
material a la saturacin de vapor bajo presin. Es el mtodo ms ampliamente utilizado
por su costo relativamente bajo y por la ausencia de toxicidad. El mismo se puede
aplicar a cualquier material que tolere el calor y la humedad. A ttulo de ejemplo,
conviene mencionar: el instrumental mdico quirrgico, la lencera, gran parte de las
soluciones y ciertos materiales hechos de plstico no deformable (leer siempre las
indicaciones del fabricante!).
Las temperaturas generalmente establecidas para la esterilizacin por autoclave
son las siguientes:
- 121oC por un tiempo entre 15 hasta 30 minutos
- 132oC por un tiempo entre 4 y 7 minutos
Cuatro parmetros influyen en el proceso de esterilizacin:
1. La temperatura
2. La presin
3. La saturacin de vapor
4. El tiempo
Una de las condiciones que ms contribuyen a la efectividad del proceso es la
calidad del vapor; a saber: se requiere la obtencin de un vapor saturado 100% seco
(sin presencia de agua en fina neblina).
Por otra parte, es importante lograr la eliminacin (vaciado) del aire de la cmara
del autoclave para permitir la total exposicin del material al vapor.

71
La temperatura depende directamente de la calidad del vapor y de la presin del
mismo; el tiempo de exposicin se fijar en funcin del tipo de material (dentro de los
lmites establecidos) y de la temperatura alcanzada. Por ejemplo, ciertos medicamentos
o los medios de cultivo pueden perder sus propiedades si estn expuestos por mucho
tiempo a temperaturas altas. Por lo tanto, se debe reducir al mnimo el tiempo de
exposicin de los mismos (generalmente 10 15 minutos). Conviene precisar
igualmente que el tiempo de esterilizacin corresponde al tiempo durante el cual el
material estar sometido a la temperatura o a la presin establecida, a partir del
momento del alcance de las mismas. Por consiguiente, es indispensable a no ser que
se utilicen aparatos completamente automatizados, vigilar constantemente el
funcionamiento del aparato y estar pendiente de los parmetros tales como presin o
temperatura, y limitar el tiempo a lo estrictamente necesario. Es una falta de
responsabilidad grave colocar un material en un autoclave y recuperarlo al cabo de
una hora, sin haberse preocupado por vigilar el desarrollo del proceso.
Es importante sealar que el mecanismo de funcionamiento de la olla de presin
no permite asegurar la esterilidad del material por las limitaciones relativas a presin
insuficiente y a la calidad del vapor producido.

OXIDO DE ETILENO:
El procedimiento de esterilizacin mediante el uso del xido de etileno se aplica
generalmente para el tratamiento de materiales mdico-quirrgicos que no soportan la
esterilizacin por el vapor. El xido de etileno es un gas incoloro, inflamable y
explosivo. Para fines de esterilizacin, viene mezclado con dixido de carbono u otros
compuestos fluorados para reducir los riesgos de explosin. De todos modos, el uso
del xido de etileno es delicado y debe limitarse a reas determinadas, con un personal
entrenado e instalaciones adecuadas.
Los elementos que influyen sobre la efectividad de la esterilizacin por el xido
de etileno son:
1. La concentracin del gas
2. La temperatura
3. El grado de humedad
4. El tiempo de exposicin
Los valores extremos para cada uno de los factores mencionados son los
siguientes:
1. De 450 hasta 1200 mg/L

72
2. De 29 hasta 65oC
3. De 45 hasta 85 % de humedad relativa
4. De 2 hasta 5 horas
Conviene sealar que el hecho de mantener el material mojado no equivale a
humedecerlo. En un material mojado, particularmente en un tubo de plstico muy fino,
pueden formarse tapones de agua que no permiten la circulacin del gas, y, por
consiguiente, impiden la esterilizacin del material.
El xido de etileno inactiva todos los microorganismos, aunque las esporas
bacterianas (Bacillus subtilis) estn ms resistentes que la mayora de las dems
especies.
La desventaja del mtodo de esterilizacin por el xido de etileno es la larga
duracin del ciclo de esterilizacin, su costo y los riesgos tanto para el personal como
para el medio ambiente: No se puede olvidar que el xido de etileno es un producto
txico y que su uso est sometido a estrictas condiciones para evitar cualquier
problema.
RADIACIONES IONIZANTES:
La esterilizacin por rayos gamma (generados por cobalto 60) o por otra
radiacin ionizante producida por aceleradores de electrones, es un mtodo que
funciona a baja temperatura y se utiliza principalmente para el tratamiento de
materiales mdico-quirrgicos fabricados a partir de materia sinttica tipo plstico o
para productos farmacuticos. Es un mtodo costoso que slo pueden utilizar las
industrias que producen grandes volmenes de materiales.
OTROS METODOS DE ESTERILIZACIN:
Entre los mtodos alternos que podran utilizarse en un momento dado para
cubrir fallas de los sistemas tradicionales estn:
- La filtracin mediante el uso de membranas de muy bajo dimetro de poros (0,22 m).
Dicho mtodo se usa tradicionalmente para la esterilizacin de ciertas soluciones
farmacuticas termolbiles. La crtica que puede formularse es que el tamao de los
poros permite aparentemente filtrar todo tipo de bacterias, pero no es efectivo para la
filtracin de virus. por otra parte, el mtodo obliga a la realizacin de manipulaciones
que representan riesgos de contaminacin.
- El uso de productos gaseosos, tales como : perxido de hidrgeno, dixido de cloro,
formaldehdo (formol), cido peractico, ozono. Todas las sustancias mencionadas
presentan propiedades microbicidas, pero son de manejo delicado, motivo por el cual
su uso rutinario no est todava previsto.

73
- El uso de hornos microondas: estudios recientes han demostrado que las microondas
producen un efecto microbicida en un tiempo relativamente corto. Sin embargo, se
necesita efectuar otros estudios para determinar exactamente las condiciones para un
uso rutinario en el ambiente hospitalario.
- Ciertos compuestos qumicos reconocidos como desinfectantes poseen propiedades
microbicidas evidentes que permiten su uso para descontaminar materiales con muy
buena efectividad en un tiempo de exposicin variable (de 6 hasta 10 horas). Sin
embargo, el mtodo no puede considerarse como esterilizacin, porque no ofrece las
condiciones para mantener el material exento de contaminante. Por otra parte, implica
generalmente la necesidad de enjuagar el material despus del perodo de inmersin.
Entre los productos que ofrecen un alto poder microbicida estn los glutaraldehdos, los
cuales se usan con diversas metodologas. Conviene ser muy crtico a la hora de
utilizar los productos calificados como desinfectantes, porque su efectividad - en la
prctica - no corresponde necesariamente a las indicaciones destinadas principalmente
a vender el producto a la mayor cantidad de usuarios potenciales.
METODOS DE CONTROL DE LA EFECTIVIDAD
El concepto de esterilizacin implica la necesidad de efectuar peridicamente
controles para determinar la efectividad de la misma.
( No se puede confiar ciegamente en los procesos de esterilizacin !)
En nuestros tiempos, ya no se determina la esterilidad de un producto (con la
excepcin de ciertas pruebas establecidas por diversas farmacopeas), sino que se
efectan controles de los procesos mismos de esterilizacin, a travs de grabaciones
automticas de los parmetros importantes, la colocacin de indicadores que - por su
reaccin - sealan el alcance de determinadas condiciones o la realizacin al azar de
pruebas bacteriolgicas.
En la actualidad, en Venezuela, en la mayora de los centros hospitalarios, se
presenta una situacin muy grave porque los controles son muy deficientes o
inexistentes, porque su realizacin depende de las posibilidades o competencias de un
nmero limitado de personas a cargo de las centrales de suministro de materiales o de
las supervisoras de enfermera, generalmente sobrecargadas de actividades
burocrticas. Por otra parte, la mayora de los usuarios de uno u otro mtodo actan de
manera mecnica - como robots - con escasos conocimientos de las indicaciones
precisas para realizar adecuadamente el procedimiento.
Los mtodos de control generalmente utilizados se dividen en varios grupos:
- Los mtodos fsicos

74
- Los mtodos fsico-qumicos
- Los mtodos bacteriolgicos
Los mtodos fsicos utilizan las indicaciones de parmetros fsicos, tales como
temperatura o la presin, y el tiempo. Los aparatos modernos incorporan sistemas de
grabacin automtica de dichos parmetros en cada ciclo de esterilizacin. En el caso
de aparatos menos sofisticados, el usuario tiene la responsabilidad de controlar
peridicamente las indicaciones de los termmetros o de los manmetros de presin.
Los mtodos fsico-qumicos se basan en las reacciones de indicadores como el
calor y/o como la humedad en funcin del tiempo, o la transformacin del indicador por
el contacto con sustancias qumicas (por ejemplo: xido de etileno o formol). Otro
ejemplo es el adhesivo que se usa de manera rutinaria para consolidar los embalajes
de materiales mdico-quirrgicos, el cual lleva lneas que cambian de color o
intensifican su tono, luego de estar expuestas a la humedad o al calor. (El cambio de
color o de tono no indica la esterilidad del material, sino la exposicin del
material al proceso de esterilizacin!)
Los mtodos bacteriolgicos se efectan mediante el uso de microorganismos
vivos llamados bioindicadores; las pruebas bacteriolgicas son las nicas que indican
con certeza la efectividad de la esterilizacin. Por lo tanto, son las nicas que se
consideran como legalmente vlidas en varios pases. Las mismas deben efectuarse
peridicamente.
Existen diversas tcnicas para realizar las pruebas bacteriolgicas de control de
la esterilizacin, tanto por el calor hmedo, como por el xido de etileno. Incluso, se
comercializan sistemas estandarizados. Todos los mtodos utilizan bacterias muy
resistentes tanto al vapor como al xido de etileno. Dichas bacterias provienen de una
especie de bacilos grampositivos llamada Bacillus: Bacillus stearothermophilus para el
control del proceso de esterilizacin por vapor y Bacillus subtilis var. globigii para el
control de la esterilizacin por el xido de etileno. Ambas especies se presentan en
forma de esporas muy resistentes a condiciones extremas.
Los sistemas comercializados incluyen - en una forma sencilla - las esporas
repartidas sobre una tira de papel secante y un medio de cultivo con un indicador de pH
en una ampollita, ambos separados uno del otro por una fina membrana, la cual se
rompe por una presin leve, luego de realizado el proceso de esterilizacin, para
determinar la sobrevida de los microorganismos (esporas) contenidas en la ampolla.
PREGUNTAS DE AUTO-EXAMEN
1. Cules son las principales razones para controlar las poblaciones microbianas?
2. Haga la distincin entre las diferentes parejas de trminos:
- Esterilizacin y desinfeccin

75
- Higienizacin y desinfeccin
- Antisptico y desinfectante
3. Describa situaciones en las que sera apropiado:
- Esterilizar
- Higienizar
- Desinfectar
- Realizar antisepsia
4. Enumere los factores a tener en cuenta en la eleccin de un sistema de esterilizacin
5. Compare la eficacia del calor hmedo y del calor seco, como mtodos de
esterilizacin.
6. Compare las clulas vegetativas de las bacterias con las esporas bacterianas, en
cuanto a la resistencia al calor.
7. Qu es un autoclave? Qu clase de materiales se esterilizan usualmente en un
autoclave?
8. Cite algunos materiales que preferentemente se esterilizan en un horno de aire
caliente, en lugar de un autoclave. Indique para cada material, por qu el aire
caliente es el mtodo de eleccin para su esterilizacin.
9. Qu tipos de materiales suelen esterilizarse generalmente por medio de
instrumentos de filtracin? Por qu?
10. Enumere los mtodos de control de la efectividad de la esterilizacin y explique en
qu consiste cada uno.

PRCTICAS 6 Y 7
HIGIENE EN EL AMBIENTE HOSPITALARIO
Autor: Lic. Jean Jacques Pitteloud
OBJETIVOS:
a) Comprobar personalmente la presencia de microorganismos sobre la superficie del
cuerpo, en el medio ambiente del hospital o del laboratorio y en nuestro entorno,
mediante el uso de mtodos sencillos e inocuos de toma de muestras de manos, piel,
superficies inertes, etc...
b) Comprobar personalmente la efectividad de los mtodos de prevencin propuestos y
la inefectividad de otros mtodos impuestos por las circunstancias y/o las malas
costumbres.

76
CONTENIDO:
a) Visualizacin del concepto de flora normal de la piel.
b) Demostracin de la efectividad de los mtodos de antisepsia.
c) Demostracin de la contaminacin inevitable y constante de las manos y la
efectividad de las tcnicas propuestas de lavado de las manos.
d) Demostracin de la contaminacin del medio ambiente por bacterias y hongos; de la
efectividad de los mtodos de desinfeccin y de las diferencias que puedan resultar
entre las diversas tcnicas y/o los diversos productos utilizados.
INTRODUCCION
Las prcticas de "HIGIENE HOSPITALARIA" tienen como finalidad concretar algunos
conceptos quizs abstractos, expuestos en los temas tericos de "Infecciones
Hospitalarias", tales como flora normal, contaminacin, asepsia, antisepsia,
desinfeccin, as como para familiarizarse con los mtodos usuales de prevencin de
las infecciones hospitalarias (abreviadas IH a continuacin en el texto).
En efecto, el mundo bacteriano es un concepto muy abstracto cuando se inician los
estudios de las carreras de enfermera, biologa y medicina. El hecho de tomar
personalmente las muestras y de ver directamente - sin manipulacin - los cultivos, e
interpretar personalmente los resultados, permitir vencer parcialmente la barrera
comunicativa que muy a menudo existe entre el profesional del laboratorio y la
enfermera o el mdico.
El hospital representa un ambiente ecolgico muy especial. La diversidad de los
microorganismos que se consiguen en cualquier hospital se debe a su diseminacin
tanto por parte del personal o de los visitantes, como por parte de los propios
pacientes.
No se puede predecir el papel invasivo o infeccioso de los microorganismos
presentes en el ambiente hospitalario sobre determinados enfermos. Por lo tanto, una
de las medidas usuales de prevencin de las IH es la reduccin del nmero de
microorganismos de todo lo que se pueda considerar como el entorno inmediato de los
pacientes , a travs de la limpieza y/o de la desinfeccin de las diversas superficies
horizontales (pisos, mesas, mesones, estantes, etc.) y de la eliminacin selectiva de
ciertas especies bacterianas potencialmente patgenas de la superficie cutnea (por
ejemplo : piel del enfermo o manos de la enfermera o del mdico) a la hora de efectuar
curas o procedimientos diagnsticos o teraputicos a un paciente.
Generalmente, los miembros del personal que labora en el hospital son
portadores transitorios de grmenes patgenos a nivel de la nasofaringe, del tracto

77
gastrointestinal y de la piel, sin manifestacin de infeccin y, quizs sin saberlo. Por lo
tanto, todo empleado del hospital, particularmente todo aquel que tenga contacto con
los pacientes, debe considerarse como potencial reservorio de microorganismos
capaces de provocar dao a los enfermos a su cargo.
La medida ms importante de prevencin es, segn la mayora de los expertos
que han dedicado sus esfuerzos para combatir las IH, el LAVADO REALISTA DE LAS
MANOS, a saber : un lavado de las mismas adaptado a los riesgos que corre el
paciente de contraer una IH a travs del contacto con las manos del personal. Los
riesgos dependen de una cantidad de factores, entre los cuales cabe mencionar : la
enfermedad bsica del paciente, su condicin actual, el tipo de intervencin a la cual
ser sometido, etc.. El hecho de colocarse unos guantes quirrgicos estriles no
implica que no se deba lavar las manos. Ms bien, el lavado debe ser muy minucioso
de modo de eliminar los riesgos de contaminacin a la hora de una ruptura accidental
(por cierto frecuente) de un guante.
Las placas R.O.D.A.C. (ver descripcin en la parte "Material y mtodos") se
usan en una gran variedad de programas de tomas de muestras de superficies tanto
cutneas como de superficies inertes, a la vez como instrumento didctico y
demostrativo. Tambin como medio para establecer y controlar las tcnicas de
limpieza/desinfeccin y antisepsia.
La presencia de microorganismos sobre cualquier rea plana se determina.
luego de la toma de una muestra por impresin, por la aparicin de colonias
bacterianas en la superficie del medio de cultivo, las cuales se pueden contar para
evaluar el grado de contaminacin del rea analizada. Diversas instituciones han
elaborado para su uso interno, unas normas y valores lmites de limpieza, tomando
como medidas de control las placas R.O.D.A.C..
Los trabajos prcticos a realizar estarn divididos en dos (2) sesiones. La
primera sesin (Prctica N1 - 6) consistir en la toma de las diferentes series de
muestras. La segunda sesin (Prctica N2 - 7), la cual, por motivos de organizacin
interna, tendr lugar una semana despus de la primera, y consistir en la revisin de
los cultivos y la interpretacin de los resultados ya tabulados.
Cada serie de muestras se efectuar con la doble finalidad de establecer:
1. El grado de contaminacin antes de la aplicacin de un proceso de
limpieza/desinfeccin o antisepsia.
2. El grado de contaminacin luego de la aplicacin del proceso previsto y, en
consecuencia, el grado de efectividad del mismo.
MATERIAL Y METODOS

78
Todas las muestras se tomarn mediante el uso de una placa especialmente diseada
para permitir la toma por impresin y la evaluacin directa (no inmediata) del grado de
contaminacin de superficies planas y ms o menos lisas. Dicha placa se denomin
R.O.D.A.C., nombre formado por las iniciales de las 5 palabras inglesas que definen el
proceso :
R de "replicate" = replicacin o imprenta
O de "organism" = microorganismo
D de "detection" = deteccin
A de "and"
= y
C de "counting" = recuento
En otras palabras, el mtodo puede definirse como el aislamiento y el recuento de
microorganismos obtenidos por la tcnica de la replicacin.
La presentacin de la placa R.O.D.A.C. permite
tomar las muestras por simple aplicacin y presin
de la placa sobre la superficie analizada. En efecto,
el medio de cultivo debe formar un menisco, el cual
sobresale ligeramente del borde de la placa. Es
hecho facilita el contacto directo entre la superficie y
el medio de cultivo que acta
como adhesivo.
En otras palabras, se realiza una impresin de la
superficie y, al cabo de 48 horas de incubacin a la
temperatura de 32C (2 C) se puede efectuar una
evaluacin cuantitativa del grado de contaminacin
- mediante el conteo del nmero de colonias que
crecieron en la superficie del medio de cultivo - y
una evaluacin cualitativa

mediante la observacin morfolgica de las colonias y/o repicaje de las mismas en

los medios especficos para la identificacin.
El medio de cultivo contenido en las placas R.O.D.A.C. puede escogerse
entre el medio "Tripticase Soy Agar with Lecithin and Polysorbate 80" (BBL
catlogo n1 11.784) o el medio "Standard Methods Agar with Lecithin and
Polysorbate 80" (BBL Catlogo N 11.643), el cual corresponde a un medio
nutritivo adecuado para el desarrollo de la mayora de los agentes microbianos
presentes sobre las superficies analizadas, al cual se le aadieron unos
compuestos destinados a neutralizar el efecto de las sustancias desinfectantes o
antispticas habituales (lecitina y polisorbato 80). El motivo de dicha inclusin (de
las sustancias inactivadoras) es el de parar la accin del desinfectante o del
antisptico en el momento de la toma de la muestra y, por lo tanto, conocer la
efectividad real del procedimiento o del producto en dicho momento. La lecitina se
incorpora para neutralizar los compuestos de amonio cuaternario y el polisorbato
80 se usa para neutralizar los desinfectantes a base de formol, hexaclorofeno y
formalina. La asociacin de ambos productos permite la neutralizacin del etanol.
Las placas se descartan luego de la evaluacin de los resultados como material
biolgico peligroso, al igual que todo el material utilizado para los cultivos
microbiolgicos. Los procedimientos que permiten eliminar los peligros inherentes
a un contacto accidental son:
a) La incineracin o quema en un horno, alcanzando el material la temperatura de
160-180 1 C durante aproximadamente 2 horas. Dicho mtodo se utiliza para el
material descartable de plstico.
b) La esterilizacin por autoclave a una temperatura de 121 1 C durante 15-20
minutos. Dicho mtodo se recomienda para el material reutilizable de vidrio.
USO CORRECTO DE LA PLACA R.O.D.A.C.
La placa R.O.D.A.C. est constituida por dos partes: un receptculo de forma
circular que contiene aproximadamente 17 cc de medio de cultivo solidificado
(agar), el cual sobresale ligeramente del borde del mismo, lo que permite tomar
una muestra uniforme de la superficie analizada, y una tapa que se ajusta
perfectamente a la placa, la cual evita cualquier contacto directo con el medio de
cultivo o cualquier contaminacin en el transcurso del transporte al sitio de
incubacin o durante la observacin de la misma. A pesar del mecanismo de
proteccin previsto por el fabricante, conviene ser muy cuidadoso durante su
manipulacin.
Para diferenciar las muestras tomadas, conviene numerar las placas segn
unos cdigos preestablecidos. Por ejemplo, cada placa tendr, en su tapa, un
nmero correlativo, el nmero de la muestra seguido de la letra A o D, segn que
la muestra haya sido tomada "Antes" o "Despus" del procedimiento evaluado.

Ejemplo: 131 nmero correlativo

2 nmero de la muestra
D "despus"
La finalidad del sistema de numeracin es la de poder clasificar sin
equivocacin posible las muestras entre los alumnos y tipos de muestra, para una
interpretacin correcta de los resultados.
En virtud de que, durante el perodo de incubacin, se produce la
condensacin de una parte del agua contenida en el medio de cultivo, se
acostumbra a incubar las placas en la posicin "volteadas hacia abajo" de manera
de evitar que el agua se deposite sobre el agar y modifique el grado de
contaminacin real. Al retirar las placas de la incubadora, conviene ser prudente y
mantenerlas en la misma posicin hasta verificar la presencia o no de gotas de
agua en la parte interna de la tapa; las gotas de agua se pueden eliminar por
absorcin con una servilleta de papel.
Especificaciones cualitativas y cuantitativas del material necesario para una
prctica:
- aproximadamente 12 placas R.O.D.A.C. por cada estudiante
- marcadores con tinta indeleble o lpices grasos
- 1 pastilla de jabn corriente
- varias muestras de jabones antispticos
- paquetes de toallas de papel previamente esterilizadas
- 1 envase de alcohol isoproplico o etlico al 70 %
- 1 envase (como mnimo) de un antisptico comercial en solucin alcohlica
- 1 envase (como mnimo un tipo) de producto comercial de limpieza/desinfeccin
para pisos . Lo ideal sera comparar, en paralelo, la efectividad de un
producto de limpieza simple y la de un producto desinfectante.
- 1 mopa esterilizada y su mango para adaptacin
- 1 balde doble con exprimidora de mopa y un recipiente graduado para la correcta
dilucin del producto detergente o desinfectante
- varios paos de limpieza previamente esterilizados
- varios recipientes tipo palanganas (poncheras)
- una incubadora ajustada a la temperatura de 32 1C +_ 2 1C
- un contador de colonias con marcador de tinta indeleble.
FLORA NORMAL DE LA PIEL
Mediante el uso de placas R.O.D.A.C. se tomarn muestras de diversas partes del
cuerpo sin tratamiento previo:
- de una mano, ms precisamente de los tres dedos mayores de la mano
dominante
- de la piel del pliegue del codo
- de la piel de un antebrazo.

Procedimiento:
Con una leve presin, y sin rotacin de la placa, se debe lograr cubrir toda
la superficie analizada con el medio de cultivo. Al cabo de unos segundos, se retira
cuidadosamente la placa y se cubre con la tapa correspondiente.
Luego de la toma de la(s) muestra(s) prevista(s) [ANTES], el alumno se
lavar cuidadosamente las manos y/o los antebrazos y/o la piel a nivel del pliegue
del codo con el producto asignado, se enjuagar con abundante agua y se secar
con toallas de papel.
Seguidamente, se proceder a la toma de la(s) muestra(s) previstas DESPUS
del lavado. Por otra parte, con una mota de algodn impregnado con alcohol
isoproplico o etlico al 70 % o con otro antisptico destinado para su uso en la
piel, el estudiante se desinfectar la piel del pliegue del codo y, al cabo de unos
minutos, se tomar la muestra correspondiente.
Adems de las muestras individuales, se podrn tomar, bajo supervisin de un
docente, muestras de otras partes de la superficie corporal, las cuales
representarn una demostracin de la diversidad de la flora normal de la piel
(diversidad tanto cuantitativa como cualitativa).
Ejemplo de muestras:

- cuero cabelludo
- cara
- cuello
- pierna
- pie
- pliegue de la rodilla
- axila

Dado que, entre las medidas preventivas de las Infecciones Hospitalarias, la

ms recomendada es el lavado de las manos entre cada paciente, se realizar
una demostracin de la rapidez y facilidad con la cual la mano puede
recontaminarse luego de un lavado minucioso.
CONTAMINACION DEL MEDIO AMBIENTE
Mediante el uso de placas R.O.D.A.C., se tomarn muestras de diversas
superficies de trabajo, como por ejemplo: piso de pasillos o aulas, lavamanos, piso
de baos, superficies de mesones, mesas, etc., las cuales pueden compararse
con cualquier muestra idntica tomada en las reas comunes de una institucin
hospitalaria. El objetivo de la toma de dichas muestras es, por una parte,
visualizar lo que representa la contaminacin microbiolgica del medio ambiente y,
por otra parte, evaluar la efectividad de los diversos mtodos de limpieza o
desinfeccin. A tal efecto, se proceder a la limpieza o desinfeccin de las reas o
superficies analizadas y se volver a tomar las series de muestras
correspondientes para cuantificar la reduccin del grado de contaminacin lograda
a travs de los diferentes mtodos o productos.

BIBLIOGRAFIA:
1. Biological Contamination Control Committee. American Association for
Contamination Control.
2. Committee on Microbiological Contamination of Surfaces, Laboratory Section,
Health
Lab. Sci., 1 : 256 , APHA
3. Dubay, E.C. y Grubb, R.D. , Infection Prevention and Control.
4. Favero (Chairman), Microbiological sampling on surfaces - A state of the art
report
5. Hall & Hartnett, Public Health Rep. , 79 : 1021
6. Palmer, M.B. R.N., M.S.N., Manual de Control de Infecciones
7. Tanner, F. y cols. , Elementos de Higiene Hospitalaria y Tcnicas de
Aislamiento en el Hospital, EUNSA, Pamplona

EXPLICACIONES QUE FACILITARAN LA COMPRENSIN DE LAS PRCTICAS

Como hemos visto a travs del material de apoyo de las prcticas, para
evaluar la efectividad de una sustancia desinfectante o antisptica, o para
comparar entre s la efectividad de diversas sustancias higienizantes, en
condiciones de uso, utilizamos la cuantificacin del grado de contaminacin de las
reas determinadas ANTES y DESPUS de la aplicacin de la sustancia a
evaluar.
Ejemplo: Se quiere determinar cul de los cinco productos (Producto 1, Producto
2, Producto 3, Producto 4, Producto 5) disponibles para la desinfeccin de
superficies inertes, es el ms efectivo.
Se escoge una superficie lo suficientemente grande como para permitir su
divisin en 5 partes iguales (pudiera ser un mesn de una sala de tratamientos o
de un laboratorio). En cada una de las divisiones, se probar uno de los productos
mencionados, a saber: el Producto 1 en la Divisin 1, el Producto 2 en la Divisin
2, etc...
Previamente a la aplicacin de cada producto, se proceder a la toma de la
muestra "ANTES". El nmero de las mismas variar en funcin del tamao de la
superficie y los sitios de toma se escogern al azar. Inmediatamente luego de la
toma de las mencionadas muestras "ANTES", se proceder a la aplicacin de la
sustancia desinfectante mediante el uso de un pao estril, por nebulizacin o por
cualquier otro mtodo adecuado. Se dejar actuar el producto por un tiempo
determinado. Luego de este tiempo de accin, se procede a la toma de muestra
"DESPUS", en sitios escogidos nuevamente al azar.
Una vez identificadas adecuadamente las placas, se procede a su
incubacin a 32C durante 48 horas para cuantificar el grado de contaminacin a
travs del recuento de colonias bacterianas en cada una de las mismas y se
procede a determinar el grado promedio de contaminacin ANTES y DESPUS de
la aplicacin de cada producto en forma individual.
Para calcular la efectividad de cada uno de los productos, se utilizar como
base el grado de contaminacin promedio de cada una de las divisiones ANTES
de la aplicacin del producto haciendo su comparacin con el grado de
contaminacin promedio de cada una de las divisiones DESPUS de su
higienizacin.
Para ilustrar la manera de calcular y comparar la efectividad, se utilizarn a
continuacin unos resultados ficticios de una prueba con 5 productos:
Producto 1 ---> Promedio ANTES
= 100 colonias
Promedio DESPUS = 10 colonias

Producto 2 ---> Promedio ANTES

= 200 colonias
Promedio DESPUS = 20 colonias
Producto 3 ---> Promedio ANTES
= 300 colonias
Promedio DESPUS = 60 colonias
Producto 4 ---> Promedio ANTES
= 400 colonias
Promedio DESPUS = 100 colonias
Producto 5 ---> Promedio ANTES
= 500 colonias
Promedio DESPUS = 250 colonias
La efectividad de los productos es la siguiente:
Producto 1
De 100 colonias se eliminaron 90 ===> EFECTIVIDAD 90:100 = 0.9 o 90 %
Producto 2
De 200 colonias se eliminaron 180 ===> EFECTIVIDAD 180:200 = 0.9 o 90 %
Producto 3
De 300 colonias se eliminaron 240 ===> EFECTIVIDAD 240:300 = 0.8 o 80 %
Producto 4
De 400 colonias se eliminaron 300 ===> EFECTIVIDAD 300:400 = 0.75 o 75 %
Producto 5
De 500 colonias se eliminaron 250 ===> EFECTIVIDAD 250:500 = 0.5 o 50 %
El producto ms efectivo es aqul que logre eliminar todos los microorganismos o
la mayor cantidad de ellos de la superficie analizada. En el ejemplo propuesto, 2
productos lograron eliminar el 90 % de los microorganismos, uno el 80 %, uno el
75 % y el menos efectivo, el producto 5 que elimin el 50 %.