INSTITUTO TECNOLOGICO SUPERIOR DE XALAPA

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G.
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INDICE

1. GENERALIDADES
2. REPLICACIN
2.1 REPLICACIN THETA
2.2 REPLICACIN POR DESPLAZAMIENTO DE HEBRAS
2.3 REPLICACIN RC (ROLLING CIRCLE)
3. SISTEMAS DE PARTICIN
4. CONJUGACIN
5. CLASIFICACIN

1. Generalidades
Son molculas circulares de ADN de doble cadena que
se encuentran naturalmente todos los tipos de bacterias
estudiadas hasta la fecha. Se han hallado tanto en
bacterias Gram positivas como Gram negativas, as como
en levaduras y algn otro tipo de hongo. Pueden alcanzar
hasta el 10% del material gentico celular total.
Estos elementos genticos son extracromosomales, se
replican de manera independiente del cromosoma
bacteriano y dependiendo del tamao de estos pueden
codificar desde unas cuantas protenas hasta unos
cientos. Sin embargo raramente codifican productos
esenciales para el crecimiento celular, tales como el ARN polimerasa o enzimas del ciclo
de los cidos tricarboxlicos.
Los estudios indican que los plsmidos estn asociados con protenas de la membrana
plasmtica. Suelen contener entre 5 y 100 genes que en condiciones ambientales
normales no son indispensables para la supervivencia de la
bacteria. En ciertas condiciones los plsmidos presentan una
ventaja para la clula porque pueden aportar informacin gentica
relacionada con diversas actividades celulares.

Bacteria con plasmidos

(Profesor Stanley
N.Cohen/ Photo
reasearches)

Generalmente los productos de sus genes dan a las bacterias

ventajas selectivas bajo ciertas condiciones. Los plsmidos varan
ampliamente en tamao, desde miles a cientos de miles de pares
de bases y son, con mayor frecuencia, molculas circulares de
ADN de doble cadena.

Existen diferentes tipos de plsmidos y cada uno de ellos se

caracteriza al menos por dos propiedades constantes:
el nmero de copias existentes en el interior celular, que puede variar desde una a
miles de ellas
la incompatibilidad entre plsmidos para poder ser heredados en la misma lnea
celular, lo que ha permitido clasificar a los plsmidos en grupos de
incompatibilidad.
Una misma clula bacteriana puede ser portadora de dos o ms tipos de plsmidos
diferentes, pudiendo estar cada uno de ellos en cantidades diferentes.
Los plsmidos juegan un papel crucial en la evolucin y adaptacin bacterianas, ya que
son mediadores del intercambio de material gentico entre estas poblaciones. La
transferencia de la informacin gentica contenida en el plsmido de una bacteria
donadora a una receptora se conoce con el nombre de conjugacin. Este proceso
requiere de la expresin de genes y de la presencia de regiones en el ADN del plsmido
necesarios para su movilizacin. El plsmido se moviliza a travs de un puente de
conjugacin entre las clulas. Algunos plsmidos se recombinan de manera dinmica

entre s o con el genoma, constituyendo una fuente de diversidad gentica importante

para las bacterias.
Desde los puntos de vista bsico y aplicado, los plsmidos han servido como
herramientas importantes en estudios de Biologa Molecular y Biotecnologa. La Tabla I
muestra algunos ejemplos del uso de los plsmidos como herramientas biotecnolgicas y
algunas de sus caractersticas. En este sentido, la mayora de los plsmidos naturales no
son vectores de clonacin o de expresin convenientes.

TABLA I: PLSMIDOS UTILIZADOS COMO HERRAMIENTAS

IMPORTANTES EN ESTUDIOS BIOTECNOLGICOS.
Plsmido Aplicaciones
pBR322 Vector de clonacin
pTrcHis A
pGV2260
pKM101
pTn5cat

BACs
YACs

Algunas caractersticas
Origen de ColE1, bla, tet
seleccin de recombinantes por
color
Vector de expresin; purificacin Origen de pBR322, bla, trc
de protenas recombinantes
Promotor, histidinas, pptido
seal
Generacin de plantas
Contiene los bordes del T-DNA
transgnicas; transformacin con del plsmido Ti y secuencias de
A. tumefaciens
pBR322
Plsmido conjugativo
Ori T, tra, eex
Plsmido multifuncional con
Plsmido:, tet, tnp; Transposn:
caractersticas de transposn,
origen de ColE1, cat (sin promotor),
para mutagnesis, identificacin
neo, regin Mob
de promotores y conjugacin
Plsmidos con elementos del
BAC's: OriS, repE, parA,B y C
cromosoma para conferir
YAC's: Ori, ARS1, Amp, TRP1,
estabilidad mittica en bacterias
CEN4
(BAC) y levaduras (YAC)

Bla,-lactamasa (resistencia a ampicilina); tet, resistencia a tetraciclina; trc, promotor de

triptofano; oriT,origen de transferencia; tra, genes que codifican funciones de transferencia; eex,
genes que previenen la entrada de otros plsmidos; tnp, transposasa; cat, resistencia a
cloranfenicol; neo, resistencia a kanamicina; Mob, regin necesaria para la conjugacin; OriS,
origen basado en el factor F para clonacin de fragmentos mayores de 350 kpb; repE, helicasa,
parA,B y C, facilitan la divisin exacta del plsmido; Ori, origen de replicacin de ColE1; ARS1,
secuencia de replicacin autnoma; Amp, resistencia a ampicilina; TRP1, auxotrofia sobre
triptofano; CEN4, secuencia permite una segregacin eficiente del cromosoma entre clulas hijas.

Hoy en da se dispone de una gran variedad de plsmidos sintticos de naturaleza

modular con caractersticas diversas para lograr ya sea la clonacin de un fragmento de
ADN genmico, de cADN o de PCR, o para la expresin de los mismos y obtencin del
producto proteico.
Entre las propiedades de los plsmidos que favorecen la utilizacin como vector de
clonacin se incluyen:
1. Su pequeo tamao hace que el ADN sea fcil de aislar y manipular
2. Su naturaleza circular hace que el ADN sea ms estable durante la extraccin

3. Su origen de replicacin independientemente del control directo de la replicacin

del cromosoma bacteriano
4. Su mltiple nmero de copias, de manera que se aumenta la eficiencia de la
extraccin de ADN plasmdico
5. La presencia de marcadores seleccionables, tales como genes de resistencia a
antibiticos, haciendo ms fcil la deteccin y seleccin de las bacterias que
contienen plsmidos.
La estructura modular de todo plsmido comprende bsicamente:

Un origen de replicacin autnomo que permita un alto nmero de copias por

bacteria
Genes de resistencia a antibiticos
Marcadores de seleccin
Un sitio mltiple de clonacin, caracterizado por la presencia de sitios nicos para
enzimas de restriccin, no encontrados en ninguna otra regin del plsmido.

2. Replicacin
Un sistema sencillo de clasificacin de los plsmidos consiste en determinar si su
replicacin se encuentra sometida a un control restringido o relajado. Los plsmidos
sometidos a control restringido (como el pSC101 y derivados) se encuentran en pequeo
nmero en clulas en crecimiento activo, mientras que los de control relajado (ColE1 y
derivados) pueden encontrarse en gran nmero.
Los plsmidos que pueden replicarse de forma autnoma, se les ha denominado
replicones, es decir, estructuras de cidos nucleicos con capacidad de autorreplicacin, al
igual que los los cromosomas y el ADN de los fagos. Los plsmidos que no poseen esta
capacidad y que se integran de forma reversible en el cromosoma bacteriano para
replicarse bajo su control, se les denominan episomas.
El inicio de la replicacin de un plsmido es un proceso especfico, y de vital importancia
para su herencia, para el nmero de copias en el interior celular y para las propiedades de
incompatibilidad plasmdica.
Tipos de replicacin
Hay tres tipos de mecanismos bsicos de replicacin para los plsmidos circulares:
1) replicacin (theta)
2) replicacin por desplazamiento de hebras
3) replicacin RollingCircle (RC)
Cada tipo de plsmido se replica por uno de estos mecanismos, lo cual viene determinado
junto a otras propiedades, por los genes localizados en una regin especfica y esencial
para el plsmido que se encarga del proceso de replicacin y su control. Dentro de esta
regin esencial se agrupan genes y secuencias fundamentales, como son:

el origen de replicacin, ori, caracterstico de cada replicn. Un plsmido puede

poseer ms de un ori (plsmidos compuestos multireplicn) y funcionar cada
origen de manera simultnea e independiente.
los genes implicados en el necesario control de la replicacin. Una funcin
relacionada se suma a sta: el control del nmero de copias de un plsmido por
clula.
adicionalmente, la mayora de los plsmidos son portadores de un gen que
codifica una protena, denominada protena Rep, que funcionar como primer de la
replicacin del ADN plasmdico. Estas protenas Rep son especficas del origen de
replicacin y esto se refleja en la existencia de sitios especficos de unin para
ellas en ori. Esto es lo que diferencia el proceso de la replicacin de plsmidos del
proceso en el cromosoma procariota: la iniciacin de la replicacin plasmdica en
bacterias posee especificidad de molcula. Estas protenas codificadas por el
propio plsmido, no solo cumplen funciones como iniciadores de la replicacin,
sino que son reguladoras de la frecuencia de dicha iniciacin y tambin de su
propia sntesis.

2.1 Replicacin theta

Este modelo de replicacin implica la apertura de ambas hebras parentales en el origen
de replicacin, la sntesis de una molcula de ARN iniciadora, ARNp, y el inicio de la
sntesis de ADN por extensin covalente de dicho ARNp de manera unidireccional o
bidireccional. La sntesis de una hebra es continua mientras que la de la otra es
discontinua, pero se trata de una sntesis acoplada, acompasada. En el caso de
replicaciones unidireccionales, una nica horquilla de replicacin se desplaza a lo largo de
toda la molcula hasta alcanzar de nuevo el o r i g e n, y despus ambas hebras se
separan. En replicaciones bidireccionales, dos horquillas de replicacin se desplazan en
sentido opuesto. Este tipo de replicacin puede tener uno o ms orgenes simultneos.
Se denomina theta por la forma intermedia resultante, que recuerda a la letra griega .

2.2 Replicacin por desplazamiento de hebras

El ejemplo mejor conocido es el de los promiscuos
plsmidos de la familia IncQ, y el caso mejor
descrito es el plsmido RSF1010 de E. coli. Los
miembros de esta familia requieren de tres
protenas especficas codificadas por el plsmido
para el inicio de la replicacin: RepA, con actividad
helicasa, RepB, primasa que se une en un par de
pequeas secuencias, una por hebra, formando un
palndromo dentro de la regin ori, y RepC, protena
con actividad de iniciador que se une a los iterons
especficos en ori. La replicacin se inicia en dos
orgenes a d y a c e n t e s y simtricos
posicionados cada uno en una hebra de ADN del
plsmido: ssiA y ssiB, donde se une RepB.

2.3 Replicacin RC (Rolling circle)

Proceso de replicacin unidireccional y asimtrico, ya que la sntesis de ambas hebras
est desacompasada. Se conocen hasta cuatro grupos de plsmidos que se replican por
este mecanismo.
En este mecanismo de replicacin, una protena propia del plsmido, Rep, corta una de
las hebras (la hebra parental principal) en un punto especfico denominado dso (del
ingls: double strand origin) y se queda unida covalentemente al extremo 5. Esto genera
un extremo 3OH libre, que sirve como primer para la nueva sntesis de ADN. La nueva
hebra principal sintetizada queda unida covalentemente a su idntica hebra parental
principal, quedando sta al mismo tiempo desplazada. El proceso finaliza con la formacin
de una molcula de doble cadena formada por la nueva hebra sintetizada ms la antigua

hebra parental no replicada, y una molcula de ADN monocatenario correspondiente a la

antigua hebra parental principal, como producto intermedio del proceso.

3. Sistemas de particin
La forma de evitar la prdida del plsmido en la herencia vertical es responsabilidad de
los sistemas de particin. Estos sistemas se aseguran de que al menos una copia vaya en
cada clula hija por cada ciclo celular. Por el simple hecho de que una clula se divida en
dos, no implica que se repartan equitativamente las copias que contenga de un plsmido
determinado.
Los sistemas de particin requieren de tres elementos:
a. Una serie de secuencias cis repetidas, a modo de centrmero, llamadas
genricamente parS
b. El gen de una ATPasa: parA
c. El gen de la protena que se une al centrmero: parB
Estas dos ltimas protenas se unen en el sitio parS formando un complejo ncleoproteico. El ParB se une al sitio. Este complejo se puede agrandar gracias a la unin no
especfica de ms molculas ParB al ADN de alrededor. Las ATPasas ParA reconocen su
plsmido interactuando especficamente con ParB en el complejo. Ese hecho provoca que
ParA forme uniones metaestables que empujan cada copia hacia uno de los polos,
quedando situados en regiones celulares concretas.

4. Conjugacin
Permite la transferencia de ADN entre diferentes clulas, a diferencia de la transformacin
que es una captacin exgena de ADN del entorno. Tanto la conjugacin como la
transformacin, implican el transporte de ADN monocatenario a travs de una o ms

membranas. El tercer mecanismo de transferencia intercelular gentica, la transduccin

(bacterifagos), conlleva el pase de molculas de ADN de doble cadena.
Durante el proceso de conjugacin las dos hebras del plsmido se separan, quedando
una de ellas en la clula donadora y la otra en el interior de la clula receptora, o
transconjugante. De esta forma ambas hebras sirven de plantilla en cada una de las
clulas para la sntesis de una nueva molcula completa de doble cadena y ambas
clulas siguen siendo portadoras de una copia del plsmido.

5.Clasificacin
En funcin de la caracterstica a la que se atienda, los plsmidos pueden clasificarse de
diversos modos:
Segn el sistema de replicacin y segregacin de copias, se pueden clasificar por
grupos de incompatibilidad.
Segn el fenotipo que codifiquen, hablamos de plsmidos de resistencia si portan
genes de resistencia a antibiticos y metales pesados (Plsmidos R), plsmidos
bacteriocinognicos (ColE1), plsmidos de virulencia.

Segn sean auto transferibles o no, se pueden clasificar como ya hemos

apuntado, en conjugativos, movilizables por un plsmido conjugativo y no
movilizables.
Los plsmidos conjugativos son aquellos que promueven la transferencia horizontal de
genes de resistencia entre diferentes clulas por s mismos, a travs de un proceso de
conjugacin. Poseen todos los genes necesarios en este proceso (sistema Tra completo).
Los plsmidos conjugativos pueden poseer un rango de hospedadores amplio o estrecho.
Cuanto ms estrecho, menor nmero de receptores compatibles.
Los plsmidos movilizables son transmisibles slo en
presencia de funciones
conjugativas adicionales, esto es, en presencia de un plsmido conjugativo coresidente.
Los plsmidos movilizables carecen de los genes que se requieren para el
emparejamiento celular, pero s de los necesarios para generar las protenas especficas
de movilizacin y de un sitio oriT donde actuarn los productos del sistema tra del
plsmido conjugativo.

Bibliografa
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