UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESINAL DE MEDICINA HUMANA

ESPECTROFOTOMETRA
OBJETIVOS:
-

- Nociones bsicas del espectro electromagntico.

Comprender los conceptos relativos a la interaccin entre la
radiacin electromagntica y la materia, en los que se basan los
mtodos espectroscpicos en general.
Enunciar la ley de Lambert Beer, comprender el significado de
las magnitudes que intervienen en ella e interpretar la naturaleza
de las desviaciones de esa ley.
Describir los componentes bsicos de los instrumentos para
mediciones de absorcin de radiacin ultravioleta- visible,
espectrofotmetros.
Aplicaciones de la espectrofotometra visible y ultravioleta.

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MARCO TEORICO
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las
investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite
comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene
una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida
de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que
parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que
pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin
infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa absorbida, la
energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de
onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos
aquellas longitudes de onda no absorbida.
Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve
para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una
misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es
utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y
microorganismos.
Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o
espectrofotmetro de masa.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica
a travs de una muestra y medir la cantidad de luz monocromtica a travs de
una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra
.Esto le permite al operador realizar dos funciones:
1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra
2. Indicar indirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa est
presente en la muestra.

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PARTES DEL
ESPECTROFOTOMETRO

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DESARROLLO EXPERIMENTAL
Solucin stock: Bicromato de Potasio 80 mg% .

Calcular la concentracin de mg% de bicromato de

K en cada uno de los tubos Standard.

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Leer la absorbancia de los tubos a 350 nm de

longitud de onda.

DISCUSIN DE LOS
RESULTADOS
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1-Preparar la siguiente batera de tubos:

Bicromato de K
Agua destilada
Concentracin
(mg %)
Muestra X

Tabla I

Tabla II

1ml
9ml

2ml
8ml

Tabla
III
3ml
7ml

Tabla
IV
4ml
6ml

Tabla Tabla
V
Vi
6.3ml 5.5ml

3.5ml 4.5ml

1) Con los datos obtenidos construir en un papel

milimetrado la grfica de absorbancia en el eje de las
Ordenadas vs concentracin de bicromato de K en el eje
de las Abscisas.

2) Calcular la concentracin en mg% de bicromato de sodio

en cada uno de los tubos que a continuacin se dar.

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TUBO 1

TUBO 2

TUBO 3

TUBO 4

TUBO 5

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TUBO 6

3) Una vez obtenida la curva de calibracin, medir la

absorbancia de la muestra problema (Problema X).

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TUBO 2

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4) Obtener el factor de calibracin (Fc) promedio con las

soluciones standard y sus Absorbancia utilizadas para
construir las curvas de calibracin ajustadas.

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5) Calcular la concentracin de la muestra problema por los

siguientes mtodos:
- A.- Grficamente extrapolando su absorbancia en la curva de
calibracin.
- B.- Usando Factor de Calibracin, multiplicando su
absorbancia por el factor de calibracin del standard.

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CONCLUSIN
Se ha llegado a la conclusin de que la espectrofotometra es un mtodo
analtico indirecto porque se basa en la medicin de la absorbancia o
transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para la
identificacin de un analtico en una muestra problema.
La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a que es sencillo,
especfico y sensible.

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CUESTIONARIO
1.- Explique el mecanismo de funcionamiento de un
espectrofotmetro.
El funcionamiento de un espectrofotmetro consiste bsicamente en iluminar la
muestra con luz blanca y calcular la cantidad de luz que refleja dicha muestra
en una serie de intervalos de longitudes de onda. Lo ms usual es que los
datos se recojan en 31 intrvalos de longitudes de onda (los cortes van de 400
nm, 410 nm, 420 nm 700 nm). Esto se consigue haciendo pasar la luz a
travs de un dispositivo monocromtico que fracciona la luz en distintos
intrvalos de longitudes de onda. El instrumento se calibra con una muestra o
loseta blanca cuya reflectancia en cada segmento de longitudes de onda se
conoce en comparacin con una superficie de reflexin difusa perfecta.

2.- Qu diferencias existen entre un fotocolormetro y un

espectrofotmetro?
El fotocolormetro mide la intensidad de a luz absorbida por una solucin y el
espectrofotmetro relaciona la capacidad de absorcin de la radiacin
ultravioleta y visible con la concentracin de una sustancia.

3.- Grafique el espectro de luz, tanto en el rango visible como

no visible con sus respectivas longitudes de ondas.

4.-

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BIBLIOGRAFIA
Skoog, Douglas A. West, James F. QUMICA ANALTICA,
Editorial Mc Graw Hill.

Morrison Boyd. QUMICA ORGNICA

Pginas Web: http://www.advmex.com

http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometra
http://wwwprof.uniandes.edu.co/~infquimi/ANALISIS/espectrofotometria/esp
ectrofoto.htm

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