Q2B VALIDACIN ANALTICA DE PROCEDIMIENTOS: METODOLOGA

1. INTRODUCCION.
Este documento es complementario a la gua ICH titulada texto para la Validacin
analtica de Procedimientos (ICH Q2A), que presenta una discusin de las
caractersticas que se deben considerar durante la validacin de los
procedimientos analticos. Su propsito es proporcionar alguna orientacin y
recomendaciones sobre cmo considerar las diversas caractersticas de validacin
para cada uno procedimiento analtico.
En algunos casos (por ejemplo, la demostracin de la especificidad), el general
Capacidades de un nmero de procedimientos analticos en combinacin se
pueden investigar con el fin de Asegurar la calidad de la sustancia de frmaco o
producto farmacutico. Adems, el documento proporciona una indicacin de los
datos que deben ser presentados en una solicitud de nuevo frmaco.
Todos los datos relevantes recogidos durante la validacin y las frmulas utilizadas
para el clculo de la validacin caractersticas deben ser presentados y discutidos
en su caso.
Soluciones distintas de las expuestas en esta gua puede ser aplicable y
aceptable. Es responsabilidad del solicitante para elegir el procedimiento de
validacin y el protocolo ms adecuado para su producto.
Sin embargo, es importante recordar que el objetivo principal de validacin de una
Procedimiento analtico es demostrar que el procedimiento es adecuado para el fin
previsto. Debido a su naturaleza compleja, los procedimientos analticos para
productos biolgicos y biotecnolgicos en algunos casos pueden ser abordados de
manera diferente que en el presente documento.
Los Materiales de referencia bien caracterizados, con la pureza documentada,
deben utilizarse durante todo el estudio de validacin. El grado de pureza
necesario depende del uso previsto.
De acuerdo con el documento de nivel superior, y en aras de la claridad, este
documento considera las diversas caractersticas de validacin en secciones
distintas. La disposicin de estas secciones refleja el proceso por el cual puede
ser desarrollado y evaluado un procedimiento analtico.
En la prctica, por lo general es posible disear el trabajo experimental de tal
manera que las caractersticas apropiadas de validacin pueden considerarse
simultneamente para proporcionar un sonido, el conocimiento global de las
capacidades del procedimiento analtico, por ejemplo: Especificidad, linealidad,
rango, exactitud, y precisin.

2. ESPECIFICIDAD.
Una investigacin de la especificidad debe llevarse a cabo durante la validacin de
pruebas de identificacin, la determinacin de impurezas, y el ensayo. Los
procedimientos utilizados para demostrar la especificidad dependern del objetivo
pretendido del procedimiento analtico.
No siempre es posible demostrar que un procedimiento analtico es especfico
para un analito particular (discriminacin completa). En este caso, se recomienda
una combinacin de dos o ms procedimientos analticos para alcanzar el nivel
necesario de discriminacin.
A) Identificacin:
Las pruebas de identificacin deben ser capaces de discriminar entre los
compuestos de estructuras estrechamente relacionadas que puedan estar
presentes.
La discriminacin de un procedimiento se puede confirmar mediante la
obtencin de resultados positivos (tal vez por comparacin con un material
de referencia conocido) a partir de muestras que contienen el analito, junto
con resultados negativos a partir de muestras que no contienen el analito.
Adems, la prueba de identificacin se puede aplicar a materiales
estructuralmente similares o estrechamente relacionados con el analito para
confirmar que no se obtiene una respuesta positiva. La eleccin de este tipo
de materiales potencialmente interferentes debe basarse en criterios
cientficos sensible con una consideracin de las interferencias que podran
ocurrir.
B) Ensayo y prueba de impureza:
Para
los
procedimientos
cromatogrficos,
los
cromatogramas
representativos deberan utilizarse para demostrar la especificidad, y los
componentes individuales deben estar debidamente etiquetados.
Consideraciones similares se deben dar a otras tcnicas de separacin.
Las Separaciones crticas en cromatografa deben ser investigadas a un
nivel adecuado. Para las separaciones crticas, la especificidad se puede
demostrar mediante la resolucin de los dos componentes que efluye ms
cerca el uno al otro.
En los casos en que se utiliza un ensayo no especfico, otros
procedimientos analticos de apoyo deben ser utilizados para demostrar la
especificidad global. Por ejemplo, cuando se adopta una titulacin para
ensayar la sustancia de frmaco para la liberacin, la combinacin de
ensayo y un ensayo adecuado para las impurezas se puede utilizar.
El enfoque es similar para ambas pruebas de ensayo y de impurezas:

1. Las impurezas estn disponibles: Para el ensayo, esto debera

implicar demostracin de la discriminacin del analito en la presencia de
impurezas y / o excipientes ; En la prctica, esto se puede hacer por spiking
sustancias puras ( sustancia de frmaco o producto farmacutico ) con
niveles apropiados de impurezas y / o excipientes y la demostracin de que
el resultado del ensayo no se ve afectada por la presencia de estos
materiales ( por comparacin con el resultado del ensayo obtenido en no
enriquecido muestras ).
Para la prueba de la impureza, la discriminacin puede ser Establecido por
clavar sustancia frmaco o producto farmacutico, con niveles adecuados
de impurezas y que demuestra la separacin de estas impurezas individual
y / o de otros componentes en la matriz de la muestra.
2.
Las
impurezas
no
estn
disponibles:
Si las normas de impurezas o productos de degradacin no estn
disponibles, la especificidad se puede demostrar mediante la comparacin
de los resultados de las pruebas de las muestras que contienen impurezas
o productos de degradacin a un segundo procedimiento bien
caracterizado, por ejemplo, el mtodo de la farmacopea u otro
procedimiento analtico validado (procedimiento independiente).
En su caso, esto debe incluir muestras almacenadas bajo condiciones de
estrs relevantes: luz, calor, humedad, hidrlisis cido / base, y de la
oxidacin.
Para el ensayo, los dos resultados deben compararse.
Para las pruebas de impurezas, los perfiles de impureza deben
compararse.
Pruebas de pureza de pico pueden ser tiles para demostrar que el pico
cromatogrfico analito no es atribuible a ms de un componente (por
ejemplo, matriz de diodos, espectrometra de masas).
3. LINEALIDAD.
Una relacin lineal se debe evaluar en toda la gama (vase la seccin 3) de
la
analtica
procedimiento.
Puede demostrarse directamente en la sustancia de frmaco (por dilucin
de una madre de patrn solucin) y / o pesadas separadas de mezclas
sintticas de los componentes del producto de drogas, utilizando el
procedimiento propuesto. Este ltimo aspecto puede ser estudiado durante
la investigacin del rango.
Linealidad debe ser evaluada por la inspeccin visual de una parcela de
seales como una funcin de la concentracin de analito o contenido. Si
existe una relacin lineal, los resultados deben ser evaluados por mtodos

apropiados estadsticos, por ejemplo, mediante el clculo de una lnea de

regresin por el mtodo de los mnimos cuadrados.
En algunos casos, para obtener linealidad entre ensayos y concentraciones
de la muestra, los datos de prueba pueden tener que ser sometido a una
transformacin matemtica antes de la regresin 2 Ver secciones en "
informes Impureza contenido de los lotes " de la correspondiente gua ICH
Q3A titulado "impurezas en nuevas Sustancias medicamentos "(61 FR 372,
4 enero de 1996) e ICH Q3B proyecto de orientacin " impurezas en los
productos de nuevo frmaco "(61 FR 11268; 19 de marzo de 1996). 4
anlisis. Los datos de la lnea de regresin en s puede ser til para
proporcionar estimaciones matemticas del grado de linealidad.
El coeficiente de correlacin, ordenada en el origen, pendiente de la recta
de regresin, y la suma residual de cuadrados deben ser presentadas. Una
grfica de los datos deben ser incluidos. Adems, un anlisis de la
desviacin de los puntos de datos reales de la lnea de regresin tambin
puede ser til para evaluar la linealidad.
Algunos procedimientos analticos, tales como inmunoensayos, no
demuestran la linealidad despus de cualquier transformacin. En este
caso, la respuesta analtica debera ser descrita por una funcin apropiada
de la concentracin (cantidad) de un analito en una muestra.
Para el establecimiento de la linealidad, se recomienda un mnimo de cinco
concentraciones. Otros enfoques deberan justificarse.
4. RANGO.
El rango especificado se deriva normalmente de estudios de linealidad y
depende de la aplicacin prevista del procedimiento. Se establece mediante
la confirmacin de que el procedimiento analtico proporciona un grado
aceptable de linealidad, exactitud, precisin y cuando se aplica a muestras
que contienen cantidades de analito dentro de o en los extremos de la
gama especificada del procedimiento analtico.
Los siguientes rangos mnimos especificados deben ser considerados.
Para el ensayo de una sustancia frmaco o un producto terminado
(frmaco): Normalmente de 80 a 120 por ciento de la concentracin
de ensayo.
Para la uniformidad de contenido : Recubrimiento de un mnimo de
70 a 130 por ciento de la concentracin de ensayo , a menos que
una , el rango ms apropiado ms amplio, sobre la base de la

naturaleza de la forma de dosificacin (por ejemplo, inhaladores de

dosis medida ) , se justifica;
Para las pruebas de disolucin : +/- 20 por ciento por encima del
rango especificado ; por ejemplo, si las especificaciones para un
producto de liberacin controlada cubren una regin de 20 por ciento
, despus de 1 hora , hasta 90 por ciento , despus de 24 horas , el
rango validado sera 0-110 por ciento de la demanda de la etiqueta ;
Para la determinacin de una impureza : Desde el nivel de reporte de
una impureza 2-120 por ciento de la especificacin
Por impurezas se sabe que son inusualmente potente o para
producir efectos farmacolgicos o txicos inesperados, el lmite /
cuantificacin de deteccin, debe ser acorde con el nivel al que se
deben controlar las impurezas.
Nota: Para la validacin de los procedimientos de prueba de
impurezas lleva a cabo durante el desarrollo, puede ser necesario
tener en cuenta la gama de alrededor de un lmite sugerido
(probable);

Si el ensayo y la pureza se realizan en conjunto como una sola

prueba y slo se utiliza un estndar de 100 por ciento, linealidad
debe cubrir el rango del nivel de reporte de la impurities3 al 120 por
ciento de la especificacin de ensayo.

5. EXACTITUD.
La exactitud debe establecerse en toda la gama especificada del procedimiento
analtico:
A) Ensayo.
1. Substancia de droga.
Varios mtodos para determinar la precisin estn disponibles.
a) Aplicacin de un procedimiento analtico para un analito de pureza
conocida (por ejemplo, material de referencia );
b) La comparacin de los resultados del procedimiento analtico propuesto
con los de un segundo procedimiento bien caracterizado, la exactitud de
la que se afirma y / o definido (procedimiento independiente, ver seccin
1.2.);
c) La precisin puede inferirse una vez que se han establecido de
precisin, linealidad y especificidad.
2. producto farmacutico.
Varios mtodos para determinar la precisin estn disponibles.

a) Aplicacin del procedimiento analtico para mezclas sintticas de los

componentes del producto frmaco al que cantidades conocidas de la
sustancia frmaco a analizar se han aadido;
b) En los casos en los que es imposible la obtencin de muestras de todos
los componentes del producto frmaco , puede ser aceptable , ya sea
para aadir cantidades conocidas del analito a 6 del medicamento o
para comparar los resultados obtenidos a partir de un segundo
procedimiento, wellcharacterized , la exactitud de la que es declarado y /
o definido ( procedimiento independiente , vase la seccin 1.2 ) ;
c) La precisin puede inferirse una vez que se han establecido de
precisin, linealidad y especificidad.
B) Las impurezas (cuantificacin)
La exactitud debe ser evaluada en muestras (sustancia de frmaco /
frmaco) se trataron con cantidades conocidas de impurezas.
En los casos en los que es imposible obtener muestras de ciertas
impurezas y / o productos de degradacin, se considera aceptable para
comparar los resultados obtenidos por un procedimiento independiente (ver
seccin 1.2.). El factor de respuesta de la sustancia de frmaco se puede
utilizar.
Debe quedar claro cmo las impurezas individuales o totales se han de
determinar, por ejemplo, peso / peso o porcentaje de rea, en todos los
casos con respecto a la importante analito.
C) Datos recomendados.
La exactitud debe ser evaluada usando un mnimo de 9 determinaciones
durante un mnimo de 3 niveles de concentracin que cubre el rango
especificado (por ejemplo, concentraciones 3 / 3 repeticiones cada uno del
procedimiento analtico total).
La exactitud debe ser informado como porcentaje de recuperacin mediante
el ensayo de una cantidad conocida aadido de analito en la muestra o
como la diferencia entre la media y el valor verdadero aceptado junto con
los intervalos de confianza.
6. PRECISION.
Validacin de pruebas de ensayo y para la determinacin cuantitativa de las
impurezas incluye una investigacin de precisin.
A) Repetibilidad.
Repetibilidad debera evaluarse utilizando:
1. Un mnimo de 9 determinaciones que cubre el rango especificado para
el procedimiento (por ejemplo, 3 concentraciones / 3 replicados de
cada ); o

2. Un mnimo de 6 determinaciones en 100 por ciento de la concentracin

de ensayo.

B) Precisin intermedia.
La medida en que debe establecerse la precisin intermedia depende de las
circunstancias en las que se destina el procedimiento a utilizar. El solicitante debe
establecer los efectos de los acontecimientos al azar de la precisin del
procedimiento analtico. Las variaciones tpicas para ser estudiados incluyen das,
los analistas, equipos, etc. No es necesario estudiar estos efectos de forma
individual. Se recomienda el uso de un diseo experimental (matriz).

C) Reproducibilidad.
La reproducibilidad se evalu por medio de un ensayo entre laboratorios.
Reproducibilidad debe ser considerado en el caso de la estandarizacin de un
procedimiento analtico, por ejemplo, para la inclusin de procedimientos en las
farmacopeas. Estos datos no son parte del expediente de autorizacin de
comercializacin.

D) Datos recomendados.
La desviacin estndar, desviacin estndar relativa (coeficiente de
variacin), y el intervalo de confianza deben ser reportados para cada tipo
de precisin investigado.
7. LIMITE DE DETECCION.
Son posibles varios enfoques para determinar el lmite de deteccin,
dependiendo de si el procedimiento es no instrumental o instrumental.
Enfoques distintos de los enumerados a continuacin pueden ser
aceptables.
A) Sobre la base de la evaluacin visual.
La evaluacin visual se puede usar para mtodos no instrumentales, pero
tambin puede ser utilizado con mtodos instrumentales.
El lmite de deteccin se determina por el anlisis de las muestras con
concentraciones conocidas de analito y por establecer el nivel mnimo en el
que el analito se puede detectar de forma fiable.
B) Sobre la base de la seal a ruido.
Este enfoque slo puede aplicarse a los procedimientos de anlisis que
presentan ruido de lnea de base. Determinacin de la seal a ruido se lleva
a cabo mediante la comparacin de seales medidas a partir de muestras

con bajas concentraciones conocidas de analito con los de las muestras en

blanco y el establecimiento de la concentracin mnima a la que el analito
se puede detectar de forma fiable. Una relacin seal a ruido entre 3 o 2: 1
se considera generalmente aceptable para estimar el lmite de deteccin.
C) Sobre la base de la desviacin estndar de la respuesta y la pendiente.
El lmite de deteccin (DL) puede expresarse como:

Donde F = la desviacin estndar de la respuesta

S = la pendiente de la curva de calibracin
La pendiente S se puede estimar a partir de la curva de calibracin del
analito. La estimacin de F puede llevarse a cabo en una variedad de
maneras, por ejemplo:
1. Sobre la base de la desviacin estndar de la pieza en bruto.
La medicin de la magnitud de la respuesta de fondo de anlisis se
realiza mediante el anlisis de un nmero apropiado de muestras en
blanco y el clculo de la desviacin estndar de estas respuestas.
2. Sobre la base de la curva de calibracin.
Una curva de calibracin especfica debe ser estudiada usando
muestras que contienen un analito en el rango de DL. La desviacin
estndar residual de una lnea de regresin o la desviacin estndar de
intersecciones con el eje de las lneas de regresin puede usarse como
la desviacin estndar.
D) Datos Recomendados.
Deben presentarse el lmite de deteccin y el mtodo utilizado para la
determinacin del lmite de deteccin. Si DL se determina en base a la
evaluacin visual o sobre la base de la relacin seal -ruido, la
presentacin de los cromatogramas pertinentes se considera aceptable
para la justificacin.
En los casos en que un valor estimado para el lmite de deteccin se
obtiene por clculo o extrapolacin, esta estimacin puede
posteriormente ser validado por el anlisis independiente de un nmero
adecuado de muestras conocidas de estar cerca o preparado en el
lmite de deteccin.

8. LIMITE DE CUANTIFICACION.
Son posibles varios enfoques para determinar el lmite de cuantificacin,
dependiendo de si el procedimiento es no instrumental o instrumental. Enfoques
distintos de los enumerados a continuacin pueden ser aceptables.
A) Sobre la base de la evaluacin visual.
La evaluacin visual se puede usar para mtodos no instrumentales, pero
tambin puede ser utilizado con mtodos instrumentales.
El lmite de cuantificacin se determina generalmente por el anlisis de las
muestras con concentraciones conocidas de analito y por establecer el nivel
mnimo en el que el analito se puede cuantificar con exactitud y precisin
aceptable.
B) Sobre la base de la seal a ruido.
Este enfoque slo se puede aplicar a procedimientos analticos que exhiben
ruido de lnea de base. Determinacin de la seal a ruido se lleva a cabo
mediante la comparacin de seales medidas a partir de muestras con
bajas concentraciones conocidas de analito con los de las muestras en
blanco y el establecimiento de la concentracin mnima a la que el analito
se puede cuantificar de forma fiable. Una relacin tpica de seal a ruido es
10: 1.
C) Sobre la base de la desviacin estndar de la respuesta y la pendiente.
El lmite de cuantificacin (QL) se puede expresar como:
Donde F = la desviacin estndar de las respuestas

S = la pendiente de la curva de calibracin

La pendiente S se puede estimar a partir de la curva de calibracin del
analito. La estimacin de F puede llevarse a cabo en una variedad de
maneras, por ejemplo:
1. Sobre la base de la desviacin estndar de la pieza en bruto.

La medicin de la magnitud de la respuesta de fondo de anlisis se

realiza mediante el anlisis de un nmero apropiado de muestras en
blanco y el clculo de la desviacin estndar de estas respuestas.
2. Sobre la base de la curva de calibracin.
Una curva de calibracin especfica debe ser estudiada usando
muestras que contienen un analito en el rango de QL. La desviacin
estndar residual de una lnea de regresin o la desviacin estndar de
intersecciones con el eje de las lneas de regresin puede usarse como
la desviacin estndar.
D) Datos recomendados.
Deben presentarse el lmite de cuantificacin y el mtodo utilizado para la
determinacin del lmite de cuantificacin.
El lmite debe ser posteriormente validado por el anlisis de un nmero
adecuado de muestras conocidas de estar cerca o preparado en el lmite de
cuantificacin.
9. ROBUSTEZ.
La evaluacin de la solidez debe tenerse en cuenta durante la fase de
desarrollo y depende del tipo de procedimiento en estudio. Debe mostrar la
fiabilidad de un anlisis con respecto a deliberar variaciones en los
parmetros del mtodo.
Si las mediciones son susceptibles a variaciones en las condiciones de
anlisis, las condiciones analticas deben ser controlados adecuadamente o
una declaracin de precaucin deben ser incluidos en el procedimiento.
Una consecuencia de la evaluacin de la solidez debe ser que se establece
una serie de parmetros de idoneidad del sistema (por ejemplo, la prueba
de resolucin) para garantizar que la validez del procedimiento analtico se
mantiene siempre que se utilice.
Ejemplos de variaciones tpicas son:
Estabilidad de las soluciones analticas
Tiempo de extraccin
En el caso de cromatografa lquida, ejemplos de las variaciones tpicas
son:
Influencia de las variaciones de pH en una fase mvil
Influencia de las variaciones en la composicin de la fase mvil
Diferentes columnas (distintos lotes y / o proveedores)
Temperatura
Tasa de flujo
En el caso de la cromatografa de gases, ejemplos de las variaciones
tpicas son:

 Diferentes columnas (distintos lotes y / o proveedores)

Temperatura
Tasa de flujo
10. PRUEBAS DE IDONEIDAD DEL SISTEMA.
Pruebas de aptitud del sistema es una parte integral de muchos
procedimientos analticos. Las pruebas se basan en el concepto de que el
equipo, la electrnica, las operaciones de anlisis, y las muestras a analizar
constituyen un sistema integral que se puede evaluar como tal. Parmetros
de la prueba de aptitud del sistema que deben establecerse para un
determinado procedimiento depender del tipo de procedimiento que se
validado. Ver las farmacopeas para obtener informacin adicional