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RESULTADOS:
GENERACION
DE
UN
BANCO
DE
CLULAS
COMPETENTES Y PRODUCTRAS DE PLSMIDOS.
BACTERIANAS
1|
Equipo 4
6A
6A
Fotografa 6. Se descart el
sobrenadante y se resuspendi el
botn celular final de cada
microtubo con 150L de solucin l
6A
4|
Equipo 4
6A
Clona
D.O. 260 nm
D.O. 280 nm
D.O. 230 nm
Pureza
260/280
Pureza
260/230
77.85
37.34
3892.8
2.09
2.39
128.158
62.382
6407.9
2.025
2.33
30.598
18.982
1529.9
1.61
2.43
17.352
9.333
867.6
1.86
1.40
221.571
104.738
11078.6
2.12
2.34
138.083
68.754
6804.1
2.01
2.25
95.821
46.229
4781
2.07
2.35
95.973
46.039
4798.6
2.08
2.31
Clon
a
1
Pureza 260/280proteinas
Pureza 260/230sales
5|
Equipo 4
6A
5
Muestra valor de 1.34 por encima
del valor mximo optimo, se
encuentra grandes cantidades de
sales en la clona, sin embargo fue
el que tubo menor cantidad de
todas las clonas
6
Encontramos valor de 0.12 por
Muestra valor de 2.28 por encima
encima de los valores ptimos
del valor mximo optimo, se
encuentra grandes cantidades de
sales en la clona
7
Encontramos valor de 0.01 por
Muestra valor de 2.19 por encima
encima de los valores ptimos,
del valor mximo optimo, se
aun as se encuentra cerca de los encuentra grandes cantidades de
valores ptimos
sales en la clona
8
Encontramos valor de 0.07 por
Muestra valor de 2.29 por encima
encima de los valores ptimos
del valor mximo optimo, se
encuentra grandes cantidades de
sales en la clona
9
Encontramos valor de 0.08 por
Muestra valor de 2.25 por encima
encima de los valores ptimos
del valor mximo optimo, se
encuentra grandes cantidades de
sales en la clona
Los datos obtenidos no son del todo confiables al presentar
contaminacin por sales y protenas, sus niveles de pureza son muy bajos
segn lo calculado
Encontramos valor ptimo dentro
del rango aproximado, teniendo un
valor de pureza adecuado en la
clona
Ensayo de restriccin
NOTA: se llev a cabo con el protocolo para la enzima de restriccin Kpn1
6|
Fotografa
Fotografa 14.
15. Se
Se agrega
agrega
22.5l
Plsmido
original
6B
4.5L Kpn1
7|
Equipo
Fotografa
16.4Se6A
dejaron
incubar a 37C por 1hr
Posteriormente
se
mantuvieron en hielo frapp
para
su
posterior
almacenado a -20C hasta
usarlas de nuevo
8|
Equipo 4
6A
Sper
enrollamiento
plsmido
Mapeo de electroforesis
1. Mw
6. Clona 7 xho1
2. plasmido original
7. Clona 8 xho1
3. clona 4 xho1
8. Clona 9 xho1
4. clona 5 xho1
5. clona 6 xho 1
9|
Equipo 4
6A
3761 pb
Banda ms cercana a
3761 pb dando
Numero de pozo
1.-1Kb
5.-E6
6.- E5 7.-E9
10 |
Equipo 4
6A
Gel
de
agarosa al 0.8% de los plsmidos laboratorio 10
3761 pb
Plsmido sin digerir, sper
enrollamientos
3000 pb
761 pb
Plsmido Pvax1
Mapa de carga
1. Mw
2. Pvax1-EGFP / EcoR1
3. Clona 7 / EcoR1
4. vaco
5. Pvax1 Equipo 1 / doble dig acetatos
6. Pvax1 Equipo 2 / doble dig acetatos
7. Pvax1 Equipo 3 / doble dig butanol
8. Pvax1 Equipo 4 / doble dig butanol
6A
Ligacin
12 |
Equipo 4
6A