La importancia de la replicacin del ADN

en la medicina

REPLICACIN

La replicacin del material gentico es

esencial a la vida

Propiedades generales
del proceso de
replicacin

mitosis

Biosntesis del ADN

El mecanismo de la
replicacin

Errores en la replicacin son el origen de las

enfermedades hereditarias

meiosis

Errores en la replicacin son causa primaria

de canceres

La maquinaria de la
replicacin
La Replicacin en
Eucariotas

Existen patologas por incapacidad de

reparar errores cometidos en la replicacin

Telmeros y
Telomerasas

mitosis

Los patgenos tambien replican. Entender

estos procesos permite establecer terapias
especificas

Transcriptasas Reversas

Muchos antibioticos inhiben la replicacin

de microorganismos
1

El experimento de Meselson y Stahl

Tres posibles modelos de replicacin

La replicacin es semiconservativa
Cada hebra se usa como molde para sinte tizar otra
Los nucletidos se unen por complementariedad
Se sintetiza una cadena nueva a partir de cada hebra vieja
Se respeta la disposicin antiparalela de las hebras
3

Direccionalidad de la replicacin

Origenes,
Origenes, burbujas y horquillas de replicacin
La replicacin se inicia en sitios
particulares (orgenes de replicacin)
Cada origen define un replicn
(unidad de replicacin independiente)
A partir de cada origen la replicacin
avanza bidireccionalmente
Se forma una burbuja de replicacin
formada por dos horquillas que
avanzan en direcciones opuestas
horquilla 1

Replicacin de ADN circular y lineal

1.

2.

horquilla 2

Theta

Cromosoma bacteriano

3.

Lineal

Replicones simples o mltiples

Cromosoma eucariota

Crculo rodante Bacterifagos

Reaccin de Sntesis

La replicacin es semidiscontinua
Todas las polimerasas catalizan la elongacin de cadena in direccin 5-3
Las dos hebras estn orientadas en direccin antiparalela
Solo una hebra avanza continuamente leyendo una hebra molde en
direccin 35
La hebra complementaria se debe sintetizar en fragmentos discontinuos

En la sntesis de la nueva
cadena se generan:

enlaces fosfodiester
(covalentes)

puentes de H
entre las bases
complementarias
9

La sntesis ocurre en direccin 53

10

La hebra retrasada se
sintetiza en fragmentos
de Okazaki
La replicacin es
semisemi-discontinua

11

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La replicacin es un proceso complejo

El mecanismo de la replicacin

Seales:
Ori C
Ter

INICIACION
Reconocimiento de origenes de replicacin
separacin de hebras
Posicionamiento de maquinaria transcripcional
ELONGACION
Crecimiento bidireccional de las horquillas de
replicacin
Replicacin semiconservativa, semidiscontinua,
coordinada
TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin
Desensamble de replisomas

Enzimas principales:
ADN polimerasas
Primasas
Ligasas
Helicasas
Topoisomerasas

Mapa de genes involucrados con la replicacin y reparacin en E. coli

13

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Inicio de la replicacin en procariotas:

Separacon de las hebras
Protena DnaA
Repetidos 13 pb ricos en AT

Repetidos 9 pb

Ensamblaje del replisoma

Protena DnaA se une a

AND superenrrollado en
OriC.
Genera tensin disociando
repetidos adyacentes
La helicasa comienza
disociacin de hebras
Se asocian protenas de
unin a cadena simple

15

16

Elongacin

17

Resolucin de la replicacin en la hebra retardada

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ADN Polimerasa I

Terminacin
Secuencias
terminadoras
Retienen las horquillas
de replicacin
Contienen secuencias
que facilitan la
decatenacin y
separacin de los
cromosomas resultantes
Requieren elementos de
terminacin particulares

19

Kornbnberg, 1957
ACTIVIDAD POLIMERASA

Necesita Mg++ como cofactor

La energa es provista por la liberacin de PPi

El ADN acta como molde

Necesita un cebador que ofrezca un exrtremo

3OH libre para agregar nucletidos

La elongacin ocurre en direccin 5 3

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ADN Polimerasa I

FIDELIDAD DE LA REPLICACIN

ACTIVIDAD EXONUCLEASA

Esta dada por la actividad exonucleasa 3-5

Requerimiento de primers

35 Proofreading
correccin de sntesis

Imposibilidad de la polimerasa de agregar nucletidos si no hay

apareamiento exacto en los nucletidos previos
Implica la imposibilidad de replicacin en direccin 3-5.

53 Nick Translation
reemplazo de cebadores

21

22

El anillo corredizo y la procesividad

ADN Polimerasa III

La DNA Pol III es la enzima principal en la replicacin
Multimrica, con varias subunidades
???
35 exonucleasa

El core de DNA Pol III es poco procesivo

El anillo corredizo asegura una muy alta
procesividad

core

Pol C: polimerasa

dimerizacin

Anillo corredizo

clamp loader
(cargador del anillo)

23

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Coordinacin de hebras

Avance de la horquilla
de replicacin

La DNA Pol III funciona

como dmero
Las hebras crecen de
modo coordinado,
avanzando en la
direccin de la horquilla

25

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28

Primasa:
Primasa: sntesis del cebador

ADN polimerasas procariotas

Polimerasas
Caractersticas

II

III

Subunidades

>4

>10

103.000

88.000

830.000

si

si

si

Peso Molecular
Exonucleasa 35
Exonucleasa 53

si

no

no

Vel.Polimerizacin (nt/seg)

16-20

40

250-1.000

Procesividad (*)

3-200

1.500

>500.000

* Nucletidos incororados antes de disociarse del ADN

Las DNA Polimerasas son enzimas elongadoras

Necesitan un cebador 3OH

29

30

Helicasa:
Helicasa: Separacin de las hebras de ADN

Girasa (topoisomerasa II )
Eliminacin de tensin durante la replicacin

QUINOLONAS
QUINOLONAS
(cido
(cido nalidxico)
nalidxico)
Se
Se une
une a
a la
la subunidad
subunidad A
A de
de la
la
DNA
DNA girasa
girasa (topoisomerasa)
(topoisomerasa)
espectro:
espectro: Gram-positivos
Gram-positivos e
e
infecciones
infecciones urinarias
urinarias

31

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Resolucin de los cromosomas duplicados

ADN Polimerasas Eucariotas

Localizacin
Funcin
Funcn similar en E.coli

alfa

delta

Beta

epsilon

gama

nuclear

nuclear

nuclear

nuclear

mitocondrial

replicacin
retardada
Cebado
DNA Pol I

DNA Pol III

DNA Pol II

Exonucleasa 35

Asociada a DNA primasa

Acepta primer de ARN

Acepta primer de ADN

Sensible a afidicolina

Polimerizacin 53

33

34

La replicacin en los eucariotas

es similar a la bacteriana

La replicacin en los eucariotas

es similar a la bacteriana
La unin de PCNA (protena tipo
anillo corredizo) desplaza a la
polimerasa y recluta a la
polimerasa que continua la
sintesis de la hebra continua

Reconocimiento de origenes y
unin de helicasa (antigeno T)
La helicasa comienza la
disociacin de hebras

Se une el complejo formado por la

primasa y polimerasa , a la hebra
retardada, se sintetiza el cebador

Se asocian protenas de unin a

cadena simple que mantienen las
hebras en condiciones para la
replicacion (RPA)

Se une la protena RFC a la he bra

retardada y la polimerasa
procede a la sntesis de los
fragmentos de Okazaki

Se une un complejo formado por la

primasa y polimerasa , y se
sintetiza el cebador
Se une la protena RFC y comienza
la sntesis por la polimerasa

35

36

replicacin
reparacin reparacin? replicacin
continua

La horquilla de replicacin eucariota

El problema de replicar los extremos de molculas

de ADN lineales

Como se inicia la replicacin en el extremo 5?

37

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Replicacin en los telmeros

REPLICACIN DE LA CROMATINA

Telomerasa
Enzima que cataliza la sntesis de los extremos
Ribozima que contiene una molcula de ARN
que sirve como molde
El ARN gua la adicin de los nucletidos
correctos
Niveles variables de actividad de la telomerasa
regulan la divisin celular y el envejecimiento

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