Sie sind auf Seite 1von 4

Practica n6: Induccin qumica de

desnaturalizacin
Objetivos:
determinar la variacin en la energa de Gibbs para el proceso de
desnaturalizacin de la ficocianina.
verificar diferentes modelos tericos para interpretar los resultados
obtenidos: el modelo termodinmico para el proceso de
desnaturalizacin y el modelo LEM para el clculo de la variacin de
energa de Gibbs del proceso.

introduccin:
Continuando con el segundo ciclo de prcticas empleamos otro mtodo
para estudiar la estabilidad de la protena ficocianina.
en esta prctica inducimos la desnaturalizacin por un mtodo qumico el
cual se basa en el agregado de un agente qumico (en este caso urea)que
promueve la desnaturalizacin.
el procedimiento se basa en agregar a varias muestras de la misma
concentracin proteica diferentes concentraciones de urea, y en base a
que a 619nm solo la forma nativa de la protena absorbe se cumple la ley
de Beer para esta protena, por lo que podemos seguir el proceso.
durante el proceso debemos restar a cada medida de absorbancia la
absorcin de fondo causada por la protena desnaturalizada en presencia
de urea, a esta absorbancia se le denomina A619.
si denominamos A0619 a la absorbancia de la muestra sin presencia de urea
podemos obtener por extrapolacin la concentracin total inicial de
protena, as como tambin la concentracin de protena nativa a cada
concentracin de urea.

A 0 619 A619

[Total]=
b
b

[ urea ]

A
A
[ N ] [ urea ] = 619 619
b
b

Para obtener los datos relacionados a la estabilidad de la protena, se


emplea tanto el modelo termodinmico como el modelo LEM, en el cual se
obtiene

des G T

de la ordenada en el origen de la recta

des G0T [ urea ] vs [urea] .

des GT [ urea ]

es obtenido a partir de la cte. de equilibrio aparente

(aparente, ya que depende de las concentraciones y no de las actividades


de las especies):
des G0T [ urea ] =RT ln ( K ap
T [ urea ] )

siendo

K ap
=
T [ urea ]

[ urea ]
A0619 A619
urea ]
A[619
A 619

Resultados:
medidas tomadas a 291,5K y 1atm de presin.

Obteniendo del ajuste, los valores tanto de las asntotas como del punto de inflexin
respectivamente:
A1 = 0,88 +/- 0,02 = A0614
A2 = 0,179 +/- 0,008 = A
x0 = 3,99 +/- 0,08 = [Urea] de transicin
[UREA]
(M)
1,82
2,73

K ap
T [ urea ]

des G0T [ urea ]

0,027739
25 0,128824
4.681,10

3,2
3,64
4,11
4,55
5,45
6,36
7,27

48
0,295748
61
0,488322
72
1,055718
48
2,670157
07
21,61290
32
62,72727
27
62,72727
27

2.805,53
1.633,99
197,80988
1
-2.427,30
-7.484,12
-10.065,37
-10.065,37

En relacin al seguimiento de la reaccin solo sirven los datos correspondientes a la


zona de transicin donde se encuentran presentes tanto la forma nativa como la
desnaturalizada. Por lo que solo se utilizaran los datos correspondientes a las
concentraciones de 2.73M, 3.2M, 3.64M y 4.11M. Ya que en concentraciones menores
de urea, la fraccin de protena nativa predomina sobre la desnaturalizada y por lo tanto
K tiende a 0, as como para concentraciones mayores la forma desnaturalizada
predomina sobre la nativa y K tiende a infinito.

des G0T =14046+11 3 kJ/mol


[Urea] de transicin (raz)= 4.07 M

Discusin:
Bajo las condiciones de trabajo, los datos obtenido confirman el
modelo termodinmico para el proceso de desnaturalizacin, en
donde solo se consideran dos estados de la protena(nativa y
desnaturalizada) durante el proceso. Esto ltimo se verifica ya que al
[ urea ]
graficar A 619
vs [urea] se forma una sigmoidea con un solo punto
de inflexin.

Las tres secciones del grafico, as como su punto de inflexin pueden


ser interpretadas, la seccin superior horizontal se relaciona con
concentraciones mnimas de urea, en consecuencia una pequea
fraccin de protena se desnaturaliza y la fraccin de protena nativa
es mayor, a causa de esta relacin entre los dos K tiende a 0(el
equilibrio N D se encuentra desplazado hacia la forma nativa), por
otra parte en la zona inferior horizontal ocurre de forma inversa,
donde la forma desnaturalizada predomina sobre la nativa y K tiende
a infinito.
Para el objetivo de esta prctica ninguna de estas dos regiones
proporcionan datos relevantes, ya que la estabilidad de una protena
involucra la capacidad de la misma de mantenerse en equilibrio. En
base a esto trabajamos solo con los datos de la zona de
transicin(regin media de la sigmoidea)donde el rango de
concentracin de urea es tal que nos permite estudiar el equilibrio de
desnaturalizacin, en este caso el rango va desde 2.77M hasta 4.11M.
El punto de inflexin corresponde a la concentracin de urea de
transicin, donde [nativa] y [desnaturalizada] son iguales y por lo
tanto K es uno
Otro modelo verificado por los datos experimentales es el modelo
0
LEM, donde al graficar des G T [ urea ] vs [urea] da una recta de ordenada
en el origen igual a

des G T

y una raz que corresponde a la

concentracin de urea de transicin, as como lo era el punto de


inflexin de la sigmoidea.
Podemos comparar los resultados de ambos modelos comparando los
valores de [urea] de transicin obtenidos a travs de cada uno, para
el modelo termodinmico fue 3,99M mientras que para el LEM fue
4,07M

Conclusiones:
Se verifican ambos modelos, el modelo termodinmico para el
[ urea ]
proceso de desnaturalizacin con la grafica sigmoidea de A 619
vs
[urea] as como el modelo LEM para el clculo de la energa de Gibbs
0
del proceso, con la recta de la grfica des GT [ urea ] vs [urea] obtenida a
partir del rango de transicin.
0
Determinndose des G T =14046+11 3 kJ/mol.

Das könnte Ihnen auch gefallen