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desnaturalizacin
Objetivos:
determinar la variacin en la energa de Gibbs para el proceso de
desnaturalizacin de la ficocianina.
verificar diferentes modelos tericos para interpretar los resultados
obtenidos: el modelo termodinmico para el proceso de
desnaturalizacin y el modelo LEM para el clculo de la variacin de
energa de Gibbs del proceso.
introduccin:
Continuando con el segundo ciclo de prcticas empleamos otro mtodo
para estudiar la estabilidad de la protena ficocianina.
en esta prctica inducimos la desnaturalizacin por un mtodo qumico el
cual se basa en el agregado de un agente qumico (en este caso urea)que
promueve la desnaturalizacin.
el procedimiento se basa en agregar a varias muestras de la misma
concentracin proteica diferentes concentraciones de urea, y en base a
que a 619nm solo la forma nativa de la protena absorbe se cumple la ley
de Beer para esta protena, por lo que podemos seguir el proceso.
durante el proceso debemos restar a cada medida de absorbancia la
absorcin de fondo causada por la protena desnaturalizada en presencia
de urea, a esta absorbancia se le denomina A619.
si denominamos A0619 a la absorbancia de la muestra sin presencia de urea
podemos obtener por extrapolacin la concentracin total inicial de
protena, as como tambin la concentracin de protena nativa a cada
concentracin de urea.
A 0 619 A619
[Total]=
b
b
[ urea ]
A
A
[ N ] [ urea ] = 619 619
b
b
des G T
des GT [ urea ]
siendo
K ap
=
T [ urea ]
[ urea ]
A0619 A619
urea ]
A[619
A 619
Resultados:
medidas tomadas a 291,5K y 1atm de presin.
Obteniendo del ajuste, los valores tanto de las asntotas como del punto de inflexin
respectivamente:
A1 = 0,88 +/- 0,02 = A0614
A2 = 0,179 +/- 0,008 = A
x0 = 3,99 +/- 0,08 = [Urea] de transicin
[UREA]
(M)
1,82
2,73
K ap
T [ urea ]
0,027739
25 0,128824
4.681,10
3,2
3,64
4,11
4,55
5,45
6,36
7,27
48
0,295748
61
0,488322
72
1,055718
48
2,670157
07
21,61290
32
62,72727
27
62,72727
27
2.805,53
1.633,99
197,80988
1
-2.427,30
-7.484,12
-10.065,37
-10.065,37
Discusin:
Bajo las condiciones de trabajo, los datos obtenido confirman el
modelo termodinmico para el proceso de desnaturalizacin, en
donde solo se consideran dos estados de la protena(nativa y
desnaturalizada) durante el proceso. Esto ltimo se verifica ya que al
[ urea ]
graficar A 619
vs [urea] se forma una sigmoidea con un solo punto
de inflexin.
des G T
Conclusiones:
Se verifican ambos modelos, el modelo termodinmico para el
[ urea ]
proceso de desnaturalizacin con la grafica sigmoidea de A 619
vs
[urea] as como el modelo LEM para el clculo de la energa de Gibbs
0
del proceso, con la recta de la grfica des GT [ urea ] vs [urea] obtenida a
partir del rango de transicin.
0
Determinndose des G T =14046+11 3 kJ/mol.