Rol del trfico de leucocitos

polimorfo nucleares en la
perpetuacin de la inflamacin
durante la enfermedad intestinal
inflamatoria
Introduccin
La enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) es una importante causa de morbilidad vitalicia con una
prevalencia mayor de 1 en mil, est caracterizada por inflamacin crnica sin control del intestino
Delgado y/o colon, presentando en individuos afectados sntomas tan mltiples como sangrado, prdida
de peso, dolor abdominal y diarrea recurrente. Histricamente, IBD ha sido ms evidente en las
civilizaciones occidentales, sin embargo su prevalencia en pases en vas de desarrollo ha incrementado
recientemente. En el momento, no existe cura y los tratamientos disponibles estn limitados en
trminos de eficacia. Adems, ha sido reportado que hasta el 75% de individuos con enfermedad de
Crohn y del 25-33% de individuos con colitis ulcerativa requerirn ciruga para enfermedades no
responsivas a tratamiento durante sus vidas. Las formas graves de IBD idioptica, colitis ulcerativa y
enfermedad de Crohn han sido extensivamente estudiadas por anlisis clnicos, patolgicos,
endoscpicos y radiolgicos. La colitis ulcerativa es caracterizada por la inflamacin mucosa difusa que
esta restricta al colon, empezando en el recto y prolongndose proximalmente de forma continua. En
contraste, la enfermedad de Crohn puede afectar cualquier parte del tracto gastrointestinal, a pesar
de que es ms comnmente asociado con inflamacin transmural no continua o lesiones saltantes en
el leon terminal o la regin perianal.
La patognesis del IBD contina sin ser entendida por completo, aunque complejas interacciones
multifactoriales entre bacterias comensales entricas y el sistema inmune del husped, as como el
genotipo subyacente del mismo, son sospechados como influencia en su desarrollo. Existe, sin embargo,
una buena documentacin de que la actividad en IB est relacionada con el influjo transepitelial de
leucocitos polimorfo nuclear (PMN) en el epitelio mucoso (Criptitas) y subsecuentemente en la luz
intestinal. Ciertamente el homing extensivo de los PMN en reas de inflamacin mucosa ha facilitado
el desarrollo de tecnologa de imgenes donde PMN radio sealizados son usados como medidor
semicuantitativo de la actividad en IBD.
Coincidentemente con el influjo masivo hacia la luz de PMN, es estn las heridas mucosa les o
transmurales extensivas incluyendo edemas, perdida de clulas caliciformes, reduccin de la
produccin de mucosa, hiperplasia de clulas criptas {Parecen ser las clulas de lieberkhun pero no se,
en el texto dice literalmente crypt cells}, erosiones, ulceraciones, y formaciones de abscesos en las
criptas intestinales. En esta revisin, resaltamos el rol de PMN en la perpetuacin del trfico de la
inflamacin en el IBD, puesto que esto representa una importante rea de investigacin con
implicaciones teraputicas novedosas para la mejora de los sntomas asociados tanto con colitis
ulcerativa como con la enfermedad de Crohn.

Figura 1: Epitelio mucosal de pacientes con colitis ulcerativa mostrando infiltracion y union de
PMN transepiteliales a la superficie apical del epitelio (A) y absesos cripticos caracteristicos
causados por la acumulacion luminal de PMN migrados (B)

2. Cascada de trfico de PMN

Mientras la primera respuesta del sistema inmune innato responde, PMN debe ejecutar una rpida,
exquisitamente orquestada, cascada de eventos migratorios que incluyen navegacin trans endotelial,
trans matriz y trans epitelial, terminando en la fagocitosis de los patgenos invasores y la subsecuente
resolucin de la inflamacin.

Migracin transendotelial:
La migracin de PMN de los vasos comienza con el flujo libre de PMN que se adhieren a la pared
endotelial, seguida de PMN rodando sobre la superficie del endotelio micro vascular. Estos procesos
estn mediados a travs de dbiles, reversibles interacciones entre E-, P- o L-selectina y sus ligandos
carbohidratos incluyendo P-selectina glicoprotena Ligando-1 (PSGL-1). Especficamente, se piensa que
la unin de P-selectina endotelial con PMN PGSL-1 es importante para la adherencia inicial de PMN al
endotelio, con la unin de E-selectina siendo ms relevante para el proceso subsecuente del
rodamiento lento. El PMN rodante se mantiene en cerca aproximacin al endotelio vascular que facilita
la deteccin por parte de PMN de las quimosinas {chemokines en ingls, no s cmo se traduce} unidas
a los proteoglicanos heparina sulfato en las membranas de las clulas endoteliales. Las interacciones
quimosina-PMN, a su vez, priman a PMN a una adhesin firme al endotelio. La activacin de PMN por
quimio quinas tales como IL-8 y quimio atrayentes incluyendo C5a, leukotrieno LTB4, factor activador
de platelet (PAF) y los formil pptidos derivados de bacterias inducen una firme adhesin a travs de
unin de alta afinidad, mediadas por integrinas. Esta unin de PMN de alta afinidad al endotelio es
mediada por interacciones bien establecidas entre Mac-1 expresada por MN (CD11b/CD18) y Antigeno-1
de funcin asociada al linfocito (CD11a/CD18) y miembros de la superfamilia de las inmunoglobulina,
tales como la molcula -1 de adhesin intracelular (ICAM-1). Ms recientemente ha sido propuesto que
PMN integrinas alfa4beta1 y antgenos -4 (VLA-4), as como la ICAM-2 expresada en el endotelio, la
molecula-1 de adhesin celular vascular (VCAM-1) y el receptor para productos finales de la glicacion
avanzada (RAGE), pueden participar en la unin de alta afinidad de PMN al epitelio.

Luego de la adhesin firme, PMN se arrastra a travs de la superficie de la clula endotelial para llegar
al punto de transmigracin, donde procede en una manera CD18 dependiente de integrinas. El
siguiente paso en la migracin de PMN es la diapdesis a travs del endotelio, que procede
predominantemente a travs de la ruta para celular, con migracin transcelular reportada solo en
ciertas circunstancias. Ha sido recientemente observado que en las migraciones preferentemente para
celulares, transendoteliales toma lugar en esquinas tricelulares y uniones endoteliales posicionadas
sobre reas con bajo nivel de expresin de componentes de membrana base, tales como la laminina 10,
el colgeno IV, y el nidogeno -2. La migracin para celular de PMN entre clulas endoteliales es mediada en
parte por el involucramiento activo de varias molculas de unin endotelial tales como la molcula 1 de adhesin
celular endotelial/platelet (PECAM-1), CD99, ICAM-2, molcula de adhesin celular selectiva (ESAM) y miembro de
la familia molecular de adhesin celular (Junction adhesin molecular JAM-A , B and C). Para facilitar la
complecin de la migracin transendotelial, PMN extiende protrusiones laterales con el objetivo de encontrar
sitios adecuados en la membrana vascular basal y lamina pericitica (perycite sheat) permita mayor movimiento
hacia afuera del tejido extravascular y a travs del intersticio. Sin embargo, antes de acercarse al intersticio, ha
sido reportado que los leucocitos deben desprender sus colas/uropodos del lado baso lateral de la mono capa
endotelial y/o membrana basal en una manera CD18 dependiente de integrina.

La importancia de usar como objetivo el trfico de PMN como terapia para IBD esta resaltada por el nmero de
biomolculas nuevas que han sido diseadas para especficamente modular el reclutamiento y retencin
leucocitaria intestinal. La metronidazola oral es uno de los antibiticos ms comnmente usado en el tratamiento
de la enfermedad de Crohn. Adems de actuar como antimicrobial, metronidazola tambin ejerce efectos antiinflamatorios en el endotelio intestinal. Especficamente ha sido demostrado que la metronidazola inhibe el trafico
PMN al prevenir la adhesin de firme de leucocitos al endotelio en las vnulas pos capilares mesentricas de ratas.
Un estudio abierto reporto una disminucin en dolor en hasta el 80% de individuos con enfermedad de Crohn
perianal despus de tratamientos con dosis orales de metronidazola, con un estudio adicional demostrando la
curacin de fistulas desde un tercio hasta un medio de los sujetos tratados. Otra molcula que ha estado siendo
investigada como un reagente teraputico para el IBD es ISIS 2302 (Alicaforsen), un oligonucletido humano antisense que altera el ambiente local inflamatorio del endotelio vascular bloqueando la produccin de ICAM.
Alicaforsen inicialmente mostro xito en la fase I placebo de un ensayo controlado para enfermedad de Crohn,

pero no tuvo xito en puntos primarios definitivos en ensayos humanos, y, hasta ahora, este compuesto no ha sido
desarrollado ms para su uso en teraputica para el IBD. Natalizumab es un anticuerpo monoclonal recombinante
humano dirigido contra las subunidades alfa4 integrina que tienen por objetivo las interacciones leucocitoendoteliales mediadas por VCAM. A travs primariamente de integrinas asociadas a linfocitos, tambin ha sido
reportado que neutrfilos humanos, bajo condiciones inflamatorias, pueden expresar una subunidad alfa4 de
integrina.
Natalizumab es el primer inhibidor de adhesin molecular selectivo aprobado para el tratamiento de la
enfermedad de Crohn. Los ensayos clnicos probando la eficacia de natalizumab han demostrado una mejora en los
niveles de protenas C-reactivas, una mejora en la calidad de vida y en las proporciones de remisin clnica en
individuos con enfermedad de Crohn activa.

Migracin transepitelial
Siguiendo la migracin fuera del endotelio vascular inflamado y a travs del intersticio, el PMN migrante se
encuentra con la barrera epitelial mucosa. As como en la migracin a travs del endotelio micro vascular, la
migracin transepitelial de PMN es un proceso de mltiples pasos. Sin embargo, la secuencia de interacciones que
ocurre entre el PMN infiltrante y el epitelio mucoso se mantiene incompletamente caracterizada a pesar de la
fuerte correlacin entre transmigracin PMN y enfermedad sintomtica. Este contacto de anclaje inicial cuando
PMN migra a travs del endotelio es mediada a travs de reconocimiento CD11b/CD18-dependiente de contra
ligando en la superficie baso lateral de clulas epiteliales. La importancia de las interacciones CD11b/CD18dependiente en la migracin PMN tras epitelial ha sido bien documentada con anticuerpos a CD11b y CD18
bloqueando casi toda migracin al pptido bacteria fMLF. Sin embargo, tambin ha sido reportado que las
migraciones PMN a otros quimio atrayentes tales como C5a, IL-8 y LTB4 pueden tambin ocurrir de una forma
CD11b/CD18 independiente. Ligandos endoteliales especficos para PMN CD11b/CD18 no han sido hasta ahora
identificados, aunque un rol para protenas epiteliales fucosiladas, pero no sialiladas, en las interacciones de unin
ha sido reportada.
Luego de la adhesin inicial a la superficie baso lateral, los PMN migrantes deben ahora navegar las uniones
intracelular que incluyen desmoronas localizados basalmente, seguidos de uniones adherentes y uniones estrechas
localizadas apicalmente. Juntas, las uniones estrechas y uniones adherentes se asocian con el cito esqueleto de
actina para formal los complejos de uniones apicales (AJC) que, adems de formar una formidable barrera contra
los PMN infiltrantes, es crtica en determinar la polarizacin de mono capas endoteliales y en la regulacin del
fluido para celular y el transporte de solutos. A pesar de la importancia del rol de la migracin transepitalial de
PMN en la disrupcin de la barrera epitelial y la pato fisiologa de IBD, los detalles moleculares que facilitan la
migracin transepitalial de PMN a travs de AJC estn lejos de ser entendidos. Es, sin embargo, ampliamente
aceptado que PMN migra entre clulas epiteliales dentro del espacio para celular y que las protenas epiteliales
son importantes en la regulacin de este proceso. Especficamente, las interacciones entre protenas alfa seal
regulatorias expresadas por PMN y las CD47 epiteliales expresadas baso lateralmente han sido implicadas en la
regulacin de la velocidad de migracin de PMN a travs del epitelio intestinal polarizado. Adems de numerosos
miembros de la familia de protenas de timoncito cortical de Xenopus (CTX, incluyendo nectinas, Coxsackie y
protena receptora de adenovirus 5 (CAR), A33 antgeno, y molculas de adhesin (JAMs) han sido implicadas en
las interacciones epiteliales PMN. Especficamente, ha sido demostrado que las interacciones de unin de protenas
entre protenas parecidas al JAM (JAM-L) expresadas por PMN y CAR expresado por el epitelio juegan un rol
importante en la modulacin de la migracin PMN a travs de las uniones estrechas epiteliales.
Siguiendo el pasaje a travs de uniones estrechas epiteliales, una etapa tarda en la respuesta migratoria
transepitelial en PMN implica interacciones entre PMN y el aspecto apical del epitelio intestinal. A travs de estas
interacciones adherentes, PMN se mantiene en aproximacin cercana con las clulas epiteliales del intestino
(IECs). Bajo estas condiciones, PMN son expuestas a un complejo medio de estmulos bacteria les y derivados del
husped, resultando en un ciclo sostenido de estimulacin y activacin de PMN. Los abscesos en criptas
intestinales (una caracterstica clsica del IBD activado) representan colecciones de nmeros masivos de PMN
activados que han migrado a travs del epitelio antes de acumularse en criptas epiteliales del colon. Esta
retencin de PMNs se correlaciona tanto con la deformacin de la arquitectura de criptas, y, con los sntomas de la
enfermedad de IBD.
Sin sorpresa, el epitelio intestinal expresa receptores que interactan con PMN que han migrado a travs de AJC.
Estas protenas epiteliales juegan entonces un importante rol funcional en mediar el desprendimiento de PMN y su

limpieza de la superficie luminal del epitelio intestinal. Ha sido previamente reportado que la molcula 1 de
adhesin intracelular (ICAM-1), uno de los Ligandos conocidos para la molcula de adhesin de PMN CD11b/CD18,
es primariamente expresado en la superficie apical del epitelio intestinal pero solo bajo condiciones inflamatorias.
Adems, los bloqueos de CD55 mediados por anticuerpos, que se localizan tambin en la superficie luminal del
epitelio intestinal, resultan en la acumulacin de PMN en la superficie epitelial apical. Ms recientemente, el rol
de la glicoprotena transmembrana epitelial CD44v6 en el desprendimiento de PMN del aspecto apical del epitelio
intestinal ha sido reportado. Especficamente, fue demostrado que mAb unida a CD44v6 bloqueaba la migracin
transepitelial de PMN a travs de T84 IEC al prevenir tanto el desprendimiento del dominio extracelular de CD44v6
y el desprendimiento de PMN del aspecto apical del epitelio. La relevancia de estas protenas epiteliales apicales y
el rol que juegan en la regulacin del trfico de PMN en la enfermedad, es resaltada por reportes previos
demostrando que la expresin de CD44v6 es regulada positivamente en la mucosa del colon de individuos con IBD.
En apoyo de la importante contribucin del trnsito de PMN a travs del epitelio intestinal a la patognesis de la
enfermedad, ha sido reportado que en el intestino, la migracin transuniones de PMN est asociada con detrimento
en ambos resistencia transepitelial e integridad de la barrera epitelial. Adems, una de las consecuencias de la
infiltracin continua de PMN, como se ha visto con la IBD, es la ulceracin mucosa acompaada de disrupcin
masiva de la funcin de la barrera epitelial y aumento de la entrada de contenidos luminares y microorganismos en
la submucosa. Adicionalmente, egreso intenso de PMN ha mostrado alterar la expresin de los niveles de protenas
de unin incluyendo zonula occludens -1 (ZO-1), Claudina 1, JAM A, Beta-catenina y E-cadherina en clulas
epiteliales resultando en una funcin barrera comprometida y un aumento de la permeabilidad intestinal.

3. Especies reactivas de oxigeno de PMN y IBD

Adems de la disrupcin de la barrera epitelial causada por la migracin de PMN, los PMNs reclutados
se activan y liberan largas cantidades de mediadores citotxicos, tales como especies de oxgeno y
nitrgeno reactivas, en la mucosa intestinal donde pueden disparar heridas tisulares y disrupciones de
la barrera continua. Despus de la activacin de PMN por agonistas incluyendo pptidos formilatados
bacteria les, la nicotina mida adenina di nucletido fosfato localizada en la membrana celular (NADPH)
oxidasa, transfiere electrones de NADPH al oxigeno molecular, generando radicales superoxidos (O2).
O2 es rpidamente convertido en perxido de hidrogeno (H2O2), ya sea por disminutacin espontanea o
a travs de catlisis por enzima dismutasa superoxida (SOD). Adicionalmente, en presencia de Fe2+, los
radicales superoxidos pueden convertirse a travs de un proceso secundario no enzimtico en radicales
hidroxilo altamente reactivos (OH), los cuales des polimerizan la mucina gastrointestinal, peroxidan
lpidos, oxidan protenas y carbohidratos, y promueven la degradacin de DNA. Los radicales superoxido
tambin reaccionan con el xido ntrico, que es encontrado en altas concentraciones en sitios de
inflamacin intestinal, generando al fuerte oxidante peroxinitrato (ONOO-). Es ms, en presencia de
haloideos como Cl-, radicales superoxidos son rpidamente convertidos en cido hipoclorico (HOCL) o
N-cloraminas (RNHCLs) en reacciones catalizadas por la enzima granular myeloperoxidasa (MPO). El
cido hipo clrico es tanto un agente clorante y oxidante que es 100-1000 veces ms toxico que el O2 o
el H2O2 y acta no especficamente y rpidamente en un rango de substratos que incluyen sulfhidrilos,
cidos grasos poliinsaturados (PUFAs), ADN, nucletidos piridinicos, amino cidos alifticos y
aromticos, y componentes que contienen nitrgeno. Adems de su rol en la generacin de ROS; MPO
ha sido recientemente reportado como un importante regulador de la produccin de trampas
extracelulares neutrfilos (NETs), el producto final de una forma distinta de muerte celular programada
llamada Netosis. Es ms, la produccin de NETs por PMN tiene el potencial de participar directamente
en la perpetuacin de la inflamacin intestinal en IBD, a travs de dao tisular espectador, y ha sido
previamente reportado que la deposicin vascular de NETs est relacionado a la vasculitis de pequeos
vasos, hepatitis, trombosis y lupus nefritis, y que la deposicin pulmonar de NETs ha sido relacionada
con la patognesis de la fibrosis qustica.

ROS producidos por PMN pueden tener efectos deletreos sobre la mucosa intestinal pues las
membranas plasmticas de IECs contienen amplias cantidades de PUFAs los cuales son altamente

susceptibles al dao por radicales oxidativos. La degradacin de PUFAS dentro de la membrana celular
del epitelio intestinal por peroxidacion de lpidos resulta en la subsecuente disrupcin de la membrana
celular y aumento de la permeabilidad mucosal. Sin embargo, bajo circunstancias normales, el tejido
humano contiene suficiente cantidad de enzimas protectoras tales como la catalasa y la peroxidasa
glutathiona asi como antioxidantes no enzimticos tales como los tioles, el ascorbato, y el alfatocoferol. As, la mayor parte de los agentes oxidantes potencialmente dainos que entran a los tejidos
son neutralizados, limitando el dao tisular. Ms se considera que la liberacin incontrlada de ROS por
PMN transmigrados, como ocurre en la mucosa durante periodos activos de IBD, sobrecarga estos
mecanismos protectores resultando en dao oxidativo al tejido intestinal, y ms especficamente, dao
a las clulas responsables de mantener la funcin epitelial barrera en el colon. En apoyo de que los ROS
derivados de PMN causan dao al tejido durante la inflamacin intestinal, ha sido reportado que PMN
de individuos con IBD generan niveles aumentados de superoxido cuando son comparados con PMN de
voluntarios sanos. En contraste, tambin ha sido reportado que PMN aislado de individuos con la
enfermedad de Crohn tienen una explosin respiratoria reducid. Sin embargo, deberi notarse que
muchos de los individuos afectados incluidos en este reciente estudio tenan un profundo defecto en la
produccin de superoxidos, similar al visto en individuos con la enfermedad crnica granulomatosa
(CGD), sugiriendo que otros factores subyacentes afectando la generacin de ROS pueden estar
influenciando la data en el estudio. Tambin ha sido demostrado a travs de estudios con
quimioluminiscencia que el colon inflamado en humanos con IBD o en ratones con colitis experimental
contiene cantidades mucho ms altas de ROS que el grupo control. Adems, biopsias de individuos con
IBD han incrementado niveles de productos de peroxidacion de lpidos sugiriendo generacin mejorada
de ROS. S ms, niveles de 8-hidroxy-2-deoxigamosina (8OHdG), la principal modificacin gentica
producida por ROS, ha aumentado significativamente en la mucosa de individuos con ulceritis colonica.
En adicin a lo mltiples modelos experimentales animales de IBD se ha demostrado una produccin de
ROS aumentada que se correlaciona con tanto la severidad de la enfermedad como con su progresin.
Adems de los efectos txicos directos de los ROS mencionados anteriormente, estos metabolitos
activos pueden tambin mediar dao al epitelio y las mucosas indirectamente al alterar el balance
proteasa-antiproteasa dentro del intersticio intestinal. Especficamente, los PMN derivados del cido
hipocloroso pueden inactivar el inhibidor alfa 1 proteasa y la alfa 2 macroglobulina, facilitando la
proeolisis disregulada del intersticio mucosal y el epitelio intestinal por la elastasa derivada de
fagocito. Asimismo, PMN usa el sistema MPO-H2O2-cloruro para generar oxidantes reactivos, activando
metaloproteinasas que pueden en cambio continuar hidrolizando tanto el inhibidor alfa 1 proteasa y el
colgeno. Tambin ha sido reportado que, incluso en concentraciones no toxicas, ciertas PMN derivadas
de metabolitos oxidativos significativamente mejora la secrecin colonica e intestinal de Cl. Por tanto,
estos metabolitos reactivos pueden afectar la patognesis de la diarrea inducida por inflamacin y la
contractibilidad intestinal deprimida asociada con IBD.
El involucramiento de ROS en la patognesis de IBD es apoyado por la proteccin contra colitis inducida
qumicamente en ratones conseguida gracias a la aplicacin de carroeros de radicales libres y otros
antioxidantes. Finalmente, evidencia de una relacin causa y efecto entre especies reactivas de
oxgeno y IBD se deriva de animales modificados qumica o genticamente para alterar la expresin de
enzimas antioxidantes colonicas. Especficamente, ha sido demostrado que ya sea sobre expresin
transgnica de Zinc superoxido dismutasa (ZnSOD) o transferencia del gen SOD extracelularmente ex
vivo resulto en atenuacin de la colitis inducida por DSS en ratones (un modelo de colitis aguda con
heridas ulcero gnica que histolgicamente se asemeja a la colitis ulcerativa). Tambin ha sido
reportado que la administracin intragastrica de la cepa recombinante Lactobacillus casei BL23
productora de manganeso superoxido dismutasa (MnSOD), atenu la colitis inducida por DSS en ratones.
Por el contrario, la inhibicin de la sntesis de glutatin ha resultado en el desarrollo de colitis en
ratones, y aquellos a los que se les provoco una disrupcin de tanto la glutatin peroxidasa 1 (GPx1) y
GPx2 desarrollaron colitis espontanea.

A pesar de un rol bien caracterizado en llevar a cabo la respuesta inflamatoria continua asociada con
IBD, en una respuesta auto limitada normal, los PMN tambin son piezas clave en la resolucin de la
inflamacin y la restitucin de la integridad epitelial intestinal. Por tanto, la transmigracin constante
de PMN en la mucosa intestinal inflamada, durante respuesta inmunes no reguladas, donde el ambiente
imita la fase aguda de la inflamacin, resulta en la liberacin de citoquinas pro inflamatorias y ROS
derivados de PMN, y no la liberacin de agentes antiinflamatorios como el factor de crecimiento
vascular endotelial, lipoxinas, resolvinas y protectinas que facilitaran la curacin de la mucosa. De tal
forma, en vez de participar en la remocin de mediadores inflamatorios y restos celulares de los
tejidos, durante episodios activos de IBD, la produccin por parte de PMN de metabolitos de dao
tisular como oxigeno reactivo y otros mediadores pro inflamatorios es excesiva, contribuyendo en la
perpetuacin de la respuesta inflamatoria aguda y demorando la restitucin de la homeostasis
intestinal.

4. Rol de mediadores inflamatorios derivados de PMN en IBD

A pesar de haber sido pensado previamente como pobremente biosintetico y largamente carente de
actividad transcripcional de novo, los PMN han sido recientemente reportados sintetizando y
secretando una amplia variedad de citosinas pro-inflamatorias, quimosinas, factores de crecimiento, y
otros mediadores inflamatorios de una forma ampliamente estimulo dependiente. Por ende, en adicin
a secretar metabolitos citotxicos en sitios de inflamacin, los PMN tienen la capacidad de contribuir a
una respuesta inflamatoria ms amplia a travs de la liberacin de mediadores inflamatorios
especficos. Adems, los PMN son predominante clulas infiltrantes presentes en tejidos inflamados,
por lo que a pesar de su capacidad sinttica generalmente baja, los PMN representan una fuente
importante de mediadores inflamatorios producidos y secretados en tejidos inflamados. En vista de un
amplio espectro de actividades desarrolladas por los mediadores pro-inflamatorios producidos por PMN,
puede ser inferido que los PMN migrados juegan un rol importante sosteniendo la inflamacin de la
mucosa intestinal que es caracterstica de IBD. Tambin es por tanto posible que cantidades
aumentadas de ciertos mediadores pro inflamatorios en la mucosa y heces de individuos con IBD
puedan ser producidos en gran parte por PMN migrados. Una caracterizacin completa de todos los
mediadores inflamatorios/citosinas producidas por PMN est ms all del alcance de este manuscrito, y
este tema ha sido previamente y extensivamente revisado en otros trabajos. Sin embargo, un
entendimiento en la produccin de citosinas especficamente asociadas a IBD por PMN es importante en
trminos de un mayor entendimiento del potencial de mediadores producidos por PMN en perpetuar el
fenotipo inflamatorio observado en IBD.
Citosinas derivadas de PMN
Ha sido reportado que una de las citosinas producidas por PMN ms abundante es la interleucina 8. La
IL 8 derivada de PMN es probablemente relevante en la patognesis de IBD pues anlisis de segmentos
intestinales de individuos con colitis ulcerativa activa o enfermedad de Crohn demuestra una fuerte y
especifica expresin de IL 8 en la mucosa afectada que se correlaciona con el grado histolgico de
inflamacin activa. Las clulas que expresan IL 8 fueron encontradas principalmente en macrfagos,
PMN, y clulas epiteliales, sin embargo, ha sido sugerido que PMN representa la poblacin celular
principal en la expresin de IL 8 en base a las ulceras, exudados inflamatorios en superficies mucosa
les, abscesos en las criptas, y en los bordes de tractos fistulares.
Tambin se ha mostrado que los PMN producen y secretan otras quimosinas potentes. El producto
gentico relacionado con el crecimiento alfa (GROa), como IL 8, es un potente quimio atrayente y
activador. La secrecin de IL 8 y GROa por PMN en sitios de inflamacin intestinal facilita el
reclutamiento continuo de PMN y activa la liberacin de metabolitos reactivos en la mucosa intestinal,
llevando a un dao tisular continuo y la continuacin del ciclo de atraccin neutrofilica y activacin. La

habilidad del PMN para secretar protena inflamatoria del macrfago 1 (MIP-1/CCL3) y MIP-1b(CCL4)
tambin ha sido documentada.
La MIP1a acta como una potente factor quimio tctico para monocitos, eosinofilos y subpoblaciones
de linfocitos T y B en adicin a activar muchas funciones efectores de macrfagos y PMN. Estas
funciones efectoras incluyen la generacin de H2O2 y la secrecin de citosinas asociadas al IBD
incluyendo el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a), IL-1, y IL-6. La habilidad de PMN de secretar
MIP-1 sugiere que una vez este ha llegado al foco inflamatorio, no solo apoyan el trafico continuo de
mas PMNs, sino que promueven la acumulacin subsecuente y activacin de monocitos, macrfagos,
eosinofilos y linfocitos.
PMN tambin produce y libera TNF-a, IL1a, y IL-1b en sitios de inflamacin, con PMN implicado en ser
una de las fuentes celulares de TNF-a en biopsias del colon obtenidas de individuos con la enfermedad
de Crohn. La TNF-a es un mediador pro-inflamatorio que ejerce efectos en monocitos, macrfagos,
linfocitos y eosinofilos, as como activa adhesin aumentada al endotelio vascular por PMN, fagocitosis
mejorada por PMN, supervivencia aumentada de PMN en sitios de inflamacin, de granulacin
aumentada en PMN y liberacin de metabolitos reactivos de oxigeno mediada por PMN aumentada. IL1 y IL-1b puede ejercer efectos inmunomodulatorios en PMN, llevando a priming mejorado y
activacin, y por ende estas citosinas producidas por PMN pueden tambin contribuir a la patognesis
de la enfermedad observada durante respuesta inmune no regulada. Ciertamente ha sido previamente
reportado que tanto TNFa como IL1b estn implicados como importantes mediadores en la iniciacin y
perpetuacin de la inflamacin intestinal asociada con IBD. En adicin, los PMN perifricos de
individuos con IBD secretan cantidades aumentada de TNFa y IL-1b comparados con PMN de voluntarios
normales, sugiriendo que estos PMN tienen una habilidad mejorada para inducir el reclutamiento,
activacin, y supervivencia prolongada en sitios de inflamacin de otros PMN, sugiriendo un importante
rol en la perpetuacin de la respuesta inflamatoria en IBD.
Mediadores inflamatorios no-citosinas producidos por PMN
En adicin a las citosinas, PMN produce otros mediadores inflamatorios no-citosinas relevantes a la
patognesis de IBD, muchos de los cuales son mencionados ms abajo. Los pptidos neutrfilos
humanos (HNP) 1-4, conocidos tambin como alfa defensinas, son ricos en cistenas, pptidos
catinicos antimicrobianos responsables de la muerte dependiente de oxigeno de microorganismos.
Estos pptidos constituyen 30-50% del contenido proteico total de los grnulos azurofilicos de PMN. Ha
sido previamente reportado que las concentraciones de plasma de HNP 1-3 estn significativamente
elevados en individuos con IBD activa comparada con controles saludables. Adems, HNP 1-3 son
secretados por PMN en la lmina propia y abscesos crpticos de mucosa con IBD activa pero no en la
lmina propia de tejido normal mucoso. Esta secrecin de alfa defensinas en el tejido mucoso
intestinal inflamado por PMN activados tiene implicaciones en la perpetuacin de la respuesta
inflamatoria asociada con IBD. Estos son particularmente cierto pues HNP tiene potentes quimio
tcticos potenciales para macrfagos, clulas dendrticas y linfocitos T. En adicin estimulaciones
mediadas por alfa-defensina de produccin de IL 8 por clulas epiteliales ha sido reportada. Esto
llevara a un reclutamiento continuo de ms PMN a sitios de inflamacin intestinal.
PMN tambin producen y secretan calprotectinas, una protena que se une al calcio y al zinc y
constituye 40-60% del total del contenido proteico citosolico de neutrfilos maduros, PMN es por tanto
la fuente principal de calprotectinas que son secretadas al tejido en altas concentraciones durante la
inflamacin intestinal de la mucosa tal y como ocurre durante la IBD. En adicin a tener efectos
antimicrobianos y antiproliferativos, la calprotectina, que puede ser usada como un biomarcador para
la IBD activa, tiene otros efectos relevantes a la patologa de la inflamacin. Especficamente, ha sido
reportado que la calprotectina murina tiene actividad quimio tctica potente para PMN y macrfagos y
que mejora receptores carroeros y la expresin de Mac-1 en macrfagos murinos. Es ms, la

activacin mediada por calprotectina de la integrina CD18 de la superficie del PMN y su mejora
subsecuente de integrina de adhesin a fibringenos mediada por PMN tambin ha sido reportada.
Otro mediador relevante en IBD producido por PMN es la serina proteinasa elastasa que es
normalmente reservada en los grnulos azurofilicos de los PMN quiescentes. La activacin de PMN por
activadores potentes tales como el encuentro con bacteria opsonizada puede iniciar la liberacin de
elastasa en la mucosa intestinal. Esta elastasa liberada puede luego contribuir directamente con la
perpetuacin de la inflamacin facilitando la migracin continua de clulas inmunes a travs de los
tejidos, en adicin a actuar indirectamente a travs de la activacin proteoltica y otros mediadores
inflamatorios. Funcionalmente la elastasa es capaz de degrada un amplio rango de protenas
incluyendo colgeno, elastina, fibrina, fibronectina, receptores platelet IIb/IIIa y caderina epitelial. La
deteccin de la elastasa, que puede ser usada como un marcador para PMN activado, es aumentada en
las heces y mucosa intestinal de individuos con IBD. Es ms, recientemente ha sido reportado que la
transmigracin de PMN a travs del epitelio pulmonar induce la escisin de E-cadherina asociada con la
sobrerregulacin de sealizacin de B-catenina. Tambin ha sido reportado que la secrecin de elastasa
correlaciona tanto con el ndice de actividad de la enfermedad de Chron como la actividad numrica en
colitis ulcerativa. En adicin, la terapia anti-elastasa mejora la actividad de la enfermedad en colitis
inducida tanto por DSS como por TNBS en ratas, sugiriendo un rol para esta proteinasa producida por
PMN en mediar los efectos de la colitis in vivo.
Se conoce tambin que los PMN producen y secretan azurocidin 1, tambin conocido como protena de
unin a heparina (HBP) y protena catinica antimicrobiocidal 37 (CAP37), un microbiocida
multifuncional de unin a heparina guardado principalmente en los grnulos primarios de PMN.
Azurocidin es un miembro bsico de la familia serprocidin de homlogos de serina proteasa, que
incluye a las elastasas glicoproteicas, catepsina G, y proteinasa 3. Juntas estas protenas representan
el mayor constituyente de los grnulos azurofilos en PMN. Azurocidina 1 pueden contribuir al ciclo de
inflamacin caracterstico de IBD pues es un potente quimio atrayente de monocitos y a su vez, un
quimio atrayente menos efectivo de PMNs. En adicin, azurocidin 1 activa una liberacin mejorada de
citosinas asociadas a IBD incluyendo TNF-a y IL-6 de monocitos as como iniciando una activacin de
macrfagos aumentada.
Recientemente, los PMN han sido observados sintetizando lipocalina humana (HNL), una protena
principalmente almacenada en los grnulos secundarios de PMN. Ha sido sugerido que HNL podra
contribuir con la patognesis de IBD pues ha sido reportado que altos niveles de HNL son detectados en
el epitelio colonico de individuos con colitis ulcerativa pero no en voluntarios sanos normales. Tambin
ha sido reportado que HNL es secretada por PMN simultneamente con metalloproteinasa 9 pro matriz
y que HNL puede activar estas MMPs latentes incluyendo MMP9/gelatinasa B, en una concentracin
dependiente resultando en la generacin de enzimas cataliticamente competentes. Muchas MMPs
incluyendo MMP9 han sido reportadas como sobre reguladas, tanto en modelos animales de colitis como
en individuos con IBD. Es ms, MMP 9 ha sido especficamente implicada con un rol mediando el dao
tisular durante la colitis, se presume que a travs de la inhibicin de la sanacin de heridas.

5. Conclusin
El trafico incontrolado de PMN est implicado con la patognesis de muchos desordenes inflamatorios
de la mucosa incluyendo IBD. En adicin a la reduccin de la integridad de la barrera epitelial
intestinal causada por el influjo incontrolado de PMN y el dao fsico al epitelio causado por
metabolitos reactivos derivados de PMN, PMN tambin funciona como una clula efectora pro
inflamatoria importante capaz de secretar mediadores que influencian otras clulas inmunitarias
cercanas, demorando la restitucin de la barrera y fomentando la disfuncin epitelial y las heridas de

la mucosa asociadas con IBD. Por ende, un entendimiento aumentado del reclutamiento de PMN y sus
funciones en el ambiente inflamatorio representan importantes objetivos para acercamientos
farmacuticos dirigidos a mejorar las consecuencias de la inflamacin no regulada en IBD.