Antgeno HLA-B27, pesquisa PCR

Comentrios
Os antgenos HLA so produtos dos genes do complexo maior de histocompatibilidade. Alguns destes
antgenos esto relacionados presena de determinadas doenas. A associao mais freqente a da
espondilite anquilosante com o antgeno HLA-B27, que est presente em mais de 90% dos indivduos de
raa branca acometidos por essa doena. A pesquisa tambm indicada para identificar risco do
acometimento de descendentes. Elevada incidncia do antgeno HLA-B27 tem sido relatada na sndrome de
Reiter, uvete anterior, artrite reativa e artrite psoritica. Este antgeno no um marcador da doena, uma
vez que est presente em aproximadamente 10% dos indivduos normais. O resultado deve ser associado
aos achados clnicos e radiolgicos sugestivos destas doenas. As vantagens da PCR sobre a citometria de
fluxo incluem interpretao objetiva e maior especificidade (a citometria de fluxo pode apresentar reao
cruzada com o HLA-B7, HLA-B37 e HLA-B39).
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
5,0mL de sangue total (ACD/EDTA).
Laboratrios
Colher em tubo estril. No colher em heparina.
Conservao para envio
At 4 dias entre 2o e 8oC ou em temperatura ambiente. No congelar.

Chlamydophila pneumoniae, pesquisa PCR

Comentrios
A C. pneumoniae causadora de pneumonia atpica. A apresentao mais comum de um infiltrado
intersticial localizado ou difuso. O curso pode ser arrastado, com boa evoluo, ou fulminante, evoluindo com
insuficincia respiratria. Os testes sorolgicos auxiliam a selar o diagnstico de forma retrospectiva. A
cultura apresenta baixa sensibilidade. A PCR um teste rpido, com sensibilidade de 82,5% e especificidade
de 99%.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase do gene 16 sRNA.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
Swab de orofaringe; escarro; lavado broncoalveolar; aspirado de nasofaringe; lquido pleural ou bipsia de
pulmo.
Laboratrios
Swab de orofaringe: colher em kit prprio de PCR ou meio de transporte rosa (Dulbeccos).
Tecidos: conservar em etanol e congelar imediatamente.
Demais materiais: colher em tubo ou frasco estreis.
Conservao para envio
Lquido pleural e swab: refrigerar at 24 horas.
Tecido: enviar em gelo seco.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Chlamydia trachomatis, pesquisa PCR

Comentrios
As clamdias so bactrias intracelulares obrigatrias, desenvolvendo-se na clula hospedeira e formando
incluses citoplasmticas. A C. trachomatis responsvel por infeces sexualmente transmissveis
(uretrites e cervicites), podendo evoluir, quando no tratadas, para infeces profundas (epididimite,
salpingite, peri-hepatite ou esterilidade tubria). tambm responsvel por conjuntivites e pneumonia no
recm-nascido. Pode apresentar-se de forma assintomtica em 70% das mulheres e 30% dos homens. A
PCR til na deteco rpida das infeces em diversos stios pela Chlamydia trachomatis. Tem
sensibilidade e especificidade superiores cultura e imunofluorescncia direta. Uma de suas principais
vantagens a possibilidade de ser realizada em amostra de urina. De acordo com o CDC (Centro de
Controle e Preveno de Doenas) a PCR considerada o teste de escolha para este diagnstico.
Veja tambm Doenas sexualmente transmissveis, PCR.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: Este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
20mL de urina do 1o jato (homem/mulher); raspado uretral (homem/mulher); endocervical (mulher); secreo
conjuntival; raspado retal; esperma; lquido sinovial.
- Amostras uretrais: no urinar pelo menos 1 hora antes da coleta.
- Urina: no urinar por pelo menos 4 horas antes da coleta.
- Endocervical: a mulher no pode estar menstruada.
Laboratrios
Para amostras de raspado uretral e endocervical necessrio kit especial com swab apropriado e meio de
transporte. Para amostra de urina, colher em frasco estril.
Conservao para envio
- Swab: at 10 dias em temperatura ambiente.
- Urina: at 7 dias entre 2o e 8oC.

Citomegalovrus, PCR qualitativa

Comentrios
O Citomegalovrus (CMV) um DNA vrus, pertencente famlia Herpesviridae. Em adultos saudveis, o
CMV em geral assintomtico, e, s vezes, pode determinar quadro clnico semelhante mononucleose
infecciosa. encontrado na saliva, urina e outros fluidos corpreos como o smen e secreo vaginal. A
importncia da infeco pelo CMV maior quando ocorre a transmisso da gestante para o feto.
Manifestaes graves podem ocorrer quando o CMV adquirido ou se reativa em pacientes
imunossuprimidos (transplante, AIDS). A PCR til nas seguintes situaes:
- Meningoencefalite ou outras alteraes neurolgicas: a PCR pode ser realizada no lquor com
sensibilidade que varia de 80% a 92% e especificidade de 98%.
- Diagnstico pr-natal: quando a gestante apresenta um quadro de infeco aguda e pretende-se afastar a
possibilidade de infeco intra-uterina por meio da PCR no lquido amnitico.
- Infeco do recm-nascido: a deteco do CMV na urina ou sangue de RN nas trs primeiras semanas de
vida define a infeco congnita. A sensibilidade e especificidade so de 98% e 100%, respectivamente.
- Infeco localizada em rgo-alvo: a PCR pode ser realizada em lquidos corporais ou material de bipsia
de leses ou rgos suspeitos.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Aninhada (Nested PCR) do gene IE do CMV.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
20mL de urina; 5,0mL de sangue total (EDTA); 0,5mL de lquor; 10mL de lquido amnitico; 250mg de
material de bipsia; 3,0mL de lavado brnquico/alveolar ou outros fluidos orgnicos.
(continua)

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
- Lquor e lquido amnitico: refrigerar overnight.
- Lavado brnquico/alveolar: refrigerar.
- Sangue total: enviar em temperatura ambiente.
- Tecido: congelar imediatamente e enviar em gelo seco. No enviar em formol.
- Urina: at 7 dias entre 2o e 8o C. No congelar.
Limitaes do teste
- Por ser um mtodo qualitativo no distingue infeco aguda da reativao de uma forma latente.
- A presena de pequenas quantidades de DNA do CMV no sangue perifrico (aps o perodo neonatal) no
est associada presena de doena. Para essa finalidade recomenda-se mtodo quantitativo, como por
exemplo, a antigenemia p65.
- Reaes falso-negativas ocorrem quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de deteco
do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Dengue, PCR qualitativa e tipagem

Comentrios
O Dengue, uma doena infecciosa aguda causada por um flavivrus transmitido atravs da picada do
mosquito vetor Aedes aegypti. Aps a transmisso, existe um perodo de incubao de dois a sete dias.
Existem quatro sorotipos causadores de dengue, que no oferecem proteo cruzada entre si (den1, den2,
den3 e den4). Os principais sintomas da doena so febre, calafrios, mialgia e cefalia. As crianas
apresentam formas mais leves da doena, sendo assintomticas em 80% dos casos. Em determinadas
situaes, a evoluo pode dirigir-se para a forma hemorrgica, que raramente ocorre na infeco primria.
mais comum na reinfeco, geralmente quando o agente o den2 ou den3. A confirmao do diagnstico
de dengue pode ser realizada atravs de exames sorolgicos (ELISA) ou da PCR (polymerase chain
reaction). Como a sorologia (anticorpos circulantes IgM) comea a ser reativa do quarto ao oitavo dia de
doena, a PCR til durante o perodo de viremia, em geral desde imediatamente antes de surgirem os
sintomas at o stimo dia da infeco. possvel realizar a genotipagem e definir o sorotipo do vrus da
dengue, atravs da utilizao de iniciadores (primers) especficos.
Mtodo
Transcrio Reversa e Reao em Cadeia da Polimerase aninhada com primers especficos.
Condio
1,0mL de soro ou plasma (EDTA).
Laboratrios
Este exame depende da antigenemia do vrus, qualitativo e deve ser pedido na fase aguda da viremia, de
preferncia nos primeiros 5 dias de evoluo. Coleta em frasco estril.
Conservao para envio
At 72 horas a - 4oC (enviar em gelo seco).
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas ocorrem quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de deteco do
teste, aps 10 dias do incio dos sintomas ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Doenas sexualmente transmissveis, PCR multiplex

C. trachomatis - N. gonorrhoeae - U. urealyticum - M. genitalium - M. hominis
Comentrios
A PCR multiplex capaz de detectar, em uma nica reao, a maioria das bactrias associadas s infeces
do trato genital: C. trachomatis, N. gonorrhoeae, M. hominis, M. genitalium e U. urealyticum. de grande
valia no diagnstico diferencial das uretrites e cervicites. As Doenas Sexualmente Transmissveis (DST)
esto entre as cinco principais causas de procura por servios de sade e quando no tratadas podem levar
a doenas inflamatrias da pelve, infertilidade e gravidez ectpica. A PCR multiplex pode ser realizada em
urina de primeiro jato, sendo tcnica mais rpida e sensvel que os mtodos convencionais.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex Multiplex PCR.
(continua)

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Valor de referncia
Negativo.
Condio
50mL de urina do 1o jato da manh; secreo uretral ou secreo endocervical.
- Amostras uretrais: no urinar pelo menos 1 hora antes da coleta.
- Urina: no urinar por pelo menos 4 horas antes da coleta.
- Endocervical: a mulher no pode estar menstruada.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
At 3 dias da coleta entre 2o e 8oC.

Epstein-Barr, PCR qualitativo

Comentrios
A infeco pelo Vrus Epstein-Barr (EBV) extremamente comum. Nos adolescentes e adultos jovens, a
infeco primria caracterizada pelo quadro de mononucleose infecciosa. O EBV pertence famlia
Herpesviridae, infectando clulas epiteliais da nasofaringe e linfcitos B que espalham o vrus pelo
organismo. Cerca de 90% dos infectados evoluem para infeco crnica e complicaes podem estar
associadas ao EBV nestes casos: leucoplasia pilosa, carcinoma de nasofaringe, desordens
mieloproliferativas, linfomas ps-transplantes, linfomas do sistema nervoso central, linfomas de clulas T e
doena de Hodgkin. A PCR um dos mtodos mais sensveis para a deteco do genoma viral. A PCR no
soro ou plasma, em conjunto com o painel de sorologia, til como teste confirmatrio da infeco, uma vez
que parte dos pacientes no apresenta anticorpos heteroflicos e a IgM VCM tem carter transitrio. Na
Doena Linfoproliferativa Ps-Transplante (PTLD), onde encontramos tumores relacionados ao EBV, o DNA
do EBV pode ser detectado no soro 7 a 50 dias antes do aparecimento dos tumores. Em pacientes HIV
positivos com linfadenopatia generalizada persistente, a presena de DNA do EBV srico apresenta risco
aumentado de desenvolvimento do linfoma. A deteco do EBV DNA no lquor uma abordagem prtica e
alternativa sorologia ou cultura para pacientes com complicaes no SNC, que ocorrem em 1% dos
casos, podendo ser a nica manifestao clnica da infeco pelo EBV. No lquor, a PCR positiva em
pacientes com AIDS e leses focais cerebrais um forte indicador de linfoma cerebral. O DNA do EBV pode
ser encontrado em tecidos de diversos tumores malgnos e bengnos, incluindo linfomas, carcinoma
nasofarngeo e carcinoma gstrico.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
1,0mL de lquor; 1,0mL de plasma (EDTA) ou 250mg de material de bipsia.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
Lquor: refrigerar overnight.
Tecido: congelar imediatamente e enviar em gelo seco. No enviar em formol.
Plasma: at 3 dias a - 4C.

Gene CCR-5, pesquisa da deleo

Comentrios
A presena de deleo homozigota do gene CCR-5 leva resistncia infeco pelo HIV-1 por cepas
macro/monocitotrpicas. A deleo heterozigota est relacionada com um melhor prognstico no paciente
infectado.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Ausncia de deleo no gene CCR-5.
(continua)

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Condio
10,0mL de sangue total (EDTA).
Laboratrios
Enviar em frasco estril.
Conservao para envio
At 72 horas em temperatura ambiente ou refrigerada entre 2o e 8o C.

Helicobacter pylori, PCR qualitativa

Comentrios
O Helicobacter pylori (HP) uma bactria Gram negativa espiralada que coloniza a mucosa gstrica. A
infeco pelo HP adquirida pela ingesto oral da bactria e transmitida principalmente entre familiares na
primeira infncia. Baixos nveis scio-econmico e sanitrio esto associados ao aumento da prevalncia da
infeco. H significante evidncia de que o HP est associado etiologia da doena ulcerosa, ao cncer
gstrico e ao linfoma MALT (Tecido Linfide Associado Mucosa) gstrico. A PCR pode ser usada para o
diagnstico preciso da infeco por HP e no requer que a bactria esteja viva quando testada. Esta tcnica
permite ainda identificar as cepas Cag A positivas que esto associadas a um maior risco de
desenvolvimento de adenocarcinoma gstrico. Outra vantagem do uso da PCR est na anlise do suco
gstrico, apresentando 96% de sensibilidade e 100% de especificidade no diagnstico da infeco por HP.
Para controle de cura de erradicao, dever ser solicitado 3 meses aps a teraputica antimicrobiana.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex - Multiplex PCR (amplificao de quatro regies diferentes do
DNA: Cag A, Flagelina, Urea C e 16S RNA).
Nota
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo do limite de deteco do
teste ou na presena de inibidores de PCR na amostra.
Condio
Material de bipsia: colher em tubo ou frasco estril, imerso em lcool a 70%. No enviar em formol.
Congelar e enviar em gelo seco.
Suco gstrico: colher 5mL, em tubo ou frasco estril, refrigerar e enviar em at 24 horas.
Conservao para envio
Material de bipsia: congelar imediatamente. Enviar em gelo seco.
Suco gstrico: at 24 horas entre 2o e 8oC.

Hepatite B, PCR qualitativa

Comentrios
A hepatite B causada por um vrus envelopado de DNA circular, da famlia Hepadnaviridae. Cerca de 10%
das infeces pelo HBV tornam-se crnicas, variando o quadro clnico desde o estado de portador
assintomtico hepatite crnica ativa, que pode evoluir para a cirrose heptica e cncer hepatocelular. A
pesquisa de DNA do HBV no soro o marcador mais sensvel na avaliao de infectividade e replicao viral
em pacientes portadores crnicos. Poder ser utilizada nos casos de positividade isolada do Anti-HBc
(HBsAg e Anti-HBs negativos) indicando a presena de infeco oculta em caso de positividade. Outra
aplicao seria a deteco de mutantes do envelope, em regio conhecida como determinante a (pacientes
com infeco ativa pelo vrus B e HBsAg negativos). Para monitorizao de tratamento anti-viral
recomendado o uso da PCR quantitativa.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Nota
A presena de um resultado negativo no descarta a possibilidade de inibidores na amostra ou viremia
abaixo do limite de deteco do teste (sensibilidade: 200 cpias/mL de soro).
(continua)

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Condio
1,0mL de soro.
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo de vacutainer ou seringa estril. Centrifugar a 1.800r.p.m., por 10 minutos.
Aliquotar assepticamente 1,0mL de soro em frasco estril. Congelar imediatamente e enviar no gelo.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Hepatite B, bDNA (quantitativo)

Comentrios
til na seleo dos pacientes candidatos ao tratamento anti-viral para avaliao do prognstico (alto grau de
atividade inflamatria e menor carga viral possuem maior chance de resposta ao tratamento) e
acompanhamento da resposta teraputica dos pacientes portadores crnicos do HBV. Pode ser utilizada
para deteco de replicao viral em pacientes HBsAg positivos com mutao pr-core (HBeAg negativos,
anti-HBe positivos e com persistncia da viremia). Valores acima de 100.000 cpias/mL so considerados
significativos de replicao viral. Nveis abaixo de 10.000 cpias/mL podem ser detectados em qualquer fase
da doena, mesmo na convalescncia.
Mtodo
Tcnica de DNA ramificado Amplificao do sinal.
Valor de referncia
No detectvel.
O valor mnimo quantificvel de 2.000 cpias de DNA viral/mL.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
1,0mL de soro ou plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril com EDTA.
Centrifugar a 1.800r.p.m., por 20 minutos. Aliquotar assepticamente 1,0mL de soro ou plasma, em frasco
estril. Congelar imediatamente e enviar em gelo seco. Enviar em frasco estril ou solicitar kit.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Hepatite B, PCR quantitativa

Comentrios
til tambm na seleo dos pacientes candidatos ao tratamento anti-viral para avaliao do prognstico (alto
grau de atividade inflamatria e menor carga viral possuem maior chance de resposta ao tratamento) e
acompanhamento da resposta teraputica dos pacientes portadores crnicos do HBV. Pode ser utilizada
para deteco de replicao viral em pacientes HBsAg positivos com mutao pr-core (HBeAg negativos,
anti-HBe positivos e com persistncia da viremia). Valores acima de 100.000 cpias/mL so considerados
significativos de replicao viral. Nveis abaixo de 10.000 cpias/mL podem ser detectados em qualquer fase
da doena, mesmo na convalescncia.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
No detectvel.
O valor mnimo quantificvel de 1.000 cpias de DNA viral/mL.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
1,0mL de soro ou plasma (EDTA/ACD).
(continua)

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo de vacutainer ou seringa estril. Centrifugar a 1.800r.p.m., por 10
minutos. Aliquotar assepticamente 1,0mL de soro ou plasma em frasco estril. Congelar imediatamente e
enviar no gelo.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Hepatite B, teste de resistncia aos antivirais

Comentrios
Indicado para avaliao do paciente que no est respondendo ao tratamento com a lamivudina, ajudando a
guiar possveis decises teraputicas contra o HBV. O surgimento de mutaes no gene da DNA polimerase
do HBV levam resistncia a estes anti-virais, permitindo o reaparecimento do DNA do vrus no soro,
principalmente em indivduos submetidos a uma terapia prolongada. As mutaes associadas resistncia
ao tratamento anti-viral so:
Mutao L528M: a substituio do aminocido leucina (L) pela metionina (M) na posio 528 na protena
da DNA polimerase leva a reduo de 18 vezes da sensibilidade lamivudina.
Mutao na regio YMDD da DNA polimerase (posio 552):
- Mutao M552V: a substituio da metionina (M) pela valina (V) na posio 552, leva a uma reduo de
150 a 300 vezes da sensibilidade lamivudina.
- Mutao M552I: a substituio da metionina (M) pela isoleucina (I) na posio 552 est relacionada com
uma resistncia lamivudina bastante acentuada, com reduo de cerca de 10.000 vezes da sensibilidade.
Mtodo
Amplificao do gene da DNA polimerase do HBV utilizando a reao em cadeia da polimerase (PCR) e
anlise com enzima de restrio (RFLP). um teste rpido e sensvel, capaz de estabelecer precocemente o
diagnstico de resistncia gentica s drogas.
Condio
2,0mL de soro.
Conservao para envio
At 5 dias a -4oC.
Laboratrios
Colher em tubo estril ou prprio para PCR.
Limitaes do teste
necessria uma carga viral suficiente para a realizao do teste ( 1.000 cpias/mL) nos ltimos 60 dias.

Hepatite C, genotipagem
Comentrios
O vrus da hepatite C (HCV) apresenta alta variabilidade gentica, o que leva a uma grande heterogeneidade
em suas seqncias de nucleotdeos. Baseado em estudos de seqenciamento gentico, o HCV foi
classificado em seis gentipos maiores e vrios subtipos designados como: 1a, 1b, 1c, 2a, 2b, 2c, 3a, 3b, 4, 5 e
6. Portadores do vrus do gentipo 1, principalmente o 1b, apresentam doena mais grave e pior resposta ao
tratamento com interferon. Sendo assim, a genotipagem do HCV auxilia no prognstico e conduta teraputica
do paciente com infeco crnica. necessria uma carga viral superior a 1.000UI/mL para que esse exame
possa ser realizado. Amostras com quantidades inferiores sensibilidade do teste podem no apresentar
partculas virais suficientes para a amplificao e anlise do gene do HCV e o resultado ser liberado como
inconclusivo.
Mtodo
Transcrio Reversa, Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) e anlise dos fragmentos aps digesto com
enzimas de restrio (RFLP).
Condio
2,0mL de soro ou plasma (EDTA, ACD).
Laboratrios
O sangue venoso deve ser colhido em tubo PPT-vacutainer ou seringa estril. Deixar coagular em temperatura
ambiente durante 20 minutos e centrifugar a 1.800r.p.m., por 10 minutos. Aliquotar 2,0mL de soro
assepticamente, em frasco estril. Congelar imediatamente. Enviar em gelo seco o mais rpido possvel,

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

juntamente com um resultado quantitativo por uma das tcnicas de amplificao de cido nucleico ou um PCR
qualitativo.
Nota
A quantificao viral dever ser pedida em conjunto, caso o cliente ainda no tenha feito nenhum estudo prvio
por mtodo de biologia molecular. A genotipagem ser feita na dependncia do resultado da quantificao.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Hepatite C, PCR qualitativa

Comentrios
O HCV o principal agente das hepatites no-A no-B. um vrus RNA pertencente famlia Flaviviridae. A
infeco aguda freqentemente inaparente e cronifica-se em cerca de 50% a 60% dos casos, podendo
evoluir para hepatite crnica. Eventualmente, pode progredir para a cirrose heptica e carcinoma
hepatocelular. A realizao do PCR qualitativo indicada para:
- Confirmar a presena da infeco ativa (com replicao viral) pelo HCV, aps um resultado sorolgico
indeterminado ou positivo (pesquisa de anticorpo anti-HCV), conforme o algoritmo abaixo.
- Fazer o diagnstico da infeco pelo HCV em pacientes imunodeprimidos (HIV, transplante) que podem
permanecer soronegativos.
- Detectar a presena do vrus precocemente, a partir da 1a a 2a semana aps a exposio.
- A sensibilidade do PCR HCV qualitativo de 50 UI/mL
Mtodo
Transcrio Reversa e Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs.: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
1,0mL de soro ou plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
Enviar no gelo o mais rpido possvel. O sangue deve ser colhido em tubo vacutainer (PPT ou convencional)
ou seringa estril com EDTA. Deixar coagular em temperatura ambiente durante 20 minutos e centrifugar a
1.800r.p.m., por 10 minutos. Aliquotar 1,0mL de soro ou plasma assepticamente, em frasco estril. Congelar
imediatamente. Enviar em gelo seco.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.
anti-HCV
POSITIVO

Realizar a PCR
qualitativa

POSITIVA

Paciente tem
infeco pelo HCV

NEGATIVA

Recuperao da
infeco pelo HCV

anti-HCV
falso-positivo

Considerar reao
falso-negativa

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Hepatite C, bDNA (quantitativo)

Comentrios
Exame til para determinar a carga viral para avaliao da resposta teraputica e acompanhamento do
paciente infectado pelo HCV. Valores iguais ou superiores a 800.000UI/mL (carga viral alta) so
considerados como preditores de pior prognstico. O valor mnimo quantificvel de 615UI/mL.
Mtodo
Tcnica de DNA ramificado Amplificao do sinal.
Valor de referncia
No detectvel.
Obs.: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
1,0mL de soro ou plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril com EDTA. No caso
de soro, deixar coagular em temperatura ambiente durante 20 minutos e centrifugar a 1.800r.p.m., por 20
minutos. Aliquotar assepticamente 1,0mL de soro ou plasma, em frasco estril. Congelar imediatamente e
enviar em gelo seco. Enviar em frasco estril ou solicitar KIT.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Hepatite C, PCR quantitativa

Comentrios
Exame tambm til para determinar a carga viral para avaliao da resposta teraputica e acompanhamento do
paciente infectado pelo HCV. Valores iguais ou superiores a 800.000UI/mL (carga viral alta) so considerados
como preditores de pior prognstico. O valor mnimo quantificvel de 600 UI/mL.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR).
Valor de referncia
No detectvel.
Obs.: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
1,0mL de soro ou plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
Enviar no gelo o mais rpido possvel. O sangue deve ser colhido em tubo vacutainer (PPT ou convencional) ou
seringa estril com EDTA. No caso de soro, deixar coagular em temperatura ambiente durante 20 minutos e
centrifugar a 1.800r.p.m., por 10 minutos. Aliquotar 1,0mL de soro ou plasma assepticamente, em frasco estril.
Congelar imediatamente. Enviar em gelo seco.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Instituto Hermes Pardini X Biologia Molecular

Hepatite C, qualitativo por TMA

Comentrios
O HCV o principal agente das hepatites no-A no-B. um vrus RNA pertencente famlia Flaviviridae. A
infeco aguda freqentemente inaparente e cronifica-se em cerca de 50% a 60% dos casos, podendo
evoluir para hepatite crnica. Eventualmente, pode progredir para a cirrose heptica e carcinoma
hepatocelular. A realizao do TMA indicada para:
- Confirmar a presena da infeco ativa (com replicao viral) pelo HCV, aps um resultado sorolgico
indeterminado ou positivo (pesquisa de anticorpo anti-HCV).
- Fazer o diagnstico da infeco pelo HCV em pacientes imunodeprimidos (HIV, transplante) que podem
permanecer soronegativos.
- Detectar a presena do vrus precocemente, a partir da 1a a 2a semana aps a exposio.
- A sensibilidade do HCV TMA de 6 UI/mL.
Mtodo
Amplificao Mediada por Transcrio TMA.
Valor de referncia
Negativo.
Obs.: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
2,0mL de soro ou plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
Enviar no gelo o mais rpido possvel. O sangue deve ser colhido em tubo vacutainer (PPT ou convencional)
ou seringa estril com EDTA. Deixar coagular em temperatura ambiente durante 20 minutos e centrifugar a
1.800r.p.m., por 10 minutos. Aliquotar 2,0mL de soro ou plasma assepticamente, em frasco estril. Congelar
imediatamente. Enviar em gelo seco.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

Herpesvrus Simples 1 e 2, PCR e genotipagem

Comentrios
Os Vrus Herpes Simples (HSV) do tipo 1 e 2 esto relacionados a uma grande variedade de manifestaes
clnicas, variando desde uma estomatite leve at doena fatal. A encefalite e o herpes neonatal so fatais em
70% dos casos, com seqelas neurolgicas na maioria dos sobreviventes. As leses mucocutneas podem
ser graves e de evoluo prolongada no paciente imunocomprometido. Como o tratamento anti-viral pode
alterar o curso da infeco pelo HSV, o diagnstico precoce de extrema importncia. Na encefalite
herptica a PCR apresenta sensibilidade de 98% e a especificidade de 99%, sendo, atualmente, o mtodo
padro-ouro recomendado para o seu diagnstico. A PCR tambm til na suspeita de herpes neonatal
(lquor, aspirado nasofarngeo) e na presena de leses cutneas de etiologia indefinida ou durao
prolongada.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Aninhada - Nested PCR. Tipagem (discriminao entre o HSV do tipo 1 e
o do tipo 2 atravs da utilizao de primers especficos para cada vrus).
Valor de referncia
Negativo.
Condio
0,5mL de lquor; 5,0mL de sangue total (EDTA); 10,0mL de lquido amnitico; raspado da leso (colher em
kit Digene); 250mg de material de bipsia no kit Digene ou imerso em etanol a 70%.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Condies de envio
Lquor e lquido amnitico: refrigerar overnight.
Sangue total: enviar em temperatura ambiente.
Tecidos: congelar imediatamente e enviar em gelo seco. No enviar em formol.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

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HIV, bDNA (quantitativo)

Comentrios
A verso 3.0 do bDNA apresenta boa correlao (97,6%) com a PCR e o NASBA. Apresenta alta
sensibilidade, sendo o valor mnimo quantificado de 50 cpias de RNA do HIV-1 por mililitro. capaz de
detectar com a mesma preciso todos os subtipos do HIV-1. a tcnica utilizada pela Rede Pblica em
Minas Gerais.
Mtodo
DNA ramificado ou branched DNA (bDNA).
Valor de referncia
Negativo.
Condio
5,0mL de plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo Vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril com EDTA.
Centrifugar a 1.800r.p.m., por 20 minutos, no mximo de 4 horas aps a coleta. Aliquotar assepticamente
5,0mL de plasma em frasco estril. Congelar imediatamente e enviar no gelo seco. Enviar em frasco estril
ou solicitar o kit fornecido pelo laboratrio.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

HIV, NASBA (quantitativo)

Comentrios
O NASBA o teste aprovado pelo Ministrio da Sade e utilizado na Rede Pblica para o acompanhamento
de pacientes infectados pelo HIV-1. Apresenta grande sensibilidade, sendo capaz de detectar at 80 cpias
de RNA do HIV-1/mL.
Mtodo
NASBA - Nucleic Acid Sequence Based Amplification.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
5,0mL de plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo Vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril com EDTA/ACD.
Centrifugar a 1.800r.p.m., por 20 minutos, no mximo de 4 horas aps a coleta. Aliquotar assepticamente
2,5mL de plasma em 2 frascos estreis. Congelar imediatamente e enviar no gelo seco. Enviar em frasco
estril ou solicitar o kit fornecido pelo laboratrio.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

HIV, PCR qualitativa (diagnstico)

Comentrios
O HIV-1 um vrus RNA, que infecta clulas que apresentam a molcula CD4 expressa na sua superfcie
(linfcitos T helper e moncitos). A infeco apresenta aspecto crnico e progressivo sendo caracterizada
por severa imunodeficincia associada a infeces oportunistas, desenvolvimento de tumores,
especialmente sarcoma de Kaposi, e envolvimento do sistema nervoso, que caracterizam a Sndrome da
Imunodeficincia Adquirida (SIDA). A PCR qualitativa do HIV-1 til para:
- Detectar o HIV-1 antes da soroconverso (perodo de janela imunolgica, que tem durao, em geral, de 3
a 8 semanas aps o contato inicial);
- Esclarecer um Western blot indeterminado e avaliar a presena desta infeco em crianas nascidas de
mes sabidamente infectadas pelo HIV-1.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
(continua)

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Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Nota
A presena de um resultado negativo no descarta a possibilidade de inibidores na amostra ou viremia
abaixo do limite de deteco do teste (sensibilidade: 10 cpias/mL de soro).
Condio
2 frascos com 5,0mL de sangue total (EDTA).
Laboratrios
Enviar as amostras em temperatura ambiente. As amostras devem ser processadas at, no mximo, 72
horas aps a coleta. Enviar em frascos estreis.
Conservao para envio
At 72 horas entre 2o e 8oC. No congelar.

HIV, PCR quantitativa

Comentrios
A quantificao da carga viral pode ser utilizada com o objetivo de:
Estabelecer o prognstico de um indivduo (tempo de progresso para AIDS). Sabe-se que quanto maior
o nvel do RNA do HIV, maior a destruio de clulas CD4.
Tabela 1: Relao entre a carga viral e progresso para AIDS.
Carga viral
(cpias de RNA/mL de plasma)
> 36.000
13.000 36.000
4.000 13.000
< 4.000

AIDS aps 5 anos de

infeco
62%
49%
26%
8%

Tempo mdio (em anos) de

desenvolvimento da AIDS
3,5
5,5
7,7
> 10

Determinar o incio do tratamento anti-retroviral.

Avaliar a eficcia das drogas anti-retrovirais. Uma mudana de tratamento dever ser considerada se:
- No h queda de pelo menos 0,5 a 0,75log na carga viral, aps um ms de tratamento.
- No h queda para nveis indetectveis (menor que 50 cpias/mL) em 4 a 6 meses.
- Aumento da carga viral aps manter nveis indetectveis, sugerindo resistncia aos anti-retrovirais.
- Queda contnua do nmero de linfcitos CD4 (>25%).
- Deteriorao clnica.
Obs: 1. Oscilaes entre dois resultados de exame de carga viral menores do que 0,5log10
(aproximadamente 3 vezes) no so consideradas significativas do ponto de vista clnico.
2. Vrios fatores podem influenciar a variao do RNA do HIV no plasma. As mais comuns decorrem
de ativao do sistema imune (infeces intercorrentes ou imunizaes).
Mtodo
Transcrio Reversa e Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo. O valor mnimo quantificvel de 400 cpias de RNA viral/mL de plasma para um menor valor
de deteco, solicitar o mtodo ultrassensvel.
Nota: devido a variaes individuais e metodologias do teste, apenas variaes maiores que 0,5 log no
nmero de cpias de RNA viral/mL devem ser consideradas para decises teraputicas.
Este exame pode apresentar resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma caracterstica do mtodo.
Condio
1,0mL de plasma (EDTA).
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo Vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril com EDTA.
Centrifugar a 1.800r.p.m., por 20 minutos. Aliquotar assepticamente 1,0mL de plasma em frasco estril.
Congelar imediatamente e enviar no gelo seco. Enviar em frasco estril ou solicitar kit.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4OC.

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HIV, PCR quantitativa ultra-sensvel

Comentrios
A realizao deste exame est indicada para acompanhar a resposta teraputica aps HIV-PCR quantitativo
negativo ou quando a carga viral atingir valores abaixo de 75.000 cpias/mL. Apresenta sensibilidade de 50
cpias de RNA do vrus/mL de plasma. Pacientes com carga viral menor que 50 cpias/mL tm um
prognstico melhor do que aqueles com valores entre 50 e 400 cpias/mL.
Mtodo
Transcrio Reversa e Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: a faixa de deteco do PCR HIV-1 quantitativo ultra-sensvel varia de 50 a 75.000 cpias do RNA/mL.
Condio
1,5mL de plasma (EDTA/ACD).
Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo Vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril. Centrifugar a
1.800r.p.m., por 20 minutos. Aliquotar assepticamente 1,5mL de plasma em frasco estril. Congelar
imediatamente e enviar no gelo seco.
Conservao para envio
At 5 dias a - 4oC.

HIV, resistncia genotpica aos antivirais

Comentrios
Detecta a presena de mutaes no gene pol do HIV-1, que levam resistncia s drogas utilizadas no
tratamento da infeco crnica, como os inibidores nucleosdeos e no nucleosdeos da transcriptase
reversa, e aos inibidores da protease. Este teste est indicado para: determinar a droga anti-retroviral de
escolha quando o paciente apresenta falncia ao tratamento atual; avaliar o padro do vrus infectante na
fase aguda da infeco pelo HIV; avaliar o padro de resistncia na mulher grvida. Devido ao acmulo de
dados relacionados interpretao dos testes de resistncia aos anti-retrovirais, ser realizada uma
atualizao semestral da tabela de mutaes relacionadas resistncia. Estamos utilizando o sistema de
pontuao das mutaes (mutation score) do Hospital Universitrio de Stanford. O peso de cada mutao foi
determinado atravs de estudos publicados que correlacionavam tratamento e gentipo, gentipo e fentipo
e finalmente, gentipo e evoluo clnica. O laudo de interpretao do resultado apresentar 3 nveis de
resistncia s drogas:
1- Sensvel (0 a 14): o vrus seqenciado no apresenta reduo de susceptibilidade s drogas.
2- Resistncia parcial (15 a 59): a inibio do crescimento in vitro no total. Valores entre 15 e 29
indicam um baixo grau de resistncia e, apesar destes vrus apresentarem reduo da sensibilidade s
drogas in vitro, alguns pacientes portadores destas cepas mostram resposta virolgica sub-tima ao
tratamento.
3- Resistente (60 ou superior): estes vrus apresentam alto grau de resistncia in vitro ou no
apresentaram resposta virolgica durante tratamento com os anti-retrovirais.
Mtodo
Transcrio reversa do RNA do HIV-1, seguida de Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) do gene pol e
seqenciamento gentico do DNA.
Valor de referncia
No foi detectada a presena de resistncia.
Condio
2,0mL de plasma (EDTA/ACD).
Enviar juntamente com a requisio de genotipagem, um resultado de carga viral com menos de 30 dias.
Nota
A quantificao viral dever ser pedida em conjunto, caso o cliente no tenha um resultado recente. A
genotipagem ser feita na dependncia do valor encontrado.
(continua)

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Laboratrios
O sangue deve ser colhido em tubo Vacutainer (PPT ou convencional) ou seringa estril com EDTA.
Centrifugar a 1.800 r.p.m., por 20 minutos. Separar em 2 frascos plsticos estreis e congelar no mximo 4
horas aps coleta. Anotar data da coleta e hora do congelamento nos frascos e na requisio. Enviar em
gelo seco.
Conservao para envio
At 5 dias a - 40C.
Limitaes do teste
necessria uma carga viral suficiente para a realizao do teste ( 1.000 cpias/mL). Tanto os testes
genotpicos quanto os fenotpicos so pouco sensveis a variantes minoritrias, presentes em um percentual
abaixo de 20% do total da populao viral. Como os mtodos analisam os vrus que esto se replicando
ativamente no momento da amostragem, no so detectados vrus resistentes s drogas as quais o paciente
foi exposto no passado. A descontinuao da terapia leva proliferao do tipo selvagem que pode
enganosamente sugerir susceptibilidade.

HPV, Captura Hbrida

HPV Baixo e alto risco
Comentrios
til no diagnstico e acompanhamento da infeco pelo Papilomavrus Humano (HPV). Identifica 18 tipos do
HPV divididos em sondas de baixo e alto risco para neoplasia cervical. Permite a deteco de 1 pg/mL de
DNA-HPV, equivalente a 0,1 cpia de vrus por clula. O resultado considerado positivo quando as
relaes RLU/PCA para os vrus do grupo A (6, 11, 42, 43 e 44) e/ou RLU/PCB para os vrus do grupo B
(16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68) forem iguais ou maiores que 1. A Captura Hbrida contm
sondas gnicas de 70% dos tipos de HPV de baixo risco e 99% dos oncognicos. Valores das relaes
RLU/PCA e/ou RLU/PCB menores que 50, indicando pequeno nmero de cpias virais por clula, podem
significar infeco inicial ou fase de remisso espontnea. Nesses casos, a critrio clnico, sugere-se, antes
de qualquer tratamento, confirmar a presena de infeco ativa com nova coleta aps intervalo de trs
meses. Para aferio da eficcia do tratamento, indica-se colher nova amostra aps trs meses do trmino
da teraputica.

HPV Alto risco

Comentrios
A Captura Hbrida para vrus do grupo B (alto risco) poder ser feita de forma isolada. til no diagnstico e
acompanhamento da infeco pelo Papilomavrus Humano (HPV). Identifica os 13 tipos do HPV de maior
risco para cncer cervical. Permite a deteco de1 pg/mL de DNA-HPV, equivalente a 0,1 cpia de vrus por
clula. O resultado considerado positivo quando a relao RLU/PCB para os vrus do grupo B (16, 18, 31,
33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68) forem iguais ou maiores que 1. A Captura Hbrida contm sondas
gnicas de 99% dos HPV com maior potencial de oncogenicidade. Valores da relao RLU/PCB menor que
50, indicando pequeno nmero de cpias virais por clula, pode significar infeco inicial ou fase de
remisso espontnea. Nesses casos, a critrio clnico, sugere-se, antes de qualquer tratamento, confirmar a
presena de infeco ativa com nova coleta aps intervalo de trs meses. Para aferio da eficcia do
tratamento, indica-se colher nova amostra aps trs meses do trmino da teraputica.
Mtodo
Tcnica da hibridizao molecular associada a anticorpos monoclonais.
Condio
Raspado ou secreo de leses ou regio suspeita (colo uterino, vagina, vulva, regio perineal, perianal,
anal, pnis, glande, prepcio, bolsa escrotal, cavidade oral); bipsia (colo uterino, vulva, pnis, anus, etc).
Coleta
O paciente poder ser encaminhado para colher o material no prprio laboratrio. Para isso, necessria a
solicitao mdica de Captura Hbrida com a descrio do local anatmico de onde deve ser colhida a
amostra. Para os casos de coleta crvico-vaginal, solicita-se abstinncia sexual de 3 dias e a paciente no
deve estar menstruada. No estar em uso de creme ou vulo vaginal e no fazer ducha interna no dia do
exame. Se houver necessidade da coleta de citologia na mesma consulta, esta deve ser realizada em
primeiro lugar. No caso de aplicao de cido actico ou iodo, colposcopia ou ultra-som transvaginal,
aguardar 3 dias para a realizao do exame. Para coleta uretral, estar h pelo menos 4 horas sem urinar e
para coleta peniana, um mnimo de 8 horas sem higiene local.
(continua)

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Laboratrios e mdicos
Solicitar kit especial para coleta do material.
Instrues
No recomendvel efetuar exame digital (toque), colposcopia ou assepsia prvia; evitar contaminar a
escova; a presena de sangue (no menstrual) ou contedo vaginal supostamente infectado no traz
qualquer alterao no resultado; efetuar a coleta com leve atrito da escova na regio que se quer estudar
(colo uterino, vagina, vulva, regio perineal e perianal, pnis, ou cavidade oral), preferentemente nas reas
consideradas suspeitas. Na coleta de material da pele, essa deve ser umedecida com soro fisiolgico,
raspada com lmina de bisturi e a amostra dever ser colocada dentro do tubete com o uso da escova;
inserir a escova no tubete imediatamente aps a coleta do material; quebrar a haste, fechar o tubete fixandoo na caixa de transporte. Preencher corretamente a ficha de solicitao e coloc-la no interior da caixa.
Conservao para envio
Escovados (raspados): at 2 semanas em temperatura ambiente.
Bipsias de colo uterino: colocar imediatamente dentro do kit coletor entre 2o e 8oC por, no mximo, uma
noite; aps este perodo, armazenar entre - 5 e - 25oC por, no mximo, 30 dias.

HPV, PCR - Tipagem

Comentrios
O Papilomavrus Humano (HPV) um vrus sexualmente transmissvel e provoca o aparecimento de
verrugas nos rgos genitais e na regio anal (condiloma acuminado) ou pode se apresentar de forma
subclnica. H forte evidncia de que o HPV desempenha um papel na carcinognese da genitlia externa,
das neoplasias intraepiteliais vulvares, dos carcinomas escamosos de vagina e dos carcinomas do colo de
tero. Em mais de 90% dos casos de cncer cervical, existe a presena de DNA do HPV. Existem mais de
70 gentipos do HPV, e j foram identificados mais de 30 tipos infectando a genitlia humana. Os tipos de
HPV associadas infeco genital so divididos em categorias de alto e baixo risco, conforme seu potencial
oncognico (ver tabela). Esta tcnica apresenta alta sensibilidade para deteco da infeco pelo HPV e
capaz de definir exatamente o tipo do HPV relacionado s leses clnicas. Identifica tambm a presena de
infeces mistas (por mais de um tipo diferente).
RISCO

Associao freqente

Alto risco

16, 18

Baixo risco

6, 11

Tipo do HPV
Associao menos freqente
26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 66, 68,
69, 73 e 82.
40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81 e CP6108.

Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase e Polimorfismo de Fragmentos por Enzima de Restrio (RFLP).
Condio
Raspado ou secreo de leses ou regio suspeita (colo uterino, vagina, vulva, regio perineal, perianal,
anal, pnis, glande, prepcio, bolsa escrotal, cavidade oral); bipsia (colo uterino, vulva, pnis, anus, etc).
Cuidados:
- No recomendvel efetuar exame digital (toque), colposcopia ou assepsia prvia. recomendvel fazer
abstinncia sexual 3 dias antes da coleta. Se houver necessidade da coleta de citologia na mesma consulta,
esta deve ser realizada em primeiro lugar. Amostra de swab cervical deve ser coletada antes da aplicao do
cido actico e iodo, no exame colposcpico. Evitar contaminar a escova de coleta. No realizar a coleta
durante o perodo menstrual.
Coleta:
- Solicitar kit especial para coleta do material.
- Efetuar a coleta com leve atrito da escova na regio que se quer estudar, preferencialmente, nas reas
consideradas suspeitas. Na coleta de material da pele, essa deve ser umedecida com soro fisiolgico,
raspada com lmina de bisturi e a amostra dever ser colocada dentro de tubetes com uso da escova de
coleta.
- Inserir a escova de coleta no tubete imediatamente aps a coleta do material, quebrar a haste e fechar o
tubete fixando-o na caixa de transporte.
- O material dever ser enviado o mais rpido possvel.
(continua)

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Conservao para envio

Escovados (raspados): at 2 semanas em temperatura ambiente.
Bipsias de colo uterino: colocar imediatamente dentro do kit coletor entre 2o e 8oC por, no mximo, uma
noite; aps este perodo, armazenar entre - 5 e - 25oC p, no mximo, 30 dias.

HTLV-I, PCR
Comentrios
O HTLV-I um retrovrus associado com a leucemia/linfoma de clulas T do adulto (LLTA), com uma
desordem neurolgica denominada paraparesia espstica tropical e com a mielopatia associada ao HTLV-I
(MAH). Sua transmisso ocorre atravs de transfuso de sangue, contato sexual e seringas contaminadas
(usurios de drogas). A transmisso perinatal ainda no foi comprovada. A presena de anticorpos antiHTLV-I, detectados atravs do ELISA, encontrada em alta freqncia em pessoas apresentando as
desordens mencionadas acima. Todo ELISA positivo dever ser confirmado atravs da tcnica Western blot
ou do PCR. O PCR est indicado, tambm, para pacientes com sorologia inconclusiva ou com Western blot
indeterminado para HTLV-I.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Este exame pode apresentar, embora raramente, resultado falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
2 frascos de 5,0mL de sangue total (EDTA).
Laboratrios
Enviar em frasco estril.
Conservao para envio
At 72 horas entre 2o e 25oC. No congelar.

Legionella sp., PCR

Comentrios
Dentre os agentes etiolgicos associados a um quadro de pneumonia comunitria, cita-se a Legionella
pneumophila. A infeco causada por L. pneumophila tem maior freqncia nos pacientes com DPOC,
alcolatras, usurios crnicos de corticosterides e imunodeprimidos. Dos agentes atpicos o que mais
acomete idosos. A apresentao clnica varia de um quadro gripal auto-limitado (febre de Pontiac) que poupa
o pulmo, at as formas mais graves com evoluo para insuficincia respiratria. Opacidades alveolares
(com broncograma areo) uni ou bilaterais e nodulaes podem estar presente na radiografia do trax.
Raramente, h cavitao ou derrame pleural. Dos testes utilizados para o seu diagnstico, a cultura tem
sensibilidade baixa, em torno de 50% a 60% dos casos. A sorologia mais til na avaliao retrospectiva do
diagnstico, sendo que cerca de 25% dos pacientes no apresentam aumento significativo dos ttulos.
Testes para a pesquisa de antgeno (imunofluorescncia direta e pesquisa de antgeno urinrio) detectam
apenas espcies de L. pneumophila sorogrupo 1 (Lp1), responsveis por 70% a 80% dos casos. A PCR
um teste sensvel e especfico, capaz de detectar as vrias espcies de Legionella. Pode tambm
demonstrar a presena de organismos no cultivveis e DNA livre, aumentando a chance de diagnstico em
pacientes parcialmente tratados empiricamente com antibiticos.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase do gene 5S rRNA.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
3,0mL de escarro; 3,0mL de lavado broncoalveolar (BAL); 3,0mL de lquido pleural ou 250mg de material de
bipsia de pulmonar.
Laboratrios
Colher em tubo ou frasco estreis.
Material de bipsia: congelar imediatamente e conservar em etanol.
(continua)

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Conservao para envio

Tecido: enviar em gelo seco.
Demais amostras: at 24 horas entre 2 e 8C.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Leishmania, PCR
Comentrios
A leishmaniose uma doena parasitria causada por protozorios do gnero Leishmania. So transmitidas
pela picada de um mosquito (flebtomo) que so normalmente encontrados nas regies tropicais e
subtropicais. Os reservatrios da Leishmania incluem roedores, ces e seres humanos infectados. Vrias
espcies do gnero so agentes etiolgicos da leishmaniose visceral (LV), cutnea e mucocutnea. A
leishmaniose visceral ou calazar essencialmente causada pelo Complexo Donovani que inclui a
Leishmania donovani, a Leishmania infantum e a Leishmania chagasi. A LV fatal na ausncia de
tratamento e as drogas atualmente disponveis so caras e causam srios efeitos colaterais. Vrios estudos
tm demonstrado que a PCR (reao em cadeia da polimerase) altamente especfica e mais sensvel do
que mtodos clssicos utilizados para o diagnstico da leishmaniose e pode ser usada de rotina em
humanos e ces.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase - PCR. A reao de amplificao define a presena do DNA do
cinetoplasto da Leishmania sp.
Valor de referncia
Amostra negativa para Leishmania sp.
Condio
5,0mL de sangue total (EDTA); 1,0mL de aspirado de medula ssea; 250mg de material de biopsia de leses
ou linfonodos.
No usar medicao tpica nas 48 horas que antecedem o exame.
Laboratrios
Colher em tubo ou frasco estreis.
Conservao para envio
Sangue: at 72 horas em temperatura ambiente.
Aspirado de medula ssea e linfonodos: at 24 horas em temperatura ambiente.
Material de bipsia: at 48 horas em etanol com gelo seco.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Micobactrias, identificao em cultura por PCR

Comentrios
O exame se destina identificao rpida das vrias espcies de micobactrias isoladas a partir do meio de
cultura de qualquer material clnico (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. fortuitum, M. kansasii, M.
gordonae, etc). til na avaliao do paciente que no est respondendo aos tuberculostticos, ajudando a
guiar decises teraputicas.
Veja tambm Mycobacterium tuberculosis PCR.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) e anlise dos fragmentos aps digesto com enzimas de restrio
(RFLP).
Condio
Colnias isoladas em meio slido (tubos de Lowestein-Jensen ou placas Middlebrook 7H10 ou 7H11) ou
10mL de caldo de cultura (caldo Middlebrook 7H9).
Conservao para envio
At 6 meses entre 2o e 8oC. No congelar.

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MRSA, deteco por PCR

Comentrios
Exame utilizado para pesquisa de Staphylococcus aureus resistente meticilina (MRSA) em secrees e
fluidos corporais e para pesquisa de colonizao cutneo-mucosa em portadores.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex Multiplex PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
- Swab de orofaringe, vagina, axilas ou vestbulo nasal: colher com swab e frasco estreis e enviar em meio
de transporte Stuart.
- Secrees: colher em frasco estril e enviar em meio de transporte Stuart.
- Urina, jato mdio: colher, preferencialmente no laboratrio, a 1 urina da manh ou com um intervalo
mnimo de 4 horas da ltima mico.
- Amostras j semeadas em meio de cultura.
Obs.: em caso de uso de antimicrobianos, aguardar, se possvel, 7 dias aps o trmino do medicamento
para realizao do exame.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
At 3 dias aps a coleta, entre 2o e 8oC.

Mycobacterium tuberculosis, PCR (pesquisa)

Comentrios
A tuberculose permanece como um dos maiores problemas de sade pblica em todo mundo. O diagnstico
rpido essencial para o incio do tratamento apropriado e controle dos contatos. Detecta diretamente o
DNA da micobactria nas amostras clnicas. Trata-se de tcnica especfica, sensvel e rpida, permitindo o
diagnstico e tratamento precoce, auxiliando no controle de disseminao da doena.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase - PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
5,0mL de escarro; 5,0mL de lavado broncoalveolar; 50,0mL primeira da manh (aps assepsia); 5,0mL de
lquido pleural; secreo de orofaringe; 3,0mL de lquor; 5,0mL de lquido asctico; 5,0mL de lquido sinovial;
5,0mL de fluidos corporais ou bipsia.
- Refrigerar e enviar o mais rpido possvel.
Conservao para envio
At 4 dias entre 2o e 8oC.

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Mycoplasma, PCR
Comentrios
O Mycoplasma genitalium foi detectado no trato urogenital de dois pacientes com uretrite no-gonoccica
(UNG) pela primeira vez em 1981. Experimentos recentes reforam que esses patgenos so capazes de
invadir os tecidos do trato urogenital causando doena. Somente com a aplicao dos mtodos de
amplificao do DNA foi possvel o melhor esclarecimento da sua epidemiologia e patogenicidade. Alm de
agente causador de uretrite, o M. genitalium tem sido implicado em uretrite crnica, doena inflamatria
plvica e doenas articulares. Embora o Mycoplasma hominis tambm possa ser encontrado no trato
urogenital de pacientes saudveis, tendo sido cada vez mais implicado na patognese de infeces
urogenitais. Estudos experimentais e clnicos associam o M. hominis com pielonefrite aguda, estando
presente em at 10% dos casos. Possui forte associao com vaginose bacteriana, estando presente em 2/3
dos casos. Da mesma forma, diversos estudos o correlacionam com doena inflamatria plvica e febre
puerperal.
Veja tambm Doenas sexualmente transmissveis, PCR.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex Multiplex PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
50mL de urina do 1o jato da manh (aps assepsia); secreo uretral ou secreo endocervical.
- Amostras uretrais: no urinar pelo menos 1 hora antes da coleta.
- Urina: no urinar por pelo menos 4 horas antes da coleta.
- Endocervical: a mulher no pode estar menstruada.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
At 3 dias entre 2o e 8oC.

Mycoplasma pneumoniae, PCR

Comentrios
O M. pneumoniae o agente mais comum dentre os germes atpicos associados a um quadro de pneumonia
comunitria. Na maioria das vezes subestimado pelo difcil diagnstico. Acomete preferencialmente
escolares, adolescentes e adultos jovens. Os sintomas so generalizados ocorrendo normalmente faringite e
traqueobronquite, podendo ou no haver acometimento do trato respiratrio baixo. Inicialmente, h um
infiltrado intersticial localizado, que pode evoluir com preenchimento alveolar difuso. Derrame pleural muito
incomum. Hipoxemia pode estar presente, com evoluo franca para insuficincia respiratria em alguns
casos. Manifestaes articulares, hematolgicas, hepticas, renais, oculares e pancreticas podem estar
associadas. As limitaes dos testes laboratoriais disponveis levou ao desenvolvimento de tcnicas de
amplificao de seu DNA, que apresentam sensibilidade de 92% e especificidade de 100%.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase do gene da protena P1 citoadesina.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
Escarro, lavado broncoalveolar, swab de orofaringe, aspirado de nasofaringe e lquido pleural: volume
mnimo de 1,0mL.
250mg de material de bipsia de pulmonar.

(continua)

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Laboratrios
Swab de orofaringe: colher no kit de PCR de C. trachomatis (Roche) ou no meio de transporte rosa
(Dulbeccos).
Demais materiais: colher em tubo ou frasco estreis.
Material de bipsia: conservar em etanol e congelar imediatamente.
Conservao para envio
Lavado broncoalveolar, lquido pleural e swab: at 72 horas entre 2 e 8C.
Material de bipsia: enviar em gelo seco.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Neisseria gonorrhoeae, PCR

Comentrios
A infeco pela Neisseria gonorrhoeae a segunda infeco mais notificada nos EUA, sendo o risco de
transmisso em uma relao sexual com um(a) parceiro(a) doente de aproximadamente 90%. Geralmente,
assintomtica nas mulheres (60%) e se no tratada pode determinar doena inflamatria plvica,
infertilidade, gravidez ectpica e dor plvica crnica. Em homens, a N. gonorrhoeae causa uretrite em 90%
dos infectados, ocasionalmente resultando em epididimite. Raramente a infeco dissemina e causa quadro
articular, meningite e endocardite. Infeco neonatal pode resultar em conjuntivite severa. Os ensaios
moleculares permitiram a diminuio do tempo de diagnstico e aumentaram a sensibilidade da deteco. A
sensibilidade da PCR para N. gonorrhoeae de 98%.
Veja tambm Doenas sexualmente transmissveis, PCR.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex Multiplex PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
50mL de urina do 1o jato da manh (aps assepsia); secreo uretral ou secreo endocervical.
- Amostras uretrais: no urinar pelo menos 1 hora antes da coleta.
- Urina: no urinar por pelo menos 4 horas antes da coleta.
- Endocervical: a mulher no pode estar menstruada.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
At 3 dias entre 2o e 8oC.

Toxoplasmose, PCR
Comentrios
O Toxoplasma gondii um protozorio parasita intracelular obrigatrio. Usualmente assintomtica, a
infeco importante em imunocomprometidos, gestantes e naqueles com acometimento ocular. A infeco
adquirida em imunocompetentes sintomtica em apenas 10% dos pacientes, a maioria com
linfonodomegalia auto-limitada. Podem apresentar febre, urticria, hepatoesplenomegalia, rash
maculopapular e corioretinite. Neste caso, o diagnstico facilmente estabelecido pelos testes sorolgicos.
A PCR est indicada nas seguintes situaes: definir o diagnstico no paciente imunodeprimido; na presena
de acometimento do sistema nervoso central (SNC); detectar a presena de acometimento ocular;
estabelecer o diagnstico pr-natal e ps-natal da infeco congnita.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Aninhada (Nested PCR) do gene B1 do Toxoplasma gondii.
(continua)

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Valor de referncia
Negativo (o DNA do Toxoplasma gondii no foi detectado pela PCR).
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
0,5mL de lquor; 250mg de material de bipsia; 10,0mL de lquido amnitico ou 5,0mL de sangue total
(EDTA).
Laboratrios
Colher em tubo ou frasco estreis.
Material de bipsia: congelar imediatamente aps a coleta.
Conservao para envio
Lquor e lquido amnitico: refrigerar overnight.
Tecidos: enviar em gelo seco.
Sangue total: enviar em temperatura ambiente.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

Ureaplasma urealyticum, PCR

Comentrios
A principal sndrome associada infeco pelo U. urealyticum a uretrite no-gonoccica (UNG). A maioria
dos casos de UNG causada pela C. trachomatis, sendo o U. urealyticum responsvel por 20% a 30% dos
casos restantes. Em mulheres, pode levar a complicaes como salpingite, endometrite e corioamnionite.
Prostatite e epididimite tm sido associadas a este agente em homens. o organismo mais freqentemente
isolado no crion-mnio, mesmo na presena de membranas intactas. Est associado com inflamao, parto
prematuro, septicemia, meningite e pneumonia no recm-nascido. Em pacientes imunocomprometidos, o U.
urealyticum est associado com artrite, osteomielite, pericardite e doena pulmonar progressiva.
Veja tambm Doenas sexualmente transmissveis, PCR.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex Multiplex PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
50mL de urina do 1o jato da manh (aps assepsia); secreo uretral ou secreo endocervical.
- Amostras uretrais: no urinar pelo menos 1 hora antes da coleta.
- Urina: no urinar por pelo menos 4 horas antes da coleta.
- Endocervical: a mulher no pode estar menstruada.
Laboratrios
Colher em frasco estril.
Conservao para envio
At 3 dias entre 2o e 8oC.

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Vrus respiratrios, PCR qualitativa

Adenovrus - Coronavrus - Influenza A e B - Parainfluenza 1, 2 e 3 - Vrus Sincicial
Respiratrio - Coronavrus

Comentrios
Esta tcnica capaz de detectar, em uma nica reao, a maioria dos vrus associados s infeces das
vias respiratrias: Adenovrus; Coronavrus; Vrus influenza A e B; Vrus Parainfluenza 1, 2 e 3; Rinovrus,
Vrus Sincicial Respiratrio.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Multiplex Multiplex PCR.
Valor de referncia
Negativo.
Condio
Lavado de nasofaringe, swab de nasofaringe ou lavado brnquico.
Lavado de nasofaringe: nos casos em que o material no pode ser aspirado, incline a cabea do paciente
cerca de 70 para trs, instile de 3 a 7mL de soro fisiolgico estril e reaspire. Enviar imediatamente.
Swab de nasofaringe: insira um swab cuidadosamente e o mais profundamente possvel atravs das narinas,
colha toda secreo existente e friccione as paredes da nasofaringe de forma a obter clulas. Ressuspender
em aproximadamente 1mL de salina estril.
Conservao para envio
Enviar imediatamente entre 2 e 8C.

Vrus Varicela-Zoster, PCR qualitativa

Comentrios
O Vrus Varicela-Zoster (VZV) o agente etiolgico da varicela (catapora) e do herpes zoster. A presena de
complicaes so mais freqentes quando a infeco primria ocorre aps 12 anos de idade. As mais
comuns so a encefalite, pneumonia e infeco secundria das leses. Pacientes imunocomprometidos
podem apresentar evoluo desfavorvel com infeco disseminada, pneumonite, hepatite e encefalite.
Raramente, a transmisso congnita do VZV pode levar a infeco neonatal grave. As indicaes da PCR
so as seguintes: acometimento do sistema nervoso central; complicaes oculares; leses vesiculares
atpicas; complicaes pulmonares (por anlise do lavado brnquico ou do tecido de bipsia) e infeco
congnita, por anlise do lquido amnitico a partir da 15a semana.
Mtodo
Reao em Cadeia da Polimerase Aninhada (Nested PCR) do gene 29 do VZV.
Valor de referncia
Negativo.
Obs: este exame pode apresentar, embora raramente, resultados falso-positivo e falso-negativo, que uma
caracterstica do mtodo.
Condio
0,5mL de lquor; 250mg de material de bipsia; swab de vescula; 10,0mL de lquido amnitico ou 5,0mL de
sangue total (EDTA).
Conservao para envio
Lquor, lquido amnitico e swab: refrigerar overnight.
Tecidos: congelar e enviar em gelo seco.
Sangue total: enviar em temperatura ambiente.
Limitaes do teste
Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a quantidade de DNA est abaixo da sensibilidade de
deteco do teste ou na presena de inibidores da PCR na amostra.

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