SESSION 2016

CONCOURS G2E

BIOLOGIE

Dure : 3 heures
Les calculatrices programmables et alphanumriques sont interdites.
Lusage de tout ouvrage de rfrence et de tout document est strictement interdit.
Si, au cours de lpreuve, un candidat repre ce qui lui semble tre une erreur dnonc, il
en fait mention dans sa copie et poursuit sa composition. Dans ce cas, il indique clairement
la raison des initiatives quil est amen prendre.
Les candidats doivent respecter les notations de lnonc et prciser, dans chaque cas, la
numrotation de la question pose.
Une grande attention sera apporte la clart de la rdaction et la prsentation des
diffrents schmas.
Remarque importante : Les deux parties Biologie 1 et Biologie 2 sont indpendantes. Au
sein de chaque partie, les questions suivent une problmatique progressive et le jury vous
demande donc de les aborder dans lordre.

BIOLOGIE 1 (dure conseille 1h30)

TUDE DE LA DIVISION CELLULAIRE
Partie 1 (3,5 points)

EXPRESSION DE LA PROTEINE SCC1

La division cellulaire est un moment cl du cycle cellulaire. Ce phnomne donne naissance
deux cellules-filles dont les caractres sont hrits de la cellule-mre. La rpartition correcte du
matriel gntique maternel dupliqu est essentielle. Le support exprimental de cette tude est la
levure Saccharomyces cerevisiae, qui se divise par bourgeonnement : la rupture du bourgeon
concrtise la sparation des deux cellules-filles.

1.1. ADN et chromatides au cours du cycle cellulaire

On utilise deux souches de levures : une sauvage et une mutante ne synthtisant pas la protine
SCC1. Le document 1 reprsente lvolution des caractristiques suivantes au cours du temps :
bourgeonnement cellulaire, sparation des chromatides et extension du fuseau de division.
Les graphes de droite reprsentent la quantit dADN par cellule.
Dans deux lots, on utilise du nocodazole qui dpolymrise les microtubules.

Question 1.a. Nommer les tapes successives de la mitose et prciser leur

fonction en une seule phrase chacune.
Question 1.b. D'aprs le document 1, dans quel mcanisme est impliqu le
gne SCC1 ?

1.2. La protine SCC1 au cours du cycle cellulaire

On cre une souche de levure possdant la squence codante sauvage du gne scc1 associe
un pitope Myc. L'pitope Myc est le domaine de la protine Myc reconnu spcifiquement par
l'anticorps anti-Myc. La protine SCC1-myc est ainsi aisment dtectable par
immunofluorescence.
Le document 2 dcrit lvolution, au cours du temps la quantit dADN par cellule (2-A), la
quantit de protine SCC1-myc (2-B) et la localisation cellulaire de cette protine, en relation avec
lADN et les microtubules (2-C). Le temps 0 correspond au transfert dans un milieu complet
25C.
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Document 1 : volution de caractristiques cellulaires de deux souches de levures.

Document 2 : volution des

caractristiques cellulaires de deux
souches de levures.
Document 2-A : Quantit dADN par cellule
au cours du temps (en minutes).
Document 2B : lectrophorse dextraits
cellulaires prlevs aux temps indiqus
(en minutes), rvle par
immunofluorescence.
Swi6p est une protine exprime durant
tout le cycle cellulaire.
Document 2-C : Localisation cellulaire
chez des levures sauvages de diffrents composs par des colorants fluorescents spcifiques.
DAPI : coloration de lADN en bleu. Tub : coloration de la protine tubuline en vert. Scc1 :
coloration de la protine SCC1 en rouge.

Question 2.a. partir de lanalyse du document 2-A, distinguer les grandes

phases du cycle cellulaire.
Question 2.b. Formuler une hypothse sur la fonction de la protine SCC1
grce aux analyses des documents 2-B et 2-C.

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1.3. Rle de la protine SCC1

On construit une nouvelle souche de levure exprimant une protine SCC1 non dgradable.
Aprs trois jours de culture, la souche sauvage et la souche mutante sont mises en contact avec
de la colchicine, alcalode vgtal qui dpolymrise les microtubules.
Les cellules cultives sont alors toutes au mme stade de division : la mtaphase.
Afin de localiser la chromatine, les souches expriment une histone modifie : lhistone H2-GFP
correspond la fusion de la protine histone H2 avec la protine fluorescente verte GFP.

Document 3 : volution du matriel gntique

au cours du temps, observe par fluorescence
Le temps (heure:minutes) est indiqu en bas
gauche de chaque photo.

Question 3. Analyser le document 3 afin de conclure sur le rle de la protine

SCC1 dans la division cellulaire.

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Partie 2 (3,5 points)

DEVENIR DE LA PROTEINE SCC1

On cherche comprendre comment la sparation des chromatides est dclenche lors de la
division cellulaire.

2.1. Intervention de la protine ESP-1

On utilise une souche sauvage de cellules humaines, exprimant des protines homologues de
celles tudies chez S. cerevisiae. On constitue deux lots : un lot tmoin sans modification et un
lot test o lon injecte un ARN interfrent dESP-1.
Document 4 : Photographies de mitoses.
A, B et C: Cellules sauvages.
Les deux flches en C pointent le sillon de
division.
D, E et F: Cellules avec ARNi.
Les deux flches en F pointent des ponts de
chromatine de deux cellules interphasiques.
La barre dchelle mesure 20 m.

Question 4. Analyser le document 4 afin de dterminer le rle de la protine

ESP-1.

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On construit une souche de S. cerevisiae exprimant une protine chimre sous le contrle du
promoteur de lopron galactose. De lextrmit N-terminale lextrmit C-terminale, cette
protine chimre est la fusion d'un pitope FLAG, de la protine ESP-1 et d'un domaine de liaison
la chitine CBD. L'pitope FLAG est reconnu spcifiquement par un anticorps anti-FLAG.
Cette souche exprimant FLAG-ESP-1-CBD sera utilise dans les documents 5 et 6.
On utilise deux cultures de la souche construite de S. cerevisiae, lune en prsence de galactose,
lautre non.
Les protines cellulaires totales ou les protines retenues sur une colonne de chromatographie
daffinit billes recouvertes de chitine sont purifies partir de chaque culture puis on effectue
une lectrophorse et un transfert sur membrane (= Western blot).
Les protines fixes la membrane sont rvles comme indiqu sur le document 5.

Document 5 : Western blot des protines de la souche exprimant la protine chimre FLAGESP-1-CBD en prsence ou en absence de galactose.

Question 5.a. Expliquer le principe de la technique de chromatographie

utilise pour obtenir les rsultats du document 5.
Question 5.b. Analyser le document 5.

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2.2. Action de la protine ESP-1 sur SCC1

On utilise la souche exprimant FLAG-ESP-1-CBD. Les protines cellulaires totales sont extraites
et passent sur une colonne de chromatographie daffinit billes recouvertes de chitine.
On fait ensuite passer la protine SCC1 sur cette colonne. Lluat rcupr est analys par
Western blot et on rvle la protine SCC1 par un anticorps spcifique anti-SCC1.
Les rsultats sont prsents sur le document 6-A.
Le document 6-B prsente les rsultats dun Western blot rvlant la protine SCC1 par un
anticorps spcifique anti-SCC1.
Avant la migration, la protine a t incube en prsence de diverses substances extraites de
cellules en mtaphase de mitose, comme indiqu sur le document. La protine ESP-1 est membre
dune famille protique possdant un domaine catalytique conserv nomm CD Clan.
On utilise des concentrations croissantes (0-1 mM) de la molcule cmk, un inhibiteur spcifique du
domaine CD Clan sur la protine ESP-1.
La protine ESP-1 mutante nest pas fonctionnelle.

Document 6 : Western blot de la protine SCC1 aprs incubation avec divers composants
cellulaires.

Question 6.a. Proposer une hypothse partir de lanalyse du document 6-A.

Question 6.b. Analyser le document 6-B et dterminer la fonction de la
protine ESP-1.
Question 6.c. Conclure, en trois lignes maximum, sur lintervention de la
protine ESP-1 grce lanalyse de lensemble des documents de la partie 2.

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Partie 3 (3 points)

REGULATION DE LA DIVISION CELLULAIRE

partir dune souche sauvage de S. cerevisiae bloque en mtaphase, on extrait et purifie les
protines SCC1, ESP-1 et Pds1. On labore diffrents milieux ractionnels contenant la protine
SCC1 et les molcules indiques sur les pistes du document 7 ci-dessous. Aprs incubation
durant 30 minutes 37C, on ralise ensuite une lectrophorse et un transfert sur membrane.
La protine SCC1 est ensuite rvle immunologiquement.
Les rsultats sont prsents sur le document 7.

Document 7 : Dosages in vitro de laction

des protines ESP-1 et Pds1 sur la protine
SCC1
- : absence du compos ;
+ : prsence du compos.

Question 7. Analyser le document 7 afin de proposer une condition

ncessaire lactivit de la protine ESP-1.

On utilise la mme souche que pour le document 7. Le milieu ractionnel est diffrent puisquil
contient des quantits dcroissantes de protine ESP-1. LADN dun plasmide gnrique est aussi
prsent dans une partie des puits (+). La protine SCC1 est rvle par un anticorps anti-SCC1.
Les rsultats sont prsents sur le document 8.
Les variations apparentes de masse sont dues un artfact de migration.

Document 8 : Dosages in vitro de

lactivit de la protine ESP-1 sur la
protine SCC1.
- : absence dADN plasmidique ;
+ : prsence dADN plasmidique.

Question 8.a. Analyser le document 8 afin de proposer une condition

ncessaire lactivit de la protine ESP-1.
Question 8.b. Sous la forme dun schma, reprsenter la rgulation de la
sparation des chromatides avant et aprs anaphase.
Bibliographie :
Cell, Vol. 103, 375-386, October 27, 2000.
Science, Vol. 293, 1320-1323, August 17, 2001.
Cell, Vol. 91, 35-45, October 3, 1997.
Current Biology, Vol. 12, 973-982, June 25, 2002.
Current Biology, Vol. 12, 1368-78, August 20, 2002.
The EMBO Journal, Vol. 20, 792-801, February 15, 2001.
Cell 137, 123-132, April 3, 2009.

7/15

BIOLOGIE 2 (dure conseille 1h30)

QUELQUES ASPECTS DES STRATGIES PERMETTANT
LINFECTION ET LA NUTRITION DU CHAMPIGNON
PHYTOPATHOGNE BOTRYTIS CINEREA.
Botrytis cinerea est un champignon phytopathogne responsable de la pourriture grise, lorigine
de graves pertes agricoles chaque anne dans le monde. Ce champignon peut sattaquer plus
de 200 espces de plantes cultives. Ce champignon est dit "ncrotrophe", cest--dire quil se
nourrit de tissus vgtaux morts.
On cherche comprendre ici comment le champignon B. cinerea peut pntrer dans les tissus
vgtaux et comment il peut contourner certaines ractions immunitaires de la plante infecte.

Partie 4 (5,5 points)

LE FRANCHISSEMENT DUNE BARRIERE PHYSIQUE :

LA MATRICE EXTRACELLULAIRE VEGETALE
Les tissus vgtaux possdent un pH compris entre 4 et 6. Ce paramtre varie notamment au
cours de la maturation des fruits. Pour voir les effets et la variation du pH au cours dune infection,
des spores de B. cinerea sont dposes sur des chantillons de pomme. Le pH est suivi au cours
du temps ainsi que la progression de la zone de ncrose qui reflte linfection de lchantillon
(document 9-A). En parallle, des cultures de spores de B. cinerea en milieux tamponns sont
ralises (document 9-B). Le pH final de la culture est dtermin aprs 7 jours ainsi que la
quantit dun acide faible prsent dans le milieu, lacide oxalique (document 9-C).

Document 9-A : Variation du pH au cours dun test de pathognie de B. cinerea sur pomme.
Le pH est mesur diffrents temps aprs le dbut de linfection (hpi = heures postinfection). Les taches ncrotiques traduisent la croissance et linfection de lchantillon par
B. cinerea. Le pH initial de la surface de la tranche de pomme est de 4.
Document 9-B : Variation du pH dans une
culture de Botrytis cinerea.
Des spores de B. cinerea sont mises en
culture dans un milieu liquide sans agitation et
dont le pH est tamponn. Au bout de 7 jours
de culture, les cultures sont filtres et le pH
final des milieux est dtermin. Les rsultats
correspondent la moyenne obtenue partir
dau moins trois cultures indpendantes.

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Document 9-C : Variation de la quantit

dacide oxalique dans les cultures de
B. cinerea en fonction du pH initial.
Les conditions exprimentales sont les mmes
quen B. Au bout de 7 jours de culture, les
cultures sont filtres et la quantit dacide
oxalique est dtermine dans le milieu,
sachant que cet acide est absent au dpart
dans les milieux de culture. Les rsultats
correspondent la moyenne obtenue partir
dau moins trois cultures indpendantes.
Document 9 : Variation du pH et de la quantit dacide oxalique lors de culture in vivo et in vitro de
B. cinerea.
Question 9.a. Dcrire les rsultats observs sur le document 9A et formuler des
hypothses pour expliquer ces rsultats.
Question 9.b. Comparer et interprter les rsultats des documents 9B et 9C. Utiliser
ces interprtations pour affiner lhypothse formule la question prcdente.
Pour comprendre le lien entre variation du pH et infection, des tudes du scrtome (ensemble
des protines dtectes dans le surnageant de culture) de B. cinerea sont ralises pH 4 et
pH 6 (document 10). Un pH de 6 est proche du pH observ la surface des feuilles et des
nombreux fruits que B. cinerea peut infecter. Un pH de 4 correspond plutt soit des fruits acides,
soit des structures ges ou dj infectes par B. cinerea.
Les rsultats de l'lectrophorse prsente dans le document 10-A permettent de visualiser
l'aspect de l'exprience mais ne sont pas interprter. Les rsultats des lectrophorses
exploiter figurent dans le document 10-B.

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Document 10-A : Rsultat de llectrophorse bidimensionnelle du scrtome pH 4 du

champignon B. cinerea. Trois grammes de myclium de B. cinerea ont t mis en culture
pH 4 ou pH 6 pendant 3 jours. Le milieu de culture est rcupr et le filtrat est
soumis une lectrophorse dans un gradient de pH (sparation selon le point
isolectrique des protines; pHi). Le gel est ensuite soumis dans une deuxime
dimension une lectrophorse de protines classique en conditions dnaturantes,
avec ajout dun dtergent, le SDS, et dun agent rducteur.
Numro de Fonction suppose de
tache (pH 4)
la protine

Numro de Fonction suppose de la

tache (pH 6)
protine
U8 U11

Cellulase

U5
S4

S17 S21
U12

Cellulase
Arabinogalactan endo-1,4-galactosidase
-amylase
Protase

U1

Mannosyl-oligosaccharide
-1,2-mannosidase
-arabinofuranosidase
Glucan 1,3--glucosidase

U2, U3
U4, U7, S5
S16
S1, S2
S3

Protase de la famille S53

Protase
aspartique
BcAP8
Protase
aspartique
BcAP1
Carboxypeptidase typesrine

U15, S24
U16, S23
U 19
U14

Protine de la famille des

crato-platanine
Rhamnogalacturonan actyl
estrase

Document 10-B : Identification de quelques protines de llectrophorse bidimensionnelle

pH 4 ou pH 6 ralise dans le document 10-A. U1,U19 : protines plus abondantes
ce pH que dans la deuxime condition de culture. S1, S24 : protines prsentes dans le
scrtome uniquement ce pH de culture.
Document 10 : Analyse du scrtome de B. cinerea aprs culture pH 4 ou pH 6.
Question 10.a. Expliquer brivement le principe de sparation des acides amins et
des protines selon leur point isolectrique. Rappeler le principe de sparation des
protines par lectrophorse en conditions dnaturantes.
Question 10.b. Donner la composition prcise et larchitecture de la matrice
extracellulaire dune cellule vgtale parenchymateuse. Prciser la structure
molculaire du composant majoritaire de cette matrice.
Question 10.c. Comparer les scrtomes de B. cinerea pH 4 et pH 6 explicits dans
le document 10-B. En dduire les liens ventuels entre le moment de linfection, le pH
et le scrtome.
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Parmi les protines tudies, on sintresse lexpression du gne Bcacp1, un gne codant une
protase scrte pH 4. Pour cela, on ralise des lignes transgniques dans lesquelles le gne
rapporteur GUS codant une glucuronidase est plac sous contrle du promoteur du gne Bcacp1
(document 11-A). Les lignes transgniques sont places dans des cultures liquides tamponnes
pH 4,5 ou pH 7,5 et on mesure lactivit GUS aprs 16h de culture.
Question 11.a. Rappeler prcisment ce que mesure un gne rapporteur.
A

Document 11-A : Effet du pH sur l'activit du promoteur du gne Bcacp1.

Une ligne transgnique de B. cinerea contenant le gne rapporteur GUS sous contrle des
400 premires paires de base du promoteur du gne Bcacp1 est mise en culture pendant
16h dans un milieu liquide tamponn pH 4,5 ou 7,5. Aprs filtration, les protines sont
extraites et lactivit GUS est dtermine par spectrophotomtrie en utilisant un substrat de
lenzyme GUS qui devient color aprs raction. Les rsultats sont exprims en variation
dabsorbance A par heure et par mg de protines. Ils correspondent la moyenne de trois
expriences indpendantes.
La protine BcACP1 existe sous deux formes : une forme pro-enzyme non fonctionnelle de
35 kDa et une forme mature et fonctionnelle de 28 kDa. Pour savoir si le pH a un effet sur
ces formes, on ralise des expriences in vitro en incubant la protase BcACP1 diffrents
pH (document 11-B).
Document 11-B : Incubation de la protine
BcACP1 diffrents pH.
Un filtrat de milieu de culture pH 7 de B.
cinerea contenant la protine scrte
BcACP1 est incub in vitro diffrents pH
pendant 1 h 4C. Les protines du
milieu sont ensuite spares et dtectes
par Western blot laide danticorps antiACP1.
Document 11 : Effet du pH sur la production de lenzyme BcACP1.
Question 11.b. partir de linterprtation des documents 11-A et 11-B prsenter
limpact du pH sur la production de lenzyme BcACP1.
Question 11.c. partir des rsultats de lensemble de cette partie (documents 9 11),
raliser un schma prsentant les tapes principales de la pntration de B. cinerea
dans une cellule vgtale.

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Partie 5 (2,5 points)

RPONSES DE LA PLANTE UNE INFECTION

PAR B. CINEREA
Les vgtaux possdent diffrentes stratgies de dfense face un pathogne. Le peroxyde
dhydrogne H2O2 fait partie des espces ractives de loxygne connues pour causer des
dommages svres dans les cellules et notamment sur lADN. La quantit dH2O2 est suivie par
colorimtrie dans une feuille saine ou infecte de larabette des dames Arabidopsis thaliana
(document 12-A). Une approche semi-quantitative est ralise par microscopie lectronique afin
de le localiser au niveau subcellulaire au cours de linfection (document 12-B).
Document 12-A : Dtection de la
production dH2O2 par le DAB dans
des feuilles dA. thaliana saines ou
infecte par B. cinerea.
Le diaminobenzidine (DAB) donne
une coloration brune en prsence
dH2O2.
La
flche
indique
le
site
dinoculation (dpt) de B. cinerea.

Document
12-B :
Localisation
subcellulaire de H2O2 dans les
cellules vgtales dA. thaliana au
cours de linfection.
La prsence dH2O2 est mise en
vidence par ajout de CeCl3 qui
prcipite proportionnellement sa
prsence. Des clichs sont pris
diffrentes heures post-infection
(hpi) et la surface des prcipits sur
les clichs est dtermine pour
chaque compartiment.
Les rsultats sont la moyenne dau
moins 40 sections indpendantes
avec 15 cellules chaque fois.
IS : cellules du site dinfection.
AIS : cellules voisines du site
dinfection.
Nd : non dtect.
Document 12 : Localisation du peroxyde dhydrogne chez A. thaliana au cours dune infection.
Question 12. Analyser les rsultats des documents 12-A et 12-B et en dduire un rle
pour le peroxyde dhydrogne dans les interactions plantes-pathognes.

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Pour mieux comprendre cette rponse, on sintresse un mutant cerk1-1 dA. thaliana
particulirement sensible aux infections par des champignons comme B. cinerea (document 13).

Document 13-A : Dtection par chimioluminescence de la production de peroxyde dhydrogne

chez la plante sauvage et le mutant cerk1-1 dA. thaliana en contact avec diffrentes molcules.
De jeunes plants dA .thaliana sont mis en contact avec de leau (W), des fragments de chitine
(GN8), composant de la paroi fongique ou des lipopolysaccharides (LPS), composant de la
membrane externe de certaines bactries. Les dosages ont t raliss avec une raction
chimioluminescente aprs 0, 30 ,60 ou 120 minutes de contact. Les rsultats correspondent la
moyenne de 10 plants.
Document 13-B : Localisation de la protine
fusion CERK1-GFP par transgnse dans
des cellules de tabac.
Des cellules pidermiques de tabac ont t
transformes avec un vecteur codant une
protine fusion CERK1-GFP (en vert) ou
avec un vecteur mCherry-HVR qui marque
un composant des membranes plasmiques
(en orange), puis observes par microscopie
fluorescence.
Document 13 : Le rle et la localisation de la protine CERK1 chez A. thaliana.
Question 13.a. Interprter les rsultats du document 13-A et 13-B et expliquer la
sensibilit spcifique du mutant cerk1-1 aux champignons phytopathognes.
Question 13.b. partir des rsultats acquis dans cette partie (documents 12 et 13),
rsumer en cinq lignes maximum le mcanisme de dfense dune cellule vgtale en
cas dinfection par le champignon B. cinerea.

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Partie 6 (2 points)

LES MCANISMES DE TOLRANCE DE B. CINEREA LA

RPONSE IMMUNITAIRE DE LA PLANTE
Leffet du peroxyde dhydrogne est test sur lexpression de certains gnes de B. cinerea
(document 14).
Document 14 : Expression de quelques gnes
chez B. cinerea en prsence ou en absence
dH2O2.
LARN est extrait de myclium de B. cinerea
cultiv sur milieu complet aprs avoir subi (+)
ou non (-) une exposition de 30 minutes une
concentration dH2O2 de 10 mM. Les ARN sont
spars par lectrophorse et dtects par
Northern blot laide de sonde dADNc
complmentaire aux ARN recherchs.
La glutathion peroxydase et la glutardoxine ont
pour substrat H2O2. La chitinase permet une
hydrolyse partielle de la chitine. Ddr48 et Rci
sont des protines de stress.
Question 14. laide de linterprtation du document 14, dcrire et analyser les
consquences de la prsence du peroxyde dhydrogne sur B. cinerea.
Afin de voir si le stress oxydatif engendr par une lvation de la teneur en peroxyde dhydrogne
peut avoir un effet sur le pouvoir infectieux de B. cinerea, des tests de pathognie sont raliss sur
des feuilles intactes ou prsentant des lsions avec des souches sauvages de B. cinerea ou avec
une souche mutante bcsak1, qui produit peu de glutathion rductase et de glutardoxine en
prsence dH202 (document 15).
Document 15 : Rsultats des tests
de pathognie avec les souches
sauvages (WT) ou bcsak1 sur des
feuilles de haricot intactes ou
initialement lses.
Des disques de myclium de B.
cinerea (en blanc sur la figure)
cultivs pendant 10 jours dans un
milieu de culture sont dposs sur
des plants de haricots au niveau de
feuilles et cultivs 20 C en lumire
naturelle. Les rsultats sont observs
3 jours plus tard.

Feuilles
initialement
intactes

Feuilles
initialement
lses

Souche de
B.cinerea
sauvage
Souche de
B.cinerea
mutante
bcsak1

Question 15. Interprter les rsultats prsents dans la figure 15 et proposer un rle
au gne bcsak1.

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Lun des effets du peroxyde dhydrogne est dinduire lapoptose, ou mort cellulaire programme
des cellules suite aux lsions causes sur les molcules dADN. Pour tester si le peroxyde
dhydrogne a cet effet sur B. cinerea, trois souches diffrentes sont mises en prsence d H2O2 :
- Une souche sauvage B05.10 ;
- Un mutant bir14 pour lequel lexpression du gne BcBir1est trs attnue ;
- Un mutant BIR124 qui surexprime le gne BcBir1.
On dtermine alors par deux mthodes diffrentes le pourcentage de cellules en apoptose, soit en
recherchant par coloration DAPI du noyau des marqueurs dune condensation anormale de la
chromatine, soit en quantifiant les cellules prsentant des cassures double brin dans lADN
(mthode TUNEL) (document 16-A). La pathognie des trois souches de B. cinerea est par
ailleurs teste sur des feuilles dA. thaliana (document 16-B).
Document 16-A : Rle de la protine BcBIR1
dans lapoptose chez B. cinerea.
Des filaments mycliens sont mis en culture en
prsence dH202 pendant 24h puis sont
observs au microscope la recherche de
marqueurs de lapoptose, soit en marquant des
condensations anormales de la chromatine
(coloration DAPI agent intercalant), soit en
recherchant des cassures double-brin dans
lADN (mthode TUNEL).
Les rsultats sont prsents en pourcentage de
noyaux possdant des marqueurs dapoptose
dtermin laide de chacune des mthodes.
Chaque rsultat correspond la moyenne dau
moins 4 expriences indpendantes.
Document 16-B : Rle du
gne
BcBir1
dans
la
pathognie de B. cinerea.
Lobservation des lsions sur
des feuilles darabette 48 et
72h aprs le dpt de spores
des diffrentes souches de
B. cinerea.
B05.10 : souche sauvage
BIR124 :
souche
surexprimant BcBir1.
bir14 : souche ayant une
expression trs attnue de
BcBir1.
Document 16 : Le rle du gne BcBir1 chez B. cinerea.
Question 16. Interprter les rsultats obtenus dans les documents 16-A et 16-B et en
dduire un rle du gne BcBir1.
Bibliographie :
Partie 4 : Espino JJ et coll., Proteomics, 10(16) : 3020-3034 (2010); Manteau S. et coll., FEMS,
Microbiol. Ecol. 43 : 359-366 (2003); Rolland S. et coll., Microbiol. 155, 2097-2105 (2009); Parties 5 et
6 : Miya A et coll., PNAS 104 : 19613-19618 (2007); Temme M. et coll., MPMI : 22, 987-998 (2009)
Shlezinger N. et coll., PLoS pathog : 7-8 (2011); Simon UK. et coll. PLoS one : 8 (2013)

FIN DE LPREUVE

15/15