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PROFESORES DE BIOLOGA
Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales y Agrimensura
Docentes: Dr. Enrique Rafael Laffont, Dra. Mara Celina Godoy, Lic. Juan
Manuel Coronel, Lic. Clara Etcheverry.
Asignatura: Biologa de los Invertebrados. Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales y Agrimensura. Universidad Nacional del Nordeste.
Lugol tambin resulta til para la observacin de la morfologa gruesa de protistas. Tambin
puede utilizarse la tintura de iodo de uso medicinal, pero debe diluirse con agua destilada ya
que es una solucin alcohlica. Tambin pueden obtenerse buenas coloraciones usando
Hematoxilina de Delafield o de Erlich, las cuales tien ncleos y detalles citoplasmticos de
los protozoos. Ambas soluciones contienen glicerina, lo que permite que los preparados se
conserven por varias semanas. La utilizacin de verde de metilo o carmn actico permiten la
observacin del nmero y forma de los ncleos.
Durante esta parte del taller, adems de la realizacin de las preparaciones de protistas con
coloraciones semipermanentes, se elaborarn preparaciones de nemtodes de suelo o
fitoparsitos.
Elementos a utilizar:
Ejemplares previamente fijados de nemtodes de suelo o fitoparsitos (en F.A.A., F.S. 4:1 u
otro lquido fijador), portaobjetos, cubreobjetos, aguja histolgica o pincel fino, medios de
montaje (glicerina pura o lactofenol), gotero, esmalte para uas, etiquetas autoadhesivas,
microscopio binocular.
Procedimiento para realizar las preparaciones:
1) Colocar sobre un portaobjetos limpio una gota del mismo lquido fijador o del medio
de montaje elegido (en este caso se utilizar glicerina). La gota debe ser de tamao tal
que abarque slo la superficie del portaobjetos que ser cubierta por el cubreobjetos.
2) Tomar con una aguja histolgica o pincel fino un ejemplar de nemtode y apoyarlo
suavemente en un pequeo trozo de papel absorbente, para evitar que arrastre un
exceso de lquido fijador. Transferirlo al portaobjetos, sobre la gota de glicerina.
3) Cubrir suavemente con un cubreobjetos.
4) Sellar el preparado, rodeando los bordes del cubreobjetos con esmalte para uas.
Asegurarse que todo el permetro est totalmente cubierto para evitar la desecacin del
preparado.
5) Rotular el preparado, con los datos correspondientes a: ejemplar montado, lugar de
procedencia, fecha de realizacin, etc.
6) Observar al microscopio, primero con objetivo de menor aumento (4 x) hasta
identificar un ejemplar y luego pasar a mayor aumento (10 x) para reconocer los detalles
estructurales.
Elementos a utilizar:
Ejemplares de invertebrados de mayor tamao corporal (lombrices de tierra recientemente
fijadas, calamares congelados adquiridos en el comercio), bandejas plsticas, aguja
histolgica o pinza de punta fina, bistur o tijera de diseccin, portaobjetos, placas de Petri
con parafina, alfileres finos, lquidos fijadores (formol 4%, alcohol 70%), lupa binocular.
Procedimiento para realizar la preparacin de lombrices de tierra (Annelida,
Megascolescidae):
1) Para su fijacin, colocar los ejemplares en un recipiente con agua, la cual ser
entibiada por encima de los 40C, o en un recipiente con alcohol 50%. Al cabo de unos
minutos las lombrices quedarn con el cuerpo extendido, facilitando su posterior
observacin y preparacin.
2) Tomar la lombriz entre los dedos pulgar e ndice de la mano izquierda, con el extremo
posterior hacia la palma de la mano y con la superficie dorsal (ms oscura) hacia arriba.
3) Realizar un corte longitudinal con una tijera de punta curva o recta, desde la abertura
bucal hacia la regin clitelar, sin introducir demasiado la punta de las tijeras para no
daar los rganos internos.
4) Una vez realizado este corte, colocar el ejemplar sobre una placa de Petri con parafina
y fijarlo con un alfiler en el extremo anterior y con otros dispuestos en forma oblicua a
ambos lados de la pared del cuerpo.
5) Completar el corte mediodorsal utilizando tijeras de punta fina, hasta casi alcanzar el
extremo posterior del cuerpo.
6) De ser necesario, cortar los septos con bistur o tijeras.
7) Agregue agua de grifo a la placa, hasta cubrir el animal.
8) Observar bajo lupa binocular para el reconocimiento de rganos internos.
9) Conservar el ejemplar agregando a la placa formol 4% hasta cubrir el cuerpo y taparla.
Al cabo de 3- 4 das, el cuerpo adquiere cierta rigidez y pueden quitarse los alfileres y
guardar la lombriz en un recipiente plstico hermtico. Otra opcin para la conservacin
es ubicar el ejemplar entre dos cubreobjetos y atar ambos extremos con un hilo de
algodn.
10) Los ejemplares pueden fijarse y conservarse en formol 4- 5% o en alcohol 70%.
3) Abrir ambos lados del manto para exponer el contenido de la cavidad paleal.
4) Desprender suavemente con las tijeras o la pinza, la delgada membrana que recubre
los rganos internos.
5) Realizar el reconocimiento de las estructuras internas a simple vista.
6) Extraer la valva interna (pluma), levantando parcialmente el cefalopodio y efectuando
un corte en el borde del manto (superficie dorsal). Tirar suavemente del extremo de la
pluma con la pinza y quitarla.
7) Extraer las mandbulas quitinosas y la rdula con la pinza de punta fina.
8) Montar la rdula entre portaobjetos y cubreobjetos con una gota de glicerina y
observar con el microscopio binocular.
9) Conservar el ejemplar dentro de un recipiente plstico hermtico, agregando formol
4% hasta cubrir el cuerpo. Al cabo de 10- 15 das, reemplazar el formol por alcohol 70%.
a la leche.
Solucin de Lugol: Solucin de Lugol: tambin llamada Yodo de Lugol.
Yodo (I2) . 5g
Yoduro de potasio (KI) .10 g
Agua destilada .100 ml
hasta obtener una solucin saturada. Enfriar y filtrar. Mantener en refrigerador o lugar
fresco.
Carmn .... 1 g
cido actico al 45% .. 100cc
Hematoxilina de Delafield:
especialmente.
Hematoxilina al 3,5% en alcohol absoluto 100 cc
Alumbre de amonio al 6,5% acuoso .. 320 cc
Glicerina . 80 cc
Hematoxilina de Erlich: Disolver la hematoxilina en alcohol y el cido. Disolver el alumbre
por los buenos resultados que se obtienen. Es excelente para la fijacin de platelmintos,
nemtodes, insectos, etc. El tiempo mnimo de accin es de alrededor de 24 hs. en la
mayora de los ejemplares.
Formol comercial (40%).10 cc
Agua destilada . 35 cc
cido actico glacial ... 5 cc
Alcohol 96% .. 50 cc
F.S. 4:1: Para fijacin de nemtodes.
que en general son difciles de montar en preparaciones permanentes). Los bordes de las
preparaciones realizadas con este medio viscoso deben sellarse para que duren varios aos.
Fenol .. 20 g
cido lctico .... 20 g
Glicerina .. 40 g
Agua destilada . 20 g
Formol 4%: el formol comercial se adquiere en una concentracin aproximada del 40%.
fijadores usados ms frecuentemente, tanto para ejemplares enteros como para piezas
anatmicas.
Alcohol etlico 96% .. 500 cc
Agua de grifo o destilada 127 cc
Alcohol 80%:
Alcohol etlico 96% .. 500 cc
Agua de grifo o destilada 120 cc
BIBLIOGRAFIA:
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Third Edition. Blackwell Science.
Gavio, G.; J.C. Jurez y H. Figueroa. 1987. Tcnicas biolgicas selectas de laboratorio y de
campo. Ed. Limusa, Mxico.
Hickman, F.M. y C.P. Hickman Jr. 1991. Zoologa: Manual de Laboratorio. Ed. McGraw-Hill
Interamericana, Madrid.
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McGraw-Hill Interamericana, Madrid.
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