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1. USOS ALIMENTARIOS
1.1. FERMENTACIONES ALCOHLICAS
1.1.1. Bebidas Malteadas
En la fabricacin de cerveza, se prepara primeramente la malta. Para ello, los granos de
cebada se limpian, se someten a maceracin (unos 2 das) y germinacin (unos 2 das), se
secan (a unos 80 C), se separan los grmenes de las semillas y se muelen los granos. La
malta contiene amilasas y proteasas, y al amasarla con agua aplicando perfiles de
temperatura complejos, se solubilizan algunos de sus componentes. Por debajo de 50 0C las
-glucanasas degradan productos gomosos, la protelisis se produce a unos 50-60 0C, y la
sacarificacin a 60-74 0C. Tras diversos lavados se hierve el mosto (para concentrar,
esterilizar, coagular, inactivar enzimas, extraer productos aromas/antispticos caramelizar
ligeramente). Se aade tambin flor de lpulo.
El mosto as obtenido, despus de filtrada, se inocula con levadura de cerveza
(Saccharomyces carlsbergensis) en el proceso lager de fermentacin en el fondo),
previamente desarrollada, y se fermenta durante 8-14 das con perfiles especficos de
temperatura. Se producen cantidades considerables de dixido de carbono y de levadura
que al final flocula y sedimenta. La cerveza se madura durante semanas cerca de los O C,
se gasea, enfra, clarifica y envasa. Como en el resto de procesos, hay muchas variaciones.
La fabricacin de cerveza muestra un gran nmero de procesos de ingeniera de
bioprocesos. Es tambin un buen ejemplo de proceso de fermentacin de bebida. Hay
numerosos tipos de cervezas (distinta fuerza, caloras), adems de productos semejantes,
como el sake. En este ltima caso, el fermento koji que contiene las enzimas se obtiene
cultivando Aspergillus oryzae en arroz macerada y tratado por vapor, despus el koji sobre
el propio arroz convierte el almidn en azcar, que sufre fermentacin alcohlica con
especies del gnero Saccharomyces durante 10-14 das. Otros productos similares son el
pulque (de jugo de maguey) o ginger beer (azcares aromatizados con jengibre).
1.1.2 Vinos
Las uvas se machacan y exprimen, y el mosto que se extrae se trata para inhibicin
microbiana. La fermentacin, con Saccharomyces cerevisiae, se airea inicialmente para que
haya crecimiento, favorecindose despus la anaerobiosis, durante unos 5 das a 25 0C en
el caso de los tintos (los pigmentes de la piel de las uvas dan el color), unos 11 das a unos
15 0C en el caso de los blancos. Es muy importante el control de la temperatura.
Previa separacin de slidos, se realiza una fermentacin secundaria del mosto de unos 10
das a 25 0C aproximadamente; despus se enfra y se lleva a cubas o tanques evitando el
las dos fermentaciones se hacen con una mala divisin de microorganismos. Mientras, los
mtodos rpidos implican un aporte considerable de oxgeno y de eliminacin de calor,
llevndose a cabo, sobre toda, en tanques agitados (fermentacin sumergida).
En lecho fijo (biopelcula), se coloca en la columna un sopor e slido, pasando a su travs el
lquido alcohlico (en transformacin) en direccin descendente. Para regular a
temperatura (< 30 C) que aumenta por el carcter exotrmico de la oxidacin, se enfra el
lquido a la entrada y en el reciclo. El suministro de oxgeno a partir del aire se obtiene por
dispersin del lquido en la parte superior, aunque tambin se podra hacer ascender el aire
a travs de la columna. Como en muchos otros reactores, se precisa un balance completo
de materia y energa. La puesta en marcha del equipo requiere especiales cuidados y
estudios para la formacin adecuada de la pelcula, as como el control del sustrato a la
entrada. Con frecuencia se trabaja con varios reactores en serie. Hay tambin procesos
secuenciales como la introduccin de un lecho de relleno y separacin de vinagre, seguida
de aireacin, y acetificacin final en un tanque ya sin relleno.
En tanque agitada (flculos), en el proceso clsico (acetador Frings), se airea y agita su
contenido con un rotor que succiona aire, distribuyendo las burbujas en el medio que
contiene los flculos de Acetobacter. Es importante la forma del flujo interno y la colocacin
de hlices de refrigeracin para el control de temperatura. Existen tambin biorreactores
tipo pulverizacin o niebla (Mackin) y tipo columna. Los vinagres obtenidos por el mtodo
rpido pueden precisar algn tipo de acabada o envejecimiento. Finalmente se lleva a cabo
la clarificacin (por filtracin), pasteurizacin y envasada.
1.2.2 cido Ctrico
En la industria alimentaria se usa en bebidas refrescantes, mermeladas y en repostera,
como complemento de antioxidantes y acidificante, para evitar tratamiento trmico fuerte
e impedir pardeamientos.
Se produce por fermentacin sobre todo de melazas, con Aspergillus nger (con Candida
guilliermondii es ms rpida) con altas concentraciones de azcar y con adicin de
nitrgeno, generalmente en forma de amonio o urea. Es muy sensible a la concentracin
de oxgeno disuelto, al pH (por encima de 2 acumula cido glucnico) y a la presencia de
Mn2+. El reactor clsico de bandejas (crecimiento superficial) se ha ido sustituyendo por
tanques (crecimiento en profundidad) disminuyendo el tiempo de fermentacin a menos
de 7 das.
1.2.3 cido Lctico
Se usa purificada para acidificacin alimentaria, para conservacin y para facilitar la
digestibilidad de productos lcteos. Una parte muy importante de la demanda mundial se
obtiene por fermentacin, esencialmente mediante bacterias lcticas homofermentativas
en condiciones anaerobias, pH ligeramente cido y con un 5-20% de azcar. Las bacterias
lcticas homofermentativas utilizan las hexosas para dar en forma casi completa (>80- 90%)
cido lctico por la ruta Emben-Meyerhoff, mientras que las heterofermentativas generan
adems de cido lctico, etanol y CO2, y en algunos casos adems cido actico
(bifidobacterias) por la va de la pentosa fosfato. Como sustratos se usan melazas e
hidrolizados de almidn (Lactobacillus delbrueckii), suero de leche (Lactobacillus
bulgaricus), aguas sulfticas de la industria de papel (Lactobacillus plantarum que fermenta
pentosas). El cido lctico se cristaliza como sal clcica para posteriormente purificarse para
alimentacin.
1.2.4 Otros cidos
Se pueden tambin destacar:
que junta a las hexosas puede tratar pentosas. Los reactores continuos
resultan adecuados al permitir una aireacin y agitacin ptimas evitando
produccin de alcohol, sin una respiracin excesiva. El suministro de C, N, P,
K debe ser inicialmente creciente mantenindose despus. El rendimiento es
alrededor del 45% respecto al azcar. Las levaduras se centrifugan, se lavan,
concentran y secan. Cuando se usan sustratos residuales debe cuidarse la
contaminacin.
Bacterias y actinomicetos. Se han propuesto numerosos microorganismos
(por ejemplo Methylophilus, Methylomonas) usando como sustrato
productos qumicos y residuos agrcolas y forestales. Suele haber problemas
de coste y manejo de materiales, por la necesidad de elevada concentracin
final de producto, y tratar grandes volmenes de agua, con dificultades en la
centrifugacin y filtracin
Mohos y hongos superiores. Existen diversos procesos, por ejemplo, para
setas, en purines o lechos de compost sintticos.
Algas. Pueden crecer en forma auttrofa (con luz en la regin de 700 nm y
dixido de carbono) o hetertrofa (Corgnico y energa). En el caso del
crecimiento fotosinttico se limita a profundidades de unos 25 cm, bajando
a continuacin la eficacia de la luz (p. ej. 1 kg alga/35 kWh), siendo
conveniente pH alcalina para disponer de Cinorgnico como bicarbonato. Hay
datos de produccin de 10 g/m2da (con Spirulina, fertilizando con nitrato y
hierro, y 70 cm de profundidad), o con luz artificial, 30 veces la natural y X =
25 g/L (Chlorella sorokiniana).
1.4 OBTENCIN DE INCULOS
El inculo o starter se obtiene para ser utilizado como biocatalizador de bioprocesos
debiendo cumplir unas exigencias estrictas de viabilidad, eficacia y vida til. En la industria
alimentaria se usan para modificar la textura el desarrollo de aromas o mejora nutricional,
para la conservacin de alimentos (en particular en las industrias de panadera, lctea,
crnica), as como para fermentaciones alcohlicas. Habitualmente deben considerarse
varios factores:
En cultives mixtos deben ser especies compatibles y hay que tener en cuenta que es
muy difcil mantener la proporcin de microrganismos que se desea.
1.4.1 Levaduras de Pan
Suele usarse melaza como sustrato suplementado con N, P y biotina, con Saccharomyces
cerevisiae, requirindose aproximadamente 1 g de oxgeno por gramo seco y refrigeracin
(3,5 kcal por gramo de levadura producida). Se lleva a cabo manteniendo baja la
concentracin de azcares en un reactor de alimentacin contina y en condiciones
aerobias. Posteriormente se concentra por centrifugacin y filtracin rotatoria a vaco. La
torta puede mejorarse mediante emulsionantes y secada en lecho fluidizado hasta alcanzar
una humedad del 7%.
Se llega a alcanzar un rendimiento de biomasa de 0,54 kg/kg (Yx/s y una concentracin de
unos 60 g/L (seco).
1.4.2 Industria Lctea
En la produccin de quesos los microrganismos ms importantes son Streptococcus
cremoris y S. lactis (homofermentativos mesfilos) que producen cido lctico. Para yogures
se utilizan S. thermophilus, Lactobacillus bulgaricus y L. acidophilus (homofermentativos
termfilos). El Penicillium camemberti se usa en quesos madurados con superficie
recubierta de mohos, y el Penicillium roqueforti para desarrollo interno. La invasin de los
mesfilos por bacterifagos es uno de los mayores problemas, en particular al
incrementarse la demanda e introducirse cepas nicas. Para evitarlo se debe mejorar la
propagacin asptica, acortar los tiempos de maduracin, rotar cepas no relacionadas con
fagos, introducir medios inhibidores (por ejemplo, complejando el Ca2- que precisan con
fosfato) o directamente utilizando cepas insensibles a fagos, aunque no siempre sea
posible.
La produccin se realiza en cultivos con sustrato lcteo con aditivos e inhibidores de fagos,
a unos 30 0C (segn tipo), pH=6 y agitacin suave. Despus se enfra y se filtra
aspticamente, pudindose inocular directamente o almacenar (congelacin o liofilizacin).
1.4.3 Industria Crnica
La fermentacin en la industria crnica suele inducirse por razones de conservacin (debido
a la acidificacin para eliminar humedad y mejorar la estabilidad, para a produccin de
aromas y saberes, o para la mejora del aspecto, evitando el empleo de aditivos qumicos.
Con frecuencia se aade azcar para propiciar la produccin del cido lctico, que resulta
favorecida tambin por la adicin de nitratos, que pasan a nitritos. Los nitritos impiden la
oxidacin de la hemoglobina, evitando bacterias indeseables, al tiempo que estabilizan el
color.
Se usan bacterias productoras de acides, por ejemplo Lactobacillus plantarum o
Pediococcus cerevisiae (no reduce nitrato) y reductoras de nitrato (Micrococcus) en un
controlar
2. OBTENCIN DE ENZIMAS
2.1 Enzimas de Inters.
Las enzimas microbianas se han venido usando sin purificar, en la industria alimentaria
desde la antigedad, en procesos tradicionales. Algunas enzimas no microbianas son la
papana de la planta Carica papaya (usada en cervecera), la quimosina del estmago de
terneras (para fabricar queso), o las amilasas, glucanasas y proteasas de cereales malteados
(cervecera).
Algunas enzimas microbianas extracelulares de inters son:
Muchos de los medios de fermentacin son productos agrarios, renovables, con azcar,
almidn y en algunos casos grasas o aceites (soja, palma, algodn), y que el futuro podra
sustituirse por lignocelulosa por producirse entre 100 y 1.000 veces ms que con los dos
primeros. El almidn, de diversas procedencias (maz, trigo arroz, patatas), es el ms usado.
Lo normal es hidrolizarlo previamente con amilasas para evitar la gelificacin durante la
esterilizacin y facilitar la fermentacin posterior. Tambin se usa glucosa, obtenida
frecuentemente por conversin enzimtica de almidn. Es habitual el uso de sacarosa,
zumos y, en particular melazas, por ser un subproducto, aunque debe purificarse y cuidar
reproducibilidad de resultados. La lactosa tambin usa, al encontrarse como subproducto
en el suero de leche, aunque debido a la baja concentracin (su transporte puede resultar
costoso. La celulosa refinada se usa para obtener enzimas, pera resulta difcil de aprovechar
de la madera, pues la lignina que contiene hace resistente al ataque microbiano, mientras
que el otro componente, la lignocelulosa, no puede convertirse an de forma rentable
(qumica o enzimticamente) en azcares fermentables, aunque puede usarse para obtener
hongos.
Las fuentes de nitrgeno pueden ser cereales, races o subproductos, o bien amoniaco,
urea, o nitratos y en casos muy especiales aminocidos. En ocasiones se puede aportar
mediante sustratos complejos que tambin aportan vitaminas y otros factores de
crecimiento.
Obtencin de alcohol y productos qumicos.
2.3.1.1 Alcohol (Bioetanol)
El uso de biomasa como materia prima tiene la ventaja de su carcter renovable, aunque
junto con los problemas de transporte y ambientales, presenta problemas econmicos si
puede ser usado directamente como alimento, por lo que es preferible el uso de material
lignocelulsico. Junto con la operacin de fermentacin, las etapas de molienda, hidrlisis
qumica y enzimtica, y deslignificacin presentan importantes problemas tcnicos y
econmicos.
El alcohol se obtiene actualmente en grandes volmenes para su uso como combustible
(particularmente en Brasil y USA, unos 30 X 109 kg). Las materias primas principales son
azcares de caa y remolacha, almidones de cereales (maz en particular) y otras en
desarrollo, como las procedentes de madera y subproductos de procesos como la industria
papelera o el lactosuero. El 95% se obtiene con S. cerevisiae sobre hexosas, aunque estn
propuestos otros, en particular Clostridium thermocellum, y Zymomonas mobilis de mayor
rendimiento.
Los procesos estn bien establecidos, no slo los discontinuos, sino tambin los continuos,
que pueden tener ms eficacia y no presentan la limitacin que suele plantear su uso en la
fabricacin de productos alimentarios, con una industria conservadora en cuanto a
mtodos. Las mejoras se han realizado no slo en la produccin agraria, sino tambin en el
realiza a pH=6,5 y 25 oc. En aerobiosis se requiere un aporte de oxgeno de unos 0,20,4 g/m3s (OTR), con un caudal aproximada 0,5-1,0 vvm (volmenes de aire/
volumen media de fermentador y por minuto) y agitacin fuerte, 1 kW/m3. Se
obtienen unos 30 g/L de penicilina G o V, consumindose, por gramo obtenido, unos
20 g de carbohidrato y 0,5 g de fenilacetato sdico, entre otros.
La separacin inicial de la masa micelial se realiza por una filtracin con
coadyuvante, enfriando a continuacin el filtrada a 0-4 0C para reducir la
degradacin, pudiendo requerirse asimismo otra filtracin posterior. La forma acida
de penicilina (pKa=2,5-3,1) se extrae con un extractante orgnico (frecuentemente
acetato de amilo o de butilo) a pH=2,5-3,0 en extractores multietapa, continuos a
contracorriente centrfugos (Podbelniak), reextrayndose con KOH (pH=5,0-7,7). A
continuacin se evapora y cristaliza, lavndose, presecandose con disolventes
voltiles como n-butanol y secndose, finalmente, a vaco y con filtros horizontales.