INTRODUCCION A LA ESTIMACION

DE INCERTIDUMBRE Y CURVAS DE
CALIBRACIN EN LOS MTODOS
ANALTICOS
Prof. Marcial Prez

PROCESO DE MEDIDA QUIMICO (PMQ)

Conjunto de etapas sistematizadas que van a permitir resolver
un problema analtico
Muestreo, pesaje,
digestin, etc.

XU
Los mtodos analticos son establecidos por instituciones nacionales o internacionales
que proporcionan procedimientos y caractersticas del mtodo y que concluyen con
indicadores de calidad (denominados caractersticas del desempeo analtico) que suelen
incluir: exactitud, precisin, especificidad, adems de los parmetros que se determinan
a partir de las curvas de calibracin.

Conocimientos previos
Antes de empezar el tema, es necesario recordar a los alumnos que deben
manejar los siguientes trminos:
Exactitud, precisin, error aleatorio, error sistemtico, poblacin, muestra,
media de la poblacin (m), desviacin estndar de la poblacin (s), varianza
de la poblacin (s2), media de la muestra ( x ), desviacin estndar de la
muestra (s), varianza de la muestra (s2), distribucin normal de error y
ANOVA.
La informacin sobre estos trminos puede encontrarse en:
a) D.A. Skoog, J.J. Leary, Anlisis Instrumental, 4ta. Edicin, Apndice 1.
b) Paginas web: http://www.iupac.org/; http://www.cenam.mx/default.aspx

CONTROL DE CALIDAD EN MTODOS ANALTICOS

1. Trazabilidad metrolgica

Propiedad de una medicin, fsica

o qumica, por de medio de la
cual el resultado puede ser
relacionado con una referencia
establecida mediante una cadena
ininterrumpida y documentada de
comparaciones.

Una
cadena
de
trazabilidad
metrolgica, se define como una
sucesin de patrones y calibraciones
que relacionan un resultado de
medida con una referencia.

En mtodos de anlisis qumicos, la trazabilidad se consigue

trazando globalmente los resultados obtenidos en el
procedimiento analtico a un valor de referencia y evaluar si los
resultados obtenidos con dicho
procedimiento son
comparables a los de la referencia utilizada.

2. Qu es la validacin del mtodo de ensayo?

La Norma COVENIN-ISO 9000:2000 define a la
validacin como: La confirmacin por examen y
el suministro de evidencia objetiva de que se han
cumplido los requisitos particulares para una
utilizacin o aplicacin especfica prevista.

La validacin de un mtodo de ensayo es un

requisito primordial cuando deseamos obtener
resultados tcnicamente vlidos, exactos y
confiables.
La validacin del mtodo es necesaria ya que
permite conocer los parmetros de
desempeo del mtodo y proporcionar un alto
grado de confianza y seguridad en el mtodo y
en los resultados que se obtienen al aplicarlo.

2. Incertidumbre de una medida

XU

Parmetro asociado con el resultado

de una medicin que caracteriza la
dispersin de los resultados de los
valores
que
pueden
ser
razonablemente atribuidos a una
particular propiedad sujeta a medicin
denominada mensurando.

En
la
practica,
la
incertidumbre
puede
provenir
de
diversas
fuentes incluyendo por
ejemplo:

El muestreo, los efectos de la matriz e

interferentes, las condiciones ambientales, la
incertidumbre procedente de la balanzas y el
material volumtrico, los patrones de referencia, el
mtodo o procedimiento utilizado, etc.

Las incertidumbres se
pueden clasificar en:

a) Incertidumbre tipo A; son las que se pueden

determinar exclusivamente a partir del anlisis
estadstico de un conjunto de observaciones
individuales. Por ejemplo: Estudios de repetibilidad
y/o reproducibilidad.
Las incertidumbres de tipo A se determinan a partir de
cualquier mtodo matemtico vlido para analizar datos
estadsticos.
b) Incertidumbre tipo B; son aquellas en la que influyen
factores diferentes a los puramente estadsticos y que
usualmente no pueden ser modificadas por el operador,
como por ejemplo:
Especificaciones del fabricante del
instrumento o calibracin previa.
Incertidumbres de los patrones
tomadas como referencia en los
manuales o en los certificados del
bur de estndares.
Experiencias previas acerca del
comportamiento de los instrumentos.

Incertidumbre estndar combinada:

Para estimar la incertidumbre total, es necesario considerar todas las
fuentes de incertidumbre que pueden ser significativas y obtener la
contribucin individual de cada una de ellas
(denominada
incertidumbre del componente).
Las contribuciones deben ser expresadas como desviaciones
estndar y combinadas de acuerdo a las reglas apropiadas para dar
la incertidumbre estndar combinada.
Debido a que la incertidumbre de cada componente se expresa
como una desviacin estndar
las mismas deben llamarse
Incertidumbre estndar del componente.

Uc

Diagrama de causa - efecto utilizado como ejemplo para determinar la incertidumbre

estndar combinada total de un mtodo analtico.

Y ahora como calculo la incertidumbre

de una medicin analtica?

Debido al elevado numero de

fuentes de error presentes en
un procedimiento analtico, no
es fcil el clculo de la
incertidumbre; por esta razn
se han propuesto diversas
metodologas para determinar
la misma.

I. Metodologas basadas en el clculo de la

incertidumbre de forma global. Es decir, agrupando
trminos de incertidumbres cuando esto sea
posible. Este tipo de metodologas se conoce como
aproximacin top down.

II. Metodologas basadas en la utilizacin de la

informacin histrica de la que ya dispone el
laboratorio, ya sea provenientes de la validacin
del mtodo (estudios de precisin), de grficos de
control o de los resultados de la participacin en
pruebas
interlaboratorios.
Este
tipo
de
metodologas se conoce como aproximacin ISO o
bottom up.

Calculo de la Incertidumbre tipo A

Repetibilidad: Es el resultado de mediciones del mismo mensurando realizadas en iguales
condiciones de medida. Es sinnimo de precisin.
Las condiciones de repetibilidad son:
El mismo procedimiento de medicin.
El mismo operador.
El mismo instrumento, usado bajo las mismas
condiciones.
El mismo lugar de realizacin.
Repeticiones realizadas en intervalos de tiempo cortos.
Reproducibilidad: Resultados de mediciones del mismo mensurando realizadas en
diferentes condiciones de medida.
Estas condiciones pueden incluir diferencias en:

Principios de medicin
Mtodos de medicin
Analistas
Instrumento de medida
Estndar de referencia
Lugar
Condiciones de uso

La reproducibilidad y la
repetibilidad
son
dos
medidas de precisin.

PROCEDIMIENTO SIMPLIFICADO PARA ESTIMAR LA

INCERTIDUMBRE

Calculo de la
Incertidumbre total

Diagrama de flujo del procedimiento simplificado para estimar la incertidumbre.

PROCEDIMIENTO
1. Escribir la expresin matemtica de la magnitud (y) que se mide

2. Considerar las causas de las incertidumbres

3. Identificar las diferentes fuentes de incertidumbre y analizar su

influencia en el mensurando.
Para efectuar esta identificacin sirve de ayuda dibujar un diagrama causa efecto
en el cual se debern considerar las incertidumbres debidas a las magnitudes
primitivas (incertidumbre tipo B) y la repetibilidad y/o reproducibilidad
(incertidumbre tipo A).
Este paso del procedimiento implica la bsqueda de informacin relevante como:
manuales de los equipos (limites de exactitud, certificados de calibracin, etc.),
datos de fabricantes (tolerancias), datos existentes en el laboratorio (grficos de
control de calidad, validaciones, etc.).

Calibracin

Pesaje de la
muestra

Volumen

Dilucin de las
muestras

Diagrama de causa y efecto de las variables involucradas en la tcnica de EAA.

4. Medir o estimar la incertidumbre individual del componente asociado a cada una de

las potenciales fuentes de incertidumbre consideradas.
Por ejemplo:
En el caso de una simple pesada es necesario incluir cualquier incertidumbre
proveniente de la linealidad de la balanza y de su reproducibilidad.
Si el parmetro a considerar requiere dos mediciones (por ejemplo, para conocer la
masa de un solido se necesita tarar y pesar) se deber conocer la incertidumbre
combinada del parmetro considerando la incertidumbre del instrumento o material.
La formula para el clculo de la incertidumbre combinada de la masa es:

5. Estimar la incertidumbre total evaluando el efecto combinado de todos los

componentes, llamada incertidumbre combinada estndar.

Propagacin del error en los clculos aritmticos

NOTA: Cabe sealar que el curso de

Laboratorio Instrumental se pretende
nicamente
introducir
conceptos
bsicos y simplificados de como abordar
el tema de clculo de incertidumbre; un
tratamiento mas formal requiere un
curso completo que deber ser tomado
como materia optativa.

CURVAS DE CALIBRACIN
Los resultados de un anlisis qumico,
pueden verse afectados por la presencia
de efectos de la matriz por errores
inherentes al mtodo. En estos casos, se
requiere la utilizacin de mtodos de
calibracin que permitan minimizar y/o
eliminar estos inconvenientes.
La calibracin se define como un
procedimiento analtico muy utilizado en
anlisis cuantitativo y que implica la
construccin de una curva de calibracin.

Una curva de calibracin es la

representacin grfica de una seal que
se mide en funcin de la concentracin de
un estndar o patrn.

Patrn
Primario

Secundarios

Los estndares qumicos o patrones usados

para la calibracin de una metodologa de un
anlisis qumico son en general, sustancias
puras, mezclas, disoluciones, gases, aleaciones,
etc.

Cmo realizar una buena medida?

Es reproducible?

Precisin

Cmo conseguir el
valor aceptado como
verdadero?

Exactitud

Cual es la cantidad
ms pequea que
puede ser medida?

Sensibilidad

En que rango de
cantidad se puede
medir?

Rango Dinmico o
lineal

Existen
interferencias?-

Selectividad

Independientemente de la tcnica instrumental responsable de la

seal analtica los parmetros que se determinan a partir de
las curvas de calibracin obtenidas con cualquiera de ellas son:

I.
II.
III.
IV.
V.

Linealidad
Sensibilidad
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Intervalo analtico

I. Linealidad

INTERVALO DE LINEALIDAD:
Es
el
intervalo
de
concentraciones donde la
relacin seal-concentracin
es lineal.

Para demostrar la linealidad se requieren cumplir ciertos criterios de

aceptacin en la que estadsticamente se puede justificar esa linealidad;
para ello es necesario calcular:

Como criterio de aceptacin de la linealidad a partir de la curva de calibracin

(conjunto de concentraciones que describen el intervalo en el cual se deber
cuantificar el compuesto por analizar) se considera r2>0,98.

Los estndares o disoluciones

patrn para construir la recta
de calibrado deben ser
preparadas
en
forma
independiente, a partir de una
o varias soluciones madre; el
nmero de puntos a escoger
depender del uso que se d a
la recta de calibrado.

Si bien con dos puntos se puede construir una

curva, estadsticamente se requieren por los
menos tres para que la curva sea confiable;
este nmero se suele aplicar a mtodos de
rutina perfectamente establecidos y validados
(proceso por el cual se demuestra, por
estudios de laboratorio, que la capacidad del
mtodo satisface los requisitos para la
aplicacin analtica deseada).
Por el contrario, si el mtodo est en una etapa
de desarrollo, el nmero de puntos mnimo
ser de cinco o seis para que la variabilidad sea
mnima y el intervalo lineal sea suficiente. Hay
que considerar que un aumento en el nmero
de puntos experimentales implicara mayor
fiabilidad en la recta de calibrado.

Nota: La verificacin del comportamiento de un analito mediante una curva de

calibracin requiere un mnimo de cinco puntos para un intervalo de confianza del 95 %
y de ocho puntos para uno del 99 %.

Disolucin

Aforo

Muestra

Medicin

Obtencin de la concentracin de analito en

las muestras a partir de la grfica y la recta

II. Sensibilidad
Se define SENSIBILIDAD (s) como la razn del
cambio en la seal de salida del instrumento,
S, al cambio correspondiente en el estmulo,
en este caso la concentracin del analito, C.
La sensibilidad mide la capacidad de mtodo
para discriminar entre pequeas diferencias en
la concentracin del analito.
Dos factores limitan la sensibilidad: la pendiente
de la curva de calibracin y la precisin del
sistema de medida.
Por otra parte, es importante mencionar que, al igual que la linealidad, tambin la
pendiente de la curva puede ser distinta para matrices diferentes; esto significa que la
pendiente de la curva depende de todas las condiciones de medida y que stas deben
ser iguales (o al menos similares) para los estndares y la muestra problema.

III. Limites de deteccin (LD)

Se define como la mnima concentracin
del analito detectable por el mtodo.
Su determinacin es importante,
particularmente en anlisis de trazas.

Matemticamente, se define como el cociente

de tres veces la desviacin estndar de la
medida del blanco (b) entre la pendiente (m) de
la curva de calibracin.
El blanco es la seal emitida por el instrumento con
una disolucin que contiene las mismas especies que
la muestra problema (pero sin el analito). Para fines
de validacin se considera que deben hacerse 10
mediciones de blancos independientes El valor de 3
se refiere a tres veces la desviacin estndar al
realizar la medicin de estos blancos; cabe mencionar
que la eleccin de estos blancos no siempre es fcil.

IV. Limites de cuantificacion (LC)

Se define como la concentracin ms pequea del
analito que puede ser determinada con un nivel de
exactitud y precisin aceptables. Dependiendo del
convenio utilizado se considera como la
concentracin de analito que corresponde al valor
del promedio del blanco mas 5, 6 o 10 veces la
desviacin estndar del mismo (esta ltima es la ms
comn).
Matemticamente, se define como el cociente
de diez veces la desviacin estndar de la
medida del blanco (b) entre la pendiente (m) de
la curva de calibracin.
Es importante hacer notar que ni LD ni el LC
representan niveles a los cuales sea imposible la
cuantificacin del analito; el significado es que el LC
representa la mnima concentracin del analito que
puede ser determinada con un aceptable nivel de
incertidumbre

V. Intervalo analtico

Est definido como el intervalo de concentracin

en que el analito puede ser determinado
mediante la utilizacin de la curva de
calibracin; se considera que es el comprendido
entre el lmite de cuantificacin (LC o LOQ) hasta
la concentracin en la cual se pierde la linealidad
de la curva (LOL).

Los mtodos de
calibracin
se
pueden dividir en
dos tipos

Los que utilizan

estndares externos a
la muestra.

Los que utilizan

estndares aadidos
a la muestra.

Los mtodos de estndar

externo los patrones se analizan
separadamente de la muestra
desconocida
y
contienen
distintas
concentraciones
conocidas del analito, junto a la
matriz la cual es similar
idntica a la de la muestra.

Los mtodos que se basan en

estndares
aadidos,
se
requiere agregar una cantidad
conocida del estndar a cada
muestra que se analiza.

I. Calibracin sencilla con estndares externos

Este mtodo de anlisis se aplica en la determinacin de un analito,
en el cual los componentes de la matriz de la muestra como tambin
los reactivos usados en la preparacin de la misma no interfieren en el
anlisis. Es decir, la matriz no tiene efecto sobre la seal medida.
Tambin se puede emplear en condiciones tales que la contribucin
de los interferentes, sobre las medidas se mantiene constante, con lo
cual se puede realizar la oportuna correccin del error determinado por el
interferente.
Los estndares de calibrado seleccionados deben aproximarse tanto en la
concentracin del analito como en su composicin de los diferentes
componentes qumicos, presentes en la matriz de la muestra.

La calibracin externa se denomina

as porque las muestras y los
patrones se determinan en forma
separada.

Ejemplo 1: Se tienen tres muestras de agua potable A, B y C de 10 mL cada una, en la

cual se debe cuantificar la cantidad de cobre presente por absorcin atmica. Para ello,
la muestra es filtrada, acidificada con cido ntrico y se diluye a un volumen final
de 25 mL. Posteriormente, se mide la respuesta instrumental de cada muestra de
agua. Adicionalmente, se prepara una serie de patrones de Cu en agua destilada y
deionizada que tambin se acidifica y se mide su respuesta instrumental junto
con una solucin blanco (solucin que no contiene analito). Los resultados obtenidos
se presentan en la tabla 1.

Una vez que se calibra el instrumento, utilizando los estndares y aplicando el

mismo procedimiento, se miden las muestras de agua y se registran los resultados que
se presentan en la tabla 2.

SOLUCIN:
PATRONES CALIBRACION

Tanto los resultados obtenidos de las

seales medidas correspondientes a las
soluciones estndares como a las muestras,
deben corregirse utilizando la medida del
blanco. Luego se procede a realizar el
anlisis estadstico de la data experimental
y la grfica correspondiente.

(Conc.)
Blanco
P1
P2
P3
P4
P5
P6
P7
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3

(Seal)
0,001
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,39
0,45
0,41

y
(Seal
corregida)

X^2

Y^2

XY

Resultados del anlisis de las muestras de agua en

concentracin**.

**Valores obtenidos AL MULTIPLICAR POR el

factor de dilucin, al cual se someti inicialmente
las muestras de agua.

RECUERDEN SIEMPRE, TODA MEDICIN

TIENE ASOCIADO UN VALOR DE
INCERTIDUMBRE.

?
ES CORRECTO
REPORTAR UN VALOR
DE ESTA FORMA?

XU

Estimacin de la Incertidumbre en la determinacin de la

concentracin de una disolucin de concentracin desconocida
del analito en una muestra mediante el mtodo de la curva de
calibracin

i. Clculo de incertidumbre por el mtodo de regresin

por mnimos cuadrados
El calculo de la pendiente y de la
ordenada en el origen se
simplifican cuando se definen tres
cantidades, Sxx, Syy, y Sxy

S xx =

x x = x

2
i

S yy = yi y =

_
_

= xi x yi y=
Sxy

2
i

( xi )

y)
(

xi yi

x y
i

Donde:
N Nmeros de pares o puntos de la
curva.
Sxx, Syy, es la suma de los cuadrados de
las desviaciones de la media para cada
uno de los valores de x y y.
sy , desviacin estndar residual.
sx , sm , sb desviacin estndar de los
resultado analticos, pendiente y de la
ordenada al origen.
_

x, y

son los valores medios para x y y.

De las expresiones Sxx, Syy, Sxy se puede obtener las siguientes ecuaciones:
1. La pendiente m de la recta:

m=

S xy
S xx

2. La ordenada en el origen, b:
_

b= y m x
3. La desviacin estndar de la regresin, Sy:
sy =

S yy m 2 S xx
N 2

4. La desviacin estndar de la pendiente, Sm:

sm =

s y2
S xx

5. La desviacin estndar de la ordenada en el origen, Sb:

sb
=

x
s=
N x ( x )
2
i

2
i

sy

( x)
N
i

2
i

6. La desviacin estndar de los resultados obtenidos a partir de la curva

de calibracin, Sx:

=
sx

sy
m

_ _
yc y

1 1

+ +
M N
m 2 S xx

yc media de un conjunto de M

anlisis repetidos (replicas) cuando

se usa una curva de calibracin de N
puntos.

Los resultados para una

muestra incgnita se
expresan como:

donde t depende del

nmero de muestras
realizadas
en
la
calibracin y del
intervalo de confianza
deseado.

Valores de t para varios niveles de confianza

Distribucin Normal de Probabilidad.

ii. Clculo de incertidumbre combinada extendida

Se calcula las desviaciones

estndar para cada uno de
los parmetros (y, b y m),
los cuales se consideran
como
incertidumbre
individuales.

Se calcula la incertidumbre
estndar combinada de los
dos
trminos
del
numerador:

Valido solo para

una replica

Finalmente, se calcula la
incertidumbre
estndar
combinada total:

En el caso de usar varias

replicas, hay que introducir
termino de la incertidumbre
estndar asociada a la
repetibilidad:

U ct
=
_
x

U cn sm srep
xK

+ +
y m n
2

Nota: En las ecuaciones anteriores no se han considerado las incertidumbres asociadas

al material volumtrico, la pesada de reactivos y muestras, entre otras.

II. Calibracin con adicin de estndar

Se utiliza cuando las
muestras
tienen
matrices difciles

El propsito de este mtodo es generalmente

corregir
efectos
de
interferencias
multiplicativas debidas a la matriz de la
muestra.

Mtodo muy largo, ya que hay que

hacer una preparacin por muestra

Algunos software permiten hacer

el tratamiento de datos sin tener
que hacer todas las preparaciones

Ejemplo
:
Para
la
determinacin de aluminio
en muestras de agua de ro,
se utiliz el mtodo de
adicin de estndar. En
todos los casos se empleo un
volumen de muestra de 10
mL a las cuales se les
adiciono una solucin patrn
(S) de aluminio 0,15 mM. Por
ltimo, todas las soluciones
se diluyeron a un volumen
final de 25 mL, y se
obtuvieron los resultados
presentados en la tabla

En este caso CM es 1,21E-5 M y aplicando el factor

de dilucin se obtiene que CM=3,03E-5 M.

Clculo de la
concentracin
de analito por
extrapolacin

Calibracin por adicin de estndar

Clculo de incertidumbre en mtodos de adicin de estndar

MTODO I

MTODO II

K=1

Nota: Si la determinacin de la muestra hubiese sido realizada n veces, con el uso de

material volumtrico y una balanza , habra que introducir estos datos en el clculo de la
incertidumbre final.

III. CALIBRACIN CON PATRN INTERNO

Se utiliza sobre todo para corregir posibles derivas instrumentales
OBJETIVO

Medir la seal de un analito de concentracin

conocida a lo largo de un anlisis

Eleccin del patrn interno:

Comportamiento lo ms parecido al analito problema:
Potencial de ionizacin
Masa atmica
METODOLOGA
Aadir un volumen fijo del elemento elegido como patrn interno tanto a
muestras como patrones

La calibracin con estndar patrn interno se utiliza para compensar errores

aleatorios y sistemticos como interferencias no espectrales de componentes de la
matriz, fluctuaciones debidas del mtodo y errores instrumentales .
Por ejemplo: variacin de la velocidad de nebulizacin, del tamao de gota,
fluctuaciones de las presiones gaseosas, de la viscosidad y tensin superficial.
Se aplica este mtodo en tcnicas instrumentales que permitan la determinacin
multielemental.
La aplicacin de este mtodo consiste en realizar medidas simultneas de la
respuesta del instrumento al analito y al estndar interno. El estndar interno, se
aade en una cantidad conocida y constante a la muestra, y a los estndares del
analito. En la grfica de calibrado se representa la relacin Seal analito/Seal de
estndar interno en funcin de la concentracin del analito en los estndares. De
esta manera la respuesta del instrumento o la seal analtica es independiente, de
la fluctuacin debida al mtodo de anlisis. Para la muestra la relacin entre la
seal (Seal M) y la concentracin (CM) viene dada por:

Similarmente, para el estndar interno se tiene:

Dividiendo las ecuaciones anteriores se obtiene:

Donde, f corresponde al factor de respuesta f=kM/kEI este debe ser constante en un

determinado intervalo de concentracin. Adems, f tambin viene dado por el
producto de la pendiente de la curva de calibrado por la concentracin del patrn
interno, cuando se grfica la relacin de las seales versus la concentracin del
estndar. Mientras que si se grfica la relacin de las seales versus la relacin de las
concentraciones, la pendiente es directamente el factor de respuesta.
Re-escribiendo la ecuacin anterior en trminos de los estndares del analito (CS,
SealS), se tiene la expresin que describe la curva de calibrado, dada por:

Se determinan las respuestas del analito y del estndar interno, y se

calcula el cociente de las dos respuestas.
Si se vara algn parmetro que afecte a las respuestas medidas, dichas
respuestas (del analito y estndar interno) se deben afectar por igual.
Por tanto, el cociente de respuestas (del analito y del estndar interno)
depende solamente de la concentracin de analito.

Patrones internos ms utilizados:

45Sc, 69Ga, 89Y, 115In, 103Rh, 159Tb,
165Ho, 175Lu, 187Re, 209Bi

Selectividad.
La selectividad de un mtodo analtico indica el grado de ausencia de
interferencias, debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra
Se cuantifica mediante la obtencin de la sensibilidad del mtodo frente al analito
(mA) y al interferente (mB).
La seal total (S) viene dada por la expresin:

Donde, CA y CB corresponde a la concentracin

del analito y del interferente, respectivamente
y Sbl es la seal del blanco.
De esta manera se define el coeficiente de selectividad de B con respecto a A como:

El coeficiente de selectividad es una medida de la respuesta relativa del mtodo

para la especie B cuando se compara con A.
Los coeficientes de selectividad son parmetros de calidad

Eliminacin de Interferencias.
Qumicamente: Usando agentes enmascarantes ( sustancia que reacciona con
el interferente para formar una especie que no produce la misma seal del
analito). Se consigue mediante un ajuste de pH , un cambio en el estado de
oxidacin, formacin de complejos.
Fsicamente: Separndolas previamente a la determinacin. mediante
precipitacin, extraccin, cromatografas o destilacin, volatilizacin.