HYDROLYSIS OF MALTOSA FOR OBTAINING SYRUP, ENZYME USING

DEXTROZYME GA , AT STANDARD CONDITIONS.

HIDROLISIS DE MALTOSA PARA LA OBTENCIN DE JARABE DE
GLUCOSA, UTILIZANDO LA ENZIMA DEXTROZYME GA , EN CONDICIONES
ESTNDARES.
Eduardo L. ANAYA S., Amelia M. HOME J., Donis A. MNDEZ R.,
Luis C. MORALES D., Isamar RODRGUEZ J.
ABSTRACT
Background: malt sugar or maltose is a disaccharide composed of two glucose
units joined by a glycosidic bond between oxygen produced first anomeric carbon
(from-OH) of glucose and oxygen within the fourth carbon of another. Objective: to
evaluate in the laboratory parameters enzymatic hydrolysis of maltose to produce
glucose syrups. Methods: Data Dextrozyme GA enzyme is a glucoamylase
which hydrolyses maltose to obtain glucose production was assessed dextrose
equivalent when the enzyme works at standard conditions, ie, at a pH of 4.3 and a
constant temperature 60 C. Analytical method was used 3,5-dinitrosalicylic acid
(DNS) to calculate the reducing sugars present in the sample. Results:
absorbance was calculated from each of the samples was determined and
reducing sugars present in these. Conclusion: We can conclude that the reaction
time mediad and dextrose equivalent have a direct, for the increase of time also
increases the amount of dextrose equivalent.
Keywords: Dextrozyme GA , maltose, pH, 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS)
RESUMEN
Antecedente: La maltosa o azcar de malta es un disacrido formado por
dos glucosas unidas por un enlace glucosdico producido entre el oxgeno del
primer carbono anomrico (proveniente de -OH) de una glucosa y el oxgeno
perteneciente al cuarto carbono de la otra. Objetivo: evaluar a nivel de laboratorio
los parmetros de la hidrlisis enzimtica de la maltosa, para la produccin de
jarabes de glucosa. Mtodos: Se utiliz la enzima Dextrozyme GA que es una
glucoamilasa, que hidroliza la maltosa para obtener glucosa se evalu la
produccin de equivalente dextrosa cuando la enzima trabaja en condiciones
estndares; es decir; a un pH de 4,3 y una temperatura constante de 60C. Se
utiliz el mtodo analticos del cido 3,5-dinitrosalicilico (DNS) para calcular los
azucares reductores presentes en la muestra. Resultados: se calcul la
absorbancia de cada una de las muestras y se determin los azucares reductores
presentes en estas. Conclusin: podemos concluir que a mediad el tiempo de
reaccin y el equivalente dextrosa tienen una relacin directa; pues al aumentar el
tiempo aumenta tambin la cantidad de equivalente dextrosa.

Palabras claves: Dextrozyme GA, maltosa, pH, cido 3,5-dinitrosalicilico (DNS).

INTRODUCCIN
La maltosa o azcar
de
malta es
un disacrido formado
por
dos glucosas unidas por un enlace
glucosdico producido
entre
el
oxgeno
del
primer
carbono
anomrico (proveniente de -OH) de
una
glucosa
y
el
oxgeno
perteneciente al cuarto carbono de la
otra. Por ello este compuesto tambin
se llama alfa glucopiranosil (1-4) alfa
glucopiranosa. Al producirse dicha
unin se desprende una molcula
de agua y ambas molculas de
glucosa quedan unidas mediante
un oxgeno monocarbonlico
que
acta como puente. Tiene una carga
glucmica muy elevada.

La maltosa presenta en su forma

estructural el OH hemiacetlico por lo
que es un azcar reductor, da la
reaccin de Maillard y la reaccin de
Benedict.A la maltosa llama tambin
azcar de malta, ya que aparece en
los granos de cebada germinada. Se
puede obtener mediante la hidrlisis
del almidn y glucgeno. Su frmula
es C12 H22 O11.
La glucoamilasa es una enzima
hidroltica del grupo de las amilasas,
tambin
conocida
como
amiloglucosidasa,
su
nombre
sistemtico es 1,4-alfa-D-glucano
glucohidrolasa. Es una de las
enzimas ms estudiadas debido a su
influencia directa en la degradacin
del almidn, uno de los productos

alimentarios ms explotados a nivel

mundial.
El objetivo de la prctica es
determinar la cantidad de equivalente
dextrosa presente en una solucin de
maltosa al 3%, con la accin de la
enzima
Dextrozyme
GA,
a
diferentes tiempos de reaccin.
METODOLOGA
En un Erlenmeyer se disolvi 4,5 g de
maltosa en 150ml de una solucin
buffer de cido actico 0.1 normal y
citrato de sodio, para mantener un pH
de 4,5 y as crear las condiciones
adecuadas para que actuara la
enzima,
luego
se
agit
constantemente para homogenizar la
solucin,
quedando
una
concentracin final de 3%. Se tom
una muestra blanco en el tiempo cero
(no hay enzima), seguidamente se
agregaron 1.92 ml de la enzima
dextrozyme a la solucin despus de
haber tomado el blanco, se llev al
bao termostatado con control de
temperatura y agitacin permanente
en donde la temperatura se mantuvo
constante a 60C con el fin de que la
enzima
no
fuera
inactivada.
Posteriormente se retir cada 5
minutos 0,5 ml de la muestra para un
tubo de ensayo, al cual se le adicion
4,5 ml de agua destilada, dando
como resultado una dilucin de jarabe
de glucosa.

Luego
con
ayuda
de
un
micropipeteador se extrajeron tres
muestras de 0,5 ml de la dilucin y se
agreg a cada tubo 0,5 ml de DNS,
se homogenizaron en el vrtex;
posteriormente, se colocaron a
ebullicin en un Beaker con agua por
un tiempo de 5 minutos (en estas
condiciones, el DNS reacciona con
los grupos reductores y se convierte
en
3-amino-5-dinitrosaliclico),
terminado este procedimiento se
enfriaron las muestras en un bao de
hielo durante 5 minutos, y despus se
les adicion 5 ml de agua destilada, y
seguidamente se agit en el vrtex y
por
ltimo
se
deposit
aproximadamente 1ml de cada
muestra, con el fin de determinar la
absorbancia
a
575nm en el
espectrofotmetro Genesys 10S-VIS.
Este procedimiento se repiti para
tiempos de 5, 10 y 15 minutos.

Para la realizacin de todos los

clculos de azcar reductor con el
mtodo DNS se utiliza la curva patrn
de glucosa debido a que la maltosa
esta formada por dos molculas de
glucosas, y el producto de la hidrolisis
es un jarabe de glucosa (ver grafica
1).

Resultados.

La ecuacin de la recta es:

Y=61,531X 4,9497; donde X: es la
absorbancia de la muestra en
cualquier tiempo.

Utilizando la enzima dextrozyme

(glucoamilasa) y sustrato la maltosa,
para preparar una solucin de 150 ml
a una concentracin de 3% para los
tiempos de 0, 5, 10 y 15 minutos
usando la tcnica del triplicado los
resultados obtenidos se muestran en
la tabla 1.
Tabla 1: absorbancia de las muestras
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Blanco
0,167
0,179
0,189
5
0,198
0,201
0,187
10
0,216
0,189
0,225
15
0,301
0,296
0,307

CURVA PATRON DE GLUCOSA

120

y = 61,531x - 4,9497
R = 0,9907

100

Glucosa (mg)

80
60
40

20
0
-20

0,5

1,5

absorbancia

Grafica 1: curva patrn de glucosa.

Para calcular la cantidad de azucares

reductores se realiz un promedio de
las absorbancias para cada tiempo, y
adems se calcul la desviacin
estndar de los tres datos para cada
tiempo, encontrando que estos no
presentan gran variacin, por lo tanto
podemos trabajar con los promedios
de absorbancia calcular azcares
reductores;
los
resultados
se
muestran en la tabla 2:

TIEMPO Vs EQUIVALENTE
DEXTROSA

Tubo
1

Tubo
2

Tubo
3

Blanco 0,225

0,292 0,276

5
10
15

0,501 0,451
0,573 0,589
0,654 0,625

0,505
0,598
0,635

Desviacin
estndar

Prom.
abs

0,035
0,030
0,013
0,015

0,264
0,486
0,587
0,638

EQUIVALENTE DEXTROSA

Tabla 2: absorbancia promedio

1,000
0,800

y = 0,0368x + 0,3458
R = 0,909

0,600
0,400
0,200

A partir de la ecuacin de la curva

patrn Y=2,9741X+ 0,1791; donde
X: es el promedio de absorbancia
para cada tiempo. Se calcula la
cantidad de azucares reductores.
(Ver tabla 3)

Grafica 2: tiempo Vs equivalente

dextrosa.

Tabla 3: azucares reductores

DISCUSIN

TIEMPO

0
5
10
15

ABSORBANCIA AZUCARES
REDUCTORES(AZ)

0,264
0,486
0,587
0,638

11,315
24,934
31,148
34,307

Para calcular el equivalente dextrosa

se utiliza la siguiente ecuacin:
, y los resultados
obtenidos para cada
muestran en la tabla 4:

tiempo

se

Tabla 4: equivalente dextrosa

Tiempo
Equivalente
dextrosa
0
0,277
5
0,609
10
0,761
15
0,839
Para ilustrar mejor los resultados
obtenidos y determinar la relacin
que hay entre el equivalente dextrosa
y el tiempo en que acta la enzima
dextrozyme (hidrolisis) se realiza la
siguiente grafica (ver grafica 2).

0,000
0

10

15

TIEMPO

La
enzima
dextrozyme
o
Glucoamilasa tambin reconocida
como
amiloglucosidasa.
En
la
nomenclatura
internacional
con
nombre sistemtico es 1,4-alfa-Dglucano glucohidrolasa. Su funcin es
actuar en la reaccin de hidrlisis en
cadenas de polisacridos operando
en los enlaces 1,4-alfa-D-glucosa que
estn de manera residual despus de
haberse expuesto la cadena a la
accin de alfa y beta amilasa. El
principal producto final de la accin
de la glucoamilasa sobre la maltosa
es glucosa, lo que la diferencia
claramente de la alfa y beta amilasas.
La
enzima
tambin
produce
pequeas
cantidades
de
oligosacridos. La accin de la
enzima causa inversin de la
configuracin,
produciendo
betaglucosa. Su actividad es mxima
entre pH 4 y 5.5, y temperatura

20

alrededor de 55-60 C. La velocidad

de reaccin cae rpidamente a
medida que disminuye el tamao de
la molcula de sustrato.
La enzima dextrozyme atac el
enlace alfa-1,4 de la maltosa,
logrando as hidrolizarlo con el fin de
obtener glucosa (Ver figura 1). La
enzima separa al carbono 1 de una
glucosa del carbono 4 de la segunda
glucosa, separando los monmeros
de glucosa, obteniendo as dos
monosacridos (ambos glucosa) de
un disacrido (maltosa).

desdoblamiento en la estructura de la
maltosa d-glucosa y tener un alto
rendimiento el produccin de jarabe
de glucosa Este trabajo, adems de
demostrar las bondades de la enzima
DGA, permiti optimizar el proceso de
hidrlisis, como son la carga de
sustrato y de enzima, entre los cuales
existe una relacin que involucra
obtener una alta velocidad de
reaccin y una mxima conversin,
minimizando as efectos de inhibicin
el proceso.
La identificacin de las condiciones
ptimas para la enzima DGA y el
planteamiento de un modelo cintico
que describe la formacin de
producto en el proceso de hidrlisis,
son resultados de gran valor para un
adecuado diseo del proceso y de los
biorreactores en una planta de
produccin de jarabes glucosados, a
partir de maltosa.
BIBLIOGRAFA

Figura 1: hidrolisis de maltosa a

glucosa
De la garfica 2 podemos decir que a
medida que aumenta el tiempo de
reaccion
aumenta
tambien
la
proporcion de dextrinas en el jarabe
de glucosa.
CONCLUSIN
podemos
denotar
que
el
funcionamiento del enzima fue el
adecuado a su temperatura optima,
ya que se alcanzaron los objetivos del
el laboratorio que era lograr un

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