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M. Sandoval-Villa
Alfredo Carrillo
Colegio de Postgraduados
Colegio de Postgraduados
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SMCS, AC
50 aos haciendo historia. Promueve vida, conserva suelo
Zacatecas, Zac., Mxico 11 al 16 de noviembre de 2012
congreso.smcs@gmail.com
Resumen
El experimento fue llevado a cabo con la finalidad de identificar y discriminar entre deficiencias de
hierro (Fe) y manganeso (Mn) en el cultivo de frijol (Phaseolus vulgaris L.) cv. Cacahuate mediante
anlisis de imgenes digitales de hojas. Se establecieron un tratamiento testigo al cual se le
suministr la solucin Steiner completa, un tratamiento con deficiencia 100% de Fe y Mn, dos
tratamientos con deficiencia 50% de Fe o Mn, y dos tratamientos con deficiencia 100% de Fe o Mn;
en todos los casos fue con base en la solucin Steiner. Al inicio de la floracin, 1 hoja recientemente
madura por tratamiento fue digitalizada en un escner y despus con un programa en Visual Basic se
obtuvieron los valores promedio de cada banda del espacio de color RGB. Despus de determinar la
concentracin de Fe y Mn en hojas, se calcul la relacin Fe-Mn, y un ndice Fe-Mn que considera la
concentracin mxima y mnima de estos metales en las hojas. Se encontr que el Mn tiene un
potencial de oxidacin superior al Fe, por lo que un desbalance en la relacin ocasiona la conversin
de Fe soluble a insoluble provocando la acumulacin de Fe inasimilable por el cultivo. Ese mismo
desbalance pudiera resumirse en que la deficiencia de un elemento provoca la toxicidad del otro,
resultado de estar ntimamente relacionados. El ndice Fe-Mn tiende a 1 conforme aumenta la
concentracin de Mn y en condiciones de deficiencia de Fe, contrario a lo esperado que es el obtener
un ndice Fe-Mn mximo con el tratamiento testigo; en cambio bajo este tratamiento el ndice Fe-Mn
fue 0.2. Si aumenta parcialmente Fe y se mantiene constante el contenido de Mn entonces el ndice
Fe-Mn disminuye conforme aumenta el contenido de Fe. El ndice disminuye al mnimo en
condiciones de deficiencia total de Fe y Mn. Se encontr una correlacin alta entre la banda R del
espacio RGB con la relacin Fe-Mn y con el ndice Fe-Mn.
Palabras clave
RGB; Phaseolus vulgaris L.; Imgenes digitales; relacin Fe-Mn
Introduccin
El cultivo de frijol es fundamental para la economa campesina, como fuente de ocupacin e
ingreso, as como garanta de seguridad alimentaria, va autoconsumo. Para una proporcin amplia
de la poblacin mexicana, este cultivo representa la principal, y en ocasiones la nica, fuente de
protenas (ASERCA, 1997). El frijol ocupa el segundo lugar a nivel nacional en superficie promedio
anual sembrada. Adems, por el nmero de productores dedicados a su cultivo, esta especie
representa la segunda actividad agrcola ms importante en el pas (SAGAR, 1998). Agrega que el
consumo per cpita anual es de aproximadamente 15 kg, el segundo ms alto de Amrica Latina,
despus de Brasil. El cultivo de frijol se practica en todas las regiones del pas, bajo las condiciones
ms diversas de suelo y clima.
De acuerdo con Hansen et al., (2009), el frijol es una especie susceptible a deficiencia de Fe,
mientras que Clark (1991) menciona que la deficiencia de Fe puede disminuir hasta 100% el
rendimiento de frijol. La deficiencia de Fe se manifiesta como clorosis. La importancia del Fe radica
en sus funciones de aceptacin y donacin de electrones y juega un papel importante en la cadena
de transporte de electrones de la fotosntesis y respiracin, por lo que es indispensable en la
transferencia de energa en la planta. Adems, el Fe es un constituyente de enzimas y protenas y al
igual tiene importancia en el metabolismo (Ebrahimian y Bybordi, 2011).
El Mn forma complejos estables con molculas biolgicas; cataliza la formacin de la clorofila y las
reacciones de xidoreduccin en los tejidos. En las plantas es un elemento poco mvil y en el suelo
se encuentra en compuestos anlogos a aquellos del Fe. Su disponibilidad es limitada en suelos que
presentan valores altos de pH o que presentan carbonatos libres. La deficiencia de Mn en las
dicotiledneas se caracteriza, a menudo, por pequeas manchas amarillas, o clorosis intervenal; las
hojas superiores de las plantas con deficiencia se vuelven amarillentas entre nervaduras, mientras
que stas permanecen verdes. La toxicidad por Mn a su vez distorsiona las hojas y se observa
manchas oscuras. En casos severos, hay un necrosamiento de los bordes de las hojas que avanza
hacia el interior de las mismas a medida que se incrementa la severidad (Schulte y Kelling, 1999). De
acuerdo con Mengel et al., (1982), el nivel de deficiencia crtico para la mayora de las especies est
en el rango de 15 a 25 mg L-1 en la materia seca en las plantas superiores. Jones et al., (1991) a su
vez, menciona un rango de 15 a 49 mg kg-1 como bajo. El mismo autor establece una concentracin
de 50 a 300 mg kg-1como ptimo tanto para Mn como para Fe.
Weinstein y Robbins (1954) mencionan la dificultad para separar el papel del Fe y el Mn en la
nutricin vegetal debido a que estos elementos han mostrado ser antagonistas, de ah que se hayan
estudiado algunos de los efectos de ambos micronutrientes en condiciones de deficiencia y sus
interacciones. As entonces, Leach y Taper (1954), en un estudio llevado a cabo en frijol, cebolla y
tomate encontraron que existe una relacin Fe-Mn, la cual debe situarse en cierto rango para evitar
sntomas de deficiencias en la planta. As encontraron que el rango mencionado en frijol debe
situarse entre valores de 1.5 a 3.0. Agregan que concentraciones fuera de este rango pueden
producir sntomas de deficiencia, ya sea de Fe o Mn. Por ejemplo, Somers y Shive (1942) llevaron a
cabo un experimento en soya, en el cual encontraron que para un desarrollo ptimo debe existir cierto
valor de relacin Fe-Mn. Fuera de tal rango, puede haber una clorosis resultado de la forma frrica
del Fe, el cual no es efectivo en los procesos metablicos. Los mismos autores agregan que el Fe2+
Para esta investigacin se tuvo como objetivo diferenciar deficiencias nutrimentales con patrn de
clorosis similar como lo son la de Fe y Mn mediante el anlisis de imgenes para determinar las
bandas R, G y B, del espacio de color RGB. De acuerdo con Twyman (1951), un suministro deficiente
de Mn provoca que Fe2+ sea dominante, causando toxicidad por Fe o deficiencia de Mn, por otro lado
si Mn est en exceso entonces Fe ser inmovilizado en los tejidos como rgano-fosfato frrico y las
plantas mostrarn sntomas de toxicidad por Mn, lo que es idntico a la deficiencia de Fe.
Materiales y Mtodos
En un invernadero en Texcoco, Mxico, se sembraron semillas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) cv.
Cacahuate en vasos de poliestireno expandido de 1 L con perlita (Agrolita), sustrato q ue es inerte y
estril. La fertilizacin se hizo en el riego en seis tratamientos (solucin Steiner, testigo; -Mn; -Fe; Mn, -Fe; -50% Mn; -50% Fe) con tres repeticiones en funcin del micronutriente a estudiar mediante
la tcnica del elemento faltante. Se us agua destilada para preparar la solucin nutritiva. Estas
soluciones fueron ajustadas a un pH de 6.3 y CE de 2.0 dS m-1 y fueron suministradas cuando
diferenci la primera hoja verdadera; previamente las plantas fueron regadas solo con agua destilada.
En la etapa V4 (Lebaron, 1974), se tom la hoja recientemente madura de cada una de las tres
repeticiones, completamente expandida, para realizar la digitalizacin a 300 dpi con un escner
comercial y se almacenaron en el formato JPG. La digitalizacin se realiz inmediatamente despus
de haber sido cortadas las hojas para evitar su marchitamiento. Con un programa en Visual Basic se
obtuvieron los valores de las bandas R, G y B de cada pixel de las imgenes de las hojas y se
calcularon promedios por banda e imagen, simultneamente se obtuvieron tambin los valores para
el espacio de color CIELab adems del croma y el matz. Las mismas hojas fueron usadas para
obtener la concentracin de Fe y Mn. El mtodo para la determinacin de ambos micronutrientes fue
a travs del ICP (induction coupled plasma) siguiendo el procedimiento tradicional de tratamiento de
la muestra mediante una digestin usando una mezcla 2:1 de cidos ntrico perclrico.
Con los valores del contenido de Fe y Mn en las hojas, se calcularon la relacin Fe-Mn, y el ndice
Fe-Mn, propuesto en esta investigacin:
Donde:
yi es el ndice Fe-Mn en el rango 0 a 1
XFe = Valor actual del contenido de Fe
XMn= Valor actual del contenido de Mn
El supuesto fue que el ndice Fe-Mn tiene un valor de 1 cuando el cultivo est en condiciones
ptimas de Fe y Mn, es decir, con el testigo, mientras que el mnimo (0) es cuando hay ausencia de
Fe y Mn.
Resultados y Discusin
Se encontraron diferencias estadsticas entre tratamientos (P < 0.05) en la concentracin de Fe,
pero de acuerdo con la prueba de medias la diferencia fue entre los tratamientos sin Fe en la solucin
Steiner y los dems tratamientos (Tukey, 0.05), como puede observarse en el Cuadro 1. La
concentracin de Fe en las hojas de los tratamientos sin este micronutriente fue mayor a los dems
tratamientos, inclusive 100% superior al tratamiento testigo. De acuerdo con Somers y Shive (1942),
existe la teora que el Mn al estar en desbalance con el Fe y en mayor concentracin relativa, oxida al
Fe y lo inactiva. De esta forma, el Fe en la planta pasa de la forma ferrosa a frrica, y se convierte en
insoluble e inasimilable por la planta. Los mismos autores afirman que, resultados experimentales
muestran que un incremento en el Mn trae como consecuencia un decremento en el Fe soluble (Fe2+)
e incremente el porcentaje de Fe insoluble (Fe3+) en la planta lo que explicara el por qu la
concentracin de Fe es mayor en el tratamiento en el que existe un desbalance de Fe-Mn a favor del
Mn. Esto indica que Mn con su alto potencial de oxidacin es responsable de la oxidacin del Fe en
forma ferrosa y causa por lo tanto su precipitacin.
A su vez, Twyman (1951) afirma que el potencial de oxidacin del Mn es superior al del Fe y
agrega que esta reaccin ocurre a nivel intracelular. El Fe frrico absorbido por las plantas es
reducido a la forma ferrosa a menos que esta reaccin sea prevenida por un reactante marcador. Si
dicho marcador no est presente en la planta entonces una pequea cantidad de Fe ferroso podra
ser un agente txico poderoso, causando sntomas de toxicidad, los cuales son idnticos con los de la
deficiencia de Mn.
Cuadro 1. Prueba del rango estudentizado de Tukey para la concentracin de Fe (mg kg-1).
Tratamiento
Media*
Sin Fe
257.72 a
Sin Mn
163.09 ab
Con 50% Mn
136.31 ab
Con 50% Fe
114.94 ab
Testigo
111.60 b
Sin Fe y Sin Mn
99.57 b
Cuadro 2. Prueba del rango estudentizado de Tukey para la concentracin de Mn (mg kg-1).
Tratamiento
Media*
Sin Fe
71.690 a
Con 50% Fe
56.117 ab
Testigo
37.263 bc
Con 50% Mn
33.220 c
Sin Mn
23.007 c
Sin Fe y sin Mn
20.03 c
Media*
Sin Mn
7.810 a
Sin Fe y Sin Mn
4.897 ab
Con 50% Mn
4.137 ab
Sin Fe
3.867 ab
Testigo
3.197 ab
Con 50% Fe
2.047 b
Como puede verse en el Cuadro 4, a diferencia estadstica es significativa para el tratamiento sin
suministro de Fe, suministro parcial de Fe y en ausencia de Fe y Mn. El ndice Fe-Mn increment
conforme aument la concentracin de Mn en las hojas y en condiciones de deficiencia de Fe. Un
ndice Fe-Mn de 0.69 se obtuvo en ausencia total de Fe, pero con un suministro completo de Mn en la
solucin nutritiva. Si aumenta parcialmente la concentracin de Fe y se mantiene el contenido de Mn,
el ndice Fe-Mn fue 0.33. Si Fe aumenta ms, entonces el ndice sigue disminuyendo. As se obtuvo
un valor de 0.2 para el testigo, el cual es considerado como el ptimo para un cultivo. Este ndice
tiene su mnimo valor cuando la solucin Steiner no es suministrada con Fe ni Mn. En este sentido el
supuesto de que el ndice Fe-Mn tiene un valor de 1 cuando el cultivo est en condiciones ptimas de
Fe y Mn, es decir con el testigo, mientras que el mnimo (0) es cuando hay ausencia de Fe y Mn, no
se cumple, y habra que cuestionar la importancia de calcular este ndice propuesto.
Cuadro 4. Prueba del rango estudentizado de Tukey para el ndice Fe-Mn.
Tratamiento
Media*
Sin Fe
0.69000 a
Con 50% Fe
0.33667 b
Con 50% Mn
0.21333 bc
Testigo
0.20000 bc
Sin Mn
0.19000 bc
Sin Fe y Sin Mn
0.06000 c
En un anlisis de correlacin se encontr que el parmetro R est altamente relacionado tanto con
el ndice de Fe (0.80), Mn as como con la relacin Fe-Mn (0.87). Se observ entonces que en
condiciones de deficiencia parcial de Fe, se obtuvieron valores superiores de R (Figura 1). Una
tendencia similar se observ con el tratamiento con deficiencia parcial de Mn, sin embargo, estos
valores de R son parecidos a los obtenidos en los tratamientos con ausencia de Fe y Mn.
a
Canal R (rojo)
113
Canal G (verde)
134
b
Canal B (azul)
74
Canal R (rojo)
129
Canal G (verde)
157
Canal B (azul)
58
Figura 1. Valores RGB para una planta del tratamiento testigo (a) y una planta con deficiencia parcial de Fe
(b) al momento de realizar el muestreo.
Conclusiones
Se corrobor la importancia de la relacin Fe-Mn y el efecto de uno siendo determinado por la
concentracin del otro. Puede estudiarse an ms el ndice como propuesta alterna a la relacin FeMn. La correlacin con los valores R con ambas propuestas fue de las ms altas, sin embargo, con
los dems colores no se obtuvieron correlaciones importantes.
De los resultados se considera debe determinarse por separado el contenido de Fe total, as como
el Fe soluble del cultivo para conocer la proporcin de ambas formas y establecer relaciones que
puedan ayudar a mejorar los resultados de correlacin de las concentraciones con el anlisis de
imgenes digitales. Se obtuvo tambin correlacin entre los mismos colores, por lo que pudieran
establecerse relaciones entre los mismos con la finalidad de observar similitudes. E incluso pueden
probarse simultneamente otros espacios de color como el CIELab para evaluar las ventajas y
desventajas respecto al modelo RGB. La presente investigacin puede considerarse parcial debido a
que con los resultados obtenidos surgieron aspectos no previstos y que convienen explorarse.
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