UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA
LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA PATOLGICA

COLORACIONES HISTOQUMICAS ESPECIALES

PRESENTADO POR:
FIDEL MAMANI QUIONEZ

CURSO:
HISTOQUMICA ESPECIAL

CICLO Y AO:
VIII CICLO, 2014

DOCENTE:
Lic. T.M. INS ORELLANA PORRAS

Juliaca, 10 de diciembre del 2014

INTRODUCCIN:
Las coloraciones histoquimicas se basan en reacciones quimicas, a las que es sometido
el tejido. El objetivo del uso de estas coloraciones se basan en la necesidad de poder
demostrar una determinada sustancia presente en el tejido, estas sustancias no pueden
ser visualizadas por otro itpo de coloracion, tal como es el caso de la coloracion de
hematoxilina-eosina, que solo colorea las estructuras celulares de acuerdo a la afinidad
quimica del colorante con una determinada estructura de la celula.
Las principales coloraciones histoquimicas se basan en la coloracion de las celulas de
acuerdo a cargas electricas, reacciones de reduccion-oxidacion, entre los colorantes o
reactivos y las estructuras las cuales queremos demostrar su presencia.
En el presente informe de da a conocer las pricipales coloraciones histoquimicas y los
resultados obtenidos luego de la coloracion.
OBJETIVOS:

Realizar las principales coloraciones histoquimicas

Conocer el fundamento de las coloraciones.

MATERIALES:

Baterias de coloracion de hisquimica

Laminas con tejido cortadas
Clips
Papel filtro
Lapiz de seda

PROCEDIMIENTO:
Previo al inicio de las coloraciones se debe de realizar la desparafinacion de los tejidos
y una posterior hidratacion de los tejidos y luego continuar las coloraciones que se
realizaran en la practica.
DESPARAFINACION E HIDRATACION DE TEJIDOS
Luego de la obtencion de los cortes se procede a quitar la parafina, se sumerge al tejido
en xilol en un intervalo de 10 minutos.
La deshidratacion se realiza con la sumercion de los cortes en alcohol decreciente desde
el alcohol absoluto hasta el de otra con una concentracion menor.

REACCION DEL ACIDIDO PERYODICO DE SCHIFFS P.A.S.

Tejido hgado fijado en formol al 10%
SOLUCIONES:
cido peryodico al-----------------------------------------------------------------------------o,5%
cido peryodico (hio4) ----------------------------------------------------------------------0,5 gr
Agua destilada--------------------------------------------------------------------------------100ml
SCHIFFS
Fucsina bsica------------------------------------------------------------------------------------1gr
P.A.S.
Agua destilada--------------------------------------------------------------------------------200ml
cido clorhdrico 1 N (Se preparara con 98.3 ml de h. cl. q.p. para 1000 ml de agua
destilada------------------------------------------------------------------------------------20ml
Bisulfito de sodio anhdrido--------------------------------------------------------------------1gr
PREPARACIN
En un matraz colocar el agua destilada y la fucsina bsica, disolver bien en calor luego
enfriar hasta 50c, aadir el cido clorhdrico 1N Y el bisulfito de sodio anhidro agitar y
filtrar, dejarlo en oscuridad por 48 horas tiene que tener un color pajizo claro y
transparente, si est muy oscuro agregarle o.5 gr. De carbn activado agitar y filtrar.
PROCEDIMIENTO
1. Desparafinar e hidratar los cortes (Desparafinar con xilol 5 minutos e hidratar
con alcoholes).
2. Colocar en cido peryodico por 0,5% por 10 minutos.
3. Lavar en agua destilada.

4. Secar ligeramente las lminas con papel de filtro.

5. Con un gotero y sobre el fondo blanco agregar el reactivo de shiffs por 15
minutos.
6. Lavar en agua corriente por 10 - 20 minutos.
7. Colocar los tejidos en hematoxilina de Harris por 2 minutos. Y lavar
8. Eliminar el exceso de colorante con agua acida 1% dos sumergidas.
9. Lavar en agua corriente.
10. Azulamiento con agua amoniacal al 3/1000 por 2 3 minutos.
11. Lavar en agua corriente.
12. Deshidratar y montar

RESULTADOS
Ncleos carbohidratos: color azulado.
Carbohidratos: color magenta a purpura.

Mucina del tracto digestivo, depositos de glucogeno en el higado, menbranas basales,

hifas y esporas de hongos son positivos al p.a.s.

COLORACION ALCIAN BLUE PH 2.5

MUESTRA:
Mucopolisacridos cidos (mucosa gstrica, cordn umbilical, intestino delgado,
apndice, colon).
Propsito: demostrar la presencia de mucopolisacridos cidos dando resultados
mucosustancias positivas al alcian blue positivas.
Las mucosustancias cidos se ve en mesoteliomas, ciertas cantidades se presentan
normalmente en las paredes de los vasos sanguneos, pero aumenta en las lesiones
iniciales de la aterosclerosis.
PRINCIPIO
Azul alcian es un grupo de polivalentes colorantes bsicos que son el agua soluble. El
color azul es debido a la presencia de cobre en la molcula. La solucin 3% de cido
actico (ph 2.5), el azul alcian colorea los muco polisacridos cidos carboxilados,
sulfatados y carboxiladosialomucinas (glicoprotenas). Se cree para formar enlaces de
sal con el grupo acido de mucopolisacaridos cidos.
TECNICA: Secciones de parafina de 4 micras.
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.

Desparafinar e hidratar
cido actico 3% 3 minutos
tratar con solucin deseada de azul alcian durante 20 minutos.
Si se us la solucin a pH 2,5 lavar con agua destilada, si se us cualquiera de

5.
6.
7.
8.

los otros dos, secar solo con papel de filtro.

Contrastar si se desea con rojo nuclear o eosina por 10 minutos.
Deshidratar con el ltimo alcohol de etlico 100% sumergirlo rpidamente.
Aclarar en xilol.
Montar en blsamo de Canad.

RESULTADOS
Mucinas acidas muco sustancias: azul
Los ncleos (con fast red nuclear) brozan rojizo.

COLORACION ACIDO ALCOHOL RESISTENTE AL TEJIDO PARA BACILO

REACTIVOS
1. COLORANTE DE ZIEHL NEELSEN O CARBOL- FUCSINA:
SOLUCION A:
Fucsina bsica---------------------------------------------------------------------------3gr
Alcohol etlico de 100%-------------------------------------------------------------10 ml
Disolver en colorantes
SOLUCIN B:
Fenol
fundido---------------------------------------------------------------------------5
ml
Agua destilada------------------------------------------------------------------------95 ml
MEZCLAR Y JUNTAR AMBAS SOLUCIONES, DEJAR REPOSAR.
2. ALCOHOL ACIDO AL 1%
cido clorhdrico-----------------------------------------------------------------------1ml
Alcohol de 70%------------------------------------------------------------------------99cc
3. AZUL DE METILENO DE LOFFEL
SOLUCION A:
Azul de metileno---------------------------------------------------------------------0.3 gr
Alcohol etlico-----------------------------------------------------------------------30 ml
SOLUCIN B:
Hidrxido de potasio---------------------------------------------------------------0.01 gr
Agua destilada-----------------------------------------------------------------------100ml
Mezclar y juntar ambas soluciones y filtrar antes de su empleo.
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.

Desparafinar
pasar por alcoholes de 100%,95% y 50%
lavar en agua corriente y luego agua destilada.
Pasar los cortes en el lquido de ziehl neelsen(fucsina fenicada) en estufa de

55 60C, de 15 a 20 minutos o a temperatura ambiente de 40 45 minutos.

5. Lavar en agua corriente.
6. Aclarar con alcohol acido al 1% hasta que este rosa palido.
7. Lavar con agua corriente.
8. Cubrir con azul de metileno por 10 minutos.
9. Lavar.
10. Pasar por alcoholes
11. Aclarar / montar.
RESULTADOS
Bacilos de cidos alcoholes resistentes: rojo brillante.
Hemates: amarillo o anaranjado.
Otros tejidos: azul plido
En el bacilo de koch lo importante es su pared celular que le confiere un cierto grado de
proteccin para su supervivencia.

COLORACION TRICOMICA DE MASSON (FIBRAS COLAGENAS)

1. HEMATOXILINA DE WEIGERTH
Colorante nuclear, es coloracin de un tiempo, utiliza lacas frricas, el hierro

2.

3.

4.

5.

6.

trivalente por oxidacin de la hematoxilina da lugar a una laca frrica.

SOLUCION A:
Hematoxilina------------------------------------------------------------------------1gr
Alcohol de 100%----------------------------------------------------------------100ml
SOLUCIN B
Cloruro frrico 29%---------------------------------------------------------------4ml
Agua destilada--------------------------------------------------------------------95ml
cido clorhdrico------------------------------------------------------------------1ml
MEZCLAR A Y B EN PARTES IGUALES
FUCCINA ACIDA SCARILATA DE BIEBRICH
Solucin acuosa de fucsina acida 1%----------------------------------------10ml
scarlata de biebrich solucin acuosa 1%------------------------------------90ml
cido actico glacial------------------------------------------------------------1ml
ACIDO FOSFOTUNOSTICO FOSFOMOLIBDICO
cido fosfotungstico---------------------------------------------------------------5gr
cido fosfomolibdico--------------------------------------------------------------5gr
Agua destilada-------------------------------------------------------------------200ml
SOLUCION AZUL DE ANILINA
Azul de anilina----------------------------------------------------------------------5gr
cido actico-----------------------------------------------------------------------2ml
Agua destilada-------------------------------------------------------------------100ml
SOLUCION COLORANTE LIGHT GREEN
LighnGreen--------------------------------------------------------------------------5gr
Agua destilada-------------------------------------------------------------------200ml
cido actico-----------------------------------------------------------------------2ml
SOLUCION ACIDO ACETICO 1%
cido actico-----------------------------------------------------------------------1ml
Agua destilada-------------------------------------------------------------------100ml

PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Desparafinar
Hidratar
Agua destilada
Fijador bouin x 1 hora a 56C o 24 horas a temperatura ambiente.
Lavar en agua corriente hasta que el color amarrillo desaparesca.
Lavar en agua destilada.
Colorear en hematoxilina de weigerth de 10 a 20 minutos
Agua corriente por 10 a 20 minutos, agua destilada por 30 segundos.
Solucin fucsina acida ms scalarta de biebrich por 10 a 15 minutos lavar

en agua destilada.
10. cido fosfotungstico fosfomolibdico por 10 a 15 minutos.
11. Azul de anilina o light Green por 10 a 20 minutos.
12. Agregar cido actico al 1% al colorante por 3 minutos.
13. Eliminar el colorante y agregar cido actico al 1% por 1 minutos. Lavar
en agua destilada.
14. Deshidratar, aclarar (95%, 95%, 100%, 100%).
15. Montar en blsamo de Canad.
RESULTADOS
Ncleos: azul oscuro
Musculo: rojo
Fibras colgenas: azul o verde

Se llama coloracin tricroma por usar tres colorantes distintos une para en ncleos otro
para el citoplasma y un tercero para las estructuras de sostn y tejido conjuntiva en
particular.
FIBRAS COLAGENAS
Son largas cintas de 1 a 12 micras de espesor que poseen una estriacin transversal y
otra longitudinal cuya periodicidad es de 646 amstrong al microscopio electrnico. Sus
propiedades fsicas son ms precisas que sus caractersticas qumicas, son ligeramente
precisas que sus caractersticas qumicas. Son ligeramente birrefringentes a la luz
polarizada, insolubles en agua fra y solubles en agua caliente lo mismo que en cidos y
en las bases fuertes, resisten, a la digestin tripsica, a 37 grados centgrados en medio
alcalino pero sede a la pepsina en medio acido.
Las fibras colgenas son largas molculas de poli pptidos ricos en prolina,
hidroxiprolina y glicerina.

COLORACION AZUL DE PRUSIA PARA HEMOSIDERINA

FIJADORES: bouin formol neutro
COLORACION AZUL DE PRUSIA: con esta reaccin, el hierro frrico es puesto de
manifiesto bajo la forma de ferrocianuro frrico o azul de Prusia.
REACTIVOS
a. Solucin de ferrocianuro de potasio al 4%.
b. Solucin cido clorhdrico al 4% mezclar a + b al momento de usar.
c. Colorante nuclear fast red o komechtrat al 0.1% o eosina.
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.

Desparafinar
Hidratar, lavar en agua destilada.
cido clorhdrico al 4% por 5 minutos.
Tratar los cortes durante 15 a 30 minutos en la sol. De fenocianuro de potasio al

5.
6.
7.
8.

4% y el cido clorhdrico al 4%
Lavar con agua destilada
Coloracin nuclear con kemechtrot o eosina
Deshidratar.
Aclarar y montar con recina neutra.

RESULTADOS
Hierro frrico: granulaciones azules
Fondo y ncleos: rosado

COLORACION HEMATOXILINA Y EOSINA

1. HEMATOXILINA DE HARRIS
Hematoxilina ------------------------------------------------------------------------10grs.
Alcohol etlico absoluto------------------------------------------------------------100ml
Alumbre de potasio-----------------------------------------------------------------200grs
Agua destilada----------------------------------------------------------------------2000ml
Oxido rojo de mercurio---------------------------------------------------------------5grs.
2. AGUA ACIDULADA 1%
cido clorhdrico QP----------------------------------------------------------------25 ml
Agua destilada----------------------------------------------------------------------2500ml
3. AGUA AMONIACAL
Hidrxido de amoniaco al 28%-------------------------------------------------------5ml
Agua destilada----------------------------------------------------------------------2500ml
4. EOSINA YELLOW
Eosina yellow--------------------------------------------------------------------------16gr.
Alcohol 70%------------------------------------------------------------------------1440ml
Sol.sat. de cido pcrico------------------------------------------------------------160 ml
PREPARACION
En solucin saturada da acido pcrico previamente filtrar, agregar los 1440 ml de
alcohol de 70% luego se agrega los 16 grs. Eosina yellow. Se recomienda usar despus
de usar de las 24 horas.
Al momento de usar, si es necesario agregar por cada 100 ml. De eosina preparada 0,1
CC. De cido actico glacial.
PROCEDIMIENTO
1. Desparafinar en xilol x 5 minutos
Xilol II X 5 minutos.
2. Hidratar en alcohol de 100% x 10 sumergidas.
Alcohol de 95% X 10 sumergidas.
Alcohol de 50% x 10 sumergidas.
Agua corriente x 1 minuto.
3. Coloracin nuclear con hematoxilina de Harris x 5 minutos.
4. Lavar en agua corriente
5. Diferenciar en agua acida al 1% x 2 sumergidas rpidas
6. Lavar en agua corriente
7. Viraje en el agua amoniacal x 3 minutos.
8. Lavar en agua corriente.
9. Coloracin citoplasmtica con eosina 3 minutos.
10. Lavar en agua corriente.
11. Deshidratar en alcohol de 95% I x 10 sumergidas.
Alcohol de 95% II x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% I x 10 sumergidas.
Alcohol de 100% II x 10 sumergidas.

12. Aclarar con xilol I X 10 sumergidas.

Xilol II x 10 sumergidas
13. Montaje con blsamo de Canad.
RESULTADOS
Ncleos: azules
Citoplasma: rosado

VIOLETA DE METILO CRISTAL VIOLETA PARA AMILOIDE

Coloracion de la sustancia amiloide
La sustancia amiloidea es una sustancia homognea, translucida de distribucin
extracelular que ensucia la sustancia fundamental y las estructuras del tejido conjuntiva.
Su composicin qumica todava es mal conocida, solamente se sabe que contiene una
parte proteica importante, algunas lipoprotenas y una pequea cantidad de glcidos.
REACTIVOS
1. cristal violeta-----------------------------------------------------------------------1gr.
Violeta de metilo-----------------------------------------------------------------0.5gr.
Alcohol absoluto----------------------------------------------------------------10 ml.
Agua destilada--------------------------------------------------------------------90ml
2. cido actico o.25 hasta 1% en agua destilada.
3. Jalea glicerina
Goma arbiga---------------------------------------------------------------------50gr.
Cloruro de sodio-------------------------------------------------------------------1gr.
Timol------------------------------------------------------------------------------0.2gr.
Agua destilada------------------------------------------------------------------100ml.
COLORACION DE AMILOIDE
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Cortes en parafina o congelacin de 10 12 micras.

Hidratar
Colocar de 1 3 minutos.
Lavar
Diferenciar con acido actico o.1%
Lavar con agua destilada x 2 minutos.
Montar con glicerina.

RESULTADOS:
Amiloide: rojo rosado

CONCLUSIONES

Las coloraciones histoquimicas se basan en reacciones quimicas, a las que es

sometido el tejido.
El objetivo del uso de estas coloraciones se basan en la necesidad de poder
demostrar una determinada sustancia presente en el tejido
Las principales coloraciones histoquimicas se basan en la coloracion de las
celulas de acuerdo a cargas electricas, reacciones de reduccion-oxidacion, entre
los colorantes o reactivos y las estructuras las cuales queremos demostrar su
presencia.

BIBLIOGRAFIA

R, Garcia (1993). Laboratorio de anatoma patolgica. 1era edicin. Editorial: McGrawHill. Madrid, Espaa.