bungsaufgaben

Bioverfahrenstechnik

Prof. Dr.-Ing. R. Takors

Institut fr Bioverfahrenstechnik (IBVT)
Universitt Stuttgart

Stuttgart,
April 2011 Dezember 2015

IBVT, Universitt Stuttgart

- Nur fr den eigenen Gebrauch -

1.
Leiten Sie eine Bestimmungsgleichung zur Ermittlung
Wachstumsgeschwindigkeit einer Substratberschuinhibierung her.

der

maximalen

Erlutern Sie, worin sich die darin verwendeten Gre von max im Vergleich zu einer
Monod-Kinetik unterscheiden.

2.
Verwenden Sie fr die nachfolgende Frage die Werte der Tabelle 7.3 (VL-Unterlagen)
zur Beschreibung des Maintenance in E. coli.
Welche Unterschiede ergeben sich fr die reale Wachstumsrate, wenn fr die Berechnung
einer Feedstrategie, die auf der biomassespez. Substratverbrauchsrate beruht, der
Maintenance-Verbrauch der Zellen nicht bercksichtigt wird?
Berechnen Sie die relativen nderungen der Wachstumsrate fr die gewnschte
Wachstumsraten (i) =0.5 1/h bzw. (ii) =0.1 1/h

3.
In einem Praktikum hat Nicky Smart die nachfolgend aufgefhrten Werte fr die
Biomassekonzentration X (g/L) und die Substratkonzentration S (g/L) als Funktion der Zeit
aus einem batch-Fermentationsexperiment ermittelt. Die Zellen sind exponentiell
gewachsen.
a) Welche maximale Wachstumsrate (1/h) haben die Zellen erreicht?
b) Welche Biomasse/Substrat-Ausbeute wurde durchschnittlich erzielt?
c) Welche Biomasse-spezifische Substrataufnahmerate konnte beobachtet werden?
Zeit (h); X (g/L), S(g/L)
zeit
0
3
7
11
15,5
16,25

S
0,10
0,25
0,74
2,23
8,14
10,08

IBVT, Universitt Stuttgart

20,00
19,73
18,73
15,61
3,92
0,43

- Nur fr den eigenen Gebrauch -

4.
Im Rahmen eines Praktikums bekommt der Student Willi Neuling von seinem
Betreuer die Aufgabe, E. coli im Schttelkolben in LB-Medium 1 bis zu einer
Biotrockenmassekonzentration von 4 g/L zu kultivieren. Er soll dazu Inokulum aus einer
Glycerinkultur 2 verwenden, was bei einer OD620=10 geerntet wurde. Der Betreuer schlgt als
Animpfdichte 1% 3 vor.
Wieviel Zeit sollte Willi Neuling fr die Kultivierung einplanen?
Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

=const

1/h

0,5

vereinfachend als konstant angenommen

KOD, BTM

OD/BTM 3

Ergebnis einer zuvor durchgefhrten

Kalibrierungskurve; gilt fr den lin. OD
Bereich von 0,03 0,3

5.
Die Studentin Nicky Smart bekommt von Ihrer Betreuerin die Aufgabe gestellt, im
Schttelkolben (fr nachfolgende Experimente) die E. coli Menge von 0,5 gBTM in einem 2L
Kolben mit 100 mL Flssigvolumen herzustellen. Die Animpfdichte mit einem Glycerin-Stock
(einer Glycerin-haltigen Animpfkultur in einem 2 mL Zentrifugenrhrchen) sei 1%, OD620=15.
Wieviel Substrat S (z.B. Zucker) muss Sie dafr bereit stellen? Welche Startkonzentration
stellt Sie im Schttelkolben ein?
Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YXS

g/g

0,4

vereinfachend als konstant angenommen

KOD, BTM

OD/BTM 3

Ergebnis einer zuvor durchgefhrten

Kalibrierungskurve; gilt fr den lin. OD
Bereich von 0,03 0,3

LB Medium wird hufig fr die Kultivierung von E. coli eingesetzt. Die Bezeichnung leitet sich von Luria
Bertani als Urheberin ab, was jedoch eigentlich Guiseppe Bertani zugeschrieben werden sollte.

Fr die Erstellung einer working cell bank werden hufig zellhaltige Proben aus einer Vorkulturstufe in 10
50% Glycerinhaltige Medien eingefroren (= stocks).

Bezeichnet typischerweise den Anteil an Animpfvolumen zu Gesamt-Volumen zu Fermentationsstart. Zur

Vereinfachung wird auch das Verhltnis Animpfvolumen zu batch-Vorlagevolumen teilweise verwendet.

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- Nur fr den eigenen Gebrauch -

6.
Nehmen Sie an, dass die in der nachfolgenden Tabelle aufgefhrten Werte fr eine
batch Kultivierung bekannt sind.
(a) Es gilt eine als konstant angenommene, maximale Wachstumsrate max: Wie lange
dauert es bis die endgltige Biomassekonzentration erreicht ist?
(b) Bercksichtigen Sie den Einfluss der Monod-Kinetik. Wie lang dauert die Kultivierung
unter diesen realen Bedingungen ?
(Hinweis: Verwenden Sie eine Simulationsumgebung oder ein Excel-Tabellenblatt mit
diskretisierter Differentialgleichungslsung)

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YXS,true

g/g

0,3

Wahre Ausbeute

max

1/h

0,3

Monod-Kinetik

KS

g/L

0,3

Monod-Kinetik

cSO

g/L

15

Startkonzentration Substrat

cXO

g/L

0,005

Startkonzentration Biomasse

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- Nur fr den eigenen Gebrauch -

7.
Der nebenstehend skizzierte Reaktor wird
zunchst im batch und anschlieend im fed-batch
Modus betrieben. Die angegebenen Gren besitzen
die Einheiten Fin [l/h]; Eintrittskonzentration Substrat
S0 [g/l]; S [g/l]; X [g/l]. Das Flssigvolumen sei VL [L].
Fred Clever (1) entscheidet sich dafr den Feed mit
500 gglucose/L von 0.02 L/h bereits 8 h nach Animpfen
zu starten. Nicky Smart (2) mchte 10 h nach
Animpfen starten.
a) Welcher der beiden Experimentatoren stellt damit
eine Substratversorgung ein, die nher an dem
wahren, aktuellen Verbrauch ist?
b) Wie wird sich Ihrer Meinung nach der
Substratkonzentrationsverlauf im Fall 1 und 2 jeweils
entwickeln. Zeichnen Sie einen qualitativen Verlauf mit
dem Startpunkt bei Feedstart.
(Anmerkung: Nehmen Sie vereinfachend
Wachstumsgeschwindigkeit wachsen).

an,

dass

die

Zellen

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YXS,true

g/g

0,4

Wahre Ausbeute

max

1/h

0,3

Monod-Kinetik

KS

g/L

0,1

Monod-Kinetik

XO

g/L

0,1

Startkonzentration

S0

g/L

10

Glucose Startkonzentration

VL

10

Reaktionsvolumen

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- Nur fr den eigenen Gebrauch -

mit

max.

8.
Nehmen Sie an, dass in einem kontinuierlichen Prozess ein steady-state bei 30% der
maximalen Wachstumsrate eingestellt wurde. Welche Substratkonzentration kann
beobachtet werden?

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

KS

g/L

0,5

Monod-Kinetik

9.
Ein Bioreaktor wird kontinuierlich im steady-state betrieben. Der Prozess luft
Substrat limitiert bei S~0 g/L.
a) Leiten Sie eine Bestimmungsgleichung fr die batch Produktivitt (gProdukt/h) her, in der
ausschlielich die in der nachfolgenden Tabelle aufgefhrten Gren bercksichtigt sind.
b) Welche Einflussgre msste besonders bei einem konkurrierenden batch oder fedbatch Ansatz bercksichtigt werden?

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YPX

gProdukt/gBTM

Produkt/Biomasse- Ausbeute

YXS

gBTM/gSubstrat -

Biomasse/Substrat-Ausbeute

1/h

Durchflussrate

SF

g/L

Eingangskonzentration Substrat

VL

Reaktionsvolumen

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10.
Nicky Smart erhlt die Aufgabe, die Produktivitt eines fed-batch Prozesses zu
berechnen. Um eine mglichst hohe Biomassekonzentration zu erhalten, wird der Prozess
mit einem exponentiellen feed-Profil fr die Glucose-Konzentration von 0.1 g/L gefahren. Zu
Beginn werden 30 g/L Substrat in einem 10L Bioreaktor mit 4 L Startvolumen vorgelegt. Der
feed-start soll bei der Soll-Konzentration der fed-batch Phase starten. Der Prozess soll so
lange gefahren werden, bis 80% des Reaktorvolumens gefllt sind.
Vereinfachend kann davon ausgegangen werden, dass in der anfnglichen batchPhase kein Produkt gebildet wird.
In der Batch Phase kann vereinfachend von max. Wachstum ausgegangen werden.
In der fed-batch Phase gehorcht das Wachstum einer Mond-Kinetik.
Die Produktbildung ist streng Wachstums-gekoppelt
Sie knnen vereinfachend den Anteil des Substratverbrauchs fr die Produktbildung
vernachlssigen.
1)

Wie lange dauert die anfngliche Batch Phase?

2)

Wie lange dauert die sich anschlieende fed-batch Phase?

3)

Wie gro ist die batch Produktivitt (g/h), wenn fr die Prparationszeit 5 h
eingeplant werden mssen?

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YPX

gProdukt/gBTM

0,2

Produkt/Biomasse- Ausbeute

YXS

gBTM/gSubstrat 0,4

Biomasse/Substrat-Ausbeute

max

1/h

0,5

Wachstumsrate

KS

g/L

0,3

Monod KS-Wert

SF

g/L

500

Eingangskonzentration Substrat

X0

g/L

0,1

Start-Biomassekonzentration im Batch

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- Nur fr den eigenen Gebrauch -

11.
Fred Clever hat seinen ersten Job in der Industrie bernommen und soll im Labor
einen Fermentationsprozess unter realen Produktionsbedingungen entwickeln. Als Test
schlgt er einen batch Prozess mit 2 L Reaktionsvolumen vor. Insgesamt sollen 120 g Glucose
vollstndig in Biomasse umgesetzt werden. Die Projektleiterin Nicky Smart ist skeptisch und
behauptet, dass dieser Ansatz technisch bei einer maximalen Sauerstoffeintragsrate von 150
mmol/Lh nicht realisiert werden kann. Fred Clever hlt dagegen.
a) Wer von den beiden hat Recht? Begrnden Sie Ihre Antwort rechnerisch.
b) Als eine andere Mglichkeit schlgt Fred Clever einen Feedstart bei Erreichen von 70% der
maximalen Sauerstoffeintragsrate vor. Dafr mchte er die verfgbare Substratmenge zu
2/3 im batch vorlegen und den Rest fr den Feed mit einer Eingangskonzentration von 500
g/L verwenden.
Welche Substratrestkonzentration wird erwartungsgem bei Feedstart vorliegen?
Wie hoch mu die Feedrate (L/h) zu Beginn eingestellt werden, um gerade den Zuckerbedarf
zu decken?

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YXS,true

g/g

0,4

Wahre Ausbeute

max

1/h

0,5

Monod-Kinetik

YO2X

mol/gBTM 0,015

Ausbeute Sauerstoffbedarf pro g BTM

XO

g/L

Startkonzentration Biomasse

0,1

Kein Maintenance

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- Nur fr den eigenen Gebrauch -

12.
In einem Schttelkolben sollen die beiden Studenten Fred Clever und Nicky Smart
Bakterien kultivieren. Ihr Betreuer stellt als Aufgabe, dass selbst unter maximalen
Wachstumsbedingungen, die Zellen nicht weniger als 10% der max. Sauerstofflslichkeit
ausgesetzt sein sollen.
(i)

Welche maximale Biomassekonzentration darf im Schttelkolben erreicht werden?

(ii)
Welche Zuckermenge muss daher fr ein Reaktionsvolumen von 200 mL (in einem 2 L
Kolben) bereit gestellt werden?
(iii)
Der Betreuer der beiden verlangt, dass die Zellen gerade vor Eintreten einer
Substratlimitierung geerntet werden. Nicky Smart schlgt daher vor, den Kolben um 15:00
Uhr zu beimpfen und am nchsten Morgen gegen 9:00 Uhr (nach dem Frhstck) zu ernten.
Fred Clever ist skeptisch und schlgt stattdessen vor in der Nacht zu beimpfen, um dann zur
gleichen Zeit am nchsten Morgen zu ernten. Wer von den beiden hat Recht und warum?
(iv)
Wird anstelle der in (ii) errechneten Substratmenge mehr Glucose vorgelegt, welche
Folgen wrden Sie erwarten?

Parameter

Einheit

Wert

Bemerkung

YXS,true

g/g

0,5

Wahre Ausbeute

max

1/h

0,5

Monod-Kinetik

YO2X

mol/gBTM 0,015

Ausbeute Sauerstoffbedarf pro g BTM

cXO

g/L

0,005

Animpfkonzentration

kLa

1/h

100

Angenommen fr Schttelkolben

Kein Maintenance

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- Nur fr den eigenen Gebrauch -

13.
Ein Bioprozess kann stchiometrisch durch folgende Reaktionsgleichung beschrieben
werden. Das Produkt wird dabei mit einer 50% C-Mol Ausbeute aus dem Substrat Glucose
hergestellt.
CH 2O + 0.311 O2 + 0.186 NH 3 0.5 CH 14 N 2 O2 + 0.4 CO2 + 0.605 H 2O + 0.1 CH 1.8O0.5 N 0.2
6

a) Welche Biomasse/Substrat Ausbeute (C-Mol%) wurde offensichtlich angenommen?

b) Welche Wrmeentwicklung (kJ/C-mol) erwarten Sie fr diesen Prozess?
c) Gehen Sie davon aus, dass die Zellen eine Substrataufnahmerate von 0.3
gGlucose/(gBiotrockenmasse h) besitzen und die Biomassekonzentration 10 gBiotrockenmasse/L ist. Das
Substrat Glucose hat ein Molgewicht von 180 g/mol. Welche Wrmebildung (W/L) wrden
Sie fr einen solchen Prozess?

14.
Fr das Wachstum eines Wildstamms wurde eine C-molare Biomasse/Glucose
Ausbeute von 0.4 experimentell ermittelt. CO2 tritt als einziges zustzliches C-Produkt im
aeroben Prozess auf.
a) Stellen Sie fr diesen Prozess die Reaktionsgleichung in C-mol auf.
b) Welche Wrmeentwicklung (kJ/C-mol) erwarten Sie fr diesen Prozess?
c) Gehen Sie davon aus, dass die Zellen eine Substrataufnahmerate von 0.3
gGlucose/(gBiotrockenmasse h) besitzen und die Biomassekonzentration 10 gBiotrockenmasse/L ist. Das
Substrat Glucose hat ein Molgewicht von 180 g/mol. Welche Wrmebildung (W/L) wrden
Sie fr einen solchen Prozess erwarten?

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10

15.
Ein Produktionsreaktor ist mit Rushton-Turbinen ausgestattet (d2=1,5 m). Der
Innendurchmesser des Reaktors betrgt 3,8 m, die Reaktorhhe sei 7 m. Im Maximalfall soll
der Bioreaktor mit 80% des Gesamtvolumens befllt sein.
Bestimmen Sie fr eine maximale Rhrerdrehzahl von 300 U/min die zulssige vvm vor
berflutung.

16.
Leiten Sie einen Volumenabhngigen Ausdruck fr die geometrische hnlichkeit fr
typische Bioreaktoren her.

17. Fred Clever soll in einem geometrisch hnlichen Reaktorsystem (Labor ->
Produktionsreaktor) einen scale-up durchfhren. Er whlt die Bedingungen vvm = idem.
a) Welche Gasleerohrgeschwindigkeit muss er im Produktionsreaktor im Verhltnis zum
Laborreaktor einstellen? Geben Sie das Ergebnis in Abhngigkeit der Volumenverhltnisse
an.
b) Diskutieren Sie, ob die zustzlichen Bedingungen kLa = idem und P/V = Idem erfllt
werden knnen.

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11

Hausaufgaben
H1)

Basierend auf der in der Vorlesung gezeigten Abhngigkeit (Tab. 7.5) der maximalen
Wachstumsrate von der Temperatur T:
a) Bei welcher Temperatur htte E. coli in rich medium die maximale Wachstumsrate? Wie
gro ist diese? Wie gro ist die zugehrige Generationszeit tD?
b) Wie ndert sich die maximale Wachstumsrate bei Temperaturerhhung um 2C?
c) Wie ndert sich die maximale Wachstumsrate bei Temperaturerniedrigung um 2C?
d) Werten Sie dieses Ergebnis mit Blick auf mgliche Temperaturgradienten in
grovolumigen Bioreaktoren.

H2)

Leiten Sie fr einen fed-batch Prozess die Bilanzen fr X, S und P her und bercksichtigen Sie,
dass ein nicht zu vernachlssigender Teil an Substrat fr die Produktbildung bentigt wird.
Verwenden Sie die eingefhrten kinetischen Gren und sehen Sie eine Monod-Kinetik fr
das Wachstum und einen Maintenance-Ansatz vor.

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12

Zusatzaufgaben
Z1)
Fred Clever und Nicky Smart sollen das Inokulum fr einen spteren Bioreaktorversuch durch eine
Schttelkolben Kultivierung produzieren. Dazu verwenden Sie Animpfrhrchen einer working cell
bank mit 2 mL Biosuspension und einer Biomassekonzentration XIno von 3 g/L.
a) Der Betreuer sagt ihnen, dass sie abends um 18:00 Uhr den Schttelkolben mit 100 mL Medium
mit einem Rhrchen animpfen sollen. Am darauffolgenden Tag um 08:00 Uhr morgens soll der
Kolben geerntet werden. Wie viel Biomasse (g) wird dann produziert worden sein ?
Hinweis: Gehen Sie von einer konstanten Wachstumsrate (siehe Tabelle) aus.
b) Fred Clever und Nicky Smart berlegen, welche Schttelfrequenz sie fr die Kultivierung des
Kolbens einstellen sollen. Laut Herstellerangaben erzielt Einstellung A des eingesetzten
Schttelinkubators einen kLa-Wert von 50 1/h, Einstellung B entsprechend 90 1/h. Der Betreuer
verlangt, dass bis zum Fermentationsende, eine minimale Sauerstoffkonzentration von 10% der max.
Lslichkeit bei Umgebungsbedingungen aufrecht erhalten werden soll. Nicky Smart sagt, dass
Einstellung A ausreicht, Fred Clever wrde lieber auf B schalten. Wer von den beiden hat Recht?
Begrnden Sie Ihre Antwort quantitativ!
c) Die Beiden beschlieen anstelle nur eines Rhrchens 2 Animpfrhrchen zu verwenden, um am
nchsten Morgen frher loslegen zu knnen. Wann mssen sie den Schttelkolben ernten, damit die
gleiche Biomasse fr weitere Versuche zur Verfgung steht?
Folgende Parameter sind bekannt:
Gre

Bez.

Wert

Einheit

Wachstumsrate

0,3

1/h

Max. Sauerstofflslichkeit

CO2*

7,5

mg/L

Biomasse/Sauerstoffausbeu
te

YO2X

0,015

mol/gBiomas

Molgewicht Sauerstoff

MO2

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se

32

- Nur fr den eigenen Gebrauch -

g/mol

13

Z2)
Nicky Smart betreibt im Rahmen eines Praktikums einen Bioreaktor mit Reaktionsvolumen VL im
steady-state. Ihr Betreuer bittet Sie fr einen stabilen Arbeitspunkt die Mewerte aufzunehmen und
darauf basierend charakteristische Kenngren zu bestimmen. Die Zulaufkonzentration des
Substrates ist 30 g/L.
Sie misst:
Gre

Wert

Einheit

Biomasse

g/L

Substrat

0,1

g/L

Produkt

10

g/L

Durchflussrate

0,3

1/h

Leiten Sie bitte die jeweiligen Bestimmungsgleichungen her und geben Sie bitte an, welche
experimentellen Werte Nicky Smart fr die
(i) Biomasse/Substrat-Ausbeute
(ii) Produkt/Substrat Ausbeute
(iii) Wachstumsrate
(iv) biomassespezifische Produktbildungsrate
(v) biomassespezifische Substratverbrauchsrate
erhlt.
Sie knnen vereinfachend den maintenance Bedarf vernachlssigen.

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14

Z3)
Nicky Smart und Fred Clever sollen im Rahmen eines Praktikums einen Bioreaktor mit 1,5L
Flssigvolumen kontinuierlich im steady-state betreiben. Es werden E. coli kultiviert, fr die der
maintenance Bedarf bekannt ist. Gehen Sie von dem Pirt Ansatz fr einen wachstumsentkoppelten
Maintenance Bedarf aus.
a) Es soll eine Wachstumsrate von = 0,1 1/h eingestellt werden. Welcher Feed muss realisiert
werden?
b) Im Bioreaktor soll eine Biomassekonzentration von X = 20 g/L eingestellt werden. Sie knnen
davon ausgehen, dass die Konzentration des Substrates im Bioreaktor annhernd Null ist.
Fred Clever schlgt vor, die Eintrittskonzentration des Substrates auf 100 g/l zu setzen. Nicky Smart
behauptet, dass dies falsch sei. Wer von den beiden hat Recht? Begrnden Sie Ihre Antwort
rechnerisch und geben Sie ggfs. die richtige Eintrittskonzentration des Substrates an.
c) Welche Eintrittskonzentration msste man einstellen, wenn vereinfachend kein maintenance
Bedarf zu bercksichtigen wre?

Zustzlich bekannte Werte:

Gre
YXStrue
Ausbeute)

Wert
(wahre 0.4

ms (maintenance)

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0,015

Einheit
g/g
g/(gh)

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15

Z4)
In einem aeroben Bioprozess wird die Aminosure L-Valin (C5H11NO2) hergestellt. Nachfolgend ist die
Summenformel in C-molarer Darstellung aufgefhrt.

CH 2O + O O2 + N NH 3
CO2 CO2 + H 2O H 2O + X CH1,8O0,5 N 0, 2 + p CH11 5 N1 5O2 5

a)
Aus experimentellen Messungen ist bekannt, dass X=0,3 und CO2=0,4 sind. Geben Sie fr
dieses Szenario die zu erwartenden stchiometrischen Koeffizienten fr die Umsetzung von des
Substrates Glucose gem obiger Gleichung an.
b)

Welche Produkt/Substrat-Ausbeute in mol/mol erwarten Sie fr diesen Prozess?

c)
In der Produktionsphase ist die Biomassekonzentration im Bioreaktor 15 g/L und die Zellen
zeigen eine biomasse-spezifische Glucoseaufnahmerate von 0,3 g/gh. Welche Wrme wird unter
diesen Bedingungen und unter Bercksichtigung des Ergebnisses von a) frei (Angabe in KJ/Lh bzw.
W/L)?

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16

Z5)
Nicky Smart und Fred Clever sollen im Rahmen Ihres HiWi-Jobs 1 kg Biotrockenmasse fr
nachfolgende Studien herstellen. Nicky Smart favorisiert batch Kultivierungen, whrend Fred Clever
lieber einen fed-batch Ansatz (bei limitierter, konstanter Wachstumsrate = 0,1 1/h) nach
vorheriger batch-Phase durchfhren mchte. Fr die Tests steht ein Bioreaktor mit max.
Sauerstoffeintragsrate von 180 mmol/Lh zur Verfgung. Dieser msste ggfs. mehrfach nacheinander
eingesetzt werden.

a)
Unter der Annahme, dass die o.a. maximale Sauerstoffeintragsrate nicht von dem
zellulren Bedarf berschritten werden soll, welche maximalen Biomassekonzentrationen
knnen Nicky Smart und Fred Clever in Ihren Fermentationsanstzen jeweils erwarten?
b)
Wie lange wrde Nicky Smart brauchen (bei Verwendung der entsprechenden max.
Biomassekonzentration aus a), um genau 1 kg Biotrockenmasse gem Ihres Vorschlags zu
produzieren? Gehen Sie davon aus, dass das maximal nutzbare Reaktionsvolumen jeweils 20
L ist und dass Sie fr jeden neuen Fermentationsansatz eine Rstzeit von 5 h bentigt.
c)
Wie lange wrde Fred Clever brauchen (bei Verwendung der entsprechenden max.
Biomassekonzentration aus a), um genau 1 kg Biotrockenmasse gem seines Vorschlags zu
produzieren? Er plant eine anfngliche batch Phase mit 5L Reaktionsvolumen bis zu einer
Biomassekonzentration von 10 g/L durchzufhren. Dann startet die fed-batch Phase mit =
0,1=konst. 1/h. Das maximal nutzbare Reaktionsvolumen ist 20 L. Auch er bentigt eine
Rstzeit von 5 h fr den Bioreaktor.
Vereinfachend kann davon ausgegangen werden, dass die Zellen keinen signifikanten MaintenanceBedarf aufweisen. In einem Batch Ansatz wachsen Sie unmittelbar mit max. Wachstumsrate.
Zustzlich bekannte Werte:

Gre

Wert

Einheit

max

0,5

1/h

YO2X (Sauerstoff/
Biomasse Ausbeute

0,02

mol/(gBTMh)

cX0 (Startkonzentration Biomasse)

0,01

g/L

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17

Z6)
Willi Neuling soll die Substratvorlagen fr einen kontinuierlichen Prozess vorbereiten. Seine
Betreuerin Nicky Smart sagt ihm, dass 2 stationre Arbeitspunkte eingestellt werden sollen. Der
erste zeichnet sich durch eine Substratkonzentration (im Bioreaktor) S1 von 0,15 g/L aus, der
zweite durch eine Substratkonzentration S2 im Bioreaktor von 0,5 g/L. Die Mikroorganismen
wachsen gem einer Monod-Kinetik (ohne Maintenance).

a) Welche Durchflussraten sind fr die stationren Zustnde mit S1 und S2 im Bioreaktor jeweils
zu erwarten?
b) Welche Substratmenge (g) muss Willi Neuling fr die beiden stationren Arbeitspunkte pro
Tag jeweils bereit stellen, wenn das Reaktionsvolumen 5 L betrgt und in den Vorlageflaschen
eine Substratkonzentration (=Eintrittskonzentration in den Reaktor) von SF = 20 g/L eingestellt
werden soll?
c) Wie gro ist die von den Mikroorganismen tglich umgesetzte Substratmenge fr den steadystate Zustand S2?
Zustzlich bekannte Werte:

Gre

Wert

Einheit

max

0,6

1/h

KS

0,3

g/L

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18

Z 7)
Fr eine E. coli Spezies wurde die Biomassezusammensetzung CH1.94O0.52N0.25P0.025 ermittelt. Nehmen
Sie als Atommassen vereinfachend an: C (12), H (1), O(16), N(14), P(31) g/mol.

I.

Wie gro ist die Biomasse pro C-mol entsprechender E. coli Zellen?

II.

Wie gro sind die relativen Massenanteile an C, H, O, N und P in diesen E. coli?

III.

In einem Fermentationsexperiment sollen 10 g/L E. coli hergestellt werden.

Glucose (180 g/mol) wird als alleinige C-Quelle eingesetzt. 30 C-mol% der
eingesetzten Glucose werden in CO2 umgewandelt, der Rest geht in die
Biomasse. Wieviel Glucose [g/L] muss im Medium fr diesen batch-Ansatz
vorgelegt werden, wenn die gesamte Glucose verbraucht wird?

IV.

Gehen Sie davon aus, dass als einzige Phosphor-Quelle K2HPO4 (136 g/mol) im
Medium vorgelegt wird. Welche Konzentration (g/L) muss mindestens eingestellt
werden um die Biomassekonzentration von (c ) zu erreichen?

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19

Z 8)
Fred Clever plant eine fed-batch Fermentation mit 5L Reaktionsvolumen (VL) deren Feed mit 100
mL/h nach vollstndigem Verbrauch des Substrates gestartet werden soll. Die Feedkonzentration des
Substrates SF ist 500 g/L. Zu Beginn der anfnglichen batch-Phase betrgt die Biomassekonzentration
X0 0.01 g/L und die Substratkonzentration S0 15 g/L. Sie knnen vereinfachend davon ausgehen, dass
die Zellen mit maximaler Wachstumsrate wachsen (siehe kinetische Parameter in Tabelle).

I.

Nach welcher Zeit ist das vorgelegte Substrat verbraucht?

II.

Welchen kLa-Wert msste Fred Clever am Ende des batch-Prozesses eingestellt haben, um bei
Umgebungsdruck noch 15% der Sauerstoffsttigung (siehe Tabelle) realisieren zu knnen?
Wre dieser kLa-Wert auch bei herkmmlich betriebenen Schttelkolben erreicht worden?

III.

Fred Clever startet den o.a. Feed nach Substratverbrauch. Er versucht die
Substratkonzentration S nach einer 1h Feed-Dauer ber die Bilanzen abzuschtzen. Welche
Substrat (S) -und Biomasse (X) Konzentration wird er erhalten?

IV.

Skizzieren Sie den erwarteten spteren Substratverlauf qualitativ und begrnden Sie Ihre
Antwort.
Zustzlich bekannte Werte:
Gre

Wert

Einheit

max

0,5

1/h

Yxs

0.5

g/g

YO2X

0,015

molO2/gBTM

cO2*

7.5

mgO2/L

MO2

32

g/mol

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20

Z 9)
Ein Bioprozess fr die Glucose-basierte Herstellung des Zielproduktes P kann mit einer
stchiometrischen Reaktionsgleichung wie folgt beschrieben werden:

C 6 H 12 O6 + O2 O 2 + NH 3 NH 3
CO2 CO 2 + H 2O H 2 O + B CH 1.8 O0.5 N 0.2 + P C 32 H 58 O13

Gehen Sie davon aus, dass die stchiometrischen Koeffizienten fr die Biomassbildung B=0,1
und die CO2-Bildung CO2=3 bekannt sind.

(i)

Bestimmen Sie die fehlenden Werte der stchiometrischen Gleichung.

(ii)

Welche Wrmebildung erwarten Sie fr diesen aeroben Prozess in kJ/C-mol.

(iii)

Gehen Sie davon aus, dass die Biomassekonzentration 15 g/L betrgt und die
biomassespez. Glucose-Aufnahmerate 0,35 g/gh betrgt. Der Bioreaktor wird mit 15
m betrieben. Welche mikrobielle Wrme muss in diesem Betriebspunkt aus dem
Bioreaktor abgefhrt werden?

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21

Z 10)
Nicky Smart und Fred Clever fhren im Rahmen eines Praktikums parallele Batch
Fermentationen in 2 Bioreaktoren durch. Die Kulturen sollen nach 10 h geerntet werden.

(i)

Welche Biomassekonzentration hat Nicky Smart in ihrem Reaktor dann gemessen?

Der Ansatz von Fred Clever zeigt zum gleichen Zeitpunkt nur eine Biomassekonzentration von
2 g/L, obwohl beide Reaktoren zur gleichen Zeit, mit dem gleichen Inokulum beeimpft
wurden. Nicky Smart behauptet, das lge an fehlenden Medienkomponenten im Ansatz von
Fred Clever, so dass die effektive Wachstumsrate halbiert worden sei. Fred Clever behauptet
dagegen, das lge an der notwendigen Adaptationszeit (lag-Phase) der Zellen. Diese sei
bestimmt mehr als 2 h in seinem Ansatz, weil die anfngliche Belftungsrate zu hoch
gewesen sei und deswegen nicht gengend CO2 zu Beginn vorgelegen htte.

(ii)

Wer von den beiden hat wohl Recht? Begrnden Sie Ihre Antwort quantitativ indem
Sie beide Thesen rechnerisch bewerten.

(iii)

Wann wrde in Nicky Smarts Reaktor eine kritische Biomassekonzentration erreicht

werden, bei der die Sauerstoffgelstkonzentration unter 10% des Sttigungswertes
fllt?

(iv)

Wann wrde in Fred Clevers Fermentation die kritische Biomassekonzentration

erreicht?

Bitte verwenden Sie die folgenden Werte fr die Berechnungen:

Gre

Bez.

Wert

Einheit

Wachstumsrate

0,4

1/h

Max. Sauerstofflslichkeit

CO2*

7,5

mg/L

Sauerstoffausbeute/Biomasse

YO2X

0,015

mol/gBiomasse

Molgewicht Sauerstoff

MO2

32

g/mol

Stofftransport

kLa

800

1/h

Startkonzentration der
Biomasse

cX0

0,1

g/L

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22

Z 11)
Fred Clever soll einen fed-batch Fermentationsprozess auslegen, der mit Glucose (C6H12O6) als
Substrat betrieben wird. Er entscheidet sich dafr, die Arbeitspunkte 1 (Wachstumsphase) und 2
(Produktbildungsphase) zur Bewertung zu verwenden.

Arbeitspunkte

Biomassekonzen-tration
(g/L)

Wachstumsrate (1/h)

10

0,5

35

0,1

i)
Welcher der beiden Arbeitspunkte hat den hchsten Sauerstoffbedarf (mmol/Lh) und wie
gro ist dieser? Dieser Arbeitspunkt wird fr die nachfolgenden Berechnungen verwendet.
Fred Clever mchte den technisch mglichen Sauerstofftransfer (OTR) abschtzen. Er berechnet den
kLa Wert eines einzelnen Rhrorgans (1/s) ber den vant Riet Ansatz und verwendet die folgenden
Werte: Proportionalittskonstante k = 0,1; Exponent = 0,475, Exponent = 0,4. Insgesamt sind 3
baugleiche Rhrorgane im Reaktor eingebaut. Fred Clever wei, dass der volumenspezifische
Leistungseintrag 2,5 W/L betrgt. Der Reaktor hat einen Durchmesser von 5 m und wird mit 100
m/min belftet.

ii)

Welcher kLa-Wert kann fr den gesamten Bioreaktor ermittelt werden?

Falls Sie Aufgabe (ii) nicht lsen konnten, rechnen Sie nachfolgend mit kLa = 600 1/h:

Fred Clever mchte bei Umgebungsdruck mindestens eine Gelstsauerstoff-konzentation von 20%
der maximalen Lslichkeit sicherstellen. Gelingt das?

iii)

Mit welcher Wrmeentwicklung (W/L) muss Fred Clever fr diesen Arbeitspunkt rechnen?
Folgende Parameter sind bekannt:

Gre

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Bez.

Wert

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Einheit

23

Sauerstoff-/Biomasse-Ausbeute

YO2X

0,025

molO2/gBiomasse

Sauerstoff-/Substrat - Ausbeute

YO2S

0,0075

molO2/gSubstrat

Biomasse-/Substrat-Ausbeute

YXS

0,3

g/g

Max. Sauerstofflslichkeit

CO2*

7,5

mg/L

Molgewicht Sauerstoff

MO2

32

g/mol

Molgewicht Glucose

MGluc

180

g/mol

Z 12)
Nicky Smart bekommt von ihrem Betreuer die nachfolgend aufgefhrten Zeitreihe fr die Biomasse(X) zur Auswertung vorgelegt. Er will sie testen und fragt, ob Sie Anhaltspunkte dafr ableiten kann,
dass das Wachstum auf einem oder mehreren Substraten stattgefunden hat:

zeit [h]

X [g/L]
0

0,10

0,36

1,01

11

3,65

13

6,43

14

7,08

15

7,79

16

8,56

17

9,3

18

9,3

19

9,3

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24

a)
Werten Sie die die Zeitreihen grafisch aus. Wie viele Phasen sind insgesamt zu erkennen,
darunter Wachstumsphasen?
b)
Geben Sie bitte fr jede Wachstumsphase die mittlere Wachstumsrate [1/h] an.
c)
Der Betreuer sagt, dass ggfs. diauxisches Wachstums aufgetreten sein knnte fr die beiden
Substrate S und Q, die mit den Startkonzentrationen (S0 = 20 g/L; Q0 = 15 g/L) vorlagen. Auerdem
behauptet er, dass ein Substrat mit der Ausbeute 0,2 und das andere mit 0,3 Biomasse/Substrat (g/g)
verstoffwechselt wurde. Ordnen Sie die Biomasse/Substrat-Ausbeuten jeder Phase zu und
berechnen Sie die jeweiligen mittleren biomassespez. Substrataufnahmeraten qS bzw. qQ [g/gh].

Z 13)
Eine biotechnische Produktionsanlage entnimmt Wasser aus einem nahegelegenen Fluss, um die
Fermentationsprozesse zu khlen. Zur Zeit ist eine Hochtemperaturperiode, weshalb die maximale
Khlleistung pro 50 m Bioreaktor auf 150 kW begrenzt ist. Nicky Smart erhlt den Auftrag einen
aeroben Produktionsprozess so auszulegen, dass diese Obergrenze eingehalten wird.
Der Produktionsprozess kann wie folgt stchiometrisch beschrieben werden:

C 6 H 12 O6 + O 2 O2 + N NH 3

CO 2 CO2 + X CH 1,8 O0,5 N 0,2 + P C 32 H 58 O13 + H 2O H 2 O

Es ist bekannt, dass die Biomassebildung mit dem stchiometrischen Faktor 0,6 und die
Produktbildung mit 0,1 erfolgt.
(a) Vervollstndigen Sie die stchiometrische Reaktionsgleichung.
(b) Bestimmen Sie die Wrmebildung in kJ/C-mol
(c) Nicky Smart berlegt den Prozess entweder bis 37 m oder bis 40 m Reaktionsvolumen zu
betreiben. Im ersten Fall ist die Konzentration an Biomasse 13 g/L und die biomassespezifische
Glucose-Aufnahmerate 0,3 g/gh. Im zweiten Fall ist die Biomassekonzentration auf 15 g/L
gestiegen und die biomassespezifische Glucose-Aufnahmerate auf 0,25 g/gh gefallen. Welche
Prozessvariante wird Sie whlen, um die max. Khlleistung nicht zu berschreiten?
Das Molgewicht von Glucose ist 180 g/mol.

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