.

Alistamiento e Identificacin de Levaduras

y Bacterias Acticas a Partir de la fresa
(fragaria ananassa)
Jeimy Valentina Munar Umbarila
Jessica Alejandra Garay Medina
Fanny Alexandra Gamba Ruiz
Centro Nacional de Aprendizaje SENA

I.

I.INTRODUCCIN
Un cultivo de microorganismos consiste en
proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que
puedan multiplicarse de forma controlada. En
general, podemos distinguir cultivos lquidos y
slidos en funcin de las caractersticas del
medio y cultivos discontinuos y continuos en
funcin de la disponibilidad de nutrientes en el
medio.
Para la identificacin y aislamiento de
microorganismos
especficos
han
sido
utilizadas tcnicas selectivas empleando
medios que permiten la identificacin y el
aislamiento de ciertos microorganismos de
inters para el proyecto a lo largo de tres
prcticas.
Dichas practicas se realizaron con el fin de
identificar y aislar los microorganismos como
Saccaromices cereviciae y Acetobacter aceti
esenciales para la produccin de vinagre a
partir de la fresa (fragaria-ananassa); la
identificacin de estos microorganismos son
esenciales ya que estos son los que permiten
la fermentacin alcohlica y fermentacin
actica claves para la produccin de vinagre

Centro de Gestin Industrial. Qumica Aplicada a la Industria.

II.

OBJETIVOS

GENERAL

Aislar e identificar levaduras y bacterias

acticas a partir de la fresa (Fragariaananassa).

ESPECFICOS

Elaborar medios de cultivo que

favorezcan el crecimiento de los
microorganismos de inters.
Identificar
macroscpicamente
y
microscpicamente
los
microorganismos de inters.
Aislar los microorganismos de inters a
partir del mtodo de aislamiento por
estra.
Efectuar coloracin de Gram para la
identificacin de Gram positivas y Gram
negativas de acuerdo a las colonias ya
caracterizadas.
Realizar
pruebas
bioqumicas
a
levaduras y bacterias acticas para
comprobar su potencial de uso para la
produccin de cido actico.

III.

MARCO TERICO

Levaduras
-

Definicin:
Todo
tipo
de
hongo
microscpico unicelular que tiene una
destacada capacidad para realizar la
descomposicin de sustancias orgnicas
(sobre todo de azcares e hidratos de
carbono) mediante la fermentacin.
Caractersticas Morfolgicas: Eucariota
unicelular, esfricas, ovaladas elipsoidales,
y alargadas.
Tamao: 10Mm
Hbitat: medios solidos
Reproduccin: gemacin o biparticin,
asexuales
Crecimiento: de 26 a 30, hidratos de
carbono, a un pH de 4,5 y 5,0 en un tiempo
de 24 a 48 h

integran el reino procariota (pro de primitivo

y cariota de ncleo).
Tamao: El tamao de las bacterias oscila
entre las 0.5 y 3 m, pudiendo llegar en
algunos tipos a 10 m.
Morfologa Macroscpica: La mayora de
las bacterias se multiplican rpidamente y
son visibles como colonias cuando se las
siembra en medios de cultivo slidos
adecuados. Requieren una incubacin de
aproximadamente 24 horas en una
atmsfera que favorezca su desarrollo, a
temperatura ptima.
Morfologa
Microscpica:
La forma de las bacterias al microscopio
est determinada por la rigidez de su pared
celular. Bsicamente, se diferencian segn
su forma en cocos (esfricas u ovaladas),
bacilos (cilndrica o de bastones; rectos o
curvos) y espirilos (espiral)
Caractersticas nutricionales: son bacilos
Gram negativos ampliamente conocidos
por su habilidad para oxidar rpida e
incompletamente sustratos de carbono,
especialmente azcares y alcoholes, por lo
que se encuentran altamente adaptados en
ambientes ricos en azcar y etanol.

Pruebas bioqumicas
TSI: El Agar-hierro-triple azcar es un
medio de cultivo. Gracias a su
composicin es uno de los medios de
cultivo ms empleados para la
diferenciacin
de
enterobacterias
segn:
o Fermenten o no glucosa.
o Fermenten o no lactosa o
sacarosa.
o Produzcan
o
no
cido
sulfhdrico.
o Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones
sobre agar TSI son:
o Si la bacteria fermenta la glucosa,
acidificar el medio haciendo virar a
amarillo el indicador en el fondo del

Figura 1: observacin microscpica de levaduras

Descripcin: Colonias hmedas, cremosas,

blancas o de color crema como se puede
observar en la siguiente imagen

Bacterias acticas
-

Definicin:
Las
bacterias
son
microorganismos unicelulares que se
reproducen por fisin binaria. Las bacterias

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tubo, mientras que si no es

fermentadora de glucosa, el medio
permanecer de color rojo.
o Si la bacteria problema fermenta
lactosa o sacarosa, acidifica el
medio
en
su
superficie
volvindolo de color amarillo,
mientras que si no lo es, la
superficie del medio continuar
de color rojo.
o Si produce cido sulfhdrico
(debido a la reduccin de las
sales de hierro), se presentar
un ennegrecimiento del tubo. La
produccin de sulfhdrico y el
consiguiente
ennegrecimiento
pueden
impedir
ver
la
fermentacin de la glucosa
(fondo amarillo), pero este hecho
implica directamente que la
bacteria es fermentadora de
glucosa.
o Si
aparece
rotura
o
desplazamiento
del
medio,
significa que la bacteria es
productora de gas.
-

Sper oxidacin del etanol:

Determina el metabolismo oxidativo o

fermentativo de un hidrato de carbono.
La utilizacin que una bacteria hace de los
hidratos de carbono tiene lugar por alguno de
dos procesos: de fermentacin o de oxidacin.
Algunas bacterias son capaces de metabolizar
un carbohidrato solo en condiciones aerbicas,
mientras que otras producen cido tanto
aerbica como anaerbicamente. La diferencia
principal entre el metabolismo fermentativo y
oxidativo depende delos requerimientos de
oxgeno atmosfrico y de la fosforilacin inicial.
La fermentacin es un proceso anaerbico que
requiere la fosforilacin inicial de la glucosa
previamente a su degradacin, mientras que la
oxidacin, en ausencia de compuestos
inorgnicos como nitrato y sulfato, es un
proceso
estrictamente
aerbico
que
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comprende la oxidacin directa de una

molcula
de
glucosa
no
fosforada
(inicialmente). La fermentacin produce una
acidez ms elevada que el proceso metablico
oxidativo.
IV.

MTODOS

Elaboracin de medios de cultivo:

Se elaboraron dos clases de medios de cultivo
uno GYC para el crecimiento de bacterias
acticas y el otro YGC para el crecimiento de
levaduras
El procedimiento inicio con el alistamiento de
la batera completa esterilizando todo el
material a necesitar en el autoclave, adems
tambin el agua peptonada necesaria para la
realizacin de las diluciones seriadas de la
muestra.
-

Preparacin de medio YGC

Para la preparacin del medio YGC Se

pesaron 6.76g de agar y se diluyeron en 135
mL de agua peptonada lo cual se coloc en
agitacin y calentamiento constante hasta
llegar al punto de ebullicin; luego se dej
enfriar sin dejar de agitar y cuando este
estuvo tibio se sirvi en 5 cajas Petri estriles
cada una con aproximadamente 30 mL, se
dej solidificar y se rotulo.
-

Preparacin de medio GYC:

Para la preparacin del medio GYC se

pesaron 6.25g de glucosa 1.25g de levadura
0.625g de carbonato de calcio, se diluyo bien
la solucin y se tomaron dos alcuotas de 5mL
y se dispusieron en dos tubos por otra parte a
la dilucin se agregaron 2.5g de agar teniendo
una solucin total de 125 mL esta mezcla se
realiz bajo calentamiento hasta llegar al punto
de ebullicin luego de esto se esper a que
bajara su temperatura y se sirvi en 5 cajas
Petri cada una con aproximadamente 25 mL.
Preparacin de la muestra

Se tomaron aproximadamente 100g de fresa a

los cuales se les agrego agua y 80g de
glucosa los cuales se dejaron en un recipiente
protegido de la luz, de la humedad y la boca
del recipiente protegida con una gasa en un
primer paso de proceso de dejaron 5 das al
aire libre y cuando empez el burbujeo se tapa
el frasco de manera que no le entrara oxigeno
se deje hasta que desaparece el burbujeo y se
le permiti de nuevo el paso de aire
destapndolo y dejndolo nicamente con la
proteccin de la gasa.

Para la siembra en medio solido de las 3

concentraciones obtenidas se toma una
alcuota de 1 mL y se disponen en diferentes
cajas de Petri tanto como para el medio GYC
como para YGC es decir que se obtiene 3
siembras para bacterias acticas y 3 para
levaduras se llevaron a incubadoras separadas
donde la temperatura de 37C y 24C
respectivamente.
A los dos tubos que contenan el caldo se
agreg una alcuota de 1 mL. De la dilucin de
10-2 para el tubo 1 y para el tubo 2 la alcuota
fue de la dilucin 10-3 se les adiciono 0,35 mL.
De etanol al 8% se taparon y se llevaron a
incubadora a 37C
Luego de tener la muestra en incubadoras en
los medios descritos se dejaron por un tiempo
de 72 horas y se retiraron a nevera.
Identificacin macroscpica:
Una vez se sacaron de la incubadora las cajas
de Petri se realiz
la identificacin
macroscpica.
Se tomaron las cajas de Petri donde se
encontraban los microrganismos aislados y se
identificaron los diferentes tipos de colonias de
acuerdo con su color tamao y apariencia.

Figura 2: Diluciones de la muestra

Se tom una alcuota de mosto anteriormente

mencionado de 1 mL la cual se coloc en uno
de los tubo de ensayo con 9 mL de agua
peptonada previamente esterilizados dejando
as esta dilucin a una concentracin de 10 -1
de esta se tom una alcuota igualmente de
un mL para una concentracin de 10-2 y de
nuevo se repiti para una solucin de
concentracin de 10-3.
Aislamiento de microorganismos a partir
del jugo de fresa fermentado de glucosa.
-

Siembra e Incubacin de la muestra

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Se seleccionaron las colonias identificadas

previamente realizando un crculo alrededor
de la colonia y se le asign una letra y numero
para nombrarlas. A estas colonias se le realiz
una descripcin morfolgica teniendo en
cuenta color, borde, tamao, textura y forma.
Para los caldos GYC la identificacin
macroscpica se basaba en la visualizacin de
la turbidez.
Identificacin microscpica:
Se procedi a realizar la identificacin
microscpica de las colonias seleccionadas de
las muestras de los caldos que se encontraban
en los tubos; para ello se debe de realizar una

tincin de Gram la cual inicia con un frotis

donde con un asa redonda esterilizada se
toma una gota de agua que se coloca sobre la
lmina porta objetos rotulada y con una asa
reta y esterilizada se toma una porcin de la
colonia y se coloca en la gota de agua se
homogeniza, luego se fija pasando la placa 5
veces por el mechero para luego proceder a la
tincin.
Para la tincin se coloca una gota de cristal
violeta al frotis durante un minuto, se aade
una gota de Lugol y se deja durante 1 minuto,
se agrega una gota de alcohol- acetona y se
deja por 30 segundos, finalmente se coloca
una gota de fuscina durante 1 minuto teniendo
en cuenta que luego de cada adicin de
reactivo se debe lavar cuidadosamente con
agua.
Luego de realizar la tincin de Gram se
procede a observar al microscopio teniendo en
cuenta que en el momento de utilizar el
objetivo 100x se debe colocar una gota de
aceite de inmersin sobre el frotis para poder
enfocar.
Aislamiento por estra:
Se tom una muestra de la caja Petri donde ya
se encontraban las colonias previamente
identificadas con el asa redonda esterilizada y
se llev a una caja Petri realizando el
aislamiento de la siguiente forma:

llevaron a incubadora a una temperatura de

37C Y 24C respectivamente
.
Identificacin bioqumica:
A los microorganismos aislados se le
realizaron diferentes pruebas bioqumicas para
su identificacin las cuales fueron las
siguientes:
Para levaduras se realizaron las siguientes
pruebas bioqumicas:
Fermentacin de carbohidratos
o Sacarosa
o Glucosa
o Lactosa
o Xilosa
o Maltosa
o Arabinosa
o ribosa

Tolerancia al etanol
o 2%
o 4%
o 8%
Para bacterias acticas se realizaron las
siguientes pruebas bioqumicas
TSI
Carr
SIM
Fermentacin de azucares:

Figura 3: Aislamiento por estra

Este aislamiento se realiz para la obtencin

de bacterias acticas y levaduras los cuales se

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Se realizaron diferentes caldos de cultivo con

azucares diferentes para identificar los
azucares que fermenta en los cuales contena
0.2975g de NaCl, 0.1750g de peptona y 0.35g
de los carbohidratos a fermentar para realizar
una solucin de 35 mL luego se adicionaron
entre 3 y 5 gotas de rojo de fenol, y esta
solucin se divide en los tubos de ensayo
aproximadamente de 7 mL, se rotula cada tubo
y se lleva a la incubadora durante 48 horas a
27C.

Tolerancia al etanol:
Se realizaron los clculos correspondientes
para hacer 3 tubos con caldo OGY, se
esterilizo cada medio y se adiciono a cada
tubo etanol de concentracin 2%, 4% y 8%
cada uno con concentracin diferente.
Teniendo el medio elaborado se procedi a
esterilizar el asa recta y con ella se tom una
muestra
dela
colonia
previamente
seleccionada se sembr en cada tubo de
ensayo, para asegurar el crecimiento del
microorganismo se suspende la colonia
agitando el asa dentro del medio, se tap el
tubo y se homogenizo; este procedimiento se
realiz para cada uno de los tubos de ensayo,
se llev a incubadora durante 72 horas
observando cada 24 y 48 horas verificando por
turbidez.
Pruebas Bioqumicas para identificacin de
bacterias Acticas
- Sper oxidacin del etanol (Carr)
Para la prueba de sper oxidacin del etanol
en medio Carr se prepar una solucin con los
siguientes componentes y proporciones de
cada uno los cuales fueron:
o Extracto de levadura 1.08g
o Agar-agar 0.7g
o Verde de bromocresol al 2.2% 0.1mL
Los cuales se diluyeron a 35 mL de agua, se
calent el medio y despus de que se
evidencio el cambio de temperatura se
transfirieron 6 mL a 5 tubos, se esterilizo y se
incubo a 50C aproximadamente y luego se le
adiciono 0.8 mL de etanol al 15%; el tubo se
dej inclinado hasta que solidifico.
- SIM
La elaboracin de la prueba parti de un medio
comercial el cual llevaba las especificaciones
necesarias para la prueba; se realizaron los
respectivos clculos y se procedi a calentar
hasta X y se sirvi una cantidad de 7 mL
aproximadamente en cada tubo; el medio se
esterilizo y se dej solidificar diagonalmente.
-

TSI

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Para la realizacin de la prueba TSI se pes X

de un medio comercial ya elaborado se diluyo
en agua y se llev a ebullicin, luego se retir
de la fuente de calor y se sirvi una cantidad
de 7 mL por cada tubo; se esterilizo y se llev
a incubadora a 36C y se dej solidificar
inclinado.
V.

RESULTADOS Y ANLISIS DE
RESULTADOS

Elaboracin de medios de cultivo

Se logr la esterilizacin adecuada del

material a utilizar.
Se realizaron correctamente los clculos
para la elaboracin de los medios de
cultivo.
Se obtuvieron los medios de cultivo tanto
solidos como lquidos.

Figura 4: elaboracin de medio de cultivo GYC

Aislamiento de
acticas

Levaduras y Bacterias

Se logr el aislamiento de levaduras a

partir del mosto de fresa fermentado
(fragaria-ananassa)
No se obtuvo ningn crecimiento en los
medios de cultivo GYC.
Al no obtener un resultado de crecimiento
positivo en medio GYC solido se realiz un
aislamiento por estra a partir del tubo 1 y
del tubo 2, este aislamiento permiti el
crecimiento de microorganismos a partir del

en la caja 10-2 del cual se escogen las

colonias C1, C2 y C3 son a las que se
les realiza el frotis y tincin de Gram; los
microrganismos luego de la tincin son
vistos al microscopio donde se not una
coloracin morada y para la caja con
dilucin 10-3 se nombran las colonias
como C4 y C5 a las cuales tambin se
les realizo la misma identificacin la
cual dio los mismos resultados (ver
imagen 7). teniendo en cuenta las
caractersticas encontradas en la
literatura de las levaduras la cual
menciona que las levaduras presentan
una coloracin morada y forma alargada
en la mayora de los casos; tomando
esta informacin como referencia
observamos que los microorganismos
encontrados son levaduras como se
puede observar en la imagen (imagen
8) pues el medio permita el crecimiento
para ellas.

tubo 2; a este se le realizo la respectiva

identificacin macroscpica y microscpica.

Figura 5: crecimiento de colonias a partir del tubo 2

medio GYC

Se realiz nuevamente un aislamiento por

estra de una colonia que dio crecimiento
positivo
en
medio
GYC
y
que
microscpicamente
presento
caractersticas de levaduras como se
puede observar en la siguiente imagen.

Figura 6: identificacin microscpica

Identificacin macroscpica y Microscpica

La identificacin se realiz primero a

las
cajas de Petri que contenan diluciones
de 10-2 y 10-3 de la muestra tanto para
YGC como para GYC y para los tubos
con caldo de crecimiento microbiano
GYC de los cuales se pueden observar
los resultados en el ANEXO 1.
Como se puede ver en la tabla se
visualiza crecimiento microbiano en
medio YGC (ver imagen 7) tanto para la
caja con dilucin 10-2 como para la 10-3,

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Imagen 7: Crecimiento microbiolgico medio

YGC

Para el medio slido GYC no se

evidencio ningn crecimiento por lo cual
no se realiz ningn tipo de
identificacin.
Al ver al microscopio los frotis luego de
la tincin que se realiz a los tubo los
cuales llamamos como tubo 1 y tubo 2
no se logr ver presencia de
microorganismos en el tubo 1 y para el
tubo 2 el resultado de la tincin fue

presencia de bacterias gram negativas y

otros microrganismos que tien de color
morado los cuales son de tamao
mayor a las bacterias para cual se
podra deducir que son tambin
levaduras.

Figura 9: Aislamiento por estra muestra tomada de

Tubo 2

Pruebas bioqumicas
Levaduras
Imagen 8: identificacin microscpica levaduras.

Ya que en el tubo 2 se logr el

crecimiento de bacterias se realiz
alistamiento por estra para ambos
tubos pues en principio se deba
descartar que definitivamente no
pudiese existir crecimiento en el tubo 1,
estos aislamientos por estras se
realizaron en medio GYC (ver imagen 9)
estas dos cajas de Petri se llevaron a
incubadora con temperatura de 37C,
luego de esto se procedi a la
identificacin
en
la
cual
macroscpicamente para el tubo 1 hubo
ausencia de microorganismos para el
tubo 2 el crecimiento si resulto as que
se procedi a la tincin para dos tipos
de colonias seleccionadas como X1 y
X2 estas tieron de color fucsia pero por
su forma y tamao no llevo a descartar
que fueran bacterias por lo cual se
presume que eran tambin levaduras.
Se puede observar las caractersticas
encontradas microscpicamente
y
macroscpicamente en el ANEXO 1

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Se observaron cada una de las pruebas

bioqumicas de fermentacin de azucares y
tolerancia al etanol cada 24 y 48 horas,
tomando nota de los cambios vistos los cuales
se pueden apreciar en las siguientes tablas y
las fotos tomadas.
Prueba

Turbidez CO2

Sacarosa
Glucosa
Arabinosa
Lactosa
Xilosa

Si
Si
Si
Si
Poca
turbidez
Si
No

No
Si
No
No
No

Cambio
en
el
pH
Si
No
No
No
No

No
No

No
No

No

No

No

No

No

No

Ribosa
Tolerancia
etanol 2%
Tolerancia
etanol 4%
Tolerancia
etanol 8%

Tabla 1: Resultados fermentacin de azucares y

tolerancia al etanol 24 horas

Como se puede observar en la tabla anterior

se puede decir que el cambio del pH
presentado en la sacarosa se debe a la
produccin de cido lo cual baja el pH y se

torna la coloracin roja como se puede

observar en la siguiente imagen:

Figura 10: Fermentacin de azucares, sacarosa, 24

horas de incubacin

La turbidez en las pruebas de fermentacin de

azucares para las primeras 24 horas se puede
observar en la figura 11

Figura 11: fermentacin de lactosa, glucosa y sacarosa,

24 horas.

En la cuatro pruebas restantes de

fermentacin de azucares el resultado fue
negativo para las pruebas de ribosa,
arabinosa, maltosa y xilosa

Centro de Gestin Industrial. Qumica Aplicada a la Industria.

Figura 12: fermentacin de ribosa, arabinosa, maltosa y

xilosa, 24 horas

Para las primeras 24 horas no se pudo

presenciar ningn tipo de cambio para las
pruebas de tolerancia al etanol a ninguna
concentracin, esto puede ser visto en la figura
13

Figura 13: tolerancia al etanol 2%, 4% y 8%, 24 horas

En la siguiente tabla se pueden observar los

datos obtenidos luego de una incubacin de 48
horas

10

Prueba

Turbidez

CO2

Sacarosa
Glucosa
Arabinosa
Xilosa
Lactosa
Ribosa
Maltosa
Tolerancia
etanol 2%
Tolerancia
etanol 4%
Tolerancia
etanol 8%

Si
Si
Si
No
No
Si
Si
Si

Si
Si
No
No
No
No
No
No

Cambio
en
el
pH
Si
No
No
No
No
No
No
No

Si

No

No

No

No

No

presencia de gases esto es visto en la figura

15.

Tabla 2: Fermentacin de azucares y tolerancia al etanol

48 horas

En la siguiente imagen se puede observar que

a las 48 horas en la prueba bioqumica de
fermentacin de azucares sacarosa el pH se
neutralizo dando una coloracin amarillenta y
turbia, tambin podemos observar la presencia
de CO2 para las pruebas de glucosa con
mayor produccin de gases y de sacarosa.

Figura 14: fermentacin de lactosa, glucosa y sacarosa,

48 horas

Luego de transcurrir 48 horas las pruebas para

ribosa, arabinosa, maltosa y xilosa siguen
dando resultado negativo aunque para algunas
la turbidez ha aumentado pero no existe

Centro de Gestin Industrial. Qumica Aplicada a la Industria.

Figura 15: fermentacin ribosa, arabinosa, maltosa y

xilosa, 48 horas

Obtuvimos un resultado positivo en las

pruebas de tolerancia al etanol luego de 48
horas para concentraciones 2% y 4%, esto
gracias a la presencia de turbidez en estos
tubos, en la figura 16 muestra dicha turbidez.

Figura 16: Tolerancia al etanol 2%, 4% y 8%, 48 horas

Al realizar la comparacin entre los datos

obtenidos y la informacin encontrada en la
literatura (VER ANEXO 2) se puede deducir
que posiblemente se cuenta con la presencia
del
microorganismo
Saccharomyces

11

Cerevisiae debido a que se fermentaron los

azucares de sacarosa y glucosa aunque no se
fermento la prueba de maltosa pero no se
descarta que al transcurrir ms tiempo pueda
existir la presencia de gases ya que el
microorganismo creci mas no fermento y las
pruebas para el resto de los carbohidratos dio
negativo a fermentacin.
En cuanto a la prueba bioqumica de tolerancia
al etanol segn la literatura Saccharomyces
cereviciae presenta tolerancia al etanol, es
decir que el microorganismo vive en presencia
del etanol lo cual para nuestras pruebas
bioqumicas resulta afirmativo pues como
resultado tuvimos tolerancia para dos
concentraciones.
Bacterias
No se realizaron pruebas bioqumicas para la
identificacin de bacterias acticas ya que
durante la incubacin y aislamiento de los
microorganismos no se encontr la produccin
o crecimiento de bacterias acticas a partir del
mosto de fresa (fragaria-ananassa)
VI.

CONCLUSIONES

1. Se elabor exitosamente los medios de

cultivo favoreciendo el crecimiento de
microorganismos.
2. Con la identificacin macroscpica se
observaron
5
colonias,
donde
presentaban caractersticas diferentes
variando su apariencia, por las
caractersticas que presentaban segn
la identificacin microscpica se
eligieron
como
presuntos
microorganismos de inters para
aislamiento de levaduras, aunque
tambin
se
identificaron
como
levaduras una colonia ms en el medio
de cultivo GYC en caldo y tambin para
el aislamiento por estra a partir de
este.

Centro de Gestin Industrial. Qumica Aplicada a la Industria.

3. Se logr el aislamiento por el mtodo

de estra para levaduras en los cultivos
realizados, en cuanto a bacterias no se
logr pues este aislamiento en las
pruebas de identificacin no presencio
ningn tipo bacterias
4. Se realiz la tincin de Gram a
microorganismos aunque estos no
fueron identificados como bacterias.
5. Al encontrar la posible presencia del
microorganismo
Saccharomyces
Cereviciae indica resultados favorables
para la realizacin del vinagre a partir
de la fresa (fragaria-ananassa) esto
debido a los resultados obtenidos en
las
pruebas
bioqumicas
de
fermentacin de azucares y tolerancia
al etanol.
VII.

RECOMENDACIONES

1. Verificar minuciosamente el material que

se va a esterilizar en la autoclave que se
encuentre correctamente envuelto en
papel craf ya que para el momento que
se realiz no se contaba con la habilidad
necesaria para hacerlo de manera
adecuada por lo cual se tuvo que realizar
en repetidas ocasiones el envolvimiento.
2. En el momento de llevar los tubos a
esterilizar en el autoclave se debe tener
en cuenta que los tubos se encuentren
semicerrados ya que por la presin tan
alta que se maneja en el autoclave esto
para evitar este tipo de accidentes
favorablemente en el momento que se
hizo aunque los tubos estaban cerrados
completamente no causo ninguna
complicacin
3. Al realizar el medio de cultivo se debe
tener en cuenta la temperatura de
preparacin
ya que esta debe ser
mximo de 70C y si se deja de agitar
este se puede fijar en el fondo.

12

IV. BIBLIOGRAFIA
4. Al servir el medio de cultivo en las cajas
Petri se debe tener presente que esto se
debe hacer cuidadosamente y adems
rpidamente ya que este se solidifica de
inmediato, entonces se debe evitar
distraerse en el laboratorio cuando se
estn sirviendo las cajas pues requiere
bastante concentracin y este tipo de
errores en la elaboracin de los medios
de cultivo genera la posible prdida del
medio.

5. Al esterilizar el aza dejarla enfriar, para

que en el momento de tomar la muestra
esta temperatura elevada no cause la
muerte de los microorganismos.
6. Al realizar el aislamiento por estra tener
en cuenta que no se debe volver a tocar
las lneas anteriores para lograr un
aislamiento ms certero, con ello se
disminuye
la
cantidad
de
microorganismo arrastrado por el asa
logrando el crecimiento de colonias ms
separadas entre ellas.
7. Ser recomienda que para la prueba de
maltosa
se
realice
una
nueva
observacin dndole ms tiempo al
microorganismo de fermentar.
8. Es importante lograr el aislamiento de
bacterias acticas para el proyecto as
que se recomienda de nuevo aislar
una nueva cepa de microorganismos de
igual manera realizar la respectiva
identificacin y las pruebas bioqumicas
para bacterias.

Centro de Gestin Industrial. Qumica Aplicada a la Industria.

Bou, G., Fernndez-Olmos, A., Garca,

C., Sez-Nieto, J. A., & Valdezate, S.
(2011). Mtodos de identificacin
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MacFaddin, J. F. (2003). Pruebas
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bacterias. Ed. Mdica Panamericana.
Jay, J. M. L., Golden, M. J., Jay, D. A. J.
M., Loessner, M. J., Golden, D. A.,
Lerda, D. E., ... & Jay, J. M. (2005).
Microbiologa
moderna
de
los
alimentos/Modern food microbiology.
Organizacin Panamericana de la
Salud.
Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1997).
Microbiologa general. Omega.
Martinko, J. M., Parker, J., & Midigan,
M. T. (1999). Brock, Biologa de los
microorganismos.

13

Anexo 1

Color
Medio
YGC 10-2
YGC 10-3

GYC
Tubo 1
Tubo 2

Identificacin Macroscpica
Borde
Tamao
Textura

Colonia
C1
C2
C3
C4

beige
blanca
blanca
beige

entero
ondulado
entero
entero

C5

beige

ondulado

1mm
2mm
3mm
4mm

Cremosa
opaca
brillante
opaco,
cremoso
opaca

8mm
<1 UFC/ml
Presencia de poca turbidez
Presencia de turbidez y sedimento

T1
T2

Elevacin

Forma

elevada
plana
elevada
convexo

circular
circular
circular
circular

plana

Circular

Tabla 4: identificacin macroscpica 1

Medio
Estras
Tubo 2

Colonia
X1

Color
beige

X2

beige

identificacin macroscpica
Borde
Tamao
Textura
ondulado
5mm
cremosa
entero

15mm

cremosa

Elevacin
Elevada

Forma
circular

Elevada

circular

Tabla 5: identificacin macroscpica estras del tubo 1

Muestra Colonia
YGC 10-

identificacin microscpica 1
Forma
Gram

C1

Ovalada

n/a

Tipo de
Microorganismo
levadura

C2
C3

Alargada
Ovalada

n/a
n/a

levadura
levadura

C4
C5
Tubo 1
Tubo 2

Ovalada
Ovalada

YGC 103

Caldos

Ovalada y
alargadas

n/a
levadura
n/a
levadura
no se pudo identificar
bacterias Gram
bacterias y levaduras
negativas

Tabla 6: identificacin microscpica

Identificacin microscpica
MEDIO Colonia
Forma
Gram
Tipo de microorganismo
Estras
X1
alargada
n/a
levadura
Tubo 2
X2
alargada
n/a
levadura
Tabla 7: identificacin microscpica estras tubo 2

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14

ANEXO 2
Fermentacin de Azucares para Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Glucosa
+
Galactosa
+
Ribosa
Arabinosa
Sacarosa
+
Maltosa
+
Celobiosa
Trehalosa
+
Lactosa
Xilosa
Rafinosa
+
Ramnosa
+
Tabla 8: Fermentacin de azucares, resultados para saccharomyces cerevisiae, gua de laboratorio de
microbiologa, pruebas bioqumicas, SENA 2016

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