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TTULO:

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RESUMEN: Este documento describe las actividades para la validacin de Mtodos de

Ensayo no- normalizados, desarrollados o diseados por el Laboratorio, mtodos normalizados
empleados fuera del alcance previsto, ampliaciones y modificaciones de los mtodos
normalizados y para las verificaciones necesarias para confirmar que un laboratorio puede
aplicar correctamente los mtodos normalizados antes de utilizarlos para los ensayos.

Este documento es una revisin total del documento complementario DC-LE-05

versin 2

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hacer uso de esta versin, por si ha sido modificada.

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CONTENIDO

1. OBJETIVO .............................................................................................................. 3
2. ALCANCE ............................................................................................................... 3
3. DOCUMENTACIN DE REFERENCIA .................................................................. 3
4. ABREVIA TURAS Y DEFINICIONES ...................................................................... 4
5. RESPONSABILIDADES .......................................................................................... 6
6. DESCRIPCIN ....................................................................................................... 6
7. DOCUMENTACIN RELACIONADA: ................................................................... 11

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1. OBJETIVO
Establecer una Gua, no obligatoria, para las actividades para la validacin de
mtodos de ensayo no normalizados, desarrollados o diseados por el Laboratorio,
mtodos normalizados empleados fuera del alcance previsto, ampliaciones y
modificaciones de los mtodos normalizados y para las verificaciones necesarias
para confirmar que puede aplicar correctamente los mtodos normalizados antes de
utilizarlos para los ensayos. Regular o sistematizar los mtodos para la validacin de
las instrucciones de ensayo y de calibracin.
El objetivo de la validacin es probar la aptitud de los mtodos, as como la
capacidad del laboratorio. La validacin se apoya en los parmetros estadsticos del
procedimiento.
Los procedimientos y el alcance de la validacin no son siempre los mismos y
deben ser establecidos individualmente.
2. ALCANCE
Esta gua la deben aplicar los laboratorios de ensayo acreditados ante el OAA, los
laboratorios que solicitan su acreditacin, y los evaluadores y expertos tcnicos que
actan en los procesos de acreditacin, a todos los mtodos de ensayo
establecidos.
3. DOCUMENTACIN DE REFERENCIA
3.1. MC-OAA : Manual de la Calidad del OAA: vigente.
3.2. Norma IRAM 301: vigente-Norma ISO/IEC 17025: vigente
3.3. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method
Validation and Related Topics. EURACHEM Guide. Editor: H. Holcombe, LGC,
Teddington: 1998.
3.4. NORMA IRAM 32: : Metrologa. Vocabulario VIM: 1997.
3.5.Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Guide EURACHEM- CITAC
Guide: 2000.
3.6. Norma ISO 9000: vigente
3.7. International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC). Nomenclature in
Evaluation of Analytical Methods including detection an quantification capabilities
IUPAC recommendations 1995 Pure & Appl.Chem., Vol. 67, N 10, pp.1699-1723
(1995)
3.8. International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC). Harmonized
Guidelines for Single-Laboratory Validation of Methods of Analysis IUPAC
Technical Report Pure & Appl.Chem., Vol. 74, N 5, pp.835-855 (2002)

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3.9. Norma ISO 3534-2: 2006. Statistics Vocabulary and symbols Part 2: Applied
statistics
3.10 Handbook for Calculation of Measurement Uncertainty in Environmental
Laboratories- Edition 2- Nordtest Report TR 537 (2004)
4. ABREVIA TURAS Y DEFINICIONES
4.1. ABREVIATURAS
-

ISO: International Standardization Organization

IRAM: Instituto Argentino de Normalizacin.

IEC: International Electrotechnical Commission.

VIM: International Vocabulary of basic and general terms in Metrology.

QUAM: Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement.

IUPAC: International Union for Pure and Applied Chemistry.

4.2. DEFINICIONES
Exactitud: proximidad entre el resultado de una medicin y el valor verdadero del
mesurando (3.9). Es la combinacin de la precisin y la veracidad.
Incertidumbre de medida: Parmetro, asociado al resultado de una medicin, que
caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al
mesurando (3.4).
Linealidad: capacidad de un mtodo analtico de producir resultados que sean
directamente, o por medio de una transformacin matemtica definida,
proporcionales a la concentracin de analito en la muestra. (3.8).
Lmite de deteccin (LD): valor real de la concentracin de un analito en una
muestra, que puede ser detectado con una probabilidad de cometer un falso
negativo igual a .
Tambin es llamado Capacidad de Deteccin (CC ).
IUPAC recomienda un valor de = 0,05, pero requisitos ms estrictos pueden ser
usados, por ejemplo = 0,01.
El Lmite de Deteccin se calcula de la siguiente forma (para = ): LD = 2.t1- , . S0,
donde S0 es la desviacin estndar de un blanco y t1- , es el factor de Student para
una probabilidad y grados de libertad. (3.7).
Lmite de cuantificacin (LQ): es la menor concentracin de analito que puede ser
cuantificada con un aceptable nivel de incertidumbre, Se determina como la
concentracin de analito para la cual la desviacin estndar relativa del mtodo
(RSD%) es del 10%.
El Lmite de Cuantificacin se calcula de la siguiente forma: LQ = 10.S0, donde S0
es la desviacin estndar de un blanco. (3.7).

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Material de Referencia (MR): material, suficientemente homogneo y estable con

respecto a una o ms propiedades especificadas, para el cual ha sido establecida
su aptitud para un uso determinado en un proceso de medicin. (ISO-REMCO 2005)
Material de Referencia Certificado (MRC): Material de referencia, caracterizado
por un procedimiento metrolgicamente vlido para una o ms propiedades
especificadas, acompaado por un certificado que provee el valor de la propiedad
certificada, su incertidumbre asociada y una declaracin de su trazabilidad
metrolgica. (ISO-REMCO 2005)
Mesurando: magnitud particular sometida a medicin (3.9).
Precisin: proximidad entre los resultados de mediciones independientes,
obtenidos bajo condiciones estipuladas (3.9).
Precisin intermedia: precisin obtenida aplicando un mismo procedimiento, sobre
una misma muestra, en el mismo laboratorio, bajo condiciones diferentes de
operacin. Estas condiciones pueden estar relacionadas a las siguientes variables:
tiempo, operador, equipamiento o calibracin. (3.9).
Rango de trabajo: Intervalo de concentraciones del analito dentro del cual se puede
considerar al mtodo validado. (3.8.)
Repetibilidad: precisin obtenida aplicando un mismo procedimiento, sobre una
misma muestra, con el mismo operador, en intervalos cortos de tiempo, utilizando el
mismo equipamiento, dentro de un mismo laboratorio (3.9).
Reproducibilidad: precisin obtenida aplicando un mismo procedimiento, sobre una
misma muestra, en diferentes laboratorios, distintos operadores, con diferente
equipamiento (3.9).
Robustez: capacidad de un mtodo para mantenerse sin cambios ante pequeas
pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo, que provee una
indicacin de su confiabilidad durante el uso normal. (3.3).
Selectividad: capacidad de un mtodo para cuantificar exactamente un analito en
presencia de interferencias. (3.8). Tambin llamada especificidad.
Validacin: confirmacin, mediante el examen y el aporte de evidencias objetivas,
de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico previsto (3.2)
Valor verdadero: valor que caracteriza una cantidad o caracterstica cuantitativa
perfectamente definida en las condiciones en que existe cuando esa cantidad o
caracterstica cuantitativa es considerada. Es un concepto terico y, en general, no
puede ser conocido exactamente. (3.9).
Valor verdadero convencional: valor de una cantidad o caracterstica cuantitativa,
la cual, para un dado propsito, puede sustituir a un valor verdadero. (3.9)
Veracidad: proximidad entre el promedio de una serie grande de resultados y el
valor verdadero del mesurando (3.9).

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Verificacin: confirmacin, mediante el aporte de evidencia objetiva, de que se han

cumplido los requisitos especificados. (3.4).
Valor Crtico (LC): valor de concentracin por debajo del cual se puede establecer
que una muestra no contiene al analito, con una probabilidad de cometer un falso
positivo igual a .
Es el valor contra el cual se debe comparar el resultado de una medicin para
decidir si se detecta la presencia de un analito en una muestra, con un determinado
nivel de confianza.
Tambin es llamado Nivel Crtico o Lmite de Decisin (CC ).
IUPAC recomienda un valor de = 0,05, pero requisitos ms estrictos pueden ser
usados, por ejemplo = 0,01.
El Valor Crtico se calcula a partir de la siguiente expresin: LC = t1- , . S0, donde S0
es la desviacin estndar de un blanco y t1- , es el factor de Student para una
probabilidad y grados de libertad.
5. RESPONSABILIDADES
Se encuentran descriptas en el documento DC-SG-07, Responsabilidades y en el
punto 6 de este documento.
6. DESCRIPCIN
La realizacin de actividades de validacin de los mtodos de ensayo utilizados por
el propio laboratorio, contemplan la satisfaccin de las necesidades del cliente y la
adecuacin para realizar los ensayos previstos.
El laboratorio debe confirmar que puede aplicar correctamente los mtodos
normalizados previo a su uso en ensayos o calibraciones. Cualquier variacin en el
mtodo normalizado implica la repeticin de dicha confirmacin.
Para el caso de metodologas de ensayo o de calibracin desarrolladas por el
laboratorio los mtodos deben ser adecuada y totalmente validados antes de su
uso.
Los equipos tambin deben ser calibrados y/ o validados antes de su uso.
6.1. Requisitos Generales
El OAA establece las siguientes recomendaciones:
6.1.1. Principio de la validacin
La validacin de un procedimiento consiste en tres pasos.
1. Establecimiento de las condiciones por cumplir (por ejemplo: lmite de deteccin
< 1 mg/L, rango lineal mayor a 2 rdenes de magnitud, incertidumbre de
medicin <20% en todo el rango de trabajo, para el caso de la validacin de un

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mtodo analtico general. No puede establecerse como principio de validacin

para otros tipos de mtodos de ensayo).
2. Determinacin de los parmetros estadsticos del procedimiento.
3. Evaluacin de los resultados de la validacin por comparacin de los
parmetros estadsticos obtenidos con las condiciones establecidas
previamente y toma de decisin sobre la validez del procedimiento para el
propsito establecido.
6.2. Especificaciones y alcance de la validacin
6.2.1. Establecimiento de las especificaciones
En el caso ideal ya deberan estar establecidas por el cliente del laboratorio o por
alguna instancia oficial. Si este no es el caso, el responsable del ensayo debe
establecerlas lo ms de acuerdo posible con el cliente del laboratorio. Cuando no es
posible contactar al cliente del laboratorio, debe definirlas el responsable del ensayo
de manera confiable y cientfica.
6.2.2. Establecimiento del alcance de la validacin
Se diferencian tres casos, en los que la dificultad de la validacin aumenta del
primero al tercero:
1. Se trata de un mtodo de ensayo normalizado, que se aplica exactamente
como est descripto en la norma.
2. Se trata de una modificacin a un mtodo de ensayo normalizado, por ejemplo,
se hicieron modificaciones a los mtodos descriptos en la norma que pueden
tener repercusin sobre la calidad de los resultados. Ejemplos: un mtodo de
extraccin diferente, otra matriz, extensin del rango, etc.
3. Se trata de un mtodo de ensayo interno, elaborado en el laboratorio y que no
se encuentra en normas u otras colecciones de mtodos.
La validacin en los casos descriptos tiene objetivos distintos y, por lo tanto, su
alcance ser diferente en cada caso, como se muestra en la tabla 1.

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Tabla 1: Alcance de la validacin segn el tipo de mtodo

Mtodo de ensayo

Caractersticas de la validacin

Caso 1: mtodo normalizado Verificacin de algunos parmetros de performance, por

ejemplo: repetibilidad, veracidad, incertidumbre de
medicin, lmite de deteccin (siempre y cuando se
indiquen en la norma).
Elaboracin de una Carta de Control analizando un
material de referencia. (ver 6.2.2.1)
Participacin en Ensayos de Aptitud. (ver 6.2.2.1)
Caso 2: modificacin de un Dependiendo de las modificaciones realizadas al
mtodo normalizado
mtodo, el Laboratorio evaluar qu parmetros de
validacin deben ser verificados (ver 6.2.2.2 y Tabla 3)
Caso 3: mtodo interno

Se debern evaluar todos los parmetros estadsticos

posibles segn las caractersticas del mtodo (ver
6.2.2.2 y Tabla 2)

6.2.2.1. Mtodos normalizados

Se consideran mtodos normalizados aquellos emitidos por organismos de
normalizacin internacionales (ej. ISO), regionales (normas europeas EN o Mercosur
NM), o nacionales como ASTM, BS, DIN, AFNOR, IRAM, etc. Tambin se
consideran
mtodos
normalizados
los
emitidos
por
organizaciones
internacionalmente reconocidas como EPA, AOAC, Standard Methods for Water and
Wastewater, USP, EP, etc.
En el caso en que un laboratorio verifique la implementacin de un mtodo
normalizado a travs de Cartas de Control o participacin en Ensayos de Aptitud,
deber asegurar que el material utilizado en el Control de Calidad ya sea interno o
externo, sea representativo de las muestras reales de rutina tanto en matriz como en
concentracin (cuando corresponda).
6.2.2.2. Parmetros de validacin
Los parmetros tpicos a evaluar durante una validacin de un mtodo de ensayo
pueden ser los siguientes:
Selectividad
Linealidad (tomar en cuenta los residuales)
Lmite de Deteccin
Lmite de Cuantificacin
Precisin (repetibilidad y/o precisin intermedia)
Veracidad (a veces llamada exactitud, trueness
Rango de trabajo
Robustez

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Incertidumbre de medicin (clculo)

Sesgo (aplicar test t para evaluar sesgo)
Repetibilidad (Aplicar test Q )
Nivel crtico
Verificacin /Confirmacin de Mtodos Normalizados
Otros parmetros a considerar:
Utilizar cuando corresponda la funcin cuadrtica que proporcionan algunos
equipos
La U de la cuadrtica
Evaluar la reduccin de los mbitos lineales amplios
Revalidar en el caso de cambios de equipos /personal
Designar responsable para evaluar los resultados obtenidos y acciones a seguir
en caso de no alcanzar el objetivo fijado.
Dependiendo de las caractersticas del mtodo se recomienda evaluar los siguientes
parmetros:
Tabla 2 parmetros tpicos a validar segn el mtodo (caso 3)
Tipo de Mtodo
Parmetro

Cualitativo

Componentes
trazas

Componentes
mayoritarios

depende

depende

L. de Cuantificacin

Precisin

Veracidad

Rango

Selectividad
Linealidad
L. de Deteccin

Robustez
Incertidumbre

Propiedad
fsica
-

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Tabla 3: Efecto de modificaciones al mtodo de ensayo sobre los parmetros

de validacin (caso 2)
Modificacin

posibles efectos sobre

Mtodo de extraccin

Selectividad, veracidad

Matriz de la muestra

Selectividad, veracidad, precisin, LD, LQ

Extensin del rango

Linealidad, precisin

Cambios en el pH

Robustez

Cambio de operador

Repetibilidad, veracidad

Sistema de deteccin

Selectividad, linealidad, rango de trabajo

6.3. Informe de Validacin de un Mtodo

Cada validacin debe ir acompaada de un informe. El mismo debe ser preparado
por el analista/operador/tcnico y posteriormente revisado y aprobado por personal
calificado.
En la realizacin del Informe de validacin debern incluirse los siguientes puntos,
cuando corresponda:
Objetivo y alcance del mtodo.
tems a ensayar.
Veracidad
Trazabilidad de equipos
Detalle de insumos, reactivos, materiales de referencia y acondicionamiento de
las muestras.
Lista de equipos, instrumentos y dispositivos.
Parmetros de validacin evaluados.
Registro de las condiciones de los ensayos y grficos representativos (curvas
de calibracin, grficos de residuos, cromatogramas, etc.)
Resultados obtenidos.
Incertidumbre de medicin.
Personas que participaron en la validacin del mtodo.
Conclusiones, criterios de aceptacin o rechazo, criterios de revalidacin.
6.3.1. Evaluacin de los resultados de validacin
Al final del informe de validacin debe hacerse una declaracin sobre la aptitud para
la aplicacin del mtodo (fitness for purpose). De esta manera se confrontan los

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parmetros estadsticos del mtodo obtenidos en la validacin con los requisitos

establecidos previamente (6.2.1)
Puede ocurrir que uno de los puntos del informe no concuerde con el requisito
establecido previamente (por ejemplo repetibilidad del 7% en vez del 5%
especificado) y que de todas maneras, se considere el mtodo adecuado. Esto debe
ser fundamentado en el informe de validacin por el responsable del ensayo.
En el caso de la verificacin de desempeo utilizando cartas de control o resultados
de ensayos de aptitud, se contrastarn los resultados de los mismos con los
indicados en la norma de referencia, utilizando herramientas estadsticas
adecuadas.
7. DOCUMENTACIN RELACIONADA:
No aplica