Aspectos

generales de la
tecnologa del
ADN
recombinante
Mayn vila Stephanie Alejandra
Grupo: 405 Seccin: A
Ledesma Jorge

Profesor: Shizuru

Aspectos generales de la tecnologa del ADN

recombinante
Al revelar los nmeros mtodos mediante los cuales las clulas procesan, aaden,
eliminan y transfieren informacin gentica, los bilogos moleculares abrieron el
camino para el desarrollo de sus propias manipulaciones genticas.

En los

ltimos aos, se han desarrollado tcnicas que han permitido abordar el anlisis y
la manipulacin del ADN en una forma antes inimaginada. Este conjunto de
tcnicas se conoce como tecnologa del ADN recombinante, nombre que pasa por
alto el hecho de que la recombinacin del ADN, segn todas las evidencias, se
llevaba a cabo espontneamente aun antes de que apareciese la primera ameba,
mucho antes de la aparicin de un primate curioso.
La tecnologa del ADN recombinante ha hecho posible investigar ms a fondo la
estructura y funcin de los genes, especialmente de los genes eucariticos que
eran inaccesibles por otros mtodos. Esta tecnologa abri de manera repentina y
contundente el camino a una nueva comprensin gentica humana, ya que
permite el diagnstico exacto de muchas de las enfermedades hereditarias y su
tratamiento exitoso en el futuro1.
La tecnologa del ADN recombinante no se desarroll rpidamente. De hecho,
tiene sus races en los estudios genticos de las bacterias. Despus de dcadas
de investigacin bsica y de una extensa acumulacin de conocimientos, la
tecnologa

se

volvi

factible y disponible para

muchos

cientficos

ahora

utilizan

que
estos

mtodos.
En la tecnologa del ADN
recombinante, los cientficos usan enzimas de las bacterias, conocidas como
enzimas de restriccin, para cortar molculas de ADN slo en sitios especficos.
Las enzimas de restriccin permiten a los investigadores cortar el ADN en
1

fragmentos manejables. Cada fragmento se incorpora entonces en una molcula

de vector adecuada, un transportador capaz de transportar el fragmento de ADN al
interior de una clula. Los bacterifagos y las molculas de ADN denominadas
plsmidos son dos ejemplos de vectores. El ADN bacteriano es circular; un
plsmido es una molcula de ADN circular separada y mucho ms pequea, que
puede estar presente y replicarse en el interior de una clula bacteriana. Los
investigadores introducen plsmidos en las clulas bacterianas mediante el
mtodo conocido como transformacin, la captacin de ADN forneo por parte de
las clulas. Para que la transformacin sea eficiente, el investigador altera la
clula qumicamente o por electroporacin-descarga de un choque elctrico- para
que la membrana plasmtica sea permeable a las molculas de ADN plasmdico.
Una vez que un plasmdico entra en una
clula, se replica y se distribuye a las
clulas hijas durante la divisin celular.
Cuando un plsmido recombinante se
replica de esta manera, se producen
muchas

copias

idnticas

del

ADN

forneo; en otras palabras, el ADN

forneo se ha clonado2.

ADN recombinante

Una interesante propiedad de los segmentos de ADN cortados por una misma
restrictasa, es que sus extremos asimtricos protuberantes tienen tendencia a
pegarse y emparejarse entre s por puentes de hidrgeno cuando se mezclan. En
1972, habiendo perfeccionado el uso de las restrictasa, fragmentos de genoma
modificados, e incluso secuencias de genoma de especies distintas, pudieron ser
unidos nuevamente usando otro tipo de catalizador biolgico llamado enzima
ADN-ligasa; de este modo, se constituy as el primer ADN recombinante, un
genoma reconstituido artificialmente al conectar fragmentos provenientes de
fuentes distintas.

Desde 1973 se realizan experimentos de recombinacin de ADN de organismos

totalmente

diferentes

(bacterias,

plantas,

animales).

En

1977

cientficos

norteamericanos introdujeron por primera vez en una bacteria material gentico de

clulas humanas, y desde 1982 sali a la venta el primer medicamento (insulina)
producido por manipulacin gentica.
El ser humano ya cuenta con el potencial de transformar la informacin hereditaria
de cualquier ser vivo, de acuerdo con una idea o patrn preestablecido, razn por
la cual a esta rea se le llama ingeniera gentica y tiene una infinidad de
aplicaciones.
La Tcnica del ADN recombinante permite:

Cortar
Aislar
Pegar
Reproducir
Secuenciar fragmentos especficos
de ADN y obtenerlo en cantidades
ilimitadas con los genes que se
deseen

Este ADN se incorpora a la clula de

otro organismo (bacteria, hongo, planta o animal) para expresar la informacin
formada por la unin de segmentos de ADN de origen diferente.
Esta tcnica se presenta en etapas, las cuales son:

Corte especifico del ADN: en fragmentos pequeos mediante enzimas

de restriccin que reconocen una secuencia especfica de nucletidos y
cortan en ese punto cada una de las cadenas de ADN. Los extremos
quedan libres y pueden unrse a otros fragmentos de ADN que hayan

sido cortados por la misma enzima de restriccin.

Clonacin del ADN: consiste en que de un fragmento de ADN se
obtienen miles de copias idnticas. Lo primero que hay que hacer es
obtener una molcula de ADN recombinante que se desea clonar y un
3

vector de clonacin. Los vectores de clonado son agentes capaces de

introducir y unir mediante enzimas ligasas fragmentos en las clulas
portadoras, los cuales se requieren para su recombinacin 3.

Enzimas de restriccin
En 1970 se descubri un nuevo tipo de enzima, llamada enzima de restriccin o
restrictasa. Las restrictasas se descubrieron en bacterias, y son molculas
capaces de reconocer una determinada secuencia de ADN (llamada diana de
reconocimiento) y de cortar ambas cadenas en lugares concretos; de esta forma,
por primera vez en la historia, las secuencias de cada gen pudieron ser analizadas
por separado, ofreciendo a los cientficos la posibilidad de estudiar y en su caso
manipular de forma directa la informacin gentica.
Se conocen ya cientos de enzimas de restriccin capaces de cortar, aislar e
incluso modificar fragmentos
de

ADN

de

diferentes

tamaos, ya que cada una es

especfica
determinada
sentido

para

una

secuencia;

estricto,

se

en

podra

decir que el descubrimiento de estas enzimas permiti el arranque de la ingeniera

gentica.
La tecnologa de las restrictasas es una de las ms poderosas herramientas con
que cuenta la ingeniera gentica en la actualidad. Estas tijeras moleculares
selectivas cortan el ADN en secuencias concretas conocidas como palindrmicases decir, que en ambas cadenas se encuentran las mismas bases pero en
secuencia inversa complementaria), que generalmente comprenden de 4 a 10
pares de bases, segmentos ms fcilmente manipulables que posteriormente
pueden ser reinsertados en una cadena, concretando as la tecnologa del ADN
recombinante4.

Vectores:
4

Plsmidos como vectores. Los plsmidos presentan las cuatro caractersticas de

un vector til. Primero, son pequeos,

como son tan pequeos, muchos

plsmidos tienen slo una secuencia de reconocimiento para una enzima de

restriccin dada. Cuando una enzima de restriccin corta un plsmido de este tipo,
lo transforma en una molcula lineal con extremos cohesivos. Los extremos
cohesivos de otro fragmento de ADN cortado con la misma enzima de restriccin
se pueden aparear con los extremos cohesivos del plsmido, lo que genera un
plsmido circular que contiene el ADN nuevo en una localizacin conocida.
Virus como vectores. A menudo, se utilizan virus procariontes y eucariontes como
vectores de ADN eucarionte. Los virus al infectar naturalmente a la clulas,
ofrecen una gran ventaja respecto de los plsmidos, que suelen requerir medos
artificiales para inducirlos a ingresar en las clulas hospedadoras.
Cromosomas artificiales como vectores. Los plsmidos bacterianos no son buenos
vectores para hospedadores eucariontes como las levaduras, porque las
secuencias de ADN procariontes y eucariontes utilizan diferentes orgenes de
replicacin. Para solucionar este problema, los cientficos han creado un
cromosoma minimalista denominado cromosoma de levadura artificial. Esta
molcula de ADN artificial no slo contiene el origen de replicacin de la levadura,
sino tambin las secuencias centromricas y telomricas, lo que lo convierte en un
verdadero cromosoma eucarionte.
Plsmidos como vectores para plantas. Un vector importante para transportar ADN
nuevo a muchos tipos de plantas es un plsmido hallado en Agrobacterium
tumefaciens. Esta bacteria vive en el suelo y causa una enfermedad de las plantas
denominada agalla de la corona, que se caracteriza por la presencia de
excrecencias, o tumores, en la planta5.

Unin de la secuencia ADN

5

Para poder soldar fragmentos de ADN obtenidos con restrictasas, sus extremos
han de ser complementarios entre s para que puedan formarse los puentes de
hidrgeno entre bases complementarias. Se descubri que la mayora de las
terminaciones de los fragmentos generados con restrictasas eran cohesivos, lo
que permita una unin por complementariedad de bases. En este hecho se basan
casi todos los procedimientos de clonacin gentica.
Lo que se hace es cortar con el mismo enzima de restriccin, tanto en el ADN que
se desea insertar en una clula como el ADN del vector, que actuar como un taxi
para llevarlo hasta el cromosoma hospedador del fragmento forneo de ADN.
Posteriormente, se mezclan las molculas cortadas, bajo unas condiciones que
favorezcan el alineamiento de las cadenas complementarias. As es posible formar
fragmentos en crculo formados por un vector tipo plsmido y el ADN extrao que
desea introducir en una clula6.

Biotecnologa

La biotecnologa es la utilizacin de
clulas vivas para producir materiales
tiles

para

alimentos,

las

personas,

frmacos

como

sustancias

qumicas.
La posibilidad de insertar casi cualquier
gen en bacterias o levaduras, junto con
los mtodos para inducir el gen que
fabrica su producto en grandes cantidades y lo exporta de las clulas, ha
convertido a estos microbios en fbricas verstiles de importantes productos. La
clave de esta explosin biotecnolgica ha sido el desarrollo de vectores
especializados que no slo transportan genes al interior de las clulas, sino que
hacen que ellas los expresen en altos niveles 5.

Transgnicos:
Plantas transgnicas. Se obtienen de la forma siguiente:
Se obtiene el segmento de ADN deseado.
Se introduce en un vector bacteriano; generalmente se usa
Agrobacterium tumefasciens, que es una bacteria que ocasiona
tumores en las plantas.
Se infecta la planta con la bacteria.
El ADN de la bacteria se une con el ADN de la planta y se producen
clulas transgnicas.
Estas clulas transgnicas se cultivan y se multiplican en el
laboratorio.
Se obtienen nuevas plntulas a partir de clulas transgnicas.
Se trasplantan las nuevas plantas transgnicas para cultivos
agrcolas.
Animales transgnicos. Los animales transgnicos tienen en sus clulas
algn gen de otro organismo, llamado transgn, elaborado mediante la
tcnica del ADN recombinante. Este gen debe llevar, adems,
secuencias reguladoras que permitan la expresin del gen deseado; el
transgn se inserta por microinyeccin en el vulo fecundado o por
transformacin in vitro de clulas madre extradas del embrin.
Terapia gnica:
La

terapia

gnica

es

un

proceso

mediante el cual se inserta material

gentico en clulas afectadas a fin de
reemplazar genes defectuosos y corregir
el dao que han causado al organismo,
o dotar a las clulas de una nueva
funcin que cubra las deficiencias en un

tejido. En trminos simples, la terapia gnica busca eliminar las causas de la

enfermad en vez de aminorar los sntomas.
La terapia gentica para transferir los genes usa varios vehculos de origen viral o
no viral llamados vectores. La transferencia por un vector viral se conoce como
transduccin, mientras que la transferencia de genes por un vector no viral se
llama transfeccin.
Formas de terapia gnica;
Terapia gnica en clulas somticas. Modifica la dotacin gentica de todas
las clulas que no son sexuales, es decir, slo a nivel de tejido u rgano
que sean transfectados. Se realiza mediante una inyeccin directa,
extirpacin previa del tejido o mediante descendencia del paciente y slo se
permite su uso para estudios en donde se requiera potenciar algn carcter,
como la altura o el color, y no tratar ningn tipo de enfermedad.
Terapia gnica de clulas germinales o sexuales. Va dirigida a modificar la
dotacin gentica de vulos y espermatozoides, lo cual origina un cambio
permanente en el individuo y su descendencia, e intenta corregir patologas
congnitas. La terapia gnica se puede clasificar en terapia gnica in vivo y
en terapia gnica ex vivo:
Terapia gnica in vivo: Las clulas humanas se extraen del paciente y se
cultivan. Se preparan los vectores del gen teraputico y se introducen en
las clulas cultivadas del paciente. As se obtienen clulas modificadas que
expresan el gen teraputico requerido para que se desarrollen su funcin
normal. Por ltimo, las clulas modificadas se transfectan al paciente.
Terapia gnica ex vivo: Esta terapia consiste en introducir directamente el
gen requerido en sangre y ah llega a las clulas blancas, tambin puede
introducirse directamente en el tejido u rgano afectado 3.

Clonacin:
La clonacin es una
tcnica

fundamental

para la biotecnologa
pues se puede clonar
un gene, una clula o
un

organismo

completo. Cuando una

clula se divide por mitosis, cuando un organismo se produce asexualmente e
incluso cuando un embrin se divide formando dos, se puede decir que se trata de
casos de clonacin. La clonacin de animales y la que se utiliza para clonar linajes
de clulas madre se realiza mediante una tcnica muy distinta.
Consiste en reemplazar el ncleo de una clula madre o de un vulo con el ncleo
de una clula somtica adulta diferenciada, de manera que este nuevo ncleo
reprograme a la clula husped, y la convirtiera en una clula del tejido que
queremos producir, o en un cigoto hbrido, respectivamente 4.

Bibliografia
Fuente 1: Velasco Santos, Juan Manuel. Biologa. Pg. 417-440.
Fuente 2: Curtis, Helena. Biologa. Pg. 323-440.
Fuente 3: De Erice Ziga, Elena Victoria. Biologa. Pg.208-219.
Fuente 4: Lecona Urrutia, Adrin. Biologa II. Pg. 56-71.
Fuente 5: Sadava, David. Vida. La ciencia de la Biologa. Pg. 358-372.
Fuente 6: Solomon, Eldra. Biologa. Pg.264-274.

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