Conceptos importantes

Que es una prueba de antiglobulina?

Que es una antiglobulina?

Que es una prueba positiva

(aglutinacin)?
Cual es el significado clnico de una prueba de
antiglobulina directa positiva

Aglutinacin
Es uma reaccin
quimica compleja que
involucra muchas
variables

Especifica / Inespecfica

Herramienta utilizada
en ImH, para detectar
reacciones Ag-Ac

Ac completos o aglutinantes
Aglutinacin directa
Anti-A

Anti-B

Ac Aglutinantes

Anti-AB

Son Ac capazes de promover la

baja del PZ hasta el punto

critico, promoviendo la
aglutinacin .
Normalmente IgM
IgM

Ac NO aglutinantes

No hay aglutinacin directa

Ac No aglutinantes
Son Ac que no logran bajar el PZ

hasta el punto crtico

promoviendo la aglutinacin
directa
Estos Ac apenas sensibilizan los

GR, sin aglutinrlos

Como detectrlos?

Prueba de Antiglobulina Hunmana

1908: Carlos Moreschi describi el principio de la prueba de Anti

Globulina Hunmana (AGH)
1945: Coombs, Mourant & Race: Presentaran la prueba en la rutina
laboratorial para la deteccin de Ac RH incompletos

Suero AGH Anticuerpo Anti

Anticuerpo Hunmano
- Reacciona con todas las globulinas
hunmanas !

Que es una AGH?

AGH

Ac fijados en los GR

Algutinacin

Es un anticuerpo Anti

Anticuerpo Humano

Ac

Reacciona com otros

Anticuerpos Humanos

(Conejos)

Al reaccionar con los Acs que estn

fijados a los GR, ellos promueven
baja del potencial Zeta y
consecuente aglutinacin

Auto
Anticuerpo?

Aloanticuerpo?

+
+ + + +
+
+

+
+ +

+
+_
+_
_
+
+
+
+
_
+
_
+
+
+
+
+ +
+
+
+
_
+
_
_
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_
+
+
+
+ _ +
+
+
+
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_
+
+
+
+
+
+
_
+
COOH+
_
+
+
_ +
COOH+
+
+
+
+
+
_
_
_
COOH+
+
+
+ +
+
+
+
COOH+
_
_ +
+ +
+
+
+
COOH+ +
_
+
+
+
+ _
+
+
COOH+
+
Ac sensibilizantes y Acs livres
+
+ _
+ _
+
+
COOH+
+
+
+
+
+
_
_
COOH+
+ +
+
+
+
_
COOH+ +
+ +
+
+ +
_
+
_ +
COOH+
+ +
+
COOH+ +
_ +
+
+
+ + + _
COOH+
+
ImunoBase- DiaMed AG

+
+ + + +
+
+

+
+ +

+
+_
+_
_
+
+
+
+
_
+
_
+
+
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+
+
+
_
+
_
_
+
_
+
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+ _ +
+
+
+
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_
+
+
+
+
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+
_
+
COOH+
_
+
+
_ +
COOH+
+
+
+
+
+
_
_
_
COOH+
+
+
+ +
+
+
+
COOH+
_
_ +
+ +
+
+
COOH+ +
_
+
+
+
+ _
+
+
COOH+
+
+
+ _
+ _
+
+
COOH+
+
+
+
+
+
_
_
+
+ +
+
+
Lavado para retirar Ac libres COOH+
_
COOH+ +
+ +
+
+ +
_
+
_ +
COOH+
+ +
+
COOH+ +
_ +
+
+
+ + + _
COOH+
+
ImunoBase- DiaMed AG

+
+ + + +
+
+

+
+ +

+
+ + _
+ +
+
+
+
+
+

_
+

+
_
+

+_

+
_

+
_
+

_+

+_
+

+
_
_

+ _
+
COOH+ _ +
+ +
COOH+
+
_
COOH+ _
+ +
+
+
COOH+
+
_ +
+ +
+_
+
COOH+
+
+
+
+
+
COOH+
+
+ _
+
+
COOH+
+
+
_
COOH+
+
+ + + +
COOH+ +
_
+
COOH+
+
+
COOH+
+ + + _
COOH+
ImunoBase- DiaMed AG
+

+
_

+
_

+
_

+
_
+
_

+
_

+
_
+
+
_ +

+
+

_ +
+

+
+ + + +
+
+

+
+
+
_
_
_
+
_
Adiccin del suero AGH =
_ +
+
+
+
+
Neutralizacin
de las_
+
_ +elctricas
+ _ + _ + cargas
+
+
+
+
_
+
+
_
+
+
+
+
+
_
COOH+
_
+
COOH+
_ +
+
COOH+ _
_
_
+
+
+
+
COOH+
+
_
_
+
+
+
_
+
COOH+
+
_
+ _
+
+
COOH+
+
+ _
+
_
+
COOH+ +
+
+
+
COOH+ _ + _ +
+
+ + + + _ +
COOH+
+
_
+
+
+
COOH+ _
+
+
COOH+
+ _ +
+
+ 13+
COOH_
+
+
ImunoBase- DiaMed AG
+

Importancia del reactivo

Control de AGH

II

II

Metodologia de Gel Centrifugacin

Tipos de AGH
POLIESPECFICO ou POLIVALENTE

Anticuerpos contra las Inmunoglobulinas humanas (anti-IgG +anti-

cadenas pesadas) y contra fracciones C3(C3c+C3d) del complemento.

21

Tipos de AGH

Anti-IgG !

MONOESPECFICOS ou MONOVALENTES

Anticuerpos contra un tipo especifico de inmunoglobulina (IgG,IgM o IgA) o

complemento (C3b, C3d o C4).
22

Valoracin del resultado de CD+

4+

4+

4+

3+

2+

1+

3+

2+

1+

(+)

Cul es el mnimo nmero de molculas de IgG

por hemate que puede ser detectado por el
reactivo antiglobulina?

Se cree que entre 100 y 200

molculas de IgG por hemate,

pero va a depender de:

De la subclase de IgG implicada

Del reactivo ATG usado
De la tecnica: tubo o tarjeta

N de molculas
IgG

Resultado

25-120

Negativo

120 - 200

(+)

200 - 300

1+

300 - 500

2+

>500

3+ o 4+
Petz LD&Garratty G. 2004

Resultados del Coombs directo

1. Negativo

2. Positivo

- Poliespecfico: 2+
- Anti-IgG:
3+
- Anti-C:
0

2. Positivo
- Poliespecfico:
- Anti-IgG:
- Anti-C:
- Autocontrol:

2+
3+
3+
0

Mono-especfico

Paciente 1

Paciente 2

Anti-IgM X C3 !

Crdito foto: Daniella Tenius-RJ

AHAI grave con PAD NEGATIVO

AHAI por IgA

Menos de 2,5% de AHAI son mediadas

por IgA

Conclusin: Es demasiado importante la realizacin de

una prueba de antiglobulina monoespecfica en
caso de sospecha de AHAI con PAD negativa.

En AHAI causada por anticuerpos IgA el PAD

poliespecfico puede ser negativo o apenas
debilmente positivo debido a una cantidad limitada
de anticuerpos anti-IgA en el suero de antiglobulina
poliespecfico.

Los sueros poliespecficos monoclonales no hay

actividad anti IgA
Autoimmune hemolytic anemia due to IgA class autoantibodies

R.J. SOKOL, D.J. BOOKER, R. STAMPS, AND J.R. BOOTH

Immunohematology
JOURNA L O F B L O O D G RO U P S E ROLOGY AND EDUCATION VO LU M E 1 2 , N U M B E R 1 , 1 9 9 6

Intensidad de aglutinacin
X
Cuantidad de Ac

Generalmente la intensidad de la aglutinacin observada es

proporcional a la cantidad de globulinas adsorbidas.

(Manual Tcnico AABB)

Siempre hay co-relacin entre la intensidad de la

aglutinacin y el significado clnico?

NO

PAD
NO es una prueba
pre-transfusional
obligatria por los
estandares
internacionales.

 Cuando hacer la PAD?

Para estudiar la presencia de GR sensibilizados in vivo por

anticuerpos y/o fracciones de complemento especialmente en
casos de Anemias Hemolticas Sospecha de etiologia inmune

Estudio de la Enfermedad Hemoltica Peri-Natal

aloac materno

Anemia Hemoltica Auto-Inmune

autoanticuerpos

Hemolisis inducida por drogas

autoanticuerpos (?)

Reacciones hemolticas inmunes post-transfusionales

aloacs x GR transfundidos
31

PAD
Situaciones donde es til estudiar los resultados de la PAD:
Resultados discrepantes en la tipificacin ABO
Cuando tenemos una reaccin positiva en el Control de Rh en la

tipificacin RHD
Positividad inexplicada en una prueba de compatibilidad La sangre
del Donante puede tener el PAD positivo que interfiere en la prueba
cruzada

PAD positiva NO s DIAGNOSTICO

La interpretacin de cualquier PAD positiva debe considerar:

la historia del paciente
los datos clinicos
transfusiones recientes - Descartar RHT
Los resultados de otras pruebas laboratoriales como Hb, bilirrubina

indireta, reticulcitos, etc....

Sin evidencias de hemolisis no hay que preocuparse con la positividad

de la PAD

Procesos clnicos que pueden presentar

CD positivo SIN anemia hemoltica
Pacientes poli-transfundidos
Enfermidades asociadas a problemas
del sistema inmune como Lupus,
SIDA, etc..,

Anemia Falciforme, B Thalasemia,

Enfermedad renal, Hepatitis, Malria

Sin embargo...
si, adems, el paciente
presenta
anemia hemoltica

Pacientes oncolgicos: Neoplasias,

Mieloma Multiplo
Otras enfermedades com aumento de
protenas
Panaglutinaciones
Pacientes que reciben algunos tipos
de Medicinas

Cefalosporinas, Metildopa, cido saliclico,

Sulfonamidas, Diurticos tiazdicos, Antazolina,
Clorpromazina, Isoniazida, Estreptomicina,
ibuprofeno.

El valor del
Coombs directo
PUEDE ser
altamente diagnstico

Valor predictivo de un CD
positivo

En un indivduo sano suelen estar

presentes entre 5 y 90 molculas de
IgG por hemate, y entre 5 y 40 de
C3d.

Un 0.1% de donantes superan estos

niveles y presentan un CD positivo.

La gran mayora
no presentan
signos hemolticos,
Entre un 1% y un 15% de pacientes
El aumento del nmero de
ni
siquiera
hospitalizados presentan un CD
molculas de IgG y/o C puede estar
positivo por razones similares. anemia.relacionado con

Hipergammaglobulinemia
Medicacin que favorece la fijacin
inespecfica de proteinas

Valor predictivo de un CD positivo

AHAI
El PAD+

PUEDE ser altamente

diagnstico.

Entre un 1% y un 4%

Pacientes con
ANEMIA HEMOLTICA
AUTOINMUNE
presentan un
CD positivo
(96%-99%)

de AHAI pueden presentar,

inicialmente, un CD negativo
En fase aguda y sin tratamiento:
CD positivo con intensa aglutinacin
Eluido: positivo

* 2-4% AHAI - PAD Negativo - IgA

Consideraciones
PAD+ , sin Ac
65 y 80% de las muestras
con PAD positiva
presentan eluidos no
reactivos

PAD positiva por RHT

89% das RHT tienen PAD

posita

PAD positiva por EHPN

Garratty
PAD fuertemente Positivos por
antiD u otros AC, y debilmente
positivos por ABO
La fuerza de aglutinacin del PAD
no esta relacionada a la severidad
de la hemolisis

Pacientes con anemia

hemoltica NO inmune
Pueden presentar un CD

positivo

Poco frecuente, el CD suele ser dbil,

el eluido suele ser negativo

Utilidad de la Elucin

Elucin por diferentes

mtodos:
Calor
Frio
cido,
Disolventes
con destruccin de los hemates

El ELUIDO se enfrenta a hemates:

Es Reactivo:
- Fijacin especfica (Fab)
(Autoac de clase IgG)

No es reactivo:
- Fijacin inespecfica (Fc)
- Frmacos
- Autoacs IgM (baja afinidad)
- Escaso autoac fijado

Cul es el significado clnico de

un CD positivo?

El paciente est
anmico?

La anemia va
acompaada de
hemlisis?

NO

El CD+ es un hallazgo serolgico

SI

El CD+ puede tener valor diagnstico

Investigar si hay hemlisis

NO

El CD+ no es favorable para AHAI

SI

El paciente MUY probablemente tiene

una AHAI

Sobre Donantes con PAD positiva

Donante tiene
ms riesgo de
tener algunas
enfermedades

Baja de la
sobrevida de los
globulos
tranfundidos

Devemos
detectar a los
donantes TAD
positivos?

Dilemas
sobre los

Devemos avisar
al donante y a
su medico?
Factores de
riesgos para
algunas
enfermedades

Donantes
con TAD
positivo

Devemos
utilizar la bolsa
de sangre de un
donante TAD
POS?
72% vida
acortada

Estudio de Subclases de IgG

> 2+

Coombs Monoespecficos

Sueros Monoespecficos

> 2+ (IgG)

Titulacin con ID-tarjeta IgG - Dilution

Significado clnico Titular

IgG

< 1:30 = positivo dbil (IgG) Bajo riesgo de hemlisis

> 1:30 = positivo fuerte (IgG) Alto riesgo de hemlisis estudiar
subclases

Pesquisa de Subclases de IgG

Positivo 1:1 = (IgG1) - Moderado riesgo de hemlisis

(IgG3) - Alto riesgo de hemlisis
Positivo 1:100 = Alto riesgo de hemlisis (IgG1 y/o IgG3)

Conclusin
TAD aisladamente no tiene ningn valor predictivo.
No incluir el TAD en la rutina de las pruebas pre-transfusionales.

Hacerlo en caso de sospecha de hemlisis inmune, para el diagnstico o

monitorizacin terapeutica.

Evaluacin de la severidad de la hemlisis

Evaluacin de todos los datos clnicos y de laboratorio
Realizacin de las pruebas in vitro, respetando las limitaciones de la

tcnica! ****
Atencin especial a los TAD hechos en muestras de RN ****

Gracias por su participacin