UNIVERSIDAD ANDRES BELLO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR BIO-035

GUA N 3 MICROSCOPIA

INTRODUCCIN
Las clulas son las unidades bsicas de los seres vivos. La mayora de ellas son de pequeo
tamao por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su
visualizacin. Por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 3m), o
sea la menor distancia vista o resuelta por el ojo humano es de dos lneas separadas 1mm de
distancia; si hay dos lneas a 200 3m de distancia, veremos una sola lnea. Los microscopios se
utilizan para mejorar la resolucin.
El trmino clula fue usado por primera vez cuando Robert Hooke observ un trozo de
corcho en un
microscopio de luz en 1665. Luego, Antony van Leeuwenhoek observ
en 1670 varios tipos de clulas y finalmente, fue en 1838 cuando Matthias Scleiden y
Theodro Schwan propusieron a partir de sus observaciones microscpicas de diversos
tejidos la teora celular Todos los organismos estn compuestos de clulas, y todas las
clulas provienen de la divisin de otras clulas preexistentes. Estos descubrimientos dieron
as origen al nacimiento de la biologa celular contempornea.
Las clulas son muy pequeas y adems son traslcidas lo que hace imposible su observacin
por ojo humano desnudo. Es por eso que el microscopio ha sido, y es una de las herramientas
ms utilizadas en biologa. El progreso en la construccin de nuevos microscopios, as como
el desarrollo y uso de nuevos mtodos de fijacin, corte y tincin han permitido una serie de
descubrimientos en los campos de la histologa, citologa y bacteriologa, permitindonos
entender cada vez con ms claridad la estructura de la clula y su organizacin, lo que es una
importante ayuda para la comprensin de su funcionamiento.

FIGURA 1: Relacin entre el tamao de diferentes clulas y sus componentes.

Objetivo del trabajo Prctico:
El objetivo principal de este laboratorio consiste en que el estudiante comprenda el
funcionamiento de un instrumento ptico como el microscopio y observe diferentes tipos
celulares
realizando
comparaciones
entre
ellas.

EL MICROSCOPIO OPTICO Y SUS PARTES.

En trminos generales, el microscopio es un sistema de lentes montados en un tubo. La
distancia desde el tubo al objeto que se quiere observar puede regularse por medio de dos
botones de ajuste, y todo el conjunto est dispuesto sobre un robusto soporte en el que
tambin se apoya la platina sobre la cual se coloca la preparacin a observar, y una fuente de
luz que se dirige a travs del objeto en estudio.
Las diferentes partes de un microscopio pueden agruparse en 3 sistemas fundamentales:
El sistema mecnico se compone del pie en el cual se sustenta el instrumento, y la columna,
que se encuentra fijada al pie y sostiene las otras partes del microscopio; el tubo que
sostiene los oculares, el revolver portaobjetivos, la platina y el sistema de enfoque, tanto
macromtrico (aproximado) como micromtrico(preciso).
El sistema ptico se compone de 2 sistemas diferentes de lentes. Los oculares son 2 lentes
separados por un diafragma fijo, tienen la funcin de aumentar la imagen proyectada por los
objetivos. Los objetivos son 3 4 lentes ubicados en el revlver, son los que aumentan la
imagen y pueden ser secos (entre ellos y la muestra hay una capa de aire) o de inmersin
(entre ellos y la muestra se coloca una sustancia especial que permite lograr un aumento mayor).
Finalmente, el sistema de iluminacin se compone de una fuente luminosa, que es
generalmente una lmpara ubicada en el pie o en la base de la columna del microscopio. Si
la fuente luminosa es independiente del microscopio, adems se necesita de un espejo que
refleje la luz y la desve hacia el condensador y de un condensador, que a travs de un sistema
de lentes concentra la luz que llega al condensador se regula por medio de un diafragma
ubicado en su parte inferior. Adicionalmente se puede colocar un filtro, generalmente azul, para
obtener una luz homognea y parecida a la luz natural.

FIGURA 2. Esquema de un microscopio ptico en el cual se indican sus partes.

3

FORMACIN DE LA IMAGEN
La luz posee una naturaleza dual, y puede ser entendida al mismo tiempo como una partcula
y como una onda. La comprensin de este comportamiento, as como de algunas
caractersticas de la luz, es importante para entender el proceso de formacin de la imagen
en un microscopio, y cmo manejando ciertos parmetros fsicos podemos obtener
imgenes ms ntidas y de mayores aumentos.
La luz posee una determinada longitud de onda y viaja en el espacio con una determinada
velocidad. Cuando la luz llega a una superficie que separa dos medios transparentes una
parte de ella se refleja volviendo por el mismo medio en que se propagaba, y otra parte en
cambio es refractada, penetra en el segundo medio y cambia su direccin y velocidad. Esto
ocurre cuando la luz llega por ejemplo a una lente. Si sta es convergente, los rayos se
juntan en un punto, el que corresponde al foco, la distancia entre ese punto y el centro de la
lente es la llamada distancia focal.
Como ya vimos, la velocidad de la luz es diferente en el vaco que en otros medios. Esta
diferencia de velocidad puede compararse mediante el ndice de refraccin, que corresponde
al cuociente entre la velocidad de la luz en el vaco y la velocidad de la luz en un medio
determinado en el que sta incide.
Mientras ms se acerca un objeto al ojo, ms detalles de l pueden ser distinguidos,
pero hay una distancia lmite a la que se pueden acercar los objeto, y sobre esa distancia, ya no
se distinguen los objetos con claridad, y se hace necesario el uso de lentes o lupas para
aumentar el objeto en estudio. El aumento de una lente est dado por el lmite de cercana a la
que pueden llevar los objetos en el ojo humano y por su distancia focal. Si se quiere
aumentar an ms una imagen, se pueden colocar dos lentes en serie (objetivo y ocular en el
caso de microscopio compuestos), y el aumento final logrado ser entonces el producto del
aumento de cada uno de ellos.
Si tiene en un microscopio un objeto a observar, los rayos de luz reflejados o emitidos por
el objeto que se sita fuera de la distancia focal de un lente (objetivo) al pasar por el objeto son
refractados y enfocados en un plano que se ubica ms all de la cara opuesta de la lente
obtenindose una imagen real que es invertida y de tamao distinto (mayor) al del objeto
original. A medida que el objeto se acerca al foco la imagen obtenida es ms grande.
Lente

Plano

FIGURA 3. Formacin de la imagen en una lente simple.

FIGURA 4: Formacin de una imagen en un microscopio. La segunda lente (ocular)

aumenta la primera imagen obtenida. La imagen final es una imagen virtual y aumentada.
El poder de resolucin de un microscopio depende tambin de la apertura numrica,
capacidad de una lente para aprovechar la mayor cantidad de rayos para formar la imagen.
Esta puede aumentarse al usar entre el objetivo y el objeto a observar una sustancia con ndice
de refraccin mayor del aire. Para esto se usan los llamados aceites de inmersin. As, al
aumentar la apertura numrica se obtienen mayores aumentos. Este tipo de aceites se usan
solamente con objetivos especiales que se llaman lentes de inmersin.
PODERES DEL MICROSCOPIO
El microscopio posee varias caractersticas o poderes que determinan en forma importante su
utilidad como herramienta de estudio. Estos son:
Poder de aumento: Es la razn entre el tamao de la imagen que produce el
microscopio y el tamao original del objeto en observacin. Este aumento se logra a
travs del ocular y de los objetivos, y ya que cada uno es capaz de amplificar la
imagen, el aumento total logrado se obtiene al multiplicar estos dos valores de aumento.
Poder de definicin: Es la capacidad del microscopio para formar imgenes ntidas y de
bordes definidos.
Poder de penetracin: Es la capacidad para visualizar los diferentes planos de una
preparacin y est dado por el ajuste de precisin que se logra con el tornillo
micromtrico.
Poder de resolucin:
encuentran

Permite distinguir como objetos separados dos puntos que se

muy
cercanos
entre
s.

USO DEL MICROSCOPIO

Para un buen uso del microscopio sea cuidadoso y siga atentamente las siguientes
instrucciones:
1. Asegrese de que el microscopio se encuentre en una posicin cmoda para usted,
tomndolo siempre de la columna.
2. Encienda la lamparilla.
3. Coloque el objetivo de menor aumento.
4. Coloque su preparacin en la platina asegurndose de que sta se encuentre con el
cubreobjeto hacia arriba.
5. Abra totalmente el diafragma iris y suba el condensador casi hasta el tope.
6. Si su microscopio tiene espejo, cntrelo para que la preparacin reciba el mximo
posible la luz.
7. Enfoque la preparacin bajando el tubo o subiendo la platina. Existe un tope que impide
que los objetivos de menor aumento topen la preparacin.
8. Mire a travs del ocular y usando el tornillo macromtrico aleje lentamente el objetivo de
la preparacin, hasta lograr una imagen ms o menos ntida. Termine de enfocar
usando el tornillo micromtrico.
9. Una vez enfocada su preparacin, regule la cantidad de luz que recibe su muestra
cerrando para ello el diafragma.
10. Si despus de realizar todos los pasos anteriores no logra observar su preparacin en
forma ntida, verifique que la preparacin est ubicada dentro del campo visual y que el
cubreobjetos se encuentre mirando hacia arriba. Revise tambin la limpiezade la
preparacin, oculares, objetivos, condensador, espejo, y por ltimo, verifique que la
iluminacin sea la adecuada y que el objetivo se encuentre en su posicin correcta.
11. Para cambiar de objetivo, gire el revolver hasta el objetivo del aumento que desea
utilizar, y vuelva a enfocar su preparacin utilizando para ello el tornillo micromtrico.
12. Para usar el objetivo de inmersin coloque sobre su preparacin una gota de aceite de
inmersin, y luego enfoque su preparacin con el objetivo inmerso en el aceite. Una vez
finalizada la observacin, limpie cuidadosamente el objetivo eliminando el aceite de
inmersin. Para ello utilice xilol y una hoja de papel para lentes, especialmente dispuesto
para ello, pues las pelusas del papel comn permanecen en el objetivo y pueden interferir
en observaciones posteriores.
13. Al terminar su trabajo limpie el resto del microscopio con un pao suave, apague la
lamparilla, situ el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, baje la
platina,
y
cubra
el
microscopio.

PREPARACION

DEL MATERIAL A SER OBSERVADO EN

UN MICROSCOPIO.

Existen dos tipos de preparaciones microscpicas, stas corresponden a las preparaciones

permanentes y a las preparaciones temporales. Ambas deben ser lo ms delgadas posible para
dejar pasar la luz a travs de l y as lograr una buena observacin.
Las preparaciones permanentes son aquellas que se han sometido a un proceso largo de
preparacin, el que permite que se mantengan en buenas condiciones para su observacin por
periodos prolongados de tiempo. La preparacin de estas muestras incluye etapas de fijacin
del material, deshidratacin, inclusin en parafina, corte de la muestra en capas muy finas con un
micrtomo, colocacin de estas capas que contienen la muestra en un portaobjetos,
disolucin de la parafina, tincin de la muestra para contrastar las diferentes estructuras
celulares y colocacin de un cubre objetos para proteger la preparacin.
Las preparaciones temporales corresponden a cortes frescos del material a observar, los
que se realizan en el momento y tienen una corta duracin. Una vez realizados los cortes, se
coloca una gota de agua en un portaobjetos, y en ella se ubica un trozo del material a
observar, el que debe quedar completamente cubierto por el agua. Sobre esta preparacin
se coloca cuidadosamente un cubreobjeto, evitando la formacin de burbujas que interfieren
en la observacin microscpica. Finalmente, se elimina exceso de agua, y la preparacin
puede teirse para ser observada.
La citoqumica corresponde a los mtodos qumicos y fsicos por los cuales se logra la
visualizacin directa de diferentes substancias celulares a travs del microscopio.
Generalmente se usan diferentes colorantes que tien lpidos, protenas, carbohidratos o
ADN, o sustratos de enzimas especficas que permiten localizarlas en un sitio celular especfico.
Algunos ejemplos son:

Reaccin de Millon: Permite reconocer protenas que contienen residuos de tirosina en

sus cadenas laterales, a travs de un reactivo que forma un precipitado rojo.
Reaccin de Diazonio: El agente cromognico, un hidrxido de diazonio, reacciona
con grupos tirosina, triptofano e histidina de protenas, formando compuestos coloreados.
Reactivo de Schiff: Permite la deteccin de cidos nucleicos, carbohidratos y lpidos que
contienen grupos aldehdos.
Reaccin de Feulgen nuclear: Es la versin especfica para ADN en la que se usa el
reactivo de Schiff.
Tincin con lugol: tie los granos de almidn de color azul-morado
Tincin con floroglucina: tie de rojo violeta las paredes celulares
lignificadas
Tincin con azul de metileno: tie el protoplasma y las paredes celulares celulsicas.

OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS

El avance tecnolgico ha permitido en los ltimos aos el desarrollo de una serie de
microscopios que con pequeas modificaciones de los principios bsicos del microscopio de luz
permiten un mejor estudio de la clula. Algunos ejemplos son los siguientes:
Microscopio de contraste de fases: El mayor problema de la observacin microscpica de
muestras biolgicas es el poco contraste que stas poseen. Las partes invisibles de una
preparacin son atravesadas por la luz, sin que cambie su amplitud, pero produciendo un
cambio en su fase. En este tipo de microscopio los cambios de fase de la luz se traducen en
cambios de amplitud, este microscopio permite examinar objetos vivos, as como el
seguimiento en ellos de procesos celulares como la mitosis.

FIGURA 5: Imagen de clulas epiteliales enfocadas con un microscopio de contraste de fase con
objetivo 20X.
Microscopio de fluorescencia: Algunas molculas emiten parte de la luz que absorben a
longitudes de onda mayores a las que reciben. Este proceso es llamo fluorescencia y se
presenta en forma natural, por ejemplo, en las clorofilas. Existen numerosos fluorocromos
(molculas capaces de emitir fluorescencia), los cuales pueden utilizarse para teir
muestras biolgicas, cuyas estructuras se ven despus por la fluorescencia de las molculas
unidas a ellas. En este tipo de microscopios la luz utilizada es de corta longitud de onda, y se
logra por el uso de lmparas de mercurio. Esta luz incide en la muestra, y lo que se observa
es la fluorescencia que proviene de ella. Si la unin de estos compuestos fluorescentes se
hace especfica se pueden observar estructuras celulares definidas, como por ejemplo,
protenas marcadoras de diferentes organelos.

FIGURA 6: Clulas epiteliales, triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes),

actina (rojo). 200X (izq.) y 1000X (der.).
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Microscopio electrnico: La luz se reemplaza por un haz de electrones que se obtienen

al calentar un filamento en un tubo al vaco. Estos electrones son desviados en un campo
electromagntico que cumple la funcin de condensador, y concentrados en el plano donde
se coloca el objeto. Al pasar a travs del objeto, los electrones son parcialmente
deflectados; el grado de defleccin de ellos depende de la densidad electrnica de la
muestra. Debido a la baja densidad electrnica de las muestras biolgicas, para aumentar
el contraste de las muestras se usan metales pesados que aumentan la interaccin
de sta con los electrones incidentes. Despus de pasar por la muestra, los electrones se
colectan en un objetivo donde se forma la imagen, sta se ve finalmente sobre una
pantalla fluorescente, o en una placa fotogrfica.
Las imgenes logradas en este tipo de microscopio son siempre en blanco y negro, y las
zonas ms oscuras corresponden a zonas de mayor densidad electrnica en la muestra. Su
poder de resolucin es del orden de 4 A, y permite lograr aumentos de hasta 1.000.000 de
veces. Sin embargo, una desventaja es que se necesitan cortes extremadamente finos, y
las muestras deben someterse a procesos de preparacin (deshidratacin) antes de ser
colocadas al vaco para ser observadas.

FIGURA 7: Esquema con los diferentes tipos de microscopios.

ACTIVIDADES PRCTICAS
ACTIVIDAD N1: Clculo del aumento y lmite de resolucin del microscopio.
La funcin principal del microscopio es aumentar la resolucin, la cual nos permite observar
detalles de los objetos que no es posible ver con el ojo humano. Al aumentar la
magnificacin, el tamao observado del objeto, tambin debe aumentar la resolucin; de
otro modo, veramos slo una imagen de gran tamao pero sin nitidez.
El poder de resolucin de un microscopio se define como la capacidad que permite hacer
perceptible por separado, dos puntos situados muy prximos entre s en el objeto. Esta
capacidad est determinada por la apertura numrica (NA) de la lente, siendo directamente
proporcional a sta, e inversamente proporcional a la longitud de onda de la luz utilizada ().

Poder de resolucin =

NA
0,61*

El recproco del poder de resolucin corresponde al lmite de resolucin, la distancia

mnima que debe existir entre dos puntos para poder distinguirlos por separado.
Lmite de resolucin = 0,61*
NA
Teniendo claros estos conceptos, podemos comenzar el estudio de los
componentes del microscopio, para llegar a calcular el aumento de las imgenes y la distancia
mnima que podemos llegar a distinguir al realizar una observacin en un microscopio
compuesto.
IMPORTANTE
: : Recuerde que el microscopio es un instrumento ptico de gran
precisin, por lo que debe ser manejado siempre en forma cuidadosa. Cualquier
maltrato o golpe puede desajustar el instrumento y daarlo gravemente. Trate de no
tocar las piezas cuya funcin no conoce.
Ante cualquier duda o problema, solicite siempre la ayuda de sus profesores.
Procedimientosyobservaciones
1. Observe cuidadosamente los distintos componentes del microscopio que le ha sido asignado.
Comprelos con el esquema que fue entregado en la gua, y asegrese de comprender la
funcin precisa de cada uno de ellos antes de comenzar cualquier observacin
microscpica.

10
10

2. Anote el poder de aumento y apertura numrica de los lentes objetivos. Estos valores se
encuentran en la parte cilndrica o can de los lentes.
Aumento (X)
Apertura Numrica (NA)

3. Anote el aumento y la apertura numrica de el o los lentes oculares.

Aumento (X)
Apertura Numrica (NA)
4. Anote ahora la apertura numrica del condensador:
Apertura Numrica (NA)
5. La resolucin mxima de su microscopio depende de la apertura numrica efectiva
mxima que posea. Este valor mximo corresponde normalmente al lente 100x o lente de
inmersin. Observe ahora los siguientes valores:
Apertura del lente 100x:
Apertura numrica del condensador
Apertura numrica de la interfase de aire
Apertura numrica de la interfase de aceite

1,0
1,3-1,5

La apertura numrica efectiva mxima es el valor ms bajo de los anteriores. Utilizando

este valor menor de apertura numrica de trabajo, calcule el lmite de resolucin y la
resolucin de su microscopio asumiendo un =400 nm, correspondiente a la luz visible.

Unidades de medida usadas en microscopa

mm (milmetro)
= 10-3 m
um (micrmetro)

= 10-6 m

nm (nanmetro)

= 10-9 m

A (Angstrm)

= 10-10 m

11
11

Tener en cuenta que:

1um equivale a 1000nm
1mm equivale a 1000um
1cm equivale a 10mm

ACTIVDAD N 2: Manejo del microscopio y Formacin de la imagen.

Procedimientosy observaciones
Utilizando el lente objetivo 10x observe la preparacin con una letra impresa con tinta
sobre papel que le ser entregada. Tenga presentes las instrucciones para el manejo
correcto del microscopio que se encuentran en la Introduccin de la presente gua.
Compare la orientacin de la letra en su portaobjetos (preparacin) y en su campo
visual (lo que observa a travs del ocular del microscopio). A qu se debe la
diferencia observada?
Rote el revlver portaobjetivo hasta llegar al lente 40x y colquelo en posicin. Centre y
enfoque la preparacin con la letra. Hay algn cambio en la orientacin de la
letra?
Dibuje a lpiz mina la imagen observada de la letra con el objetivo 10x.

ACTIVIDAD N 3: Determinacin del dimetro del campo visual.

Procedimientosyobservaciones

Con el lente lupa (4X) enfocar y observar el portaobjeto que contiene un cuadrado de
papel milimetrado de 1 cm2. Calcule el dimetro del campo visual contando
mayor
cantidad de cuadros observados. Recuerde que 1 cuadro corresponde a 1
mm2.
Transforme la medida obtenida a unidades micromtricas.
Calcule el dimetro del campo visual del resto de los lentes objetivos (10x, 40x, 100x),
empleando la siguiente frmula:

DCV obj.x = (DCV obj.4X * aumento obj.4X) / aumento obj. XSiendo:

DCV objt X: dimetro del campo visual del lente objetivo que estoy averiguando;
Aumento obj. X: aumento del lente objetivo que estoy trabajando.

12
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ACTIVIDAD N4: Observacin de preparaciones biolgicas permanentes: Frotis de sangre

humana y Corte de Intestino delgado de Rattus norvegicus (Berkenhout).
La fijacin es un mtodo que se utiliza para preservar la morfologa y la composicin
qumica de las clulas que componen una preparacin microscpica. Consiste en agregar
agentes fijadores a la muestra como acetona, formaldehdo o glutaraldehdo, los cuales
mantienen las interacciones entre las molculas (protenas, cidos nucleicos, etc.) y permiten
que las preparaciones duren en buen estado durante meses o aos.
Uno de los mtodos ms utilizados para realizar preparaciones permanentes consiste en
fijar el material de inters en una solucin FAA (formaldehdo-alcohol- cido actico) y
finalmente embeberlo en parafina para obtener bloques que puedan ser cortados en secciones
muy finas utilizando un micrmetro.
Estas
secciones
que contienen
material
fijado y desecado
se colocan
cuidadosamente en un portaobjetos, y se disuelve la parafina con un solvente orgnico como
xilol. Una vez hecho esto, la muestra se tie para contrarrestar las distintas estructuras celulares
y se protege con un cubreobjeto montado sobre una sustancia sellante.
Procedimientosyobservaciones

Observar cada una de las preparaciones entregadas por su profesor y realice un dibujo
teniendo presente las siguientes recomendaciones:
Los dibujos deben realizarse siempre a lpiz mina, evitando borrones y colores oscuros.
La utilizacin de lpices de colores es opcional, pero el colorear su dibujo le puede
ayudar a diferenciar con mayor claridad las estructuras observadas.
Cada dibujo debe ser realizado dentro de un crculo de 8cm de dimetro, indicando a un costado de ste,
ttulo de muestra; tipo de muestra (temporal o permanente); tincin; aumento objetivo; aumento total y
observaciones. Anote los nombres de las estructuras identificadas en su observacin.
ACTIVIDAD N 5: Determinacin del tamao celular (TC).
Una vez calculado el DCV de cada uno de los lentes objetivos, se puede estimar el
tamao celular (TC) utilizando la siguiente formula:
TC = (DCV obj. X) / n de clulas
Donde:
DCV obj. X: corresponde al DCV del lente objetivo que estoy ocupando en mirar las clulas;
n de clulas: el nmero de clulas que se observan (contabilizan) a travs del dimetro de
dicho campo visual.
Determine este el valor de TC de cada una de las preparaciones biolgicas
permanentes observadas en la actividad anterior.

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ACTIVIDAD N 6: Observacin de preparaciones frescas con y sin tincin: tejido vegetal de

Allium cepa (L.) (catafilo de cebolla), Elodea sp. y muestra lquida fresca de Protozoos.
La mayora de los colorantes de clulas o tinciones son de naturaleza orgnica y aromtica.
Existen dos tipos generales de colorantes: bsicos y cidos. En los bsicos, el grupo cromforo
(que da el color) es bsico o catinico, por ejemplo el grupo azo (N=N). Los colorantes cidos
poseen generalmente grupos nitrilo (NO2) o aromticos. Ejemplos de colorantes cidos son
eosina y azul de anilina. De colorantes bsicos, azul de metileno, cristal violeta y azul de
toluidina.
El mecanismo de accin de la mayora de los colorantes se basa en la propiedad de protenas,
ciertos polisacridos y cidos nucleicos de ionizarse como cidos o como bsicos, lo que les
permite reaccionar con los grupos cromforos de las tinciones.
La carga neta de las molculas es la que determina con que tipo de colorante reacciona, y es
lo que permite realizar tinciones especificas para distintos tipos de molculas y estructuras
celulares.
Procedimientos y observaciones
1- Observacin de catafilo de cebolla
Tome el trozo de cebolla que le ha sido entregado, y con una hoja de gillete limpia
realice un pequeo corte en forma transversal al tejido. Levante cuidadosamente el
epitelio de la cebolla y tire de l hasta obtener un trozo adecuado de tejido que le
permita realizar una buena observacin microscpica. Si el trozo que usted cort es
demasiado grande, crtelo para darle un tamao adecuado.
Coloque una gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio, utilizando una pipeta
Pasteur con gotario o una pizeta.
Sobre la gota ubique un trozo de catfilo de cebolla de tamao adecuado para que pueda
ser cubierto posteriormente por el cubreobjetos. Su muestra debe quedar completamente
cubierta por el agua.
Ponga una gota de la tincin a utilizar a un lado de su muestra e incline el
portaobjetos de tal modo que el colorante baje por capilaridad hasta atravesar el tejido.
Limpie el exceso de colorante con un papel absorbente.
Tome cuidadosamente un cubreobjeto (sin dejar marcas de huellas dactilares) y colquelo
en un ngulo de 45 sobre el portaobjetos. Deslcelo hasta ponerlo en contacto con la
muestra de catfilo de cebolla y djelo caer gradual y lentamente sobre ella. Trate de
evitar la formacin de burbujas de aire pues interferirn con su observacin.
Limpie el exceso de agua con un trozo de papel absorbente, cuidando de no dejar
pelusas sobre el cubreobjeto.
Comience la observacin microscpica de su preparacin en el objetivo10x y prosiga
aumentando gradualmente el aumento.
Realice en su informe un dibujo esquemtico del tejido de la cebolla antes y despus
de la tincin, describiendo brevemente lo observado.

2- Observacin de Elodea sp.

Sobre un portaobjetos deposite unas hojas de Elodea sp, cubra con un cubreobjeto y
observe al microscopio.
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Comience la observacin microscpica de su preparacin en el objetivo10x y prosiga

aumentando gradualmente el aumento.
Qu estructura logra distinguir?. Esquematice.

3- Observacin de Protozoos.

Coloque una gota de la muestra real lquida en el centro de un portaobjetos limpio,

utilizando una pipeta Pasteur con gotario.

Tome cuidadosamente un cubreobjeto (sin dejar marcas de huellas dactilares) y colquelo

en un ngulo de 45 sobre el portaobjetos. Deslcelo hasta ponerlo en contacto con la gota
de agua y djelo caer gradual y lentamente sobre ella. Trate de evitar la formacin de
burbujas de aire pues interferirn con su observacin.

Limpie el exceso de agua con un trozo de papel absorbente, cuidando de no dejar pelusas
sobre el cubreobjeto.

Comience la observacin microscpica de su preparacin en el objetivo 10x y prosiga

aumentando gradualmente el aumento.

Realice un dibujo de los organismos que observe. Descrbalos en forma clara y breve.

Bibliografa:
Introduccin a la biologa celular 2a. ed. Alberts, Bruce, 1938. 2006
Biologa celular y molecular 4a. ed. Lodish, Harvey. 2002.
Biologa celular y molecular de De Robertis. De Robertis, Eduardo M. F; 2000.

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Materiales de laboratorio. Microscopa

Materiales por grupo (3 alumnos por grupo)

Microscopio por alumno.

Porta objetos.
Cubreobjetos.
Letra impresa fijada en portaobjeto.
Preparaciones histolgicas; Corte intestino delgado de rata, Tejido heptico y Frotis
sanguneo.
Porta objeto con papel milimetrado (1cm2)
1 Cebolla.
Hojas de Elodea (frescas)
Muestra de agua con Protozoos
Alcohol.
Bisturis.
Picetas.
Gotarios.
Lugol.

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