TECNICAS DE AISLAMIENTO, OBTENCIN DE CULTIVOS PUROS

Arvalo Lpez Yessenia Abigail

Escobar Vega Andrs Pal
Laboratorio de Microbiologa de Alimentos I, Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos
Universidad Tcnica de Ambato

Resumen
En esta prctica se reconocer y aprender las tcnicas de inoculacin de
microorganismos, en las que se aislara hasta conseguir un cultivo puro, por medio de
inoculacin por estra simple y compuesta, siguiendo el procedimiento aprendido en el
laboratorio de microbiologa
Introduccin
En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no se encuentran aislados, sino
integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar
con especies aisladas, obteniendo cultivos axnicos o puros.
Para obtener cultivos axnicos o puros a partir de una poblacin microbiana mixta, se
utilizan las denominadas tcnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el
siglo XIX. (Wistreich; 1983)
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseado diversos mtodos
que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlos
bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. (Madigan;
2004)
El aislamiento de un microorganismo para obtener un cultivo puro se realiza
principalmente en un medio slido.Se inicia por la separacin de una sola clula a
partir de una poblacin y requiere tambin que la colonia que surja de esta clula se
mantenga separada de otras clulas o colonias (Vullo; 2000).
El aislamiento de un cultivo puro puede hacerse tambin en medios lquidos, siempre
que el organismo predomine en el material de partida. (Seeley; 1991)
Es la separacin de un determinado microorganismo del resto de microorganismos
que le acompaan. El mtodo ms usual es la siembra por estra sobre un medio de
cultivo slido adecuado dispuesta en una placa de Petri.
Para ello se toma una pequea cantidad de muestra con un asa de platino y se reparte
sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas e
inmovilizadas las clulas bacterianas. (Banwart; 1982)

Tras la incubacin en condiciones adecuadas, cada clula viable origina una colonia
visible resultado de sucesivas divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas
caractersticas determinadas en cuanto a su forma, borde, elevacin, tamao,
consistencia, etc.
Los tipos de bacterias presentes en la muestra original son visibles como tipos
diferentes de colonias. A partir de colonias separadas suficientemente es posible
obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la muestra
original. (Bourgeois; 1994). Por lo tanto el objetivo de la prctica es reconocer las
tcnicas de aislamiento para obtener cultivos puros, ya sea por estra simple o
compuesta
Material y mtodos
Para realizar esta prctica se utilizaron elementos como agar nutritivo, cajas Petri, una
autoclave, incubadora, cmara de flujo laminar, asa bacteriolgica, mechero, cinta
masking, marcador para CD. Se elabora el medio de cultivo, en este caso es agar
nutritivo, que despus de prepararlo, se llevan los envases al autoclave (Model NO.
25X-1), en donde sern esterilizados, a una temperatura de 115C a 15 minutos.
Una vez realizado el proceso de esterilizacin, se retiran los frascos de la autoclave, y
se los lleva a la cmara de flujo laminar (Streamline), en donde se realiza el traspaso
del medio de cultivo a las diferentes cajas Petri, lo cual se lo realiza colocndose
alcohol en las manos para eliminar las bacterias de nuestras manos y de esta manera
no contaminar nuestro medio.
Realizado este procedimiento, utilizamos el asa bacteriolgica, la cual primero
esterilizamos, ya que la colocamos en la llama del mechero hasta que esta tome un
color rojo, y sin soltar el asa la agitamos dentro de la cmara para enfriarla y para que
esta no derrita el agar solidificado. Cogemos con el asa un microorganismo presente
en una muestra y la sembramos en forma de zigzag en nuestra caja Petri que tiene
una divisin por la mitad, realizado esto, volvemos a esterilizar el asa, cogemos
nuevamente el microorganismo, y lo sembramos de la misma manera en la otra mitad
de la caja Petri, siendo esta una inoculacin por estra simple.
Para realizar la inoculacin por estra compuesta, se utiliza el procedimiento anterior,
solo que para esta, no utilizamos una caja Petri con divisin o bi-Petri sino un monoPetri, en el que igualmente, esterilizamos el asa, cogemos el microorganismo y lo
sembramos en un extremo de la caja haciendo estras rectas, pero el asa no debe
romper el agar; esterilizamos nuevamente, pero esta vez no cogemos al
microorganismo, sino que volvemos a realizar el estriado en el extremo adyacente de
la caja, haciendo que estas formen un ngulo recto.

Este procedimiento lo realizamos tres veces en la misma caja y se termina con una
estraen zigzag. Terminado el proceso de inoculacin en las cajas Petri, rotulamos y
diferenciamos en cul de ellas se realiz una inoculacin compuesta y una simple,
seguido de nuestro nombre y la fecha. Finalizado el proceso de rotulacin llevamos las
cajas Petri, en filas con la tapa hacia abajo, formando paquetes, los cuales sern
sujetados con cinta masking, y llevados hacia la incubadora (BLUE M), para que estos
microorganismos sembrados por estas dos tcnicas de aislamiento puedan
desarrollarse, ya que pasada una semana podamos observar si la inoculacin que se
realizo fue hecha correctamente.

Resultados

La inoculacin por estra simple

(Fig.N1) es una tcnica de siembra de
microorganismo que consiste en realizar
con el asa esterilizada y con muestra
del microorganismos unos lneas en
forma de zigzag de forma decreciente,
mediante esta tcnica se observa la
formacin de colonias de la muestra, se
puede diferenciar los colores y hasta
forma de las colonias.
FIGURA N1: Inoculacin por estra
simple
Otro de los mtodos ms utilizados es
la inoculacin por estra compuesta
(Fig. N2) que consiste en inocular
sobre un extremo de la placa con el asa
y se extiende formando estras sobre la
superficie en varios sentidos, cada
clula asilada se multiplicar formando
una colonia independiente, cada colonia
representa un cultivo puro

Cuestionario
FIGURA N2: Inoculacin por estra compuesta

Defina los trminos: cultivo, cultivo axnico, cultivo tipo y cepa.

Cultivo
Un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como
bacterias, hongos y parsitos, es empleado como un mtodo fundamental para
el estudio de las bacterias y otros microorganismos (Brooks; 1996)
Cultivo axenico
Un cultivo axnico o puro es aquel que contieneun slo tipo de microorganismo
y que procedegeneralmente de una sola clula; el crecimientode sta origina,
en medio slido, una masa declulas fcilmente visible que recibe el nombre de
colonia (Frazier; 2003).
Cultivo tipo
Es el conjunto de cultivos de microorganismos, desarrollados y almacenados
en laboratorios para su comercializacin (Black; 1999).
Cepa
Es el conjunto de virus, bacterias u hongos que tienen el mismo patrimonio
gentico. (Ginsberg; 1990).

Cmo se forma una colonia bacteriana?

En microbiologa, las colonias son amontonamientos de un mismo tipo de
microorganismo. Los microorganismos se dividen y crean nuevas versiones de
ellos mismos. Estos organismos permanecen juntos, si bien algunas fuerzas
pueden transportarlos a otros lugares donde pueden formar colonias. Los que
forman colinas son las bacterias, los hongos y los protozoos. Las culturas
bacterianas abarcan varios tipos de bacterias, y las colonias puras son poco
comunes. Usualmente, se forman solo bajo condiciones artificiales.
Las nuevas colonias comienzan cuando una parte de la colonia se separa y el
viento la traslada a una neuva superficie. Cuando la superficie conduce al
crecimiento, el organismo crece y se reproduce. Algunos organismos, como los
hongos, producen estructuras diseadas para enviar esporas al aire.
Si bien los microorganismos son invisibles al ojo, las colonias podras verse.
Cuando

se

producen

pigmentos,

la

superficie

colonizada

por

estos

microorganismos se tie. Las colonias se pueden ver suaves y brillantes o

secas y rugosas. Los bordes pueden ser irregulares o suaves, dependiendo de
la especie. El crecimiento de bacterias depende de la disponibilidad de
nutrientes. Las superficies semislidas tendrn ms nutrientes que las slidas.
Por lo tanto, los microorganismos crecen en patrones ondeantes en las
semislidas.
A veces, los microorganismos segregan qumicos que comunican con otros
microorganismos, lo que les hace saber que tienen que migrar en una direccin
en particular porque hay alimento. Las colonias bacterianas se mueven usando

flagelo, una extensin de su membrana. Las bacterias helicoidales rotan como

espiral. Algunas tienen una baba que las ayuda a desplazarse. En ambientes
lquidos, las bacterias tienen ms movilidad. Las bacterias solo se mueven con
otras bacterias y a veces se mueven en forma organizada para expandir ms
su colonia (Wistreich; 1983).
Conclusiones
En esta prctica se reconoci las tcnicas de aislamiento para obtener cultivo
puros, mediante estriado simple y compuesto, puesto que las bacterias, hongos y
levaduras han sido microorganismos muy estudiados en las ltimas dcadas por
lo que se ha hecho necesario cultivarlos, resulta de forma indispensable conocer
como cultivarlos para de esta forma realizar un posterior anlisis de acuerdo a las
necesidades del investigador, por lo que en la presente prctica se aprendi los
diferentes mtodos de cultivo analizando la estra simple que es una inoculacin
en zig-zag tomada de la muestra patrn y que despus de ser incubada permiti
su posterior anlisis observando la formacin de colonias de la misma forma en la
que se sembr, mientras que en la inoculacin por estra compuesta se diferencia
una muestra con lneas perpendiculares que va disminuyendo su concentracin
en cuanto se fueron realizando las estras ya que los organismos fueron tomados
de la estra anterior y se siguieron realizando las dems estras terminando con
una estra simple ya que permiti obtener la menor concentracin de los
microorganismos, una de las observaciones ms importantes que se analiz al
momento de sembrar fueron los cuidados y manejo de materiales de siembra
puesto que el asa debi ser enfriada correctamente y se desinfect el asa a cada
momento para evitar errores como contaminacin e incluso causar un
rompimiento en el agar

Bibliografa:
-

BANWART, G. (1982). microbiologa bsica Ed. Bellaterra, primera edicin,

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BLACK, J.G. (1999). Microbiology. Principles & Applications (4 edition)

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