Anatomia microscpica y composicion quimica

La anatoma microscpica de Brucella es sustancialmente semejante a la

estructura clsica de las bacterias Gram negativas. Al microscopio electrnico se
distinguen, de fuera hacia dentro: la envoltura celular, integrada por la membrana
externa, el espacio periplsmico y la membrana citoplasmtica que rodea al
citoplasma. (Merino, s.f.)
La membrana citoplsmica consiste de una bicapa de fosfolpidos y protenas de
diversos tipos, es una estructura muy vulnerable a los cambios osmticos y del
medio ambiente. Entre la membrana citoplsmica y la membrana externa se
encuentra el espacio periplsmico y la capa de peptidoglicana. La composicin
de la membrana externa deBrucella es semejante a la de E. coli. La regin apolar
(hidrofbica) de la membrana con un grosor de 4.5 nm, forma una barrera
estructural y funcional entre el periplasma y el exterior de la clula. La
peptidoglicana se encuentra fuertemente asociada a la membrana externa a travs
de molculas de lipoproteina unidas por ligadura covalente, sto le proporciona
una mayor estabilidad. (Fig. 10) La lipoprotena de Brucella es estructuralmente
semejante a la lipoprotena de Braun de E. coli y existe cruce serolgico entre
ellas. Adems existen otras protenas asociadas en forma no covalente a la
peptidoglicana. Las protenas llamadas porinas funcionan como canales
transmembranales, que permiten la difusin de compuestos entre ciertos lmites
de peso molecular (lmite de exclusin). (Merino, s.f.)
La membrana externa, constituye la barrera fsica y funcional entre el interior de
la clula bacteriana y su medio, adems de ser, la primera estructura que entra en
contacto con las clulas del sistema inmunolgico del husped, durante los
estadios tempranos de la enfermedad, ya que no se han descrito componentes
capsulares en Brucella. Por otro lado, la supervivencia de la bacteria ya sea en el
medio ambiente o en el husped, depende de la integridad de su membrana
externa; ya que si sta sufriera algn dao, la bacteria no sobrevivira por mucho
tiempo. (Merino, s.f.)
De los constituyentes de la membrana externa (ME) de Brucella, el mas
estudiado ha sido el lipopolisacrido (LPS) por ser el mas externo, abundante y
antignico, se le conoce tambin como endotoxina. Sus propiedades bioqumicas
y biolgicas son diferentes a las del resto de bacterias Gram negativas,
especialmente en cuanto al contenido de cidos grasos del lpido A. La

endotoxina de Brucella presenta baja actividad endotxica aunque conserva sus

propiedades inmunognicas (Fig. 11). (Merino, s.f.)
Las cepas en fase lisa (S), poseen el S-LPS que est constituido de un lpido A,
formado de diferentes cidos grasos; una regin central (ncleo) que contiene el
cido 2-ceto 3-desoxioctulosnico, glucosa, manosa y quinovosamina; y una
cadena O, proyectada hacia el exterior de la ME, constituida de un homopolmero
de alrededor de 100 unidades de 4-formamido-4,6-didesoximanosa (perosamina).
Las cepas con epitopo A dominante (B. abortus bv. 1) contienen un polmero de
cinco perosaminas unidas por ligadura -1,2 y con una cierta proporcin
(dependiendo de la cepa), de unidades ligadas por unin -1,3; mientras que las
cepas que son M dominante (B. melitensis bv. 1), presentan unidades repetidas de
un pentasacrido constituido de una perosamina unida por ligadura -1,3 y cuatro
unidas por ligadura -1,2. Las diferentes ligaduras influyen en la forma del
epitopo del LPS, as el tipo A dominante tiene forma de barra mientras que el tipo
M dominante es retorcido (rizado). (Merino, s.f.)
Esta semejanza estructural tiene gran importancia prctica, ya que, al inocular
una cepa de B. abortus en un animal de experimentacin, el antisuero obtenido,
reaccionar principalmente con cepas A dominante, con A/M y en menor grado
con M dominante, lo que significa que, reaccionar en diferente magnitud, con
todas las especies deBrucella en fase lisa (B. abortus, B. suis y B. melitensis), a
menos que el antisuero sea adsorbido con suspensiones de B. melitensis para
eliminar los epitopos M y obtener un suero A monoespecfico. En consecuencia,
lo mismo sucedera al inocular cualquier cepa de Brucella. (Merino, s.f.)
La presencia de molculas de perosamina en el LPS de algunas bacterias Gram
negativas, es responsable de la actividad antignica cruzada que se observa
con: Escherichia hermanni y E. coli O:157, Salmonella O:30, Stenotrophomonas
maltophilia, Francisella tularensis y Vibrio cholerae O:1. Yersinia
enterocolitica O:9, contiene una cadena O idntica a la de B. abortus as como
algn determinante M. Este hecho debe tomarse muy en cuenta al realizar el
diagnstico por mtodos serolgicos, ya que con frecuencia se producen errores y
no se establece un buen diagnstico diferencial, se trate de animales o de
humanos. (Merino, s.f.)
La estructura del LPS de cepas rugosas (R-LPS), es bsicamente similar al SLPS, excepto por la cadena O, que est ausente o reducida a unos pocos residuos.

Por lo que, la especificidad del R-LPS estar determinada por el polisacrido del
ncleo (Fig. 12). (Merino, s.f.)
Hace algunos aos se aceptaba la existencia de otros polisacridos: el hapteno
nativo (HN) y el polisacrido B (PB), el primero, aislado de cepas en fase lisa, se
deriva del rompimiento hidroltico del S-LPS, por lo que es estructuralmente
indistinguible del polisacrido O. Mientras que el PB, obtenido de la cepa
mutante en fase rugosa, B melitensis 115, en una glucana cclica, serolgicamente
inactiva a menos que se encuentre asociada a residuos de cadena O. En
conclusin los nicos antgenos polisacardicos de importancia serolgica
en Brucella son: los polisacridos A y M y la forma libre de la cadena O.
(Merino, s.f.)
A diferencia de las enterobacterias, la ME de Brucella es rica en fosfatidilcolina y
no en fosfatidil etanolamina, sto explicara en parte la resistencia que presenta a
la polimixina B, adems de que el antibitico no se une al LPS. (Merino, s.f.)
Las protenas de membrana externa (OMPs) son de gran inters porque las han
relacionado con la proteccin. Las que primero se describieron fueron las
protenas mayores de 25-27, de 31-34 y de 36-38 kDa. Las que, posteriormente,
formaron los grupos 3 (25-27) y 2 (36-38). Las protenas del grupo 2 fueron
identificadas como porinas; a las del grupo 3, se les consider equivalentes a las
OmpA de E.coli, con base en su similitud en la composicin de aminocidos y a
su relacin antignica. El grupo 1 lo formaron protenas con pesos moleculares
de 88 a 94 kDa, cuya concentracin fue menor a la de los otros grupos. En la
actualidad, como resultado de la clonacin y secuenciacin de los genes que
codifican para estas Omps, se les ha ido asignando otra nomenclatura: Omp25 ,
Omp31 y Omp2b. Otras Omps han sido, posteriormente identificadas por medio
de anticuerpos monoclonales, por ser menos abundantes, se denominan protenas
menores y presentan masas moleculares de 10,16.5 19 y 89 kDa. Con base en
estudios genticos y de su secuencia de aminocidos, las de 10, 16.5 y 19 kDa, se
han identificado como lipoprotenas de membrana externa, denominndolas
Omp10, Omp16 y Omp19, respectivamente. La Omp 16, pertenece a la familia
de lipoprotenas asociadas a la peptidoglicana presentes en bacterias Gram
negativas. Aparentemente existen protenas homlogas a las Omp10 y Omp19
en Ochrobactrum anthropi y otras bacterias relacionadas genticamente
a Brucella. La Omp1 de 89 kDa se encuentra expuesta en la superficie de la
clula. Finalmente, se ha puesto de manifiesto la existencia de acuaporinas en la

ME, que son protenas transmembranales con canales para agua y que pertenecen
a la familia de las protenas intrnsecas mayores. (Merino, s.f.)
Las Omp mayores o principales se encuentran expuestas en la superficie de la
membrana externa, sin embargo, estaran menos accesibles en las cepas lisas que
en las rugosas, debido al impedimento estrico que causan las largas y
abundantes cadenas O del LPS en las cepas lisas. (Merino, s.f.)
Otras protenas han sido descritas como la periplsmica BP26; de entre las
internas se tiene el componente A2, que es una glicoprotena resistente al calor,
empleada en el diagnstico de bovinos; las de 16 a 18 kDa usadas como
antgenos en reacciones intradrmicas; la protena citoplsmica de 18 kDa, con
secuencia descrita. (Merino, s.f.)
Numerosas protenas de membrana externa, interna, citoplsmicas y
periplsmicas han sido caracterizadas. Algunas son reconocidas por el sistema
inmune, durante la infeccin y solo se han reportado en Brucella, por lo que
seran de gran utilidad en futuras pruebas diagnsticas o para ser consideradas en
las nuevas vacunas. (Merino, s.f.)