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Definicin
Trminos
alternativos
Potencia radiante, P, P0
Absorbancia, A
log
Transmitancia, T
P
P0
Transmisin, T
Longitud de la trayectoria
de la radiacin en cm, b
l, d
A
Absortividad, a
bc
A
Absortividad molarc,
; c en g.L-1, b en cm
Coeficiente de
extincin, k
; c en mol.L-1, b en cm
Coeficiente de
extincin molar
bc
P0
Disolucin conteniendo
molculas absorbentes
de la radiacin UV/V.
Clula
espectrofotomtrica
cuarzo.
de
yn
Los orbitales moleculares asociados a los enlaces sencillos se designan como orbitales
sigma, , y los electrones correspondientes son los electrones . Tal como se muestra en la
Figura II.3.2.2.a, la distribucin de densidad de carga de un orbital sigma es rotacionalmente
simtrica alrededor del eje del enlace. Aqu, la densidad de carga negativa promedio que surge
de la localizacin de los dos electrones del enlace alrededor de los dos nucleos positivos se indica
por la intensidad del sombreado.
El doble enlace en una molcula orgnica contiene dos tipos de orbitales moleculares; un
orbital sigma ( ) correspondiente a un par de electrones enlazantes y un orbital molecular pi,
, asociado al otro par. Los orbitales pi se forman por la superposicin paralela de orbitales
atmicos p. Su distribucin de carga se caracteriza por un plano nodal (una regin de baja
densidad de carga) a lo largo del eje del enlace y una densidad mxima en las regiones por encima
y por debajo del plano (ver Figura II.3.2.1.b).
Adems de los orbitales moleculares enlazantes citados existen los orbitales sigma y pi
antienlazantes, que se designan por * y *. En las Figuras II.3.2.2.c y II.3.2.2.d, se muestran
las distribuciones de densidad de carga para * y *.
Muchos compuestos orgnicos contienen electrones no enlazantes. Estos electrones que
no participan en enlaces se designan por el smbolo n.
*y
*.
Tal como se muestra en la Figura II.3.2.3., las energas de los diferentes tipos de orbitales
moleculares difieren significativamente. Generalmente, el nivel de energa de un electrn no
enlazante est entre los de los orbitales enlazantes y antienlazantes y . Son posibles cuatro
tipos de transiciones:
*, n
*, n
*y
*.
Transiciones
*. En estas transiciones, un electrn de una molcula en un orbital
enlazante es excitado al correspondiente orbital antienlazante * por absorcin de radiacin.
Respecto a otras posibles transiciones, la energa necesaria para provocar una transicin
* es grande y corresponde a radiaciones de frecuencias en la regin del ultravioleta de vaco.
El mximo de absorcin debido a transiciones
* nunca se observa en la regin del
ultravioleta accesible ordinario; por esta razn, no se tratar este tipo de absorcin.
Transiciones n
*. Los compuestos saturados que contienen tomos con pares de
electrones no enlazantes son capaces de dar transiciones n
*. En general, estas transiciones
requieren menos energa que las del tipo
* y pueden producirse por radiacin de la regin
entre 150 y 250 nm, apareciendo la mayora de los picos de absorcin por debajo de 200 nm. La
energa de tales transiciones dependen en primer lugar del tipo de enlace atmico y en menor
extensin de la estructura de la molcula. Las absortividades molares (concepto que
explicaremos en breve) asociadas con este tipo de absorcin son de baja a intermedia magnitud
y el intervalo usual es entre 100 y 3000 L cm-1 mol-1.
Los mximos de absorcin para estas transiciones tienden a desplazarse hacia longitudes
de onda ms cortas en presencia de disolventes polares como el agua y el etanol. El nmero de
grupos funcionales orgnicos con picos n
* en la regin ultravioleta fcilmente accesible es
relativamente pequeo.
Transiciones n
*y
*. La mayora de las aplicaciones de la espectroscopia de
absorcin a compuestos orgnicos se basa en transiciones de electrones n o al estado excitado
*, ya que las energas que se requieren para estos procesos conducen a picos en una regin
espectral conveniente experimentalmente (200 a 700 nm). Ambas transiciones requieren la
presencia de un grupo funcional que suministre los orbitales . Hablando estrictamente, es a
estos centros absorbentes insaturados a los que se les aplica el trmino cromforo.
Se han propuesto dos teoras para explicar la absorcin de radiacin de los iones de los
metales de transicin y la profunda influencia del entorno qumico sobre las longitudes de onda
correspondientes; a saber, la teora del campo cristalino, que es la ms sencilla y es adecuada
desde un punto de vista cualitativo; y el tratamiento ms riguroso y complejo a partir de la teora
de orbitales moleculares, que un mejor tratamiento cuantitativo del fenmeno.
Ambas teoras se basan en la premisa de que las energas de los orbitales d de los iones
de los metales de transicin en solucin no son idnticas y que la absorcin implica la transicin
de electrones desde un orbital d de baja energa a uno de energa superior. En ausencia de un
campo magntico o elctrico externo (como en el estado gaseoso diluido), las energas de los
cinco orbitales d son idnticas y no es necesaria la absorcin de la radiacin para mover un
electrn de un orbital a otro. Por otro lado, cuando tiene lugar la formacin de complejos en
solucin entre el in metlico y agua o algn otro ligando, tiene lugar la separacin de la energa
de los orbitales. Este efecto resulta de las fuerzas diferenciales de repulsin electrosttica entre
el par de electrones del dador y los electrones de los diversos orbitales d del in metlico central.
Esta separacin de energas, se explica considerando la distribucin espacial de los electrones en
los diversos orbitales d; aunque no entramos en detalles en la figura II.3.2.4 mostramos el efecto
del campo ligando sobre los niveles de energa para la configuracin octadrica de complejos
con un nmero de coordinacin 6 y para la configuracin tetradrica y plano-cuadrada de
complejos con un nmero de coordinacin 4. Podemos observar que las energas de todos los
orbitales d aumenta en presencia de un campo ligando pero, adems, que los orbitales d se
dividen en niveles que difieren en un de energa que determina lo que se llama fuerza del
campo ligando.
Figura II.3.2.4. Efecto del campo ligando sobre los niveles de energa de los orbitales d.
biopolmero midiendo la absorbancia a 280 nm. En aquellas protenas que no contienen Trp pero
contienen Tyr, es posible y fiable determinar concentraciones a travs de la absorbancia a 280
nm. La Tyr , aunque con un coeficiente de extincin menor que el de Trp, presenta una absorcin
importante a esta . La absortividad de la Phe es mucho mas pequea que las de Trp y Tyr, por
lo que es prcticamente observar su contribucin si cualquiera de los otros dos aminocidos estn
presentes.
La cadena lateral de la Cys no presenta una banda de absorcin til en protenas porque
su principal transicin est sumergida en la regin peptdico; no obstante, los puentes disulfuro
presentan una absortividad de 300 cm2.mol-1 a 250 nm. Aunque esta absorcin no es lo
suficientemente fuerte para se til en medidas de concentracin, si tienen aplicacin en medidas
de actividad ptica (DC y DOR).
Mximos de absorcin y coeficiente de extincin molar de varios
aminocidos a pH neutro
Molecula
Triptfano
Tirosina
Fenilalanina
Histidina
Cistina
mx(nm
280
)
219
274
222
193
257
206
188
211
250
a mx (cm2.mol-1)
5600
47000
1400
8000
48000
200
9300
60000
5900
300
Momento dipolar de transicin, ab , neto mayor o menor, tal como se ilustra en la figura
II.3.2.6 para dos ordenamientos lmites.
a)
b)
En las hlices con bases apiladas o en las dobles hlices de los cidos nucleicos los
momentos dipolares inducidos y los ab de transicin se disponen en paralelamente, como
consecuencia se produce hipocromismo y el momento dipolar de transicin observado es menor
del que tendra el cromforo aislado.