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TP N1: CLASIFICACIN DE TEJIDOS MTODOS DE ESTUDIO EN

BIOLOGA CELULAR
PARTE A
1) ab- El lmite de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm. A ojo desnudo no puede
discriminarse ninguna de las estructuras de la figura, ni siquiera la clula animal. De la
segunda figura puede discriminarse una estructura milimtrica pequea como los huevos de
sapo.
2) ab- Las estructuras celulares que pueden verse con el microscopio ptico son: ncleo,
nucleolo, RE y mitocondrias. Estructuras ms pequeas como los ribosomas pueden verse
con el microscopio electrnico.
3-4) El material de estudio se obtiene del organismo que lo contiene. Puede ser fresco,
cultivado o fijado.
Al ser fresco, se lo congela para su estudio. En el proceso de fijacin, cuya funcin es
conservar la morfologa y la composicin qumica del tejido, se mata a las clulas. La
fijacin debe realizarse rpido, en cortes pequeos y con un fijador de difusin rpida, para
evitar lesiones agnicas por anoxia. Generalmente se usa formol al 10%.
El mtodo de congelacin es til para conservar la composicin qumica del tejido.
Luego se procede con la deshidratacin al vaco. Es un mtodo rpido, a temperaturas entre
160C, y 190C, proporcionados por el N2 lquido o H2 a temperaturas cercanas al 0
absoluto. El hielo de los tejidos sublima, por lo que ocurre deshidratacin.
El vibrtomo y los micrtomos sirven para cortar tejidos previamente endurecidos
( mientras ms duros, ms fino el corte) por congelamiento o inclusin.
Los micrtomos de congelacin son utilizados en el quirfano. Son rpidos y sus
resultados son apenas aceptable, pero sirven su propsito.
El mtodo de inclusin es ms lento, pero su calidad es muy superior. El tejido se
impregna en un material (generalmente parafina) para darle la consistencia necesaria para
ser cortado con el micrtomo. Como la parafina es hidrofbica y slida a temperatura
ambiente, el tejido fijado debe ser deshidratado en alcoholes, transferido a un solvente
intermedio o aclarante como el benceno o tolueno y luego colocado en un recipiente con
parafina fundida a 56C sobre una estufa.
La obtencin de cortes transparentes se soluciona con la tincin o coloracin. Existen
dos mtodos: uno para posibilitar el estudio estructural, y otro para identificar un
determinado tipo de molculas o sustancia. Por encima del punto isoelctrico, las protenas
reaccionan con colorantes bsicos y viceversa.
Microscopios pticos: utilizan una lente o serie de lentes para ampliar la imagen.
Microscopios electrnicos: utiliza electrones en lugar de fotones (luz visible) para
formar imgenes.
Microscopios de fuerza atmica: registra la topografa de muestras del orden de los
piconewtons mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o cnica, micromtrica
y muy flexible.

5) Los especimenes a estudiar son fijados en formalinas, incluidos en parafina y


coloreados con hematoxilina-eosina (H-E).
Para colorear tejidos histolgicos, la parafina debe disolverse y extraerse, de nuevo con
xileno o tolueno, y los tejidos deben rehidratarse mediante el uso de una serie de alcoholes
de concentracin decreciente. Luego, el tejido sobre el portaobjetos se tie con
hematoxilina en agua. Como el colorante de contraste, eosina, es ms soluble en alcohol
que en agua, se vuelve a deshidratar la muestra en soluciones alcohlicas de concentracin
creciente y despus se tie con eosina en alcohol. Tras la coloracin, la muestra se hace
pasar por xileno o tolueno y se le coloca un medio de montaje no acuoso antes de cubrirla
con un cubreobjetos para lograr un preparado permanente.
6) Los colorantes bsicos reaccionan con los componentes aninicos de las clulas y los
tejidos (componentes negativos). Entre estos se encuentran los cidos nucleicos, los grupos
sulfato de los glucosaminoglucanos y los grupos carboxilo de las protenas. La capacidad
de estos grupos de reaccionan con una anilina o colorante bsico se denomina basofilia. La
hematocromatina y nuclolos del ncleo, los componentes citoplasmticos y el material
extracelular presentan basofilia.
Con un pH alto (cerca de 10), los tres grupos se ionizan y quedan disponibles para
reaccionar con el colorante por medio de uniones electrostticas. A pH entre 5 y 7, se
ionizan slo los grupos sulfato y fosfato, mientras que a pH inferior a 4, slo los grupos
sulfato.
Los colorantes cidos reaccionan con los grupos catinicos de las clulas y tejidos, en
particular con grupos amino ionizados de las protenas. La reaccin de los grupos
catinicos con un colorante cido recibe el nombre de acidofilia. Estas reacciones no son ni
tan especficas ni precisas como las reacciones con colorantes bsicos. Los filamentos
citoplasmticos, los componentes membranosos intracelulares y las fibras extracelulares
presentan acidofilia.
7) Ciertos colorantes bsicos reaccionan con componentes tisulares que hacen cambiar su
color normal del azul al rojo o al prpura. Esta modificacin de la absorbancia se denomina
metacromacia. Su mecanismo subyacente es la presencia de polianiones en el tejido.
Cuanto estos tejidos se tien con una solucin bsica concentrada, las molculas de anilina
estn suficientemente cerca como para formar aglomeraciones, cuyas propiedades son
diferentes de los colorantes no aglomerados.
Las estructuras celulares y tisulares con una alta concentracin de grupos fosfato y sulfato
ionizados presentan metacromacia.
8) La capacidad de la fucsina bsica decolorada (reactivo de Schiff) de reacciona con los
grupos aldehdo trae como consecuencia la aparicin de un color rojo distintivo y es la base
de la reaccin del PAS (cido peridico reactivo de Schiff). Est reaccin tie
carbohidratos y macromolculas ricas en carbohidrato. Se usa para detectra glucgeno,
moco, membrana basal y fibras reticulares.
El cido peridico rompe la unin entre tomos de carbono adyacentes (que poseen un
grupo OH) en hexosas y hexosaminas (glucosaminoglucanos) y forma grupos aldehdo, los
cuales reaccionan con el reactivo de Schiff para dar un color prpura intenso distintivo.

La tincin de la membrana basal y las fibras reticulares tiene su fundamento en el


contenido o la asociacin de proteoglucanos.
9) En el laboratorio, los anticuerpos pueden unirse qumicamente a un colorante
fluorescente como la fluorescena. Este reactivo puede aplicarse entonces a cortes de tejido
fijados dbilmente o congelados que estn sobre portaobjetos de vidrio para detectar el
antgeno en clulas y tejidos, para luego examinarse y fotografiarse con el microscopio de
fluorescencia.
Una protena especfica se asla e inyecta en la circulacin de un animal, donde se
producen anticuerpos que luego se extraen, se conjugan con un colorante fluorescente y se
utilizan para teir clulas o tejidos donde se sospecha que se encuentra dicha protena. Si la
hay, los anticuerpos se unirn a ella y la reaccin ser visible en virtud del colorante
fluorescente unido a los anticuerpos. Tambin es posible conjugar la molcula de
anticuerpos con sustancias como oro o ferritina, que pueden verse directamente con el
microscopio electrnico.
10)

Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y ampla la imagen
formada en los objetivos.
Objetivo: lente situada cerca de la preparacin y ampla la imagen de la misma.
Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.
Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Tubo: es una cmara oscura unida al brazo.
Revlver: sistema que contiene los objetivos, y que rota para utilizar un objetivo
u otro.
Tornillos macromtrico y micromtrico: mueven la platina hacia arriba y hacia
abajo. El primero lo hace de forma rpida, y el segundo de forma lenta.
Platina: plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparacin, que permite el paso de la luz debajo del preparado. Dos pinzas
retienen el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera permite mover
la preparacin biaxialmente.

PARTE C
1) Niveles de organizacin:
Subatmico
Atmico
Subcelular
Celular
Tisular
rganos
Aparatos y sistemas
Individuo
Poblacin

Ecosistema
Biosfera

2) Un tejido es un grupo de clulas similares, que suelen tener un origen embrionario


comn y funcionan en conjunto para realizar actividades especializadas. La estructura y
caractersticas especficas del os tejidos dependen de factores como la naturaleza del medio
extracelular que rodea a las clulas y las conexiones entre las clulas que componen el
tejido. Los tejidos pueden ser slidos, semislidos o lquidos. Adems, varan
considerablemente de acuerdo con los tipos de clulas que los componen, su disposicin y
las fibras presentes.
3) Tejido epitelial: reviste la superficie del cuerpo y tapiza los rganos huecos, cavidades
y conductos. Tambin da origen a las glndulas. Est compuesto por clulas dispuestas en
capas continuas, de una forma simple o estratificada. Existe poco espacio intercelular entre
las membranas plasmticas adyacentes. La cara basal de una clula epitelial se adhiere a
estructuras extracelulares como la membrana basal. Posee inervacin propia pero es
avascular.
Tejido conectivo: protege y da soporte al cuerpo y sus rganos. Mantiene los rganos
unidos, compartimentaliza estructuras, es el principal medio de transporte del organismo,
almacena energa y otorga inmunidad contra agentes patgenos. Consta de clulas y matriz
extracelular, que se halla entre sus clulas ampliamente espaciadas, est compuesta por
fibras proteicas y sustancia fundamental, y es secretada por las mismas clulas del tejido
conectivo. Excepto el cartlago, se hallan inervados y ampliamente vascularizados.
Tejido muscular: genera la fuerza fsica necesaria para mover estructuras corporales,
mantiene la postura y genera calor. Est constituido por clulas alargadas, las fibras
musculares. Existen tres tipos muy diferentes entre s: los tejidos esqueltico, cardaco y
liso.
Tejido nervioso: detecta cambios en una gran variedad de situaciones dentro y fuera del
cuerpo, y responde generando potenciales de accin para mantener la homeostasis. Sus
clulas, llamadas neuronas, son sensibles a diversos estmulos y poseen prolongaciones
como las dendritas y el axn.
4) Clula: unidad funcional de los seres vivos. Al agruparse con otras clulas, forma los
tejidos. La clula posee vida propia, ya que es capaz de llevar a cabo todas las funciones de
los seres vivos, a pesar de constituir un organismo multicelular en conjunto con otras
clulas.
5) Un organismo vivo es aquel compuesto por materia orgnica (C, H, O, N, S, P), capaz
de llevar a cabo funciones tales como comer, metabolizar, excretar, respirar, moverse,
crecer, reproducirse y responder a estmulos externos.

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