MTODOS PROTEMICOS APLICADOS AL ESTUDIO DE LA MALARIA:

El trmino protemica es derivado de la palabra proteoma acuada por Wilkins

(1995), y hace referencia al conjunto de protenas expresadas por un genoma o
por un tipo de clula-tejido.
El anlisis protemico usando electroforesis bidimensional, es actualmente el
enfoque ms utilizado para observar la expresin de protenas del parsito.
METODOLOGAS UTILIZADAS EN EL ESTUDIO DE PROTEOMAS:
La protemica en general aplica separacin de pptidos o de protenas por
medio de electroforesis o cromatografa lquida (LC) y su posterior
identificacin y cuantificacin por espectrometra de masas.

ELECTROFORESIS UNI Y BIDIMENSIONAL: La electroforesis es una tcnica

analtica que permite la separacin de protenas segn sus propiedades
fisicoqumicas tales como tamao y carga. En el sistema electrofortico
denominado SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate- Polyacrylamide Gel
Electrophoresis) las protenas se separan segn su tamao, porque el
SDS desnaturaliza y carga negativamente todas las protenas. La
electroforesis SDS-PAGE refleja la calidad de una mezcla de protenas por
lo que su uso en protemica ha sido aplicado con xito.
En la primera dimensin las protenas son separadas por
isoelectroenfoque de acuerdo a su punto isoelctrico, las protenas
migran a travs de un gradiente de pH inmovilizado. En la segunda
dimensin las protenas son reducidas, alquiladas y corren en un gel de
poliacrilamida SDS-PAGE, segn su movilidad relativa que es
proporcional a su peso molecular.
ESPECTROMETRA DE MASAS: La espectrometra de masas (MS) es el
principal mtodo de anlisis para la identificacin y funcin de las
protenas en diversos sistemas biolgicos. La tcnica permite adquirir y
analizar alto contenido de informacin cuantitativa a partir de muestras
biolgicas complejas. Un espectrmetro de masas es un instrumento que
analiza iones, determina la relacin masa/carga (m/z) y registra las
abundancias relativas en lo que se conoce como un espectro de masas.
PROTEMICA CUANTITATIVA: la cuantificacin de la expresin relativa de
protenas por espectrometra de masas se hace por dos mtodos:
marcaje metablico isotpico de clulas en cultivo (SILAC) o por el
marcaje qumico de extractos con Isotope Coded Affinity Tags (ICATs, por
sus siglas en ingls). Las dos metodologas permiten determinar las
diferencias isotpicas de un mismo compuesto qumico en un espectro
de masas individual donde las intensidades de los picos representan la
cantidad relativa de la muestra. De esta manera se deducen las
cantidades relativas de un compuesto en una mezcla.
Uno de los problemas de ICAT en el estudio del proteoma de P.
falciparum es la dependencia de la presencia de residuos de cistena, los
cuales son de baja abundancia en el proteoma de P. falciparum.
Igualmente la posibilidad de reacciones no controladas de esos residuos

es alta, por lo que se hace necesario una considerable optimizacin

incrementando los costos. En contraste SILAC permite detectar las
diferencias en abundancia relativa de protenas entre muestras usando
marcaje isotpico no radioactivo. Posteriormente la espectrometra de
masas identifica pptidos qumicamente idnticos pero isotpicamente
diferentes.
PROTEMICA DE P. falciparum Y ANTIMALRICOS:
Debido a las limitaciones de los geles bidimensionales la tcnica de
eleccin es LCMS/MS complementada con marcacin isotpica o
metablica para el estudio del efecto de antimalricos en el parsito.
Esta tcnica de marcaje isotpico tiene la ventaja de eliminar la
variabilidad existente en las etapas de lisis celular, extraccin de
protenas, geles bidimensionales y cromatografa lquida, porque
despus de marcados, el control y la muestra, pueden ser mezclados y
manipulados simultneamente.