Benemrita Universidad Autnoma de Puebla

Facultad de Ciencias Qumicas

Licenciatura en Qumico Farmacobiologo
Anlisis Espectrofotomtrico
Otoo 2015

I.
ESPECTRO ELECTROMAGNETICO.
El espectro electromagntico (o simplemente espectro) es el rango de todas las
radiaciones electromagnticas posibles. Se denomina espectro electromagntico a
la distribucin energtica del conjunto de las ondas electromagnticas. Referido a
un objeto, el espectro electromagntico o simplemente espectro es la radiacin
electromagntica que emite (espectro de emisin) o absorbe (espectro de
absorcin) una sustancia cualquiera, ya sea en la Tierra o en el espacio estelar.
En este sentido, el espectro sirve para identificar cualquier sustancia. Es como una
huella dactilar de un cuerpo cualquiera.
II.
RAYOS GAMA
Los rayos gama son un tipo de radiacin electromagntica de muy alta energa.
Mientras ms energa tiene ms tiende a empaquetarse en lo que llamamos
fotones, las partculas que forma la luz. Son los fotones ms energticos, y no se
conoce el lmite ms bajo de su longitud de onda. (Frecuencia: 3x10 20 Hz, longitud
de onda: 10-12m)
III.
RAYOS X
Radiacin electromagntica que atraviesa cuerpos opacos a la luz ordinaria, con
mayor o menor facilidad, segn sea la materia de que estos estn formados,
produciendo detrs de ellos y en superficies convenientemente preparadas,
imgenes o impresiones, que se utilizan entre otros fines para la exploracin
mdica.(Frecuencia: 3x1018 Hz, longitud de onda: 10 -10m) los rayos X surgen de
fenmenos extra nucleares, a nivel de la rbita electrnica, fundamentalmente
producidos por desaceleracin de electrones. La energa de los rayos X en
general se encuentra entre la radiacin ultravioleta y los rayos gamma producidos
naturalmente. Los rayos X son una radiacin ionizante porque al interactuar con la
materia produce la ionizacin de los tomos de la misma, es decir, origina
partculas con carga (iones).
IV. RAYOS ULTRAVIOLETA
La radiacin solar ultravioleta o radiacin UV es una parte de la energa radiante
(o energa de radiacin) del sol, se transmite en forma de ondas electromagnticas
en cantidad casi constante (constante solar), su longitud de onda flucta entre 100
y 400 nm y constituye la porcin ms energtica del espectro electromagntico
que incide sobre la superficie terrestre. Los rayos ultravioleta estn clasificados en
tres tipos:
UVA: no absorbida por la capa de ozono.
UVB: parcialmente absorbida por la capa de ozono.
UVC: completamente absorbida por el oxgeno y el ozono en la atmosfera.
V.

REGIN VISIBLE

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Es una pequea regin del espectro electromagntico cuyas ondas tienen

una longitud que va desde los 780 nanmetros de la luz roja a unos 380 en la
violeta. Esta pequea regin del espectro es la luz que percibe el ojo humano y
nos permite ver los objetos.
VI.

REGIN IR

Es un tipo de radiacin electromagntica y trmica, de mayor longitud de onda que

la luz visible, pero menor que la de las microondas. Consecuentemente, tiene
menor frecuencia que la luz visible y mayor que las microondas. Su rango
de longitudes de onda va desde unos 0,7 hasta los 1000 micrmetros.

VII.

A.M, F.M, T.V., ELECTRICIDAD

La modulacin de amplitud o amplitud modulada (AM) es una tcnica utilizada

en la comunicacin electrnica, ms comnmente para la transmisin de
informacin a travs de una onda transversal de televisin. La modulacin en
amplitud (AM) funciona mediante la variacin de la amplitud de la seal transmitida
en relacin con la informacin que se enva.
La modulacin de frecuencia, o frecuencia modulada (FM), es una tcnica
de modulacin que permite transmitir informacin a travs de una onda
portadora variando su frecuencia. En aplicaciones analgicas, la frecuencia
instantnea de la seal modulada es proporcional al valor instantneo de la seal
moduladora. Datos digitales pueden ser enviados por el desplazamiento de la
onda de frecuencia entre un conjunto de valores discretos, una modulacin
conocida como modulacin por desplazamiento de frecuencia.
La electricidad es un fenmeno fsico, cuyo propulsor son las cargas elctricas y
la energa que estas promueven puede manifestarse ya sea en expresiones dentro
del mbito fsico, luminoso, as como contemplando el rea mecnica o trmica.
VIII.
COLORIMETRIA
Es la ciencia que estudia la medida de los colores y que desarrolla mtodos para
la cuantificacin del color, es decir la obtencin de valores numricos del color.
IX.
FOTOMETRA
Es la ciencia que se encarga de la medida de la luz, como el brillo percibido por el
ojo humano. Es decir, estudia la capacidad que tiene la radiacin
electromagntica de estimular el sistema visual.

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El ojo humano tiene la misma sensibilidad para todas las longitudes de onda ue
forman el espectro visible. La fotometria introduce este hecho ponderando las
diferentes magnitudes radiometricas medidas para cada longitud de onda por un
factor que representa la sensibilidad del ojo para esa longitud. La funcion que
introduce estos pesos se denomina funcion de luminosidad o funcion de eficiencia
luminosa relativa de un ojo modelo, que suele denotar como V() (es un modelo
similar a los de colorimetria. Esta funcion es diferente dependiendo de que el ojo
se encuentre adoptado a condiciones de buena iluminacion (vision fotopica) o de
mala (vision escotopica). Asi en condiciones fotopicas, la curva alcanza su pico
para 555nm, mientras que en condiciones escotopicas lo hace para 507 nm. No
debe confundirse con la Radiometra, encargada de la medida de la luz en
trminos de potencia absoluta.
Las ondas de luz estimulan el ojo humano en diferentes grados segn su longitud
de onda. Como es difcil fabricar un instrumento con la misma sensibilidad que el
ojo humano para las distintas longitudes de onda, muchos fotmetros requieren
un observador humano. Los fotmetros fotoelctricos necesitan filtros coloreados
especiales para responder igual que el ojo humano.
La intensidad de una fuente de luz se mide en candelas, generalmente
comparndola con una fuente patrn. Se iluminan zonas adyacentes de una
ventana con las fuentes conocida y desconocida y se ajusta la distancia de las
fuentes hasta que la iluminacin de ambas zonas sea la misma. La intensidad
relativa se calcula entonces sabiendo que la iluminacin decrece con el cuadrado
de la distancia.
X.
ESPECTROSCOPA
La espectroscopia es la rama de la fsica y la qumica que estudia la interaccin
entre la materia y la luz o cualquier radiacin electromagntica, como las ondas de
radio. Las diferentes ondas transportan diferentes cantidades de energa y
conducen a diferentes tipos de interacciones. Por varias razones, la
espectroscopia es una herramienta muy poderosa para detectar y analizar las
molculas.
Por tanto, la espectroscopia puede referirse a interacciones con partculas de
radiacin o a una respuesta a un campo alternante o frecuencia variante (). Una
extensin adicional del alcance de la definicin aadi la energa (E) como
variable, al establecerse la relacin E=h para los fotones. Un grfico de la
respuesta como funcin de la longitud de onda (o ms comnmente la frecuencia)
se conoce como espectro.
La espectrometra es la tcnica espectroscpica para tasar la concentracin o la
cantidad de especies determinadas. En estos casos, el instrumento que realiza
tales medidas es un espectrmetro o espectrgrafo.

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Un espectrmetro (tambin llamado espectroscopio o espectrgrafo) es un

instrumento ptico que se usa para medir las propiedades de la luz sobre una
porcin especfica del espectro electromagntico. Su utilidad es realizar anlisis
espectroscpicos para identificar materiales. La variable medida es generalmente
la intensidad de la luz, pero tambin podra ser, por ejemplo, el estado de
polarizacin.
La variable independiente es, por lo general, la longitud de onda de la luz, que
suele expresarse como una fraccin de metro, aunque a veces se expresa como
una unidad directamente proporcional a la energa del fotn, tales como el nmero
de onda o los voltios de los electrones (que tiene una relacin recproca a la
longitud de onda).
*Un espectrmetro se usa en espectroscopia para producir lneas espectrales y
medir sus longitudes de onda e intensidades.
XI.

ESPECTROFOTOMETRA

Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias qumicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de
radiacin se puede estudiar la absorcin de sustancias, no solamente en la zona
del espectro visible, sino tambin en ultravioleta e infrarrojo. Se denomina
espectrofotometra a la medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe
un sistema qumico (molculas de la muestra) en funcin de la longitud de onda de
la radiacin, y a las mediciones a una determinada longitud de onda. La teora
ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos
de energa llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda est asociada
con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energa.
El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida
de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
XII.

ESPECTROS DE EMISIN

Mediante suministro de energa calorfica, se estimula un determinado elemento

en su fase gaseosa, sus tomosemiten radiacin en ciertas frecuencias del visible,
que constituyen suespectro de emisin. Ninguno de estos se repite. Por ejemplo,
algunosde ellos lo hacen en el infrarrojo y otros cuerpos no. Ello depende de
laconstitucin especfica de cada cuerpo, ya que cada uno de loselementos
qumicos tiene su propio espectro de emisin.

ESPECTROS DE EMISIN

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Calentar un gas a alta temperatura

Colocar en la llama vapores de una sustancia
Producir una descarga elctrica en el interior del gas
Provocar la circulacin de corriente elctrica en un gas a baja presin.
XIII.
ESPECTRO DE ABSORCIN
El espectro de absorcin de un material muestra la fraccin de la radiacin
electromagntica incidente que un material absorbe dentro de un rango de
frecuencias. Es, en cierto sentido, el opuesto de un espectro de emisin. Cada
elemento qumico posee lneas de absorcin en algunas longitudes de onda,
hecho que est asociado a las diferencias de energa de sus distintos orbitales
atmicos. Se emplea el espectro de absorcin para identificar los elementos
componentes de algunas muestras, como lquidos y gases; ms all, se puede
emplear para determinar la estructura de compuestos orgnicos.
XIV. CONCEPTO DE COLOR
El color se define como la parte visible del espectro electromagntico que puede
ser captado e interpretado por el sentido de la vista. La palabra "color" se usa para
indicar que la espectrometra de absorbancia no slo trata con la luz en rango
visible (fotones con una longitud de onda de aproximadamente 400 a 700
nanmetros), sino tambin con longitudes de onda que estn fuera del rango de la
visin humana (infrarrojo, ultravioleta, rayos X). Sin embargo, los principios son
bastante similares tanto para la luz visible como para la no visible. La relacin
entre el color visible y el color de absorbancia es complicada; por ejemplo, una
muestra que parece roja no absorbe en el rojo, sino que absorbe en otras
longitudes de onda (colores) de modo que la luz que pasa por la muestra se
enriquece en rojo.
XV. MTODOS COLORIMTRICOS DIRECTOS
Los mtodos colorimtricos identifican de una manera ms o menos cuantitativa la
presencia de un gas. Hay ciertos elementos que al combinarse con otros dan
coloraciones especficas, y para eso nos sirve la colorimetra, para identificar
compuestos por medio de su color caracterstico. El mtodo colorimtrico se utiliza
en los laboratorios qumicos para determinar la concentracin de un compuesto
incgnita, midiendo la absorbancia que produce la muestra a un determinado
color. Se confecciona una curva con las absorbancias que producen muestras
sintticas que tienen cantidades conocidas del mismo compuesto y por
comparacin se determina la concentracin. Se basan fundamentalmente en la
medida de la absorcin de radiacin en la zona visible por sustancias coloreadas.
En ocasiones, la muestra que deseamos determinar no posee color por s misma
por lo que es preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que
den lugar a sustancias coloreadas con la muestra que nos interesa estudiar.

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Parches: Los parches son piezas de cartn de un solo uso recubiertas con un
plstico cubierto con un compuesto qumico que cambia de color cuando se
expone a un gas que se va a medir. Tanto la cantidad de tiempo de exposicin
como la intensidad de cambio de color son importantes. Los Parches dan un valor
medio e integrado pero no muy preciso.
Tubos colorimtricos: Se encuentran disponibles diferentes tipos de tubos
colorimtricos para medir un amplio rango de gases. Los tubos colorimtricos son
tubos de vidrio con ambos extremos cerrados. Para la lectura con un tubo
colorimtrico, se rompen las puntas de ambos extremos y el tubo se acopla en una
bomba de mano. La bomba hace pasar a travs del tubo un volumen de gas
oloroso conocido. El medio reacciona en el tubo y cambia de color segn el tipo de
gas que haya en la muestra. Para medir la cantidad de medio que reacciona con el
gas se usa una escala, la cual indica la concentracin del gas detectado.
XVI.
COMPARACIN (COMO MTODO)
La comparacin consiste en utilizar el sentido de la vista para comparar los brillos
de las muestras de estudio. Si utilizamos esta
tcnica para el anlisis
de soluciones el fundamento es el siguiente: si distintas soluciones conteniendo
una nica sustancia coloreada con distintas concentraciones se iluminan con
fuentes de luz idnticas es posible distinguir si una de ellas es ms concentrada
que la otra.
Si una (o ms) de ellas es de concentracin conocida (patrn o referencia)
es posible
acotar
y/o determinar la concentracin
de sustancia en
la solucin problema. De este modo se cumple la conocida ley de Lambert-Beer.
Para llevar a cabo las mediciones colorimtricas es necesario tomar como punto
de comparacin la llamada curva espectral codificada que permite asignar
valores numricos a la respuesta de estmulos de colores. Una vez asignados los
valores se hace una suma de los mismos y se obtiene la cuantificacin del o los
colores.
XVII.

TRANSMITANCIA

La transmitancia se define como la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo

en determinada cantidad de tiempo. Existen varios tipos de transmitancia,
dependiendo de qu tipo de energa consideremos.
La transmitancia ptica se refiere a la cantidad de luz que atraviesa un cuerpo, en
una determinada longitud de onda. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo
traslcido, una parte de esa luz es absorbida por el mismo, y otra fraccin de ese
haz de luz atraversar el cuerpo, segn su transmitancia. El valor de la
transmitancia ptica de un objeto se puede determinar segn la siguiente
expresin:

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Donde:
I es la cantidad de luz transmitida por la muestra e
I0 es la cantidad total de luz incidente.
Podemos hablar de transmitancia trmica como la cantidad de energa en forma
de calor que atraviesa un cuerpo, en cierta unidad de tiempo. Si tenemos en
cuenta un cuerpo con caras planas y paralelas, y entre sus caras hay una
diferencia trmica, esta diferencia constituye la transmitancia trmica del cuerpo.
La transmitancia trmica es el inverso de la resistencia trmica. Se puede definir
segn la siguiente frmula:

En esta expresin tenemos que

U = transmitancia en W/m2. Kelvin
S = superficie del cuerpo en m2.
K = diferencia de temperaturas en grados Kelvin.
El concepto de este tipo de transmitancia es aplicado en los clculos para
construir aislamientos trmicos y para calcular prdidas de energa en forma de
calor.
Tambin se toman en cuenta estos conceptos al momento de calefaccionar una
habitacin, ya que hay que calcular qu potencia se necesitar en un determinado
perodo, para lograr una cierta temperatura en la habitacin, teniendo en cuenta la
prdida de calor debido a la transmitancia de las paredes de la habitacin.
XVIII.

ABSORBANCIA

Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esta luz es absorbida
por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo. A mayor cantidad de luz
absorbida, mayor ser la absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz ser transmitida
por dicho cuerpo. Como se ve, la absorbancia y la transmitancia son dos aspectos del
mismo fenmeno. La absorbancia, a una determinada longitud de onda lambda, se define
como:

Donde:

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I es la intensidad de la luz que pasa por la muestra (luz transmitida) y I0 es la

intensidad de la luz incidente.
La medida de la absorbancia de una solucin es usada con mucha frecuencia en
laboratorio clnico, para determinar la concentracin de analitos tales como
colesterol, glucosa, creatinina y triglicridos en sangre. Cada uno de estos analitos
se hace reaccionar qumicamente con determinados compuestos, a fin de obtener
una solucin coloreada. A mayor intensidad de color, mayor ser la absorbancia de
la solucin en una determinada longitud de onda. La absorbancia es entonces
directamente proporcional a la concentracin del analito en sangre. Para medir
esta absorbancia, se hace incidir un haz de luz con determinada intensidad y
longitud de onda, sobre la solucin, y se mide la luz transmitida al otro lado de la
cubeta que contiene dicha solucin. Estas tcnicas estn comprendidas en el rea
de la espectrofotometra.
XIX.
ABSORTIVIDAD
Se denomina absortividad a la medida de la cantidad de luz absorbida por una
disolucin, definida como la unidad de absorbancia por unidad de concentracin
por unidad de longitud de la trayectoria de luz. De acuerdo con la Ley de BeerLambert, la absortividad es proporcional a la conductividad del soluto absorbente.
Antiguamente reciba los nombres de ndice de absorbencia, constante de
absorcin, coeficiente de absorcin y coeficiente de extincin.
Se conoce como absortividad molar (E) a la absortividad definida en trminos de
concentraciones expresadas en moles por litro. Antes conocida como coeficiente
molar de extincin.
La absortividad especfica (a) es la absortividad definida en trminos de
concentraciones expresadas en gramos por litro. Antes conocida como coeficiente
msico de extincin.
XX.
ESPECTROFOTMETRO (BAUSCH & LOMB)
La palabra espectrofotmetro significa luz. El espectrofotmetro, construido
mediante procesos avanzados de fabricacin, es uno de los principales
instrumentos diagnsticos y de investigacin desarrollados por el ser humano.
Utiliza las propiedades de la luz y su interaccin con otras sustancias, para
determinar las mismas. En general, la luz de una lmpara de caractersticas
especiales es guiada a travs de un dispositivo que selecciona y separa luz de
una determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad
de la luz que sale de la muestra es captada y comparada con la intensidad de la
luz que incidi en la muestra y a partir de esto se calcula la transmitancia de la
muestra, que depende de factores como la concentracin de la sustancia.
El espectrofotmetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la
concentracin de una sustancia en una solucin, permitiendo as la realizacin de
anlisis cuantitativos.

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XXI.

Curva espectral transmitancia-concentracin

XXII.

Curva espectral absorbancia-concentracin

XXIII.
Ley de Beer Lambert
Definicin La absorbancia: Es el negativo del logaritmo en base 10 de la
transmitancia.
A = - log10 T
A=absorbancia
T=transmitancia
XXIV. Fuentes de desviacin causal a la ley de Lambert-Beer-Bouger

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La linealidad de la ley lmite que relaciona el pT o absorbancia con la

concentracin, pT = A = l[i], puede perderse si las causas que garantizan dicha
linealidad no se cumplen a presin y temperatura constantes:
a) falta de mono cromaticidad
b) disoluciones concentradas
c) variaciones en el ndice de refraccin.
d) Aplicar correctamente concentraciones analticas, C0, y concentraciones
molares efectivas, [i], de la especie absorbente:
pT A l Co pT A il i i i = = = =
Es muy importante trabajar en condiciones de amortiguamiento simple o
mltiple para asegurar que el valor i es constante y efectuar las diluciones
necesarias con dichos amortiguadores y no solo con agua pura, de esta
manera tambin se garantiza que el ndice de refraccin permanezca
controlado.
XXV.

DESVIACIN DE LA LEY DE LAMBERT-BEER-BOUGER

La linealidad de la relacin pT = A = l[i] se pierde por variaciones aleatorias

asociadas a la instrumentacin y la lectura de absorbancia en los fotocolorimetros
y espectrofotmetros usados. A continuacin se mencionan las posibles causas de
desviacin a la ley de Lambert-Beer-Bouger en cada elemento insrumental.
a) A nivel de fuente de luz:
- lmparas fundidas o gastadas.
- lmparas inadecuadas.
- paso ptico bloqueado.
- variaciones altas de voltaje

BIBLIOGRAFIA
http://www.espectrometria.com/espectro_electromagntico
http://www.revista.unam.mx/vol.10/num10/art66/int66-1.htm
http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/transmitancia-y-absorbancia