UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE NICARAGUA

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

SECCIN DE BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR

Laboratorio N 1: Extraccin del ADN en guisantes (Pisum sativum)

Temas a estudiar

Tcnicas de extraccin y purificacin de cidos nucleicos.

Aplicaciones clnicas del ADN

Objetivos:

Indicar las funciones biolgicas del ADN.

Demostrar la presencia de ADN en tejidos biolgicos.
Explicar los principios fsico-qumicos en que se basa la extraccin y purificacin del ADN.
Indicar los usos del ADN genmico humano en el diagnstico molecular, en gentica forense e
ingeniera gentica.

Introduccin
El cido desoxiribonucleico (ADN) es la molcula que guarda la informacin gentica de la inmensa mayora
de los organismos.
La extraccin de ADN es un proceso vital con muchas aplicaciones cientficas. En la investigacin y la
medicina, sus usos incluyen secuenciacin del ADN, la deteccin de los virus, las bacterias, investigacin de
enfermedades y trastornos con base gentica. En el campo de la ciencia forense, es utilizado para la
identificacin de los muertos as como el anlisis de la escena de crimen.
La extraccin de ADN es la base para la aplicacin de cualquier tcnica en Biologa Molecular. Dado que
todos los organismos vivos contienen ADN, las opciones disponibles para la muestra son prcticamente
infinitas, y la eleccin por lo general se relaciona directamente con el tema del objeto de estudio.

Metodologa
Previa la realizacin del laboratorio se les recomienda a los y las estudiantes leer y analizar la gua, en pro de
lograr un aprendizaje significativo.
En este laboratorio se har la extraccin del ADN de los guisantes. Al finalizar la prctica se socializar los
resultados y se discutirn los mismos para consolidar los conocimientos tericos relacionados con esta
actividad.
Materiales
Guisantes
Balanza de compensacin
NaCl
Agua destilada
Licuadora
Beaker de 250 ml

Colador plstico, o
Filtro para cafetera
Jabn lquido
Reloj
Tubos de ensayo 13 x 100 mm
Gradillas

Ablandador para carne

Alcohol al 70%

Reloj
Pinchos de madera para carne.

Procedimientos:
Extraccin de ADN de guisantes
Procedimientos

Pesa 100 gramos de guisantes.

Agrega 1 gramo de NaCl.

Agrega 200 ml de agua destilada bien fra
(entre 0 y 4 0C).
Lica todo a la ms alta velocidad por 15
segundos!!

En un Beaker cuela la sopa resultante (usa

un colador de plstico o papel filtro para
cafetera)
Elimina lo que qued en el colador.

Agrega 30 ml de jabn lquido al filtrado.

Mezcla suavemente.
Espera 10 minutos.

Toma 1-2 tubos de ensayo y llnalos hasta

un tercio de la altura con la solucin
resultante.
Agrega 1 gramo de ablandador de carne, y
mzclalo suavemente unos 5 segundos.

Inclina el tubo de ensayo y agrega

suavemente alcohol al 70-90% sobre la
pared del tubo hasta alcanzar el doble del
volumen de la solucin de arvejas.
NO MEZCLES O ECHARAS A PERDER EL
EXPERIMENTO!!!
Deja reposar 10 minutos. Observa y veras
que se produce una particin de la solucin
acuosa y el alcohol. EL ADN SE
ENCUENTRA EN EL LIMITE DE ESA
PARTICIN.

Toma un pincho limpio de madera (usted lo

trae!!) y con mucho cuidado lo introduces
hasta el sitio donde se parten ambos
solventes, gralo en sentido horario con
suavidad. El ADN se pegar al extremo del
pincho.
Extrae el ADN.
Discute los resultados con tu docente.

Preguntas para orientar el autoestudio

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.

Describa los principios generales de extraccin de ADN.

Diga usted para qu utilizamos detergente en el procedimiento.
Diga usted para qu utilizamos alcohol en el procedimiento.
Diga usted qu tipo de enzimas contienen los suavizadores de carne y el jugo de pia y para qu los
utilizamos en este experimento.
Diga usted cuntos usos se le puede dar al ADN una vez extrado.
Diga usted que relevancia tiene el ADN en el diagnstico clnico.
Diga usted cules son las funciones biolgicas del ADN.
Diga usted cules son las diferencias en cuanto a la extraccin de ADN y ARN.
Diga usted cules son las diferencias entre los procedimientos de extraccin de ADN animal y ADN
vegetal.
Diga usted qu principio de extraccin se usa para ADN plasmdico.
Explique usted por qu la concentracin de ADN se mide a 260 nm.
Indique usted qu tipo de contaminantes podemos encontrar en un extracto de ADN.
Explique usted por qu la medicin de una muestra de ADN a 260/280 nos da informacin sobre la
pureza de la muestra.
Diga para qu fines se puede utilizar el ADN genmico humano.
Cuando realizamos una extraccin de ADN, aparte de concentracin y pureza, qu otros parmetros
de calidad de la extraccin de ADN se deben investigar?

EVALUACIN
Esta actividad tiene un valor de 100 puntos, sobre la base de los siguientes criterios: 20% preparacin
previa, 30% ejecucin de la prctica, 30% discusin de resultados y correlacin terica y 20% entrega de
reporte.

Bibliografa

Conferencias y presentaciones de la asignatura.

Ver documentos pertinentes referidos en la bibliografa del primer laboratorio.
http://www.mdp.edu.ar/agrarias/grado/741_Intr_Biotecnologia/archivos/TP1_Extraccion_ADN_Vegetal
.pdf (Extraccin de ADN vegetal)
http://bacteriologiaclinica.wikispaces.com/file/view/PRACTICA_No_4_EXTRACCION_DNA_PLASMID
ICO.pdf (Extraccin de ADN plasmdico)
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/extraccion.pdf (Teora general de la extraccin de
ADN)
http://www.biotools.eu/esp/documents/SpeedtoolsDNAExtractionKit.esp.ed07.Marzo12.pdf
(Extraccin de ADN genmico humano utilizando membranas de slice, explicado paso a
paso.Aunque no es la misma marca del kit que usamos en la extraccin de ADN, son los mismos
principios y procedimientos). En la gua de las actividades evaluadas pueden revisar los pasos de
extraccin del ADN humano.
http://www.fbmc.fcen.uba.ar/materias/ingen/practicos/arn/clases/Extraccion%20ARN.pdf/view
(Extraccin de ARN)