NOVA METODOLOGIA DE DOSAGEM DE ACARES REDUTORES CONFERE

MAIOR VELOCIDADE ANLISE DE PARMETROS DE PROCESSOS

FERMENTATIVOS
Junior Romeo Deoti 1
Angela Alves dos Santos 2
Srgio Luiz Alves Jnior 3

A glicose e a frutose so dois dos principais carboidratos utilizados por leveduras em

processos de fermentao alcolica, dentre os quais se destacam a produo de
vinho, cachaa e etanol combustvel de primeira gerao. Ambos monossacardeos,
por terem seu carbono anomrico livre, o que os habilita a participarem de reaes
de xido-reduo como agentes redutores, so classificados como acares
redutores. A deteco desses carboidratos importante no s no incio dos
processos citados, para saber o percentual terico de etanol que pode ser obtido,
como tambm durante e no fim da fermentao, para avaliar a velocidade de
consumo dessas fontes de carbono e o quanto de acar deixou de ser fermentado
reduzindo a eficincia do processo. O mtodo colorimtrico mais amplamente
utilizado para deteco de acares redutores utiliza o reativo DNS, que contm
cido 3,5-dinitrosaliclico como agente oxidante, o qual diante de glicose ou frutose
se reduz a um composto corado (cido 3-amino-5-nitrosaliclico) que pode ser
detectado por espectrofotometria a 540 nm. Essa metodologia, entretanto, requer,
mesmo nos protocolos mais econmicos, ao menos 150 mL de reagente, e leituras
individuais de amostras em espectrofotmetro, promovendo um dispndio
significativo de tempo para a anlise de acares redutores. No intuito de diminuir
os custos com a dosagem desses carboidratos e acelerar a anlise de amostras em
processos produtivos e/ou laboratrios de pesquisa, adaptamos a referida
metodologia para leitura em microplacas de 96 poos a 490 nm. Desse modo,
padronizamos a reao para que em cada poo da microplaca fossem utilizados 25
mL de amostra (diludas conforme necessidade, de modo que suas leituras ficassem
dentro da curva de calibrao) e apenas 25 mL de reagente, que, por ser em
microplaca, pde ser pipetado com micropipetadores multicanais, permitindo a
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Acadmico do Curso de Engenharia Ambiental, Campus Chapec, UFFS, Bolsista UFFS.
jrdeoti@yahoo.com.br
2
Acadmica do Curso de Engenharia Ambiental, Campus Chapec, UFFS, Bolsista UFFS.
angela.asds@gmail.com
3
Professor Adjunto II, Universidade Federal da Fronteira Sul, Campus Chapec.
slalvesjr@uffs.edu.br
1

adio do DNS a oito poos simultaneamente. As reaes se processaram em

microplacas seladas com filme plstico a 100C por 5 minutos. Em seguida, 330 mL
de gua destilada foram adicionados aos poos e cada placa foi inteiramente lida
em aproximadamente 100 segundos, apresentando os dados tratados, em planilhas
de Excel. As dosagens de glicose e frutose realizadas atravs desta nova
metodologia foram comparados quantificao desses acares nas mesmas
amostras atravs de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC). Em 60
amostras comparadas, com concentraes de acar que variaram entre 0 e 20 g/L,
os valores que obtivemos em microplacas diferiram em menos de 5% daqueles
obtidos atravs da anlise em HPLC. Desse modo, o mtodo padronizado atravs
do presente trabalho se mostra validado, revelando-se portanto uma metodologia
rpida e de baixo custo para a quantificao de acares redutores.
Palavras-chave: glicose; frutose; DNS; leitor de microplaca.