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MICROBIOLOGA GENERAL
ROGER VALLE
JORGE ARBOLEDA
ANTONIO INSIGNARES
ROBERTO JOS GARCIA-ALZATE
PROGRAMA DE BIOLOGA
CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
PGINA: 2 de 52
CONTENIDO
Pgina
INTRODUCCIN
EVALUACION
PLAN DE TRABAJO
LABORATORIO No. 1
DISTRIBUCION Y UBICUIDAD DE LOS MICROORGANISMOS
LABORATORIO No. 2
TCNICAS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
LABORATORIO No. 3
TCNICAS DE COLORACIN BACTERIANA (TENCIN SIMPLE)
LABORATORIO No. 4
9
9
12
12
21
21
28
28
LABORATORIO No. 5- 7
32
METABOLISMO BACTERIANO
32
LABORATORIO No.8-9
METODO PARA EL RECUENTO TOTAL DE MICROORGANISMOS VIABLES EN UNA MUESTRA
LABORATORIO No.9.
ESTIMACIN DEL NMERO DE BACTERIAS POR MTODOS INDIRECTOS (TURDIMETRA)
38
38
42
42
LABORATORIO No.10
45
SENBILIDAD BACTERIANA
45
LABORATORIO No.11
47
PROGRAMA DE BIOLOGA
CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
PGINA: 3 de 52
LABORATORIO No.12.
ALGUNOS PARASITOS DE IMPORTANCIA HUMANA
LABORATORIO No.13.
VIRUS
47
49
49
PROGRAMA DE BIOLOGA
CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
PGINA: 4 de 52
INTRODUCCIN
Estas prcticas proponen introducir al estudiante en el conocimiento de las
principales tcnicas y procedimientos utilizados en Microbiologa experimental, lo
cual complementado con los conocimientos tericos, le servir de herramienta
para continuar estudios avanzados, para Ia deteccin de problemas y el
planteamiento de soluciones a stos. Las prcticas se harn de forma secuencial
buscando interrelacin y coherencia con los conceptos tericos del curso de
Microbiologa, sin que esto, se constituya en una camisa de fuerza para el
desarrollo del mismo.
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CURSO: Microbiologa General
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PGINA: 5 de 52
PROGRAMA DE BIOLOGA
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PGINA: 6 de 52
PROGRAMA DE BIOLOGA
CURSO: Microbiologa General
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PGINA: 7 de 52
EVALUACION
La evaluacin del laboratorio se har con base en Ia realizacin de pruebas cortas
(quices), presentaciones y notas de seguimiento, las cuales sern definidas al
iniciar cada semestre, teniendo en cuenta las normas acadmicas vigentes.
CONTENIDO DE LAS NOTAS DE SEGUIMIENTOS O INFORME DE LABORATORIO
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CURSO: Microbiologa General
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PLAN DE TRABAJO
1. AI iniciar cada practica se har una discusin sobre el laboratorio anterior.
Usted debe traer los resultados obtenidos durante Ia lectura para ser
discutidos y complementados con los de sus compaeros.
2. Llegue siempre al laboratorio con un conocimiento completo de Ia prctica
que va a realizar. Esto le ahorra tiempo, le permite obtener mejores
resultados y una mayor comprensin.
3. Las tcnicas de laboratorio correspondientes a Ia prctica que se va a
realizar, sern explicadas y demostradas por su profesor.
4. Traiga siempre a cada prctica su libreta de anotaciones y el material
solicitado. Anote cuidadosamente todos los resultados obtenidos.
LISTA DE MATERIALES (POR GRUPO)
Cada grupo de trabajo estar conformado por 3-4 estudiantes, los cuales
realizarn durante todo el semestre las prcticas de laboratorio. Cada grupo debe
tener los siguientes materiales:
1. Bata de laboratorio (cada estudiantes)
2. Un Marcador (Sharpie)
3. Un encendedor
4. Una botella de jabn lquido
5. Dos rollos de cinta de enmascarar (1 cm y 2 cm)
6. Un paquete de papel de arroz
7. Un tapa bocas y gorro
Adems de los implementos que debe tener cada grupo de trabajo, el curso debe
entregar los siguientes materiales al monitor asignado:
1. Una botella de alcohol antisptico
2. Una bolsa de detergente en polvo (2, 5 kg)
3. Un par de guantes para lavado
4. Dos rollos de papel absorbente (papel toalla)
5. Una bolsa de algodn (para torundas)
6. Dos rollos de papel aluminio (3 metros)
7. Tres caja de portaobjetos (50 lminas)
8. Una caja de cubreobjetos
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CURSO: Microbiologa General
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LABORATORIO No. 1
DISTRIBUCION Y UBICUIDAD DE LOS MICROORGANISMOS
INTRODUCCIN
Los microorganismos se encuentran en muchos ambientes naturales. Pueden estar
localizados en suelo, agua, aire, alimentos, tracto intestinal, piel y otros rganos de
animales, el hombre y otros seres vivos. Solo unos pocos lugares en Ia naturaleza como
crteres de volcanes activos y tejidos sanos de rganos internos del hombre y animales
estn libres de ellos.
Su amplia distribucin puede ser demostrada exponiendo medios estriles al contacto con
el medio ambiente y diferentes superficies.
En nuestro medio se encuentra una gran variedad de microrganismos suspendidos en el
aire o sobre superficies, por lo cual, en el laboratorio se deben tomar las precauciones
necesarias para evitar Ia contaminacin de medios de cultivo, soluciones y equipos a
utilizar.
OBJETIVOS
1. Conocer algunas de las tcnicas utilizadas para demostrar Ia existencia de
microorganismos en un ambiente determinado.
2. Distinguir las diferentes formas de crecimiento de estos microorganismos en los
medios de cultivo.
MATERIALES
1. Cajas de Petri con agar nutritivo
2. Escobilln de algodn estril
3. lncubadora
PROCEDIMIENTO
Muestras de Ia poblacin bacteriana ambiental: Coloque una caja de Petri
sobre cualquier Iugar del laboratorio, destpela y djela expuesta al medio
ambiente durante 15 minutes. Despus de este periodo tpela y mrquela
adecuadamente. lncube dejando Ia caja invertida a 37 C de 24 a 48 horas.
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RESULTADOS
Despus del perodo de incubacin, observe cada una de las cajas inoculadas. Note las
diferencias entre las colonias de acuerdo a las siguientes caractersticas:
1. Color
2. Forma
3. Tamao
4. Cantidad de crecimiento (escaso, moderado, abundante)
Registre estos datos en el cuaderno de notas o en el formato de preinforme que ser
documentado con fotos o dibujos de los resultados obtenidos.
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CONSULTAR SOBRE
Distintos tipos de medios de cultivo.
Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo.
Mtodos de esterilizacin
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LABORATORIO No. 2
TCNICAS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
INTRODUCCIN
En Ia naturaleza, las bacterias hacen parte de los diferentes ecosistemas. Como los
dems seres vivos, para su crecimiento necesitan nutrientes apropiados y condiciones
ambientales optimas, tales como pH, presin osmtica, oxgeno, temperatura y humedad
entre otros.
Para el cultivo, aislamiento, identificacin y determinacin de las actividades metablicas
de las bacterias en el laboratorio se utilizan medios adecuados, los cuales segn su
consistencia pueden ser slidos, semi-slidos y lquidos; esta consistencia se obtiene por
Ia adicin de un polisacrido denominado agar-agar extrado de algas marinas del genero
Gellidium, su concentracin en el medio slido es de 1,5% a 2%, en el semi-solido de
0,5% y los medios lquidos son sin agar.
Los medios simples se preparan con agua, extracto de carne, peptona, extracto de
levadura, sales inorgnicas y carbohidratos. A algunos medios se les adicionan
sustancias como: Lquido asctico, vitaminas, antibiticos, colorantes, sales biliares,
sangre y suero o glicerina, obtenindose de esta forma, medios enriquecidos, de
enriquecimiento, diferenciales, selectivos y de transporte
En el aislamiento de bacterias se utilizan varias tcnicas, una de las cuales es la siembra
por estras en superficie que busca agotar Ia muestra sobre Ia superficie del medio para
obtener colonias separadas y poder observar sus caractersticas
Es importante tener en cuenta que la inoculacin de los microorganismos en los medios
de cultivo, siempre deber realizarse en condiciones aspticas (cerca del mechero o en
campana de flujo laminar), que limitan la presencia de microorganismos contaminantes.
OBJETIVOS
1. Conocer los mtodos ms utilizados para el aislamiento y cultivo de bacterias a
partir de diferentes muestras.
2. Conocer Ia composicin y el uso de los diferentes medios de cultivo utilizados en
el laboratorio.
3. Diferenciar las caractersticas de crecimiento de las bacterias, segn el medio de
cultivo utilizado.
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PROCEDIMIENTO
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RESULTADOS
Despus del perodo de incubacin, observe cada una de las cajas y tubos inoculados.
Recopilar la informacin de la caracterizacin colonial de cada cepa. De acuerdo a sus
observaciones identifique las especies presentes en la muestra problema.
Morfologa colonial de Cultivos Bacterianos
E. coli
Aislamiento por estra
cruzada
Forma
Color:
Tamao (mm):
Borde:
Superficie:
Aspecto:
Elevacin:
Consistencia
S. aureus
muestra
problema
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LABORATORIO No. 3
TCNICAS DE COLORACIN BACTERIANA (TENCIN SIMPLE)
INTRODUCCIN
La observacin microscpica de las bacterias nos permite diferenciar tres de las formas
ms tpicas que son: cocos, bacilos y espirales entre otras. Los cocos son clulas
esfricas que se pueden agrupar en parejas (Diplococos), racimos (Estafilococos),
cadenas (Estreptococos), de a cuatro (Ttradas) en cubos (Sarcinas). Estas formas de
agrupacin estn determinadas genticamente.
Los bacilos son clulas en forma de bastn o varilla que pueden presentarse
individualmente o agrupadas al asar, formando cadenas, empalizadas o estacas.
Las espirales son clulas que presentan forma helicoidal y generalmente no se agrupan.
Las anteriores formas bacterianas se pueden observar per medio de los siguientes
mtodos:
a. Preparaciones no coloreadas: Con este mtodo se observan las bacterias vivas,
lo cual hace que podamos detectar con facilidad Ia movilidad en las que Ia poseen
y su forma.
b. Preparaciones coloreadas: Como las bacterias son incoloras y tienen el mismo
ndice de refraccin del agua, es necesario utilizar colorantes para poderlas
visualizar mejor. Los mtodos para observar bacterias, proporcionan las siguientes
ventajas:
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Fijacin al calor: Para evitar que los microorganismos sean barridos o prdida de la
muestra durante los procesos de lavado durante la tincin, la muestra debe fijarse o
adherirse a la lmina mediante calor, que hace que las protenas se coagulen. La
fijacin se obtiene pasando rpidamente dos a tres veces el frotis sobre la llama del
mechero.
OBJETIVOS
1 Conocer algunos de los mtodos de observacin de las bacterias.
2 Diferenciar las formas de accin de los colorantes, sobre Ia clula, de acuerdo al
carcter qumico de stos (cidos o bsicos).
3 Diferenciar las caractersticas morfolgicas, de agrupacin y de tincin de las
bacterias observadas al microscopio
MATERIALES Y REACTIVOS:
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Por qu los colorantes bsicos son ms efectivos para las tinciones bacterianas
que los tintes cidos?
Una tincin simple puede ser usada para identificar algo mas que las
caracteristicas morfologicas de un microorganismo? Explique.
Si se te olvidara fijar la muestra durante la aplicacin del procedimiento de tincin
simple, Qu diferencias crees que encontrarias al mirar tu muestra en
comparacin con unca correctamente fijada?
Si durante una charla de amigos uno de ellos derrama caf sobre tu camiseta y
luego de varias labadas no puedes recuperar su color original; podemos decir
que el caf es un verdadero tinte biologco o es solo una sustancia capaz de
impartir color? Explica tu razonamiento.
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LABORATORIO No. 4
TCNICAS DE COLORACIN BACTERIANA (TENCIN DIFERENCIAL)
INTRODUCCIN
Las tinciones diferenciales son aquellas que se usan para diferenciar de manera ms
explcita los microorganismos. Las tinciones diferenciales ms importantes que se
empleanen bacteriologa son las de Gram y la tincin cido-resistente. Ambas tinciones se
utilizan para obtener informacin acerca de la composicin de las capas de la pared
celular de las clulas bacterianas.
Tincin de Gram: El bacterilogo Dans Christian Gram, descubri en 1884 un mtodo
de coloracin el cual ha dividido a las bacterias en dos grupos, el de las gram positivas y
el de las gram negativas. La tcnica esta basada en Ia capa gruesa de peptidoglicano que
poseen las bacterias gran positivas que es capaz de retener el complejo colorantemordiente (cristal violeta- durante Ia decoloracin con el alcohol acetona, que provoca
una deshidratacin de esta gruesa pared y se reduce la porosidad, atrapando entonces el
complejo en el interior de la clula.
Las bacterias Gram negativas, poseen una delgada capa de peptidoglicano pero rica en
lpidos como el lipopolisacarido o LPS que son disueltos y se permite la salida del
complejo colorante-mordiente (cristal violeta-yodo), perdiendo el color purpura propio del
cristal violeta y deben ser coloreadas nuevamente con el colorante secundario o de
contraste como .la safranina, que es un colorante de contraste de color rojo, dicho
colorante da un color rojo claro a las clulas decoloradas.
Este mtodo de coloracin diferencial constituye una de las tcnicas ms importantes en
el trabajo bacteriolgico, pues Ia informacin que da, ayuda a Ia identificacin bacteriana.
Tincin de Ziehl-Neels: Esta coloracin fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich
para demostrar la presencia de los bacilos causantes de tuberculosois en muestras
clnicas de pacientes. La tcnica es capaz de diferenciar dos grandes grupos de bacterias:
bacilos cido alcohol resistentes (BAAR) positivas y BAAR negativas.
Las paredes celulares de ciertos microorganismos contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de
resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos.
Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis
y M. marinum y los parsitos coccdeas como Cryptosporidium parvun se caracterizan por
sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene
lpidos como el colesterol y ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
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CURSO: Microbiologa General
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MATERIALES
Portaobjetos
Papel absorbente
Puente de coloracin
Mechero de alcohol
Aceite de inmersin
Reactivos requeridos para Ia coloracion de Gram: Cristal violeta, Safranina, Lugol y
alcohol acetona.
Asas bacteriolgicas
Microscopio
Cultivos de estreptococos, estafilococos, bacilos Gram (+) y Gram (-)
PROCEDIMIENTO
1. Prepare, seque y fije Ia muestra con se realiz en la laboratorio anterior (# 3).
2. Cubra el extendido con cristal violeta. Djelo actuar durante un minuto. Lave el
exceso de colorante con agua.
3. Cubra el extendido con solucin yodada de Gram (Lugol) durante un minuto. Este
acta como un mordiente. Lave con agua.
4. Decolore con alcohol acetona durante 20 a 30 segundos aproximadamente y lave
con agua.
5. Cubra el extendido con safranina. Djela actuar durante un minuto.
1 Lave con agua, seque y observe al microscopio con el objetivo de inmersion.
RESULTADOS.
1. Dibuje un campo representativo de cada organismo.
2. Describa la forma y arreglo del organismo.
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CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
PGINA: 30 de 52
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CURSO: Microbiologa General
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PGINA: 32 de 52
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CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
PGINA: 33 de 52
Ureasa
Amoniaco + C02
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CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
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Prueba del lndol: Seala Ia capacidad de las bacterias para oxidar el triptfano. La
accin enzimtica de Ia triptofanasa produce varios metabolitos entre los cuales
esta el lndol.
Triptofano Triptofanasa
lndol + cido pirvico + Amonaco
Desaminacin
.
El indol producido se detecta adicionndole al cultivo dos o tres gotas del reactivo
de Kovacs (P-Dimetilaminobenzaldehido)
.
lndol +(Kovacs)
anillo (color rojo violaceo) l
3
OBJETIVOS
Papel absorbente
Mechero de alcohol
Asas bacteriolgicas
2 cajas con agar almidn
2 tubos con campana de Durham y 5mL de cada uno de los siguientes medios:
glucosa rojo de fenol, lactosa rojo de fenol, sacarosa rojo de fenol y manitol-rojo de
fenol.
2 tubos con 7mLde medio SIM (Sulfuro, Indl, Motilidad)
2 tubos con 7mL de medio TSI (triple azcar hierro) o Klinger (dos azucares,
hierro) solidificados en forma inclinada
2 tubos con 7mL medio de citrato de Simmons solidificados en forma inclinada
2 tubos con 7mL de caldo urea
Portaobjetos
H202 (Perxido de hidrgeno)
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CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
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PROCEDIMIENTO
El profesor proporcionar los cultivos puros de Bacillus sp, E. coli, Klebslella sp. o
Stafilococcus sp. a cada uno de los equipos. Adems de un cultivo problema.
Todos los tubos y cajas deben etiquetarse e inocularse de acuerdo a las
siguientes instrucciones:
1.
2.
4
5
6
7
8
9
Nota: Adems de estas pruebas, existen actualmente otras sofisticadas y rpidas que
permiten una determinacin bastante confiable de las diferentes especies de bacterias,
ejemplo, el sistema API y Micro-ID.
RESULTADOS.
Hacer observaciones alas 24 y 48 horas de incubacin y determine si hay crecimiento,
cambios en el color del indicador y produccin de gas en la campana de Durham
comparando cada tubo problema con tubos control que contienen los mismos medios de
cultivo pero sin inoculacin de microorganismos. Para Ia identificaci6n de las
Enterobacteriaceas utilice Ia Tabla No. 1.
Otras Pruebas Complementarias para Bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Fermentacin de carbohidratos: Una amplia variedad de carbohidratos son
fermentados por bacterias y el patrn de fermentacin es caracterstico de ciertos gneros
y especies.
As el conocimiento de Ia fermentacin de carbohidratos por un organismo particular
ayuda a su determinacin. Esta caracterstica se puede determinar inoculando el
organismo dentro de un caldo de carbohidratos. Este medio esta compuesto
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PGINA: 37 de 52
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Escherichia coli
Shigella spp
Klebsiella spp
Enterobacter
aergenes
Serratia marcescens
Salmonella spp
Citrobacter freundii
Proteus vulgaris
Pseudomonadaceae
Pseudomona aerugin
A
K
A
A
+
V
V
-
A
A
A
A
K
K
2
V
K
V
V
IMVIC
Voges
Lisina
de
Carbox
ilasa
A
A
A
A
Rojo
de
Metilo
+
+
+/V
-
A-cido
A- cido-gas
A- cido con produccin lenta de gas
K- Alcalino
V- Variable
V Variable
1
-Lento
2
-Puede ser retardado
9: No es Enterobacteria
Indol
HS
Motilid
ad
Familia Enterobacteriaceae
KLIGLER
Fondo
Inclinacin
Ureasa
exoenzima elaborada par Ia mayora de los Staphylococcus aureus invierte Ia accin del
anticoagulante (en este caso el citrato de sodio). Cuando a este plasma se le inocula Ia
cepa patgena del S. aureus, Ia coagulacin se realiza tal como si no se hubiera aadido
citrato. Para esta prueba, proceda as:
1. Esterilice el asa.
2. Agregue 0,5 ml de plasma citratado a cada tubo de ensayo (2 tubos)
3. Tome una asada de colonias de S. aureus (coagulasa positiva) e introduzca en
uno de los tubos con plasma.
4. Proceda de igual forma con el tubo problema.
5. Observe por una o dos horas, revisando cada media hora. cuando el plasma ya
no fluya como al principio, Ia prueba es positiva, en caso contrario es negativa.
V
+
1
V
-
V
+
+
+
+
Citro
Simmo
ns
+
+
V
+
+
+
+
-
+
V
+
+
+
+
V
+
+
+
+
+
V
d
V
+
+
+
-
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LABORATORIO No.8-9
METODO PARA EL RECUENTO TOTAL DE MICROORGANISMOS VIABLES
EN UNA MUESTRA
INTRODUCCIN
Los estudios que involucran el anlisis de materiales como alimentos, agua, leche y en
algunos casos aire, requiere la cuantificacin de los microorganismos presentes en dicha
sustancia y se han diseados muchos mtodos para conseguir esto, incluyendo conteo
directo al microscopio, uso de contadores electrnicos de clulas, mtodos qumicos para
la estimacin de la masa celular o de constituyentes celulares, medida turbidimtrica y el
mtodo de diluciones seriadas-conteo en caja. A continuacin describiremos de modo
general cada uno de ellos:
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OBJETIVOS
1
2
MATERIALES
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PGINA: 40 de 52
Tubo
Tubo 5
Tubo 6
Tubo 6
Tubo 7
Tubo 7
Tubo 8
Volumen
0,1mL
1,0mL
0,1mL
1,0mL
0,1mL
1,0mL
8. Asegrese que el agar este fundido y a 45C. Seque la parte externa de los
tubos con un papel toalla. Usando tcnicas aspticas, vierta un tubo de
agar dentro del tubo 1A y mezcle por rotacin suave para asegurar una
distribucin uniforme de las clulas en el medio.
9. Repita el paso el paso anterior con las dems cajas.
10. Una vez el agar se halla solidificado incube las cajas en posicin invertida a
37C durante 24 horas.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
1. Observe todas las colonias sobre las cajas. Las cajas que contengas ms de 300
colonias no deben ser contados y sern reportados como muy numerosos para
contar (MNPC). Cajas con menos de 30 colonias sern reportados como muy
pocas para contar (MPPC). Cuente y reporte slo las cajas que contengas entre
30 y 300 colonias.
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Dilucin
en el tubo
Mililitros de la
dilucin
aadidos a la
caja
Dilucin
final en
la caja
Nmero
de
colonias
Nmero
de
bacterias
por mL de
muestra
Nmero
promedio
de cel/mL
1A
1B
2A
2B
3A
3B
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LABORATORIO No.9.
ESTIMACIN DEL CRECIMIENTO Y EL NMERO DE BACTERIAS POR
MTODOS INDIRECTOS (TURBIDIMETRA)
INTRODUCCIN
La determinacin de la turbidez (turbidimetra) es un mtodo prctico para controlar y
estimar el crecimiento bacteriano para algunos tipos de trabajo experimental. Cuando las
bacterias se multiplican en un medio lquido, ste se torna turbio o nebuloso por las
clulas y el instrumento que se utiliza para medir este efecto es un espectrofotmetro o
colormetro. En este equipo un haz de luz se transmite a travs de la muestra a una celda
fotoelctrica y cuando la cantidad de bacterias aumenta, la luz se dispersa y menos luz
alcanza la celda fotoelctrica. Este cambio de luz se registra en el instrumento como
porcentaje de transmisin. Tambin se puede determinar como una medicin logartmica
del instrumento denominada absorbancia o densidad ptica (D.O), el cual se utiliza para
graficar el crecimiento bacteriano. Cuando las bacterias se encuentran en la fase
logartmica de crecimiento o de muerte, la representacin de la absorbancia frente al
tiempo forma una lnea casi recta.
Es importante tener en cuenta para visualizar los primeros puntos o trazas de turbidez de
haber ms de un milln de clulas bacterianas por mililitro de muestra y se precisan de 10
a 100 millones de bacterias por mililitro para que la suspensin se vuelvo lo bastante
turbia como para ser leda en un espectrofotmetro. Por lo tanto, la turbidemetra no es un
mtodo til para medir contaminacin de lquidos con un nmero relativamente pequeo
de bacterias.
OBJETIVOS
Conocer y estimar el crecimiento bacteriano mediante una curva de cintica de la
biomasa celular.
MATERIALES
45 mL de caldo nutritivo
Espectrofotmetro
Gradillas
Mecheros
Pipetas estriles de 5mL
PROGRAMA DE BIOLOGA
CURSO: Microbiologa General
CDIGO: 20404-20407
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Propipeteador
Solucin desinfectante
Marcador
Cultivo de 24-48 horas de E. coli en caldo nutritivo (50 mL).
PROCEDIMIENTO
1. Tome 5 mL del cultivo de E. coli y depostelos en un Erlenmeyer que
contenga 45mL de caldo nutritivo, homogenice el cultivo mediante agitacin
suave.
2. Tome 3 mL de este cultivo homogneo y depostelos en una celda del
espectrofotmetro para leer el valor de densidad ptica (D.O) a 600 nm.
Esta lectura corresponder al tiempo 0 (t =0).
3. Incube el cultivo a 37 C. Lea y anote las D.O a las 0,5- 1,0-1,5-2,0-3,0, 4,0
y 6,0 horas pos incubacin, de la misma manera que ley el tiempo cero.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
1. Elabore una grfica de D.O vs tiempo e identifique las fases de crecimiento y
duracin (fase Lag o perodo de adaptacin, fase exponencial, fase estacionaria y
Fase de muerte).
2. Determine las generaciones (n) o nmero de divisiones celulares en el cultivo. n=
(logN-logNo)/log 2 n= (logD.O-logD.Oo)/log 2. Tener en cuenta que Log 2= 0,301
3. Calcule la velocidad de crecimiento (Vc): Vc= n/t, es decir el nmero de
generaciones (n) que ocurren por unidad de tiempo.
4. Tiempo de generacin (tg): es el tiempo requerido para que se duplique el nmero
de clulas de la poblacin bacteriana.tg=1/vc.
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Qu tipo de cultivo permite que el microorganismo pase por las cuatro fases de
crecimiento?. Justifique su respuesta.
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LABORATORIO No.10
SENBILIDAD BACTERIANA (CONTROL MICROBIOLGICO)
INTRODUCCIN
Sabemos que el control de los microorganismos se basa en el conocimiento previo de las
condiciones fsicas favorables y de una fuente de nutrientes necesarios para su
crecimiento ptimo que permite la modificacin de stas, las cuales pueden ser
potencialmente letales. Entre los agentes ms utilizados por el hombre en el control de
microorganismos tenemos los Biolgicos, Fsicos y Qumicos como Ia temperatura, Ia
radiacin con Ia luz ultravioleta, variaciones en el pH, Ia presin osmtica, lo mismo que
Ia accin de algunos compuestos qumicos de uso corriente como los antibiticos. Estos
agentes actan distintamente, dependiendo de varios factores tales como el tiempo de
exposicin, la temperatura, la concentracin, su intensidad, la presencia de materia
orgnica o el pH; s como el nmero, clase y naturaleza de los microorganismos y tambin
del material de soporte para su aplicacin.
Es importante destacar que segn sus caractersticas, los agentes que se utilizan para el
controlar los microorganismos, ocasionan diferentes efectos sobre su estructuras, entre
las que podemos mencionar: daos en Ia pared, Ia membrana celular, los cidos
nuclecos, el citoplasma o en los ribosomas, as como Ia inhibicin de Ia actividad
metablica.
En Ia presente prctica estudiaremos, como actan sobre los microorganismos algunos
antibiticos.
OBJETIVOS
Conocer y. evaluar Ia accin de los antibiticos sobre los microorganismos
utilizando el mtodo del antibiograma, el cual consiste en discos de papel filtro
impregnados con distintos antibiticos.
MATERIALES
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PROCEDIMIENTO
1. Humedezca el escobilln en la suspensin de cultivo y quite el exceso de
caldo presionando y girando el escobilln sobre la pared interna del
recipiente, por arriba del nivel del caldo.
2. Estri el medio en tres o cuatro direcciones sobre la totalidad de la
superficie del agar para obtener un inculo uniforme y espere 3 a cuatro
minutos que se seque el inculo
3. Tome una pinza estril y coloque los sensidiscos en un tiempo menor a 15
minutos despus de haber inoculado la caja, presione ligeramente los
discos para asegurar un contacto con la superficie. Evite una sobreposicin
de las zonas de inhibicin con una distribucin adecuada de los discos y
con un lmite no menos de 15 cm de los bordes de la placa
4. Invierte la cajas e incube el cultivo a 37 C por 16 a 18 horas
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Con la ayuda de una regleta mida el dimetro del halo de inhibicin por el fondo de
la caja, la cual se ilumina con la luz reflejada y clasifique las cepas en trminos de
resistente (R), intermedio (I) o sensible (S), dependiendo del dimetro del halo de
inhibicin.
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LABORATORIO No.11
HONGOS
INTRODUCCIN
Los hongos son organismos eucariticos, porque poseen un verdadero ncleo delimitado
y definido. Se encuentran ampliamente distribuidos en el suelo, en el aire, en el agua y
como parsitos de plantas, animales y el hombre. Tambin como contaminantes de
alimentos y otras sustancias.
Muchas especies de hongos descomponen Ia materia orgnica para que pueda ser
utilizada por las plantas; otras especies se utilizan en procesos industriales como en Ia
produccin de cidos, alcoholes y antibiticos, y unos pocos causan enfermedades en los
seres vivos, especialmente en las plantas.
Los hongos se presentan en dos formas: Como Mohos cuando sus estructuras son de
forma filamentosa y crecen en los cultivos en forma algodonosa o como Levaduras
cuando son unicelulares y su crecimiento en los medios de cultivo es parecido al de las
bacterias.
Los hongos se clasifican en cuatro clases atendiendo a Ia forma como se reproducen, as:
Zygomicetos, los que poseen esporangiosporas para Ia reproduccin asexual y
zigosporas para Ia sexual.
Ascomicetos, los que poseen ascosporas para Ia reproduccin sexual y
conidiosporas para Ia asexual.
Basidiomicetos, los que poseen basidiosporas para Ia reproduccin sexual y
oidiosporas o artrosporas para Ia asexual.
Deuteromicetos, los que solamente se les conoce reproduccin asexual por media
de micro o macroconidias.
Para la clasificacin de los hongos se utiliza una serie de herramientas, tales como las
caractersticas morfolgicas microscpicas y macroscpicas entre otras, para su inclusin
en un grupo taxonmico, igualmente para darle una denominacin definitiva
(nomenclatura) se requiere adems, identificar sus estructuras de reproduccin y evaluar
su fisiologa.
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MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Observacin de las levaduras:
1. Tome una asada de levaduras del cultivo y colquelas en un portaobjetos,
cbrala con una laminilla y obsrvelas con objetivo 10X y 40X. Haga
esquemas.
2. En un portaobjetos coloque una gota de lugol y luego tome una asada del
cultivo de levaduras y haga una emulsin con el asa, colquele un cubreobjeto
y observe al microscopio con 1O y 40X.
3. Trate de identificar las siguientes estructuras: pared celular, cicatriz de yema,
ncleo, vacuolas, blastoconidias, etc. Realice esquemas de lo observado.
Observacin de Mohos
1. Examine las colonias de hongos presentes en las cajas con Agar Sabouraud
y/o Mycosel. Describa su color, su contextura, su forma, etc.
2. Prepare una placa tomando con el asa estril, una muestra del cultivo;
depostela en un portaobjeto y adicinele una gota de azul de lactofenol; luego
pngale una laminilla y observe al microscopio con objetivo 1 OX y 43X. Haga
esquemas del tipo de hifa y rganos de reproduccin e identifique el gnero del
moho observado.
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INTRODUCCIN
Los protozoos y helmintos estn entre las causas ms comunes de infecciones y
enfermedades que afectan al ser humano y otros animales. Las enfermedades que
ocasionan tienen una gran repercusin socioeconmica y en Salud Pblica. Las
enfermedades causadas por parsitos, especialmente los intestinales (helmintos y
protozoos) a menudo son la causa principal de morbilidad. Estimaciones sugieren que al
menos el 50% de la poblacin mundial puede estar infectados con una o ms especies de
helmintos, mientras las tasas de prevalencia de infecciones por protozoos pueden oscilar
entre el 15 y el 30% para las regiones tropicales y desde <1% a 10% en las zonas
templadas. La transmisin de muchas de las enfermedades parasitarias, particularmente
las infecciones por helmintos, son con frecuencia, el resultado de suministros de agua
inadecuados, falta de saneamiento o eliminacin de aguas residuales mal tratadas. Sin
embargo, recientemente el agua contaminada con materia fecal se est asociando con
brotes de nuevas enfermedades protozoarias transmitidas por el agua, lo cual se est
convirtiendo en una preocupacin cada vez mayor.
Para la clasificacin de los parsitos se utiliza una serie de herramientas, tales como las
caractersticas morfolgicas microscpicas y macroscpicas, as como su modo de
infestacin.
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Otros parsitos de importancia mdica son los ectopsitos como el Pthirus pubis,
Pedculos humanus, o Sarcoptes scabiei que afectan a la piel de los animales de dos
formas: ectodrmica (sobre la piel) o contraindica (dentro de la piel).
OBJETIVOS
MATERIALES
Guantes
Placas de demostracin
Especmenes conservados en formol
Solucin salina
Cubre y portaobjetos
Solucin salina al 0,85%
Lugol
Palillo de madera para hisopos
Muestra problema (materia fecal)
PROCEDIMIENTO
Observacin de Protozoos lntestinales: Entre los protozoos intestinales que revisten
importancia patolgica para el hombre tenemos: Entamoeba histolftica, Giardia Iamblia y
el Balantidium coli. En las muestras, lo mismo que en las demostraciones observe al
microscopio con objetivo de 40X y analice las diferencias entre los trofozoitos y los
quistes.
Observacin de Helmintos: Algunos de los helmintos que afectan al hombre son:
Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Enterobius vermicularis, Taenia solium, Fasciola
hepatica y Ancylostoma duodenale. De algunos de estos organismos se encuentran
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