ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATECOLASA

INGRID TATIANA MOTTA RAMIREZ1

RESUMEN: Introduccin: Las enzimas son molculas de protenas que facilitan y aceleran las reacciones qumicas de
nuestros tejidos. Las enzimas actan cmo catalizadoras de las reacciones acelerando por lo tanto dicho proceso. La
actividad cataltica puede verse afectada por ciertos factores tales como la temperatura, o el pH. Es necesario entender,
cmo funcionan dichas reacciones para lograr determinar los factores que influencian la actividad cataltica y entender por
qu los colores de las sustancias varan. As mismo diferenciar y lograr observar en qu momento hay un incremento de la
actividad y un decremento de sta. Objetivos: Se busca identificar la reaccin catalizada por la catecolasa y observar e
interpretar el efecto de algunos factores sobre la actividad de la catecolasa. Metodologa: Para lograr entender y realizar
los objetivos buscados, realizamos varias soluciones en las que le agregamos extracto enzimtico (que se obtiene mediante
el extracto de papa junto a agua destilada). De este extracto se le agregan reactivos tales cmo el Catecol, la Hidroquinona,
el Fenol, el Nitrato de Plomo y el cido ascrbico. Estos reactivos harn variar el pH de la solucin y por lo tanto notaremos
el cambio y si hay oxidacin o no mediante la variacin del color. De igual manera para lograr observar dicha reaccin
haremos unos cambios de temperatura, y calentaremos las soluciones para ver en qu punto hay una temperatura ptima
en la que la actividad cataltica est al mximo. Conclusin: Logramos entender dichos procesos realizados para obtener
dichos resultados y lograr discutirlos.
PALABRAS CLAVES: Actividad enzimtica, Catecolasa, temperatura ptima, desnaturalizacin, oxidacin.
RSUM: Introduction: Les enzymes son des molcules de protines qui faciliten et acclrent les ractions chimiques de
nos tissus. Les enzymes on une action directe et sont des catalyseurs des ractions en acclerant le processus. Lactivit
catalytique peut se voir affecte par certains facteurs tels comme la temperatura ou le pH. Il est donc ncssaire de
comprendre comment fonctionnent ces ractions pour pouvoir dterminer les facteurs qui influencent lactivit catalytique et
comprendre pourquoi les couleurs des substances varient. De mme difrencier et pouvoir comprendre quel momment il y
a une augmentation et une diminution de celle-ci. Objectifs: On cherche identifier la raction chimique catalyse par la
Catecolase et interprter leffet de quelques facteurs sur lactivit de la catecalose. Mtodologie: Pour pouvoir comprendre
et raliser les objectifs recherchs, on ralise plusieurs solutions dans lesquelles on ajoute des ractifs comme le
catchol,lhydroquinone, le phnol, le nitrate de plomb, et lacide ascorbique. Ces ractifs Font que le pH de la solution varie
et pour autant nous observeron loxidation grce la variation de couleur. De mme, pour pouvoir observer cette raction
nous feront des changements de temprature, et rchaufferont les solutions pour voir quel point il y a une temprature
optimale, dans laquelle lactivit catalytique est au mximum. Conclusion: Nous russissons comprendre chaque
procssus ralis pour obtenir les rsultats et pouvoir les discuter.
MOTS CLS: Activit enzymatique, Catecalose, temprature optimale, desnaturalisation, oxidation.

INTRODUCCIN: Las enzimas son molculas de protenas que facilitan y aceleran las
reacciones qumicas de nuestros tejidos. Generalmente se reconocen porque se le aade
el sufijo asa al final del nombre de la sustancia en la que actan. Las enzimas no
reaccionan con las sustancias sobre las que actan ni alteran el equilibrio de la reaccin.
Actan cmo catalizadoras aumentando la velocidad las reacciones qumicas actuando
sobre la concentracin enzimtica, de la temperatura y del pH del medio. De este modo

la actividad cata1ltica de las enzimas es sensible a los cambios de pH. Las enzimas
presentan un mximo de actividad cataltica a un cierto pH, que es denominado el pH
ptimo. Esta actividad cataltica puede verse afectada por la temperatura creando dos
efectos posibles: el incremento o decremento de la actividad cataltica. Este incremento es
notable cuando se eleva la temperatura a un punto mximo en el que el nmero de
molculas ricas en energa pasan su estado de transicin y forman los productos: la
velocidad de la reaccin se encuentra al mximo. Mientras que la velocidad disminuye
cuando la temperatura es excesiva. Es decir que llegado al punto en el que la velocidad
de reaccin est a tope, no hay posibilidad de tener un incremento, y por lo tanto se
produce la desnaturalizacin de las enzimas y de su actividad.
METODOLOGA: En primer lugar, preparamos el extracto enzimtico, para realizarlo,
licuamos una papa pelada con agua, y filtramos la solucin mediante una capa de gasa.
Con este extracto enzimtico realizamos 4 tipos de pruebas: la accin enzimtica de la
catecolasa, la especificidad del sustrato, el efecto de la concentracin de la enzima, y el
efecto del pH y metales pesados. Para cada prueba se tomaron tres tubos de ensayo que
llamamos A, B Y C. Los tubos de ensayo denominados A son las pruebas patrones, es
decir que los resultados se discutirn mediante la diferencia de color obtenida frente al
tubo A. Que es el que nos muestra cmo es la muestra inicial. La primera prueba se
realiz adicionando agua destilada y solucin catecol 0,1% al tubo A. El tubo B se le
adicion 2 ml de agua destilada y 2ml de extracto enzimtico y el tubo C se le adicion 2
ml agua destilada, 2ml de solucin catecol y 2 ml de extracto enzimtico. La segunda
prueba que era para observar la especificidad del sustrato se realiz igualmente 3
disoluciones. La primera consisti en adicionarle al tubo A 2 ml de extracto enzimtico y 2
ml de solucin catecol al 0,1%. El tubo B contena 2ml de extracto enzimtico y 2 ml de
solucin de Fenol al 0,1% y el tubo C 2ml de extracto enzimtico y 2ml de solucin de
hidroquinona. Se mezcl cada solucin y se incub a 37C. Se realiz las observaciones
a los 5 y 10 minutos y se anot el cambio de color. La tercera prueba que era para
observar el efecto de la concentracin de la enzima, se realiz a travs dos mezclas. La
primera (Tubo A) consista en 2ml de solucin catecol al 0,1% ms 2ml de extracto
enzimtico. Y el tubo B contena 2ml de solucin de catecol al 0,1%, 1ml de extracto
enzimtico y 1ml de agua destilada. De igual manera se mezcl y se incub a 37C
1 Estudiante de la Universidad de la Salle. Facultad de ciencias agropecuarias,
programa de Medicina Veterinaria, primer semestre, Bioqumica 1, grupo 05.
Docente: Chicri Pars.

durante 25 minutos, observando y registrando cada 5 minutos el cambio de color. Y

finalmente la ltima prueba se realiz mediante 4 soluciones. La primera contena 2ml de
agua destilada y 2ml de extracto enzimtico (Tubo A). La segunda tena 2ml de agua
destilada y 2 ml de solucin catecol al 0,1% (Tubo B). La tercera, 2ml de solucin catecol
al 0,1%, 2ml de extracto enzimtico y 5 gotas de cido ascrbico (Tubo C). Y por ltimo, el
tubo C contena 2ml de solucin catecol al 0,1% 2ml de extracto enzimtico y 5 gotas de
nitrato de plomo.
RESULTADOS.
TABLA N1: Accin de la Catecolasa
TUBOS

OBSERVACIONES

Coloracin grisosa

Coloracin agua turbia

Coloracin caf clarita

TABLA N 2: Especificidad del sustrato

SUSTRATO

5 MINUTOS

10 MINUTOS

Catecol

+ (naranja)

++ (rosado)

Fenol

++ (rosado)

+++ (caf)

+++(caf)

++++ (caf oscuro)

Hidroquinona

5 minutos:10 minutos:

TABLA N3: Efecto de la concentracin de la Enzima

TIEMPO
5

++ rojo

B
++ verde con una tonalidad

10

+++ rojo ms intenso que el

caf
+++ caf

15
20
25

anterior
++++ an ms rojo
++++ (sin cambio de color)
++++(igual)

++++ caf ms oscuro

++++ sin cambio de color
++++ igual

5 minutos:

10 minutos:

20 minutos:

25 minutos:

15 minutos:

TABLA N4: Efecto del pH y del metal pesado

TUBOS
A
B
C
D

RESULTADOS
Sin cambio de color
Sin cambio de color
Naranja oscuro
Negro

TABLA N5 Efecto de la temperatura.

TUBOS
0C
37C
70C

Al inicio:

INTENSIDAD DEL COLOR

Ligero cambio de color ms oscuro
Ligero cambio de color ms clarito
Mismo color (desnaturalizacin)

Despus de 8 minutos:

DISCUSIN DE RESULTADOS: Podemos observar que cuando el color se torna a

anaranjado, rojo, caf o negro es porque hay oxidacin de la catecolasa. De ms la
temperatura hace variar este fenmeno. Es por eso que logramos ver porqu las
soluciones son ms claras antes de calentarlas. Mientras que luego se oscurecen. De
igual manera observamos que cuando se excede el lmite de temperatura ya no hay ms
cambio es decir que hay una desnaturalizacin de la actividad enzimtica (como en el
ltimo caso TABLA N5). Notamos que cuando hay una temperatura ptima, el color se
vuelve cada vez ms intenso (claro est, hasta cierto punto TABLA N3). En la TABLA
N1, podemos observar que hubo ms oxidacin en el tubo C y A que en el tubo B. Esto
es evidente ya que en el tubo B, slo se adicion el extracto enzimtico y agua destilada.
De igual manera la TABLA N2, nos muestra que la hidroquinona tiene ms efecto en el
extracto ya que la solucin es totalmente negra, lo que significa que la actividad
enzimtica lleg a tope, y hay completa oxidacin del extracto.
CONCLUSIN: Se cumpli con el objetivo buscado que era lograr identificar la reaccin
catalizada por la catecolasa y observar e interpretar el efecto de algunos factores sobre la
actividad de la catecolasa.
BIBLIOGRAFA: Gua de laboratorio de bioqumica del departamento de ciencias bsicas
de la universidad de La Salle (Actividad enzimtica de la catecolasa por Dilia Dallos
Boada).