UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DEL MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

INGENIERIA SANITARIA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
ABSORBANCIA

DIEGO MAURICIO USCATEGUI RIVERA20141181040

PRESENTADO A:
DOCENTE DAYSI BELTRAN

2015
BOGOTA

RESUMEN

OBJETIVOS:

Absorbancia: el color es una fuente

fundamental para analizar caractersticas
fsicas de un compuesto o sustancias
qumicas, no obstante hay longitudes de
onda las cuales no pueden ser detectadas
para el ojo humano, por esta razn se
emplea un espectrofotmetro el cual permite
medir la luz absorbida que pasa por una
solucin. Esta medicin se basa en las
molculas que absorben las radiaciones
electromagnticas y a su vez la
concentracin de la sustancia. La teora de la
luz propone que un haz de luz es un flujo de
energa llamado fotones, los cuales poseen
una definida energa.
Palabras claves
Longitud de onda, absorbancia,
espectrofotmetro, fotones.

luz,

ABSTRACT
Absorbance: the color is fundamental to
analyze physical characteristics of a
chemical compound or source, however
there are wavelengths which can not be
detected by the human eye, therefore a
spectrophotometer is used which measures
the light absorbed passing through a
solution. This is based on molecules that
absorb electromagnetic radiation and in turn
of the substance concentration. The theory
proposes that a light beam is a flow of
energy called photons, which have a definite
energy.
Keywords
Wavelength absorbance light
spectrophotometer photons.

Estudiar el efecto de la dilucin al medir la

absorbancia de disoluciones de amoniaco y
sulfato de cobre.
Graficar las curvas de calibracin
absorbancia vs. Concentracin de las
muestras analizadas.
Calcular la concentracin de una disolucin
por interpolacin de la lectura de su
absorbancia en la recta de calibrado obtenida
con disoluciones patrn de concentracin
conocida.

MARCO TEORICO
La absorbancia es una tcnica analtica que
permite determinar la concentracin de un
compuesto en una solucin. Estudia como
las molculas absorben las radiaciones
electromagnticas y a su vez que la cantidad
de luz absorbida depende de forma lineal de
la concentracin. Para hacer esta prueba se
utiliza un espectrofotmetro, en el cual se
puede seleccionar la longitud de onda que
pasa por la solucin y medir la cantidad de
la luz absorbida por la misma.
Las longitudes de onda de las radiaciones
que una molcula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen
de la estructura atmica y de las condiciones
del medio. Las molculas pueden absorber
energa luminosa y almacenarla en forma de
energa interna. Esto permite poner en
funcionamiento de ciclos vitales como la
fotosntesis.

La absorbancia (A) es un concepto que se

relaciona con la muestra puesto que indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se
define como el logaritmo de 1/T:

La cantidad de luz absorbida depender de

la distancia que atraviesa la luz a travs de la
solucin.

con dobles enlaces aislados, triples enlaces,

enlaces peptdicos, sistemas aromticos,
grupos carbonilos y otros heterotomos tiene
su mxima absorbancia en la regin UV, por
lo que esta es muy importante para la
determinacin cualitativa y cuantitativa de
compuestos orgnicos.
La regin visible, es cuando apreciamos el
color visible de una solucin que
corresponde a las longitudes de onda que se
trasmite no absorbe, el color que absorbe es
el complementario al que trasmite. Por lo
tanto, para realizar mediciones de absorcin
es necesario utilizar la longitud de onda en
la que absorbe la luz la solucin coloreada.

C1
0.1

V1
2

C2
0.008

V2
25

Abs.
2.388

0.1

0.016

25

2.864

0.1
0.1

6
8

0.008
0.008

75
100

2.037
2.681

0.1
0.1

9
10

0.009
0.008

100
125

2.541
2.940

MATERIALES:

Beaker de 50 ml
Agua Destilada
Muestras
Balanza

Espectrofotmetro
Baln Aforado de 50 ml
Sulfato de cobre CuSO4

La luz es una combinacin de colores a

diferente frecuencia, esta se divide en dos:
La regin UV, se define como el rango de
longitudes de onda de 195 a 400nm. Es una
regin de energa muy alta. Los compuestos

RESULTADOS

cobre (ml)

1) Muestra solucin de Amoniaco

C 2=

C1V 1
V2

a
(M)

21
3
5
6
7

0.002
0.006
0.01
0.012
0.014

0.050
0.159
0.295
0.345
0.406

Tabla No. 1

CURVA DE CALIBRACION
2
1.5
1

Imagen 1. ndice de absorbancia

f(x) = 41.99x + 0.06
R = 0.99 abs.
Linear (abs.)

ABSORBANCIA

0.5

Linear (abs.)

0
0.05
0

CONCENTRACION

Fuente: Propia-Tomada por Edward Tovar.

Fecha:20/04/15

ANALISIS
Uno de los mtodos ms utilizados para
determinar la concentracin de una muestra
problema, es el mtodo de la curva de
calibracin. Esta curva de calibracin es una
grfica que relaciona la concentracin de al
menos cinco soluciones de estndar de
concentraciones
conocidas,
con
la
absorbancia de cada uno de ellos a la
longitud de onda mxima ( mx).

2) Tabla No. 2
Solucin de
Sulfato
de

Concentraci

Absorbanci

Luego se mide la absorbancia de la solucin

problema y se interpola su valor en la
grfica o se reemplaza en la ecuacin (1),
para obtener el valor de concentracin del
analito. La concentracin de la solucin
problema debe estar comprendida en el
rango de concentracin que comprende la
curva de calibracin. Si la concentracin de
la solucin problema es menor que la
concentracin del estndar ms diluido, debe
usarse el mtodo de adicin estndar, que
consiste en adicionar un volumen
determinado de un estndar concentrado a la
solucin problema, antes de realizar la
lectura y que permite que esta lectura este
dentro de las obtenidas para la curva de
calibracin. En el caso contrario, si la
concentracin del analito es mayor que la
concentracin del estndar ms concentrado
la solucin problema deber ser diluida es
por esto que la curva de calibracin 2 al
graficarla no quedo tan lineal debido a que
las concentraciones de la muestra no
quedaron tan diluidas y dicha muestra quedo
muy concentrada.

El color de un compuesto slido o en

disolucin indica la existencia de un estado
excitado de energa relativamente baja, 3570 Kcal (150-300 KJ/mol) sobre el estado
fundamental. La luz blanca es una mezcla de
todas las longitudes de onda () de radiacin
electromagntica desde 400 nm (violeta) a
los 700 nm (rojo). Cuando un haz de luz
blanca atraviesa una disolucin de uno de
estos compuestos (especie absorbente), parte
de la energa radiante es absorbida por el
mismo y se utiliza en excitar electrones
desde el estado fundamental al excitado. Si
se absorbe la radiacin roja, el color que
percibimos (radiacin no absorbida) es
verde. Decimos que el verde y el rojo son
complementarios.

La absorbancia de una solucin es

directamente
proporcional
a
su
concentracin, a mayor nmero de
molculas mayor interaccin de la luz con
ellas, tambin depende de la distancia que
recorre la luz por la solucin, ya que a ms
distancia recorrida se encontrara con ms
molculas, y depende de, una constante de
proporcionalidad denominada coeficiente de
extincin (se puede observar en la curva de
calibracin 1 y en la tabla No. 1 las
concentraciones
son
directamente
proporcional a la absorbancia), que es
especfica de cada cromforo.
CONCLUSIONES

Uno de los mtodos ms utilizados para

determinar la concentracin de una muestra
problema, es el mtodo de la curva de
calibracin. Esta curva de calibracin es una
grfica que relaciona la concentracin de al
menos cinco soluciones de estndar de
concentraciones
conocidas,
con
la
absorbancia de cada uno de ellos a la
longitud de onda mxima.
Las desviaciones aparentes de la ley de
Beer en soluciones ms concentradas
pueden atribuirse a cambios en las
propiedades de las especies absorbentes de
la solucin. Conforme una solucin se
vuelve ms concentrada, las molculas de
soluto interactan entre s debido a su
proximidad, modificando sus propiedades de
absorber la luz. De ello resulta que la grfica
de Absorbancia en funcin de la
concentracin pierde su linealidad.
Cada sustancia tiene su propio espectro de
absorcin, el cual es una curva que muestra
la cantidad de energa radiante absorbida,
Absorbancia, por la sustancia en cada
longitud
de
onda
del
espectro

electromagntico, es decir, a una

determinada longitud de onda de la energa
radiante, cada sustancia absorbe una
cantidad de radiacin que es distinta a la que
absorbe otro compuesto.
BIBLIOGRAFIA
file:///C:/Users/PROYEC
%2009/Downloads/Guia_TP_2_Quimica_II
_2010%20(1).pdf

https://www5.uva.es/guia_docente/uploads/2
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http://www2.uca.es/grupinvest/corrosion/int
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http://www.uv.es/fqlabo/QUIMICOS/GRAD
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HARRIS, Daniel C. 2007. Anlisis qumico
cuantitativo. Editorial Reverte. 744 Pg.
http://deymerg.files.wordpress.com/2013/07
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