BIOTECNOLOGIA VERDE: CULTIVO IN VITRO DE SEMILLAS DE TOMATE

(Solanum lycopersicum), FRIJOL (Phaseolus vulgaris) Y TEJIDO VEGETAL DE

MANGO (Mangifera indica).
Green biotechnology: in vitro cultivation of seeds of Tomato (Solanum lycopersicum),
Bean (Phaseolus vulgaris) and vegetable tissue Mango (Mangifera indica).

Jaqueline Ortega, Luisa Taboada, Mayelis Carrascal, Mara Anichirico.

Departamento de Bacteriologa, Facultad ciencias de la salud, Universidad de Crdoba,
Montera, Crdoba.

RESUMEN
La biotecnologa es una ciencia multidisciplinar que tiene diferentes e importantes
aplicaciones, de la biotecnologa verde se aprendieron las tcnicas y conocimientos
necesarios para desarrollar este trabajo de investigacin.
Para germinar semillas de tomate, frijol y un tejido vegetal, se establecieron las
condiciones de crecimiento y nutricin de las mismas preparando varios stock de macro
y micronutrientes, stock de calcio, vitaminas y de FE-EDTA, se aadi glucosa como
fuente de carbono y se sembraron en un agar preparado en el laboratorio agregando lo
antes mencionado, mediante el uso de tcnicas de esterilizacin, y posterior siembra al
cabo de dos semanas se observaron los resultados, hubo poco crecimiento vegetal (1 sola
planta de 4 posibles) y mucha contaminacin por hongos (crecimiento fngico en todos
los frascos) por lo que para futuros trabajos de investigacin se espera mejorar en las
tcnicas de esterilizacin y germinacin de cultivos.
Palabras claves: Biotecnologa verde, germinacin, cultivo in vitro, tomate, frijol, tejido
vegetal.
ABSTRACT
Biotechnology is a multidisciplinary science that has different and important applications,
of green biotechnology techniques were learned and knowledge necessary to develop this
research.
To germinate tomato seeds, beans and plant tissue, growth conditions and nutrition of
them settled preparing several stock of macro- and micronutrients, stock calcium,
vitamins and FE- EDTA , glucose was added as the carbon source and seeded on an agar
prepared in the laboratory by adding the above, by using sterilization techniques , and
later sowing after two weeks, the results were observed , there was low plant growth (
only 1 plant of 4 possible ) and lots of fungal contamination ( fungal growth in all jars)
so for future research are expected to improve in the sterilization techniques and crop
germination.
Keywords: green biotechnology, germination, in vitro culture, tomato, bean, plant tissue

Cultivo in vitro: semillas de tomate-frijol y tejido vegetal

INTRODUCCIN
Tanto el frijol como el tomate comprenden uno de los cultivos de mayor importancia
econmica y alimenticia para los seres humanos. Por su parte el frijol es fuente de
protena, hierro y fibra en la dieta de los seres humanos y el tomate es un producto muy
demandado debido a sus propiedades y a su diversificacin en el mercado. La produccin
de frijol y tomate se enfrenta a varias limitaciones, tales como enfermedades causadas
por hongos, bacterias y virus lo que conlleva al uso indiscriminado de plaguicidas adems
ataque de insectos, deficiencias nutricionales y la prdida de tolerancia a sequas. Para
tratar de solucionar estos problemas, es indispensable buscar alternativas que permitan el
mejoramiento de las variedades existentes por tcnicas biotecnolgicas. Para tales
efectos, es importante desarrollar un sistema eficiente de cultivo in vitro que permita la
regeneracin de plantas del embrin de estos alimentos para esto tenemos en cuenta a los
diversos mtodos de cultivo in vitro dentro de los que encontramos la embriognesis u
organognesis, en numerosas especies vegetales, adems, este estudio busca optimizar el
proceso de organognesis y regeneracin de plantas del frijol y del tomate.
Por otra parte se emple una tcnica denominada Meristemos Preexistentes con el
propsito de inducir la diferenciacin de clulas y tejidos en plantas completas, mediante
la utilizacin de medios de cultivos adecuados. Esto se puede gracias a que las clulas
vegetales son totipotenciales. Es decir que a partir de unas pocas clulas, se puede obtener
un organismo completo, de forma asexual.

MATERIALES Y MTODOS
Medio de cultivo MS (Murashige y Skoog)
Se prepar este medio de cultivo partiendo de soluciones Stock de nutrientes compuesto
por: Stock de macronutrientes:NO3, MgSO4.7H2O, KNO3, KH2PO4. Stock de calcio
CaCl2H2O, y stock de micronutrientes H3BO3, MnSO4.4H2O, ZnSO4.7H2O, KI,
CuSO4.5H2O. Adems se necesit Stock de Fe-EDTA para la elaboracin del stock de
nutrientes al igual que un stock de vitaminas conformado por glicina y tiamina.
Para la elaboracin del medio de cultivo se hizo necesario que las soluciones stock se
diluyeran. Adems se le aadi la fuente de carbono (Glucosa) y el agente gelificante
(Agar). Seguidamente se determin el pH teniendo en cuenta que el valor optimo deba
ser 5,8 de no ser as se tena que ajustar. Por ltimo se esterilizo en la autoclave y se dej
enfriar para su utilizacin.
Desinfeccin de semillas y tejido vegetal.
Antes de introducir el material vegetal en el medio de cultivo previamente preparado se
realiz una adecuada desinfeccin con el fin de eliminar los microorganismos presentes
en cada tejido o semillas y se utiliz Etanol al 70% para limpiar el rea de trabajo y los
frascos de compota adems se seleccionaron materiales en ptimas condiciones para el
desarrollo del experimento. Usando una pinza estril se pasaron las semillas de tomate y
el tejido vegetal durante 30 segundos por alcohol al 70%, luego se lav con agua estril,
seguidamente se sumergiern las semillas en hipoclorito al 4% durante 1, se realizaron
cuatro lavados en agua destilada estril y al final se dejaron escurrir las semillas y se

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Cultivo in vitro: semillas de tomate-frijol y tejido vegetal

procedi a sembrar, se realiz el mismo procedimiento con el tejido vegetal. En cuanto a

la semilla de frijol se sumergi por 4 min en Hipoclorito de sodio.
Siembra
Con una pinza estril se sembraron 4 semillas de tomate teniendo en cuenta que el hilio
(punto oscuro) quedara hundido en el medio de cultivo y el resto por encima del mismo,
en cuanto al frijol se tom una semilla y se sembr teniendo en cuenta lo anterior, con el
tejido vegetal previamente cortado y esterilizado se coloc en la superficie del medio.
Luego de realizar este procedimiento se procedi a tapar cada recipiente con papel
aluminio y se dej a una temperatura entre 26-28C, con un fotoperiodo de 16 horas luz.
Al final se evaluaron las semillas y el tejido vegetal durante 2 semanas. El procedimiento
anterior se realiz cerca del mechero y se esterilizo la pinza cada vez que se tom una
nueva semilla con el fin de evitar al mximo cualquier tipo de contaminacin.
RESULTADOS
Los cultivos fueron revisados en un periodo de tiempo de 15 aproximadamente, en donde
se observ la aparicin de races y pequeas hojas en dos de los medios en donde se
introdujeron las semillas de tomate, en cuanto a la de frijol y el tejido vegetal fue
imposible su observacin ya que resultaron contaminados con especies fngicas.

Primera semana

Segunda semana

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Cultivo in vitro: semillas de tomate-frijol y tejido vegetal

TABLA 1. OBSERVACIONES Y REGISTRO

Primera semana

VARIABLES

Segunda semana

De los frascos sembrados con semillas, solo 1 semilla de

IMBIBICIN DE

tomate realizo el proceso de imbibicin, el resto de los

LAS SEMILLAS

cultivos se contaminaron con hongos. (Figura 1, 2, 3, 4, 5,6.)

Durante la primera semana la Durante

la

segunda

EMERGENCIA DE

emergencia de las primeras races semana

la

porcin

RAICES

se hizo visible solo en 1 frasco de radicular

aumento

cultivo de tomate (Figura 2.)

un

poco ms, aunque no en

todos los frascos, solo dos
que

contenan

tomate

(Figura 2, 4)
Como se muestra en la (fig 2) Al transcurrir los das la
LONGITUD DE
LAS RAIZ

hubo aparicin de pequeas longitud

races

que

presentaban

longitud aproximada de 3 cm

de

la

una aumento

raz
hasta

aproximadamente 5 cm.

Como solo se evidencio germinacin en dos frascos y en cada

PORCENTAJE DE
GERMIACION

uno de estos solo una semilla germino se puede afirmar que el

porcentaje de germinacin es del 10%
En la primera semana no se Se observ el brote de una

COTILEDONES

observ

formacin

cotiledones

de planta con germinacin

dicotilednea

la

presencia de pelos en el
tallo y las hojas (Figura 3,
4).

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Cultivo in vitro: semillas de tomate-frijol y tejido vegetal

DISCUSIN
El cultivo in vitro de semillas es un mtodo efectivo y confiable en la reproduccin
vegetal debido a que podemos obtener plantas en un perfecto estado tanto fsico como
nutricional, libre de patgenos o contaminacin, obteniendo una mayor reproducibilidad
de la tcnica.
En este estudio los resultados fueron reproducibles puesto que observamos crecimiento
de las semillas, aclarando que los resultados no fueron los esperados debido a que se
present contaminacin por hongos en los medios de cultivo presente en los 5 frascos de
compota utilizados lo que no permiti el completo desarrollo de las semillas siendo esta
la razn por la cual solo se observ crecimiento de una planta en un medio de cultivo.
La contaminacin de los medios pudo deberse a que el laboratorio utilizado para realizar
el procedimiento se encuentra altamente contaminado por hongos, como se pudo
evidenciar en los resultados.
Para la realizacin de posteriores investigaciones se recomienda realizar un estricto
control de calidad y tener en cuenta todos los factores que puedan interferir en el
desarrollo de la misma modificando los posteriores resultados como son la tcnica a
emplear, tipo de materiales e instalaciones de trabajo.

AGRADECIMIENTOS
Se agradece al docente de la asignatura Biotecnologa Jorge Negrete por los
conocimientos suministrados y de igual manera al Programa de Bacteriologa de la
Universidad de Crdoba.

BIBLIOGRAFIA
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2. San Jos, Costa Rica. Publicaciones Miscelneas; 1993
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Biotecnologa Alimentaria. Quinta edicin. Mxico D.F. Editorial Limusa S.A; 2004.
Jonathan F. Ochoa Bedoya, Jeison A. Ziga Pineda, Brandon Ziga Pineda, Carlos
Ortegn Vergel, Jorge Castaeda. Cultivo in vitro del tejido vegetal del embrin del frijol.
2011.
Vol.:
38
pg.
Disponible
en:
http://cultivodetejidovejetal.bligoo.com.co/media/users/17/870514/files/171788/CULTI
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