Universidad de Colima

MAESTRA EN CIENCIAS, REA: BIOTECNOLOGA

AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS

HIDROGENOTRFICAS EN EL TRACTO GASTROINTESTINAL DEL
AVESTRUZ (Struthio camelus)

Tesis que para obtener el grado de

Maestro en Ciencias, rea Biotecnologa

Presenta
JAVIER IBARRA ARIAS
Asesores
Dr. Roberto Lezama Gutirrez
Dr. Juan Manuel Miramontes Carrillo
Tecomn, Colima, Mxico
Mayo del 2006

AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Autnoma de Nayarit, por apoyarme en la realizacin de la Maestra

en Ciencias, rea Biotecnologa.
A la Unidad Acadmica de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad
Autnoma de Nayarit por el apoyo y facilidades laborales para alcanzar el grado de
Maestro en Ciencias.
A la Universidad de Colima, en especial a las autoridades y maestros que laboran en
la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, Campus Tecomn, por haberme
permitido incursionar en la Maestra en Ciencias.
A todos los maestros de la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias que
participaron en mi formacin acadmica durante las reuniones de socializacin a lo
largo de mi estancia en el postgrado. A todos ustedes, deseo manifestarles que la
metodologa del mtodo cientfico empleada en mi formacin es la que motivo a mi
superacin personal.
A la Comisin Revisora: Dr. Sergio Aguilar Espinosa, Dra. Edelmira Galindo Velasco
y M.C. Luis Jorge Garca Mrquez, por sus acertadas observaciones e indicaciones
que contribuyeron al enriquecimiento en formato y contenido de este documento.
Con admiracin y respeto a mi asesor Dr. Roberto Lezama Gutirrez modelo de valor
y sabidura, por su desinteresada y generosa labor en la formacin de material
humano, su inagotable entusiasmo y sus acertados consejos y sugerencias.
A mi amigo y asesor Dr. Juan Manuel Miramontes Carrillo por su amistad y el
haberme invitado a la primera reunin de socializacin. Gracias.
A todos esos seres ignominiosos que, con su desprecio y rechazo, lo nico que
lograron fue que reuniera ms coraje del que ya tena para terminar airoso este
proyecto.
A todos aquellos seres desinteresados (o interesados) que estuvieron presionando
o echando porras para que terminara este proyecto.
Y finalmente a todos aquellos que de alguna forma colaboraron en mi formacin
acadmica y en la revisin de este trabajo de tesis. Mil gracias.

DEDICATORIAS
A mi padre, Profesor Alberto Ibarra Manjarres ()
A mi madre, Sra. Leonarda Arias Villagrana
Por motivarnos para luchar y aquilatar el amor por la vida, la libertad y la bsqueda
de significado, que agigantan su esencia e impregnan los estudios para adquirir
habilidades y dar sentido, visin, orientacin y compromiso a nuestra existencia

A mi linda esposa Ana Bertha Gudio Lomeli.

Intentando expresarte mi amor y gratitud por tu apoyo incondicional, tu comprensin
generosa y tu tolerancia infinita. Por apoyarme en los proyectos por los que
luchamos juntos. Por tener una familia enriquecida en su esencia, fortalecida en el
valor, la grandiosidad y el enaltecimiento de cada miembro.

T arde una hora en conocerte y solo un da en

enamorarme. Pero me llevara toda una vida lograr
olvidarte
A mi hijo Cesar y esposa Isis Omega.
Por darme la dicha de ser abuelo.

A mi hija Ana y esposo Juan Luis

Que inician el delicado camino del matrimonio.

A mi hija Fabiola,
Por ser como eres y por los bellos momentos de tu motivacin artstica.

Y finalmente a mi querida nieta, Michel Alejandra, que vino a iluminar nuestra

existencia con su frgil y tierno cuerpecito y bella sonrisa.
ii

INDICE
Pgina
AGRADECIMIENTOS

DEDICATORIAS

ii

INDICE

III

INDICE DE CUADROS

INDICE DE FIGURAS

vi

ANEXOS

vii

RESUMEN

viii

ABSTRACT

ix

I. INTRODUCCIN

II. ANTECEDENTES

2.1 Biologa de las bacterias utilizadoras de hidrgeno

2.1.2

Metabolismo de las bacterias acetognicas

2.1.3

Metabolismo de las bacterias Metanognicas

2.1.4

Metabolismo de las bacterias sulfato reductoras

10

2.1.5

Caractersticas de las bacterias utilizadoras de hidrgeno

11

2.1.6

Las interacciones metablicas entre microorganismo

productores y utilizadores de hidrgeno

2.1.7

15

Actividad acetognica, metanognica y sulfato reductora

en algunos ecosistemas

19

2.1.7.1

Ecosistema microbiano ruminal

20

2.1.7.2

Ecosistema gastrointestinal de las termitas

22

2.1.7.3

Ecosistema intestinal en humanos

25

2.1.7.4

Ecosistema de aguas residuales

26

2.2 Sustentabilidad en la explotacin del avestruz

26

2.3 Sistema digestivo del avestruz

27

2.3.1 Alimentacin del avestruz

28

2.4 Biosntesis de las paredes celulares

30

III. MATERIALES Y METODOS

34
iii

3.1 Localizacin del rea de estudio

34

3.2 Animales y condiciones de alimentacin

34

3.3 Obtencin del inoculo

35

3.4 Preservacin y transporte de muestras

35

3.4.1 Preparacin de la solucin del agente reductor

3.5 Preparacin de los medios de cultivo

35
36

3.5.1 Preparacin del medio de cultivo de fosfato-buffer

36

3.5.1.2 Procedimiento para preparar la solucin de minerales traza II

38

3.5.2 Preparacin del medio de cultivo de postgates

38

3.5.3 Preparacin del medio de cultivo AC-11

38

3.6 Mtodo del nmero ms probable

39

3.7 Diseo experimental

40

3.8 Variables

40

3.9 Anlisis estadstico de los resultados

40

IV. RESULTADOS
4.1 Aislamiento y cuantificacin de bacterias metanognicas en las

41
41

diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz

4.2 Aislamiento y cuantificacin de las bacterias acetognicas en las

41

diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz

4.3 Aislamiento y cuantificacin de las bacterias sulfato reductoras

41

en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz

V. DISCUSIN

44

VI. CONCLUSIONES

48

VII. LITERATURA CITADA

50

iv

NDICE DE CUADROS
Pgina
Cuadro 1. Proporcin de los segmentos del tracto digestivo del avestruz

28

Cuadro 2. Composicin de la dieta empleada en el estudio

34

Cuadro 3. Medio general fosfato buffer para bacterias metanognicas,

37

Cuadro 4. Composicin de la solucin de vitaminas

37

Cuadro 5. Composicin de la solucin de minerales traza II

37

Cuadro 6. Medio de postgates para las bacterias sulfato reductoras

38

Cuadro 7. Medio de cultivo AC-11 para las bacterias acetognicas

39

Cuadro 8. Anlisis de varianza para las poblaciones de bacterias sulfato

42

reductoras en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal

Cuadro 9. Nmero de bacterias sulfato reductoras / ml de muestra en las

42

diferentes porciones del tracto digestivo del avestruz.

NDICE DE FIGURAS
Pgina
Figura 1. Esquema de la sntesis del acetato a partir del CO2 dentro del
metabolismo de la energa de las bacterias homoacetognicas

Figura 2. Ciclo propuesto para la funcin del metano a partir del H2 +

CO2 por las bacterias metanognicas

Figura 3. Promedio de los valores de las poblaciones de bacterias

sulfato reductoras en las porciones del tracto gastrointestinal

43

del avestruz

vi

INDICE DE ANEXOS

Anexo 1. Calculo del nmero ms probable

61

vii

AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS

HIDROGENOTROFICAS EN EL TRACTO GASTROINTESTINAL DEL
AVESTRUZ (Struthio camelus)

RESUMEN
Javier Ibarra Arias. Universidad de Colima, Facultad de Ciencias Biolgicas y
Agropecuarias. Apartado Postal No 36 C. P. 28100. Tecomn Colima. Mxico
jia55_9@hotmail.com
Con el objetivo de aislar y cuantificar las poblaciones de bacterias
utilizadoras de hidrgeno en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del
avestruz, se utilizaron medios de cultivos especficos para aislamiento. El medio
Ac11 para acetognicas, el medio de Postgates para sulfato reductoras y un medio
de fosfato buffer para metanognicas. Las cuantificaciones se realizaron por el
mtodo del nmero ms probable. Los tratamientos fueron cinco porciones del tracto
digestivo del avestruz y cinco repeticiones en un diseo completamente al azar, con
arreglo bifactorial donde A = porcin del tracto digestivo y B = tipo de
microorganismo. El nmero ms probable de las acetognicas y metanognicas fue
cero. El medio para las bacterias sulfato reductoras fue positivo en todos los cultivos.
El NMP en cada porcin del intestino: ms alto el intestino grueso 544 x 106, luego
los ciegos 446 x 106, en tercer lugar el intestino delgado con 157.2 x 106, en cuarto el
proventriculo 155.32 x 106 y en ltimo lugar el ventrculo 110.148 x 106.

Los

resultados obtenidos en la presente investigacin confirman la hiptesis de que la

fermentacin observada en el tracto gastrointestinal del avestruz

utiliza como

terminales de hidrgeno a las bacterias sulfato reductoras.

Palabras clave. Bacterias utilizadoras de hidrgeno, acetognicas, metanognicas,
sulfato reductoras, tracto digestivo, avestruz.

Isolation of anaerobic hydrogen utilizing bacteria from Ostrich (Struthio camelus)

intestinal tract.

viii

Abstract

Javier Ibarra Arias.

Colima University. Faculty of Biological and Agricultural Science. Post-office box. Not.
36 C.P. 28100. Tecoman Colima Mxico. Jia55_9@hotmail.com

To isolate and quantification of hydrogen-utilizing bacteria populations from different

portion of Ostrich intestinal tract, was used three different culture media. The Ac11
media for acetogenics, Postgate`s media for sulphate_reducing bacteria and
phosphate buffer media to methanogenics.

Quantifications were made by most

probable number method (NMP). Treatments were five different portions from Ostrich
intestinal tract and five repetitions in totally design random, with bifactorial
adjustment. Portion A=5 portions of intestinal tract, B=micro-organism type. Most
probable number of methanogenic was cero; Sulphate reducing bacteria were
present into all culture media. NMP from high intestine were 544.0X106. The NMP to
blind was 446.0X106. Low intestine 157.2X106. Proventriculi, 11.32X106 and last
ventricle, 110.148X106. Result obtained in present investigation is accord with
hypothesis that reported fermentation from intestinal tract of Ostrich us sulphate
reducing bacteria like electron sink.

Key word. Hydrogen utilizing bacteria, acetogenics, methanogenic, Ostric Sulphate

reducing bacteria.

ix

I. INTRODUCCIN
Ha sido investiga de manera extensa la ecologa microbiana en la ultima
mitad del siglo XX donde describen sistemticamente las caractersticas de las
especies dominantes de bacterias, protozoarios y hongos que habitan el tracto
gastrointestinal de distintas especies (Firkins y Z. Yu, 2004).
Cuando se alimenta animales con dietas ricas en paredes celulares la
eficiencia de la degradacin de los forrajes por los microorganismos, est
determinada por varios factores entre ellos se mencionan el tipo de dieta, las
caractersticas de los polisacridos constituyentes de estas estructuras, l nmero y
el tipo de bacterias del ecosistema, la interaccin entre microorganismos, el pH del
ambiente y la capacidad de las bacterias para adherirse a las partculas de las
plantas. Sin embargo algunos factores no estn suficientemente claros (Williams,
1989; Ann, et al., 1996; ngela et al., 2000).
Aunque los herbvoros no son capaces de sintetizar las enzimas necesarias
para digerir las paredes celulares de los vegetales que componen la mayor parte de
su dieta, pero algunos, como las aves, vencen esta deficiencia, principalmente por
una relacin simbitica con las poblaciones microbianas de su tracto gastrointestinal
(Angel, 1996). Por lo que la eficiencia en la degradacin de la materia orgnica
dentro de estos ecosistemas y su aprovechamiento depende de la actividad de los
microorganismos que habitan en su tracto digestivo (Williams, 1989; Angela et al.,
2000).
Las comunidades microbianas encargadas principalmente de la degradacin
de los vegetales son principalmente hongos y bacterias, los cuales participan en una
serie de fases sucesivas del proceso de degradacin, el producto o los productos de
la degradacin de determinado grupo microbiano sirven como sustrato a otro grupo
de microorganismos (Breznak y Brune, 1994). En particular el hidrgeno liberado por
microorganismo hidrolticos es utilizado dentro del mismo ecosistema por las
bacterias; acetognicas, metanognicas y sulfato reductoras que representan el
ltimo eslabn de la cadena trfica (Gibson et al., 1990).

El hidrgeno es el elemento intermediario ms abundante producido por la

mayora de microorganismos hidrolticos y fermentadores que habitan el ecosistema
y es potencialmente reutilizado por las bacterias utilizadoras de hidrgeno, las cuales
contribuyen a reciclarlo. Este fenmeno ha sido observado y evaluado en diferentes
ecosistemas; entre ellos el rumen, intestino y ciegos de los animales y el hombre
(Hungate, 1966; Gibson et al., 1990; De Graeve et al., 1994).
Aunque grandes cantidades de hidrgeno pueden ser producidas durante la
descomposicin anaerobia de la materia orgnica (por ejemplo 4 mol de hidrgeno
por mol de hexosa), la concentracin de hidrgeno en los ecosistemas es
usualmente baja (10-5 a 10-3 atm), por lo que la eficiencia de su aprovechamiento
depende de la poblacin predominante de bacterias que

utilizan el hidrgeno

presente. Sin embargo el significado ecolgico de estas poblaciones y los factores

relacionados con el establecimiento o dominio de determinado grupo que utiliza el
hidrgeno, no est determinado (Breznak y Kane, 1990).
De los tres grupos bacterianos que pueden contribuir a reciclar el hidrgeno
en la mayora de ecosistemas estudiados las bacterias metanognicas lo utilizan
para reducir el CO2 y producir metano, las bacterias sulfato reductoras lo usan para
reducir sulfatos y producir sulfuros y las bacterias acetognicas reducen CO2 y
producen acetato, (Breznak et al., 1988; Brauman et al., 1992; Dore et al., 1995b;
Morvan et al., 1996b; Ferry, 1997).
El efecto de la actividad de cada uno de los grupos de bacterias se
manifiesta por el aprovechamiento de la energa para la produccin de los cidos
grasos voltiles (AGV) que resultan de la degradacin de las paredes celulares y su
actividad biolgica. Al parecer las bacterias acetognicas y sulfato reductoras son
las que mayor energa producen en los diferentes ecosistemas intestinales, no as
con las bacterias metanognicas que producen metano y como resultado una
prdida de energa bruta del alimento de entre 10 a 15 % (Sorlini et al., 1988;
Breznak y Brune, 1994; Anderson et al., 2003; Soliva et al., 2004; Ungerfeld et al.,
2004).

En algunas condiciones ambientales de estos ecosistemas, por ejemplo en

hbitats bajos en sulfatos y nitratos, la reduccin del CO2 a metano se lleva a cabo
por las bacterias metanognicas, que son las principales terminales o depsito de
electrones del hidrgeno producido por la descomposicin anaerobia de la materia
orgnica (Breznak et al., 1988; Leedle y Greening, 1988; Hansen, 1994).
En

ecosistemas como el tracto gastrointestinal de termitas, las llamas,

bisontes, equinos, ballenas y el hombre, existe el grupo de bacterias como las

acetognicas, que predominan sobre las metanognicas y sulfato reductoras,

la

contribucin de estas bacterias al hospedador es la produccin de energa en forma

de acetato, el cual es utilizado tambin por el intestino para sus funciones (Morvan
et al., 1996b; Breznak y Brune, 1994).
El avestruz africano (Struthio camelus) es un herbvoro que en su tracto
gastrointestinal digiere eficazmente los constituyentes de las paredes celulares de las
plantas y ms especficamente la hemicelulosa

en una proporcin de (66%) de

materia seca. Tambin se ha observado que degrada en un 38% la celulosa (Swart

et al., 1993a).
La fermentacin de estos polmeros ocurre especficamente en sus cmaras
especializadas de los ciegos y el colon, las cuales tienen como caractersticas; su
gran capacidad y contenido de ingesta, pH neutro, alta concentracin de cidos
grasos voltiles, baja concentracin de

cido lctico y alta concentracin de

amoniaco (Ullrey y Mary, 1996).

En algunos ecosistemas anaerobios as como el tracto gastrointestinal del
avestruz, los productos finales de la fermentacin conocidos como cidos grasos
voltiles (AGV) son producidos en diferentes cantidades y se encuentran en los
fluidos como cido actico, propinico, butrico, adems en pequeas cantidades se
producen cidos isobutrico, valrico, 2-metilbutrico (Dijkstra, 1994; Swart et al.,
1993a).
Dijkstra, (1994) y Stan, (1994) mencionan que la produccin de AGV por la
fermentacin de materia orgnica en los diferentes ecosistemas est influenciada por
un nmero de factores que incluyen la composicin del sustrato, su disponibilidad,
3

velocidad de despolimerizacin de los carbohidratos, las especies microbianas

presentes y principalmente sus interacciones metablicas.
El alto nivel de AGV encontrados en el tracto intestinal del avestruz y en
particular en el proventrculo, indica que en comparacin con otras especies de
animales, la digestin de las paredes celulares de los vegetales es ms eficaz; pero
las bacterias responsables de la sntesis y la produccin de estos compuestos, el
significado ecolgico de esta energa, las interacciones entre microorganismos
productores y utilizadores de hidrgeno y su contribucin a la sntesis de protena
microbiana, no ha sido determinada (Swart, et al., 1993a; Angel, 1996).
Entre los diferentes AGV, la gran produccin de acetato como el principal
producto final de la simbiosis entre los microorganismos, puede ser debido a las
interacciones de los grupos bacterianos relacionados con el reciclaje del hidrgeno
de estos ecosistemas; sin embargo, en el tracto digestivo del avestruz tampoco se
conoce los grupos microbianos presentes, sus interacciones, ni su poblacin, a pesar
que es manifiesta una fermentacin eficiente en este ecosistema (Swart et al.,
1993a) por lo que es posible plantear la siguiente.

Pregunta cientfica
Existen en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del
avestruz el predominio de las bacterias sulfato reductoras utilizadoras de
hidrgeno?

Hiptesis.
La actividad microbiana en cada una de las cinco porciones del tracto
digestivo del avestruz, esta determinada por la presencia y predominio de las
bacterias anaerobias sulfato reductoras

Objetivo.
Aislar y cuantificar las poblaciones de bacterias utilizadoras de
hidrgeno en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz.
4

II. ANTECEDENTES
2.1 Biologa de las bacterias utilizadoras de hidrgeno.
En las paredes celulares de los vegetales los compuestos llamados
lignocelulticos estn formados por asociaciones moleculares llamadas complejos
lignina-carbohidratos,

de ellos entre el 40% y 50%

es celulosa y

30 al 40%

hemicelulosa (Cornu et al., 1994); tambin estan presentes otros compuestos que
asociados con la lignina reciben el nombre de compuestos fenlicos y se
caracterizan por su efecto negativo en la digestin microbiana de estas estructuras
celulares (Jung y Fahey, 1983; Carpita, 1996).
Los biopolmeros insolubles de las paredes celulares de las plantas tales
como la celulosa, es hidrolizada a unidades monmeros o monosacridos y dmeros
o disacridos dentro del tracto gastrointestinal de los vertebrados, estos sustratos
son utilizados por los grupos de bacterias hidrolticas y fermentadoras para producir
una variedad de compuestos de menor peso molecular y gases tales como el
hidrgeno y el CO2. Los cidos orgnicos son luego fermentados a acetato + H2 +
CO2 por los grupos de bacterias productoras de hidrgeno (Breznak y Brune, 1994).
La fase final de la fermentacin de estos sustratos, es afectada por los
organismos de depsito de electrones o microorganismos que utilizan (como
equivalentes de hidrgeno), los protones y electrones liberados a partir de las fases
intermediarias de las vas del catabolismo microbiano para obtener su energa
(Breznak y Brune, 1994).
Los grupos especficos que utiliza el hidrgeno y que domina el ecosistema
en cuestin, depende de las condiciones de los habitats. En los sedimentos marinos
anoxicos, donde la concentracin de sulfatos son relativamente alta (20 mM), las
bacterias sulfato reductoras dominan el flujo terminal de electrones de acuerdo a la
siguiente reaccin.
4H2 +SO4 S + 4H2O
La cual incluye la oxidacin anaerobia completa del acetato a CO2 (Breznak y Brune,
1994). Y juegan un papel clave en la mineralizacin anaerobica de los compuestos
5

orgnicos en los sedimentos marinos (Knneke y Widdel, 2003; Flemming y kjeld,

1998).
En contraste en ambientes bajos en sulfatos, las bacterias metanognicas
usualmente dominan sobre otros grupos bacterianos usando el CO2 y el grupo metilo
del acetato como aceptor de electrones, tal como se indica en la siguiente reaccin
4H2 + 2CO2 CH4 +2H2O
Otro grupo de bacterias que acta como terminal de electrones o de
hidrgeno son las bacterias acetognicas quienes reciclan este compuesto para
producir acetato, de acuerdo con la siguiente reaccin (Breznak y Brune, 1994).
4H2 +2CO2CH3COOH + 2H2O
Ya ms de 3000 secuencias de genes bacterianos 16S rRNA de origen
ruminal han sido archivadas en algunas bases de datos. Las bacterias son
clasificadas y agregadas en grupos funcionales de acuerdo a su morfologa

motilidad, requerimientos de factores de crecimiento, degradacin de sustratos y

productos producidos en cultivos puros. Las pruebas moleculares han sido
adaptadas ms recientemente a protozoarios y archae (Firkins y Z Yu, 2004).

2.1.2 El metabolismo de las bacterias acetognicas.

Las

bacterias

homoacetognicas

son

llamadas

tambin

bacterias

acetognicas, son microorganismos estrictamente anaerobios muchos de los cuales

catalizan la formacin de acetato a partir de H2 y CO2 en su metabolismo energtico
(Diekert y Wohlfart, 1994). Filogenticamente las bacterias acetognicas son
diversas y a la fecha han sido descritos 19 gneros (Muller, 2003).
Entre sus caractersticas metablicas se ha descrito que convierten 1 Mol de
glucosa en casi 3 Moles de acetato como nico producto final de su catabolismo.
Este nuevo tipo de fermentacin ha sido referido como homoacetognesis, en
analoga con la fermentacin homofermentativa del lactato.

El termino refiere a la produccin de acetato a partir de la fermentacin de la

glucosa etiquetada en presencia de cuatro molculas de CO2 que rindi acetato
radioactivo etiquetado en los dos tomos de carbono que lo forman (Diekert y
Wohlfarth, 1994).
Las acetognicas pueden crecer quimiolitotrficamente sobre H2 y CO2 como
nica fuente de carbono celular, indicando que la reduccin del CO2 a acetato debe
de estar acoplada con una sntesis neta de ATP. La ruta metablica de la formacin
de acetato por las bacterias acetognicas a partir de CO2 fue elucidada por H,G
Wood y L. G. Ljungdahl, (Breznak y Brune, 1994). Esta ruta metablica utiliza el
acetil CoA como un intermediario y la enzima monoxidodeshidrogenasa como la
enzima clave, y por esta razn se le conoce como la ruta del Acetil CoA o la ruta de
la carbonmonoxidodeshidrogenasa (Ljungdahl, 1986).
El grupo acetilo es formado a partir de los carbonos que forman la molcula
de piruvato en las bacterias acetognicas que presentan el tipo de metabolismo
mixotrfico, pero en las bacterias quimiolitotrficas la sntesis del grupo acetilo es
tambin a expensas del CO2 (Diekert et al., 1984).
Las bacterias acetognicas tambin pueden usar otros sustratos tales como
el monxido de carbono y el formato como intermediarios en la formacin del
acetato, este compuesto es rpidamente utilizado solo por unas cuantas bacterias,
por ejemplo las especies Peptostreptococcus productus y Eubacterium limosum
(Diekert y Wohlfarth, 1994). Experimentos ms recientes han reportado que el
crecimiento de una nueva bacteria acetognica aislada de las heces de humanos y
se propuso el nombre de Briantella formatexigens gen. Nov. , sp. Nov. (Wolin et al.,
2003).
Otros estudios describen que diferentes bacterias homoacetognicas crecen
con compuestos metilados como fuente de energa. El sustrato ms importante de
los compuestos metilados es el metanol y los compuestos aromticos metoxilados
tales como el vanillato, el cloruro de metilo y el cido sirngico (Traunecker et al.,
1991: Muller 2003).

La molcula de acetato contiene un grupo metilo el cual es formado a partir

del CO2 por medio de la siguiente ruta metablica,
CO2
2H
Formato

Formil-FH4

Metenil-FH4
2H
Metilen-FH4
2H
Metil-FH4

CH3 Co E
CO2
2H
(CO)
Acetil-CoA

Acetil fosfato
ATP

Acetato
Fig. 1. Esquema de la sntesis del acetato a partir del CO2 dentro del metabolismo de la
energa de las bacterias homoacetogenicas. FH4 = tetrahidrofolato. CH3 Co E = protena
metilado corrinoides/Fe-S proteina. Reacciones implicadas en la conservacin de energa, por
mecanismos quimioliticos estan indicadas por . Reacciones que requieren la entrada de
energa . (Diekert

y Wohlfarth, 1994).

2.1.3 Metabolismo de las bacterias metanognicas

La metanognesis es una actividad metablica importante en el ecosistema
del rumen, donde provoca la perdida de energa en 6 al 15 % del alimento ingerido.
El metano eliminado por los rumiantes contribuye al problema del cambio climtico
global (Zeenat et al., 2004; Moamed et al., 2004).
La formacin del metano originado por los gases de invernadero ocurre en
varios ecosistemas tales como los pantanos, marismas, sedimentos de lagos y ros,
tracto digestivo de los animales y hbitats geotrmicos. La metanognesis
8

comprende la ltima fase en la descomposicin anaerbica de muchos compuestos

orgnicos complejos y juega un papel esencial en la mineralizacin de la materia
orgnica (Blaut, 1994; Minami, 1997).
Los sustratos utilizados por estas bacterias al igual que los otros dos grupos
bacterianos son el H2 y el CO2, pero a diferencia de estos tambin utilizan el formato,
el metanol, la metilamina y el acetato.
La conversin de estos sustratos ocurre acorde con la siguiente reaccin
CO2 + 4H2O CH4 + 2H2O
El hidrgeno y el CO2 son los sustratos ms comunes para las bacterias
metanognicas y la ruta principal para la formacin de metano ha sido elucidada en
las dos ltimas dcadas. En esta ruta metablica se ha descubierto la participacin
de seis coenzimas para la formacin del metano por las bacterias metanognicas,
as como tambin compuestos muy particulares de estos gneros de bacterias,
(McAllister et al, 1996).

Metano furano (MFR)

Metilreductasa

Formil-MFR

Tetrahidrometanopterin

5-Formil H4 MPT

Metil-H4MPT
Metenil-H4MPT

Metilenil-H4MPT

Fig. 2 Ciclo propuesto para la funcin del metano a partir del H2 + CO2 por las bacterias
metanognicas.

2.1.4 Metabolismo de las bacterias sulfato reductoras

Todas las plantas, animales y bacterias requieren de azufre para la sntesis
de protena. En su estado ms alto de oxidacin el azufre existe como ion sulfato
(SO4), el cual es reducido a sulfuro (S-2) por muchas bacterias, hongos y plantas
antes de incorporarlos a la biosntesis de aminocidos (Gibson, 1990; Canfield y
Raiswell, 1999).
Las

bacterias

sulfato

reductoras

son

un

grupo

heterogneo

de

microorganismos que comprenden bacterias y Archae que tienen como caracterstica

comn, la habilidad para usar sulfato como terminal aceptor de electrones. Cuando el
sulfato est presente, estas bacterias juegan un papel muy importante en procesos
tecnolgicos, sobre todo para la corrosin anaerobia, la remocin de sulfato y
metales pesados de las aguas residuales y del dixido de azufre del gas domstico
(Hammack y Edenborn, 1992).
Tambin se encuentran presentes en el tracto gastrointestinal del hombre y
los animales. En los humanos forma parte del 70% de las poblaciones bacterianas de
ciertas partes del intestino, en los cuales alcanza cifras de hasta 109/g de heces
hmedas (Gibson et al., 1993).
Las bacterias sulfato reductoras pueden utilizar aproximadamente 125
sustratos diferentes para su metabolismo cuando son cultivadas in vitro. Muchos de
los sustratos utilizados por las bacterias sulfato reductoras y Archae son productos
de fermentacin tpica e intermediarios o productos del desdoblamiento de la materia
orgnica, tales como los aminocidos, glicerol, y cidos grasos (Hansen, 1993).
El metabolismo de estas bacterias ha sido recientemente elucidado.
Usualmente l trmino sulfato reductor es usado en el sentido que la cepa tiene la
habilidad de oxidar unidades o molculas de dos carbonos a acetil CoA. Tambin
sintetiza acetato en cantidades significativas durante su crecimiento (Hansen, 1994).
Uno de los ms sorprendentes resultados en el estudio de las bacterias
sulfato reductoras, ha sido el descubrimiento de dos mecanismos diferentes de
oxidacin de unidades de dos carbonos del acetil CoA. Algunas cepas usan la ruta

10

del cido tricarboxilico y en otra ruta el grupo acetilo es oxidado por un mecanismo
no cclico (Hansen, 1994).
En la ruta de la monoxidocarbondeshidrogenasa el grupo acetilo es dividido
en unidades de un solo carbn y un grupo metilo. El grupo metilo es oxidado a CO2
por la va de los enlaces intermediados de tetrahidrofolato (Hansen, 1994).

2.1.5 Caractersticas de las bacterias utilizadoras de hidrgeno

Las bacterias que reducen el bixido de carbono y oxidan el hidrgeno han
sido encontradas en una variedad de ecosistemas naturales (Greening y Leedle,
1989). Las bacterias acetognicas han sido aisladas a partir de aguas frescas,
sedimentos marinos, cisternas, aguas de caeras y en el tracto gastrointestinal de
diferentes animales (Breznak y Zwitzer, 1986). As como de heces en humanos
(Bernalier et al., 1996a).
Greening y Leedle, (1989), aislaron bacterias acetognicas a partir de
muestras de digesta ruminal de animales alimentados con dietas ricas en paredes
celulares. Estos aislamientos indican que las bacterias acetognicas son habitantes
normales del rumen cuando los animales son alimentados con dietas tpicas de
forrajes. Todas las bacterias acetognicas aisladas fueron de bacilos cortos gram
positvos, no formadoras de esporas, no producen el metano y los sustratos ms
utilizados fueron el formato, la glucosa y el CO2, todas requieren una atmsfera de
CO2/H2 para su crecimiento.
Rieu-Lesme et al., (1995), aislaron una bacteria utilizadora de H2 y CO2 a
partir del rumen de un venado adulto. Y se considera ser el primer reporte de una
especie de bacteria formadora de esporas gram positiva. El organismo fue
estrictamente anaerobio, de morfologa bacilar, capaz de crecer autotrficamente
sobre CO2/H2, de los productos de su metabolismo, el acetato fue el mayor producto
final de la fermentacin de la glucosa. El pH ptimo y la temperatura ptima para su
crecimiento fue de 7.0 a 7.5 de 37-42C respectivam ente. La relacin de bases de
DNA fue de 52.9 ms menos 5 mol% G+C.

11

RieuLesme et al., (1996b) aislaron tambin dos cepas de bacterias

acetognicas utilizadoras de H2/CO2 a partir del rumen de corderos lactantes.
Cuando se observa ambas cepas al microscopio, su morfologa fue cocobacilar,
poseyendo el tipo de pared celular correspondientes a las bacterias gram positivas.
Las cepas aisladas fueron capaces de utilizar una gran variedad de sustratos,
incluyendo compuestos aromticos, los cuales fueron usados heterotroficamente.
Los anlisis de 16 rRNA indicaron que las dos cepas son filogenticamente idnticas
representando una nueva sublnea del gnero Clostridium grupo XIVa. La nueva
especie se ha nombrado como Ruminococcus schinkii sp. nov.
Rieu-Lesme et al., (1998), reporta el aislamiento de cinco cepas de bacterias
filamentosas acetognicas a partir de contenido ruminal de corderos recin nacidos,
cuando se observaron al microscopio estas bacterias presentaron la forma bacilar,
son formadoras de esporas, gram positivas y pueden crecer quimiolitotroficamente
con CO2/H2 y quimioorganotroficamente con glucosa, fructosa, maltosa, manosa y
cido siringico. Su temperatura ptima es de 35 a 40C y pH de 6.5 a 7.0. Los
anlisis de la secuencia de genes

16rRNA indican que estas cepas esta

relacionadas con la bacteria Clostridium difficile.

Kamlage et al., (1997), aislaron dos cepas de bacterias de morfologa
cocobacilar, gram positivas, y estrictamente anaerobias, a partir de heces humanas,
las bacterias fueron nombradas Clostridium coccoides 1410. Las pruebas 16rRNA,
hibridacin de DNA

y parmetros morfolgicos y fisiolgicos mostraron un

parentesco muy estrecho con las cepas de C. Coccides DSM 935 T. Los sustratos
orgnicos fueron metabolizados a acetato, pero estas cepas no fueron capaces de
crecer autotrficamente.
Breznak et al., (1988), aisl cepas de bacterias utilizadoras de H2/CO2 a partir
de contenidos de intestino de termitas (Nasutitermes nigriceps). Los aislados fueron
bacilos curvos, estrictamente anaerobios, formadores de esporas, gram negativos,
mviles, con flagelos laterales. Su fuente de energa fue totalmente a partir del
acetato. Otros sustratos que utilizan son monxido de carbono, metanol, betaina,

12

trimetoxibenzoatos. Su temperatura y pH ptimo son 30C y 7.2 respectivamente. La

cepa se denomino Sporomusa termitida sp. nov.
Bernalier et al., (1996c) aislaron una bacteria utilizadora de H2/CO2 nueva a
partir de heces de humanos no excretores de metano. Las dos cepas se
denominaron S5a33 y S5a 36, son cocobacilos no esporulados, gram positivos. Los
aislados crecen autotrficamente al metabolizar el CO2/H2 y lo transforman en
acetato. Tambin fueron capaces de crecer heterotroficamente en una variedad de
compuestos orgnicos. De acuerdo con su contenido de G+C y las pruebas de
secuenciacin de genes rRNA demostraron que las dos cepas representan una
sublnea dentro de Clostridium grupo XIVa, Basados en las consideraciones
fenotpicas

filogenticas,

se

propuso

el

nombre

de

Ruminococcus

hidrogenotrophicus.
En cuanto a bacterias metanognicas se conoce que son un grupo de
microorganismos muy especiales por que a diferencia de otras bacterias, poseen
cofactores nicos, como la Coenzyma M, HS-HTP, F420 y lpidos (Isoprenil, gliceril y
teres). Las clulas contienen en su pared celular psedomuerina, protenas,
glycoprotenas, o heteropolisacridos, la secuencia de nucleotidos 16rRNA, indica
que las bacterias metanognicas han evolucionado divergentemente de otras
bacterias. Sin embargo, estas bacterias han sido clasificadas en diferentes dominios,
tales como el Archaebateria y dentro del reino Euryarchaeota (Blaut, 1994).
Las caractersticas de las bacterias metanognicas se describen como cocos y
bacilos cortos anaerobios muy delicados y que crecen solamente en ambientes con
un potencial redox de 300 mV (Balch et al., 1979).
Se han aislado solamente diecisis especies de bacterias metanognicas a
partir de una variedad de hbitats anaerobios: lagos salinos, campos de arroz, aguas
termales y el tracto gastrointestinal de los animales (Mackie et al., 1992; Jonson y
Jonson 1995).
De estas cinco especies bacterianas han sido aisladas del rumen y solamente
dos de ellas (Methanobacterium ruminantium y Methanosarcina) han sido
encontradas en tamao de poblaciones de ms de 1X106 /ml. (Miller et al., 1986). Sin
13

embargo las bacterias metanognicas constituyen un componente fundamental de la

microbiota del rumen y de otros ecosistemas, establecindose en edad muy
temprana en el rumen (Morvan et al., 1994; Imming, 1996).
Las bacterias sulfato reductoras son un grupo de microorganismos que
comprenden bacterias y Archae, que tienen en comn la habilidad para usar sulfatos
como aceptor terminal de electrones. Se ha obtenido cultivos a temperaturas con
rangos psicroflico e hipertermoflos, As como en concentraciones de cloruro de
sodio de aguas dulces e hipersalinas. Adems estas bacterias son consideradas de
inters tecnolgico no solo por su participacin en la corrosin anaerbica, sino
tambin como de uso potencial en sistemas para remover los metales pesados y
sulfatos de las aguas negras y el dixido de sulfuro del gas (Hansen, 1994).
Su importancia bioqumica no se centra solamente en el ciclo del azufre, sino
tambin en la reduccin de iones ferricos a iones ferrosos y la formacin de siderita
por ciertas cepas de Desulfovibrio. Otra actividad de importancia ambiental incluye la
dehalogenacin reductiva por Desulfomonile tiedjei, y la produccin de metil
mercurio. Interesantemente una poblacin significativa de la poblacin humana (por
arriba de 70%) portan bacterias sulfato reductoras en cantidades de arriba de 109 por
g de peso de heces (Gibson et al., 1988).
Se han reportado considerable progresos sobre el conocimiento de las rutas
metablicas y enzimas que son usadas en la degradacin de los sustratos por las
bacterias sulfato reductoras. Especialmente por la oxidacin del hidrgeno por
hidrogenasas. El hidrgeno es una excelente fuente de energa para algunos
bacterianos

como

Desulfovibrio,

Desulfomicrobium,

Thermodesulfobacterium,

Desulfobulbus, Desulfobacterium, Desulfosarcina, Desulfomonile y Archaeoglobus,

as como algunas cepas de Desulfotomaculum (Hansen, 1994)
El metabolismo de los cidos grasos tales como el propionato y acetato por las
sulfato reductoras ha sido estudiado, la oxidacin del propionato a acetato y CO2 por
Desulfobulbus propionicus procede por la va del succinato similar a la ruta para la
formacin del propionato en gneros como Propionibacterium e incluye una
trascarboxilacin del propionil CoA con oxalacetato a metilmalonil CoA.
14

Uno de los resultados ms sorprendentes en el estudio es la oxidacin

completa por estas bacterias,

ha sido el descubrimiento de dos mecanismos

diferentes para la oxidacin de la unidades de dos carbonos ha acetil Co A, en una

cepa de Desulfobacter la cual usa una ruta del cido tricarboxilico con una enzima
ferredoxin dependiente de -cetoglutarato dehidrogenasa, un enlace de membrana,
un NAD independiente a la malato dehidrogenasa y un ATP citrato liasa (Hansen,
1994).
Un anlisis bioenergtico ha permitido concluir que las dos rutas de
rompimiento del acetato en las bacterias sulfato reductoras son ms o menos
equivalentes. Las especies especializadas en el uso de acetato como fuente de
energa coinciden con las rutas de oxidacin del acetato en el ciclo de cido ctrico
(Hansen, 1994).
Por lo anteriormente descrito se puede concluir que en ambientes donde el
sulfato es limitante en condiciones anaerbicas como sedimento de aguas negras no
es sorprendente que cepas bacterianas de aguas dulce (tambin algunas cepas
marinas) con frecuencia pueden contener otros procesos para producir energa tal
como alguna fermentacin que ocasionan ambiente con pH bajo o una reduccin de
nitritos a amonio; e incluso la reduccin de nitrato (Hansen, 1994)

2.1.6 Las Interacciones metablicas entre bacterias productoras y utilizadoras

de hidrgeno.
Tomando como modelo el rumen que es un ecosistema altamente complejo,
y que contiene muchas especies microbianas

y un gran potencial para las

asociaciones nter microbianas, se conoce que existe interaccin entre hongos

anaerobios y bacterias metanognicas, entre hongos anaerobios y bacterias no
metanognicas y entre hongos anaerobios y protozoarios (Marvin-Sikema et al.,
1990; Windham y Akin, 1984; Latham y Wolin, 1977; Flint, 2004).
Tanto la interaccin de los microorganismos como su adherencia a las
partculas alimenticias se observa en rumiantes recin nacidos. En particular el

15

fenmeno se observa en el rumen de borregos a las 38 horas despus de nacidos, y

se asume que los hongos se establecen entre los 8 a 10 das y los protozoarios entre
los 12 a 20 das. Se conoce tambin que las bacterias y los protozoarios se adhieren
a los tejidos de las plantas a los 5 minutos despus de la ingestin del alimento
(McAllister et al., 1994).
El uso de aditivos alimentarios que interactan con la microflora ruminal
mejora la degradacin de las paredes celulares. Se ha demostrado en experimentos
in vitro con la levadura Saccharomyces cerevisiae o Humicola sp, una mejora de la
digestibilidad de la materia seca de hasta un 7%, con un aumento de la velocidad de
digestin por arriba de un 15% (Muiz et al., 1997).
Las enzimas digestivas producidas por las bacterias son a menudo
estabilizadas y protegidas dentro del glucocalix sobre la superficie de la pared celular
y presumiblemente estos organismos que estn ms cercanamente asociados con
los sitios de digestin de los substratos, reciben una gran proporcin de los
nutrientes desprendidos a partir de la digestin de las partculas del alimento por
otros microorganismos (McAllister et al., 1994).
Se ha demostrado el sinergismo que existe en la degradacin de la celulosa,
hemicelulosa y pectina de los forrajes intactos con bacterias (Fibrobacter
succinogenes A3c, Bacteroides ruminicola H2b; Lachnospira multiparus D15d,
aunque los resultados con substratos puros, no son claros en lo que respecta a su
funcin dentro del conjunto de la fermentacin ruminal (Osborne y Dehority, 1989).
Interacciones entre bacterias metanognicas y protozoarios ciliados en el
rumen ha sido reportada in vitro. Se estima una produccin de metano entre un 9 a
25% dentro del rumen, ya que los protozoarios y las metanognicas reciclan el
hidrgeno eficientemente (Newbold et al., 1995). Sin embargo se conoce que las
bacterias metanognicas no utilizan todo el hidrgeno producido por los protozoarios
(Ushida y Jouany, 1996; Kisidayov et al., 2000).
La presencia de especies de bacterias metanognicas Methanobacterium
arboriphilus, M. Bryantii o M. Smithii, en interaccin con hongos de la especie
Neocallimastix spp aumenta la actividad de la fermentacin de la celulosa entre un
16

10 al 15%, con un aumento en la produccin de acetato y una disminucin del

succinato y etanol (Marvin y Sikema et al., 1990; Trinci et al., 1994).
Los cultivos de hongos de los generos Neocallimastix y bacterias como
metanognicas como la especie Methanobrevibacter ruminatium son reportadas
viables hasta por un ao, sin perder su capacidad celuloltica o metanognica. En
condiciones adecuadas la degradacin de la celulosa en cocultivos se reporta de
hasta (70%) contra un 10% de los monocultivos, y en la degradacin final los
cocultivos alcanzan un 82% contra un 52% de los monocultivos. El carbono y el
hidrgeno recobrado de los cocultivos es menor que el del monocultivo, lo que indica
que uno o ms productos del hongo son asimilados por la biomasa celular de las
bacterias metanognicas (Bauchop y Mountfort, 1981).
La simbiosis entre los hongos anaerobios y las bacterias metanognicas son
probablemente comunes dentro del rumen, pero su principal desventaja para el
hospedero no es clara. Aunque, la celulosis se incrementa en cocultivos, la
produccin de CO2 y metano es consecuencia de una perdida de carbono y energa
para el herbvoro (Joblin, 1990; Fonty y Joblin, 1991).
Las interacciones in vitro entre hongos y bacterias fue demostrada

en

monocultivos de la especie Piromonas communis que degrada ms la celulosa la

especie Sphaeromonas communis. Cuando se aade la bacteria Selenomonas
ruminatium,

se

inhibe

la

celulolisis

con

Piromonas

communis,

Sphaeromonas communis se reporta mayor cantidad de celulosa

pero

con

hidrolizada en

comparacin con el monocultivo del hongo Sphaeromonas communis.

Los productos finales de la fermentacin para la interaccin de P. Communis
+ S. Rumiinatium

son lactato, acetato y propionato, y para S. communis + S.

Ruminatium son propionato, acetato y etanol en ambos cocultivos. Adems

se

reporta en ambas interacciones una disminucin en la produccin de hidrgeno por

el hongo.
En

interaccin

del

hongo

Piromonas

communis

la

bacteria

Methanobrevibacter ruminatin, reporta un limitado efecto positivo sobre la

degradacin de la celulosa, probablemente porque la cepa del hongo fue capaz de
17

utilizar rpidamente para el mismo la celulosa degradada. Aunque determino

claramente la utilizacin del hidrogeno por el M. ruminaltium. En cambio la asociacin
con el hongo S. Communis degrad una gran cantidad de celulosa

y utiliz

hidrgeno producido por el hongo para elaborar metano. En ambos cocultivos se

aumento la biomasa fungal. Puede parecer por lo tanto, que las bacterias
metanognicas promueven el crecimiento de los hongos para utilizar el hidrgeno
que producen. El aumento de la celulosis en los cocultivos puede ser el resultado de
este aumento de la biomasa fungal y por lo tanto un aumento de las celulasas
producidas (Bernalier et al., 1991).
La degradacin y fermentacin de la celulosa por los microorganismos
celulolticos ruminales, Ruminococcus flavefaciens asociado con las bacterias
sulfato-reductoras SER3, no presento un efecto significativo sobre la actividad
celulolitica del R. Flavefaciens, ni sobre la cintica de degradacin de celulosa, pero
con la presencia de las cepas acetognicas SER5 y SER8 se reporta un aumento
sobre la cantidad de celulosa degradada (9.4 y 6.7% respectivamente), despus de 8
das de incubacin (Lathan y Wolin, 1977).
El R. albus en cultivos mixtos con

bacterias acetognicas, degrado una

mayor cantidad de celulosa (3 veces ms alto), pero cuando se siembra

con

bacterias sulfato reductoras, cepa SR3, la celulosis fue ligeramente mayor (9%). El
hongo Neocallimastix frontalis asociado con las bacterias acetognicas SER8,
aumenta considerablemente la celulosis, pero es inhibido por la presencia de las
bacterias sulfato-reductoras (Morvan et al., 1996a).
De igual manera se ha reportado que existe inhibicin de la actividad
celuloltica del hongo Neocallimastix frontalis, a causa de una protena extra celular
liberada por la bacteria celuloltica Ruminococcus flavefaciens, pero no afecta el
crecimiento fungal. (Bernalier et al., 1993).
Los cocultivos de Ruminococcus albus y Methanobrevibacter smithii
producen la fermentacin de la celulosa cristalina a acetato y metano. Se demuestra
que R. albus fermenta la celulosa a etanol, acetato, hidrgeno y bixido de carbono,
pero con la adicin de las metanognicas M. smithii disminuy la produccin de
18

etanol y aumento la formacin de acetato, y el metano fue producido en lugar del

hidrgeno (Miller y Wolin, 1995).
La interaccin de los microorganismos celuloliticos, Ruminonococcus
flavefaciens

productores

de

hidrgeno

las

bacterias

metanogenicas,

Methanobrevibacter sp. MF1, aumento la actividad de la glucosidohidrolaza y

polisacaridopolimeraza en la degradacin de las paredes celulares de la paja de
trigo, con un aumento de la concentracin de los AGV, y en particular el acetato
(Fonty et al., 1997).
En el desdoblamiento de las paredes celulares, por los hongos anaerobios del
rumen, se puede observar que stos tienen un potencial de ser fuente de nutrientes
para el rumiante en dietas de baja calidad. Su contenido de protenas es
relativamente alto. Se ha demostrado que los aminocidos de las protenas de los
hongos, son altamente absorbidos dentro del intestino delgado de las ovejas. Sin
embargo no existen datos disponibles sobre la proporcin de los hongos del rumen
que pasan al tracto digestivo o sobre la regeneracin de tejidos dentro del rumen
(Fonty y Joblin, 1991).

2.1.7 Actividad acetognica, metanognica y sulfato reductora en algunos

ecosistemas.
Partiendo del hecho que el umbral de utilizacin del hidrgeno es alto para las
bacterias metanognicas en comparacin de las acetognicas y sulfato reductoras y
que la metanognesis es termodinmicamente ms favorable en comparacin con la
acetognesis, Se reporta que las bacterias acetognicas son capaces de competir
con las metanognicas en ecosistemas tales como sedimentos marinos o intestino
de termitas, donde la acetognicas representa 1/3 de la energa requerida por el
hospedero. Diferentes factores estn implicados en el dominio de ciertos grupos de
bacterias que utilizan hidrgeno en determinados ecosistemas. El estudio de la
fisiologa y caractersticas metablicas de cepas acetognicas aisladas de esos
ecosistemas digestivos y el estudio de los factores que gobiernan la competencias
entre estos grupos esta en vas de aclararse (Morvan et al., 1996b).
19

2.1.7.1 Ecosistema microbiano ruminal

Los habitantes del ecosistema microbiano ruminal, son un consorcio complejo
de diferentes grupos microbianos que viven en relacin simbitica con el hospedero,
y actan en forma sinrgica para la bioconversin del alimento lignocelulosico hacia
cidos grasos voltiles que sirven como una fuente de energa para los animales. El
rumen abriga a varios tipos de bacterias, protozoarios y hongos que son activas en la
degradacin de los componentes del alimento (Kamra. 2005).
Dentro del tracto gastrointestinal de los rumiantes, alimentados con dietas
tpicas altas en fibra, se aislaron 5 cepas de bacterias acetognicas (Acetitomaculum
ruminis: 20 40, 40C, 139b, 1904), todas fueron gram positivo en formas de barras
curvas, todas son anaerobias obligatorias y no forman endosporas, las clulas son
flageladas. La composicin base

del DNA fue de 32-36 mol % de G+C. La

temperatura ptima fue de 38 C; el pH ptimo es del 6.8, fermentan el formato,

glucosa, celobiosa. fructosa, y cido actico. Oxidan el hidrgeno y reducen al
dixido de carbono de acuerdo a la siguiente ecuacin 4H2 + 2CO2 CH3COOH +
2H2O (Greening y Leedle, 1989).
Le van et al. (1998), demostraron que las bacterias de la acetognesis
reductiva (Acetitomaculum ruminis) son habitantes del ecosistema del rumen y que
su actividad endgena como consumidor de H2/CO2 es insignificante, y que no
pueden competir por el H2/CO2 con las bacterias metanognicas del rumen.
El establecimiento de las bacterias utilizadoras de hidrgeno en el rumen de
un cordero recin nacido fue que a las 48 h de vida las bacterias anaerobias
facultativas constituan la flora dominante del rumen, empezando a disminuir
gradualmente y aumentando en numero las bacterias anaerobias estrictas a las 72
h. Se observo actividad acetognica a las 24 h de nacidos y el establecimiento de las
bacterias metanognicas y sulfato reductoras a los 15 das su nmero se acerco a la
del adulto. Adems se demostr que el ecosistema del rumen abriga otras
poblaciones hidrogenotrficas a edades tempranas; lo que indica que las condiciones
para el establecimiento de las bacterias hidrogenotrficas, estn presentes antes del
establecimiento de las bacterias celulolticas (Morvan et al., 1994).
20

Un nuevo aislamiento de una bacteria acetognica del rumen de un ciervo

adulto, alimentado con una dieta alta en fibra, presento formas de barras mviles de
0.5 por 2.4 um, fimbrillas siempre alrededor de las bacterias, presentando membrana
externa e interna, gram negativo y anaerobio estricto y utilizo el H2 y el CO2 para
formar acetato. Es capaz de fermentar varios substratos como la glucosa, ribosa y
fructuosa. El pH ptimo fue entre el 7 y 7.5 y una temperatura entre 37 a 42 C.
La cepa sobrevive a los 100 C / minutos y es capaz de producir esporas. Se
presenta 5 x 107 / ml. La presencia de metano en el espacio superior en los tubos de
la dilucin 10-7 nos indica la presencia de un gran nmero de bacterias y que las
bacterias

acetognicas

pueden

competir

exitosamente

con

las

bacterias

metanognicas por el H2 dentro del interior del rumen de los ciervos (Rieu-Lesme et
al., 1995).
Dos cepas acetognicas utilizadoras de H2 y CO2 fueron aisladas del rumen
de corderos lactantes, ambas cepas presentaban una morfologa cocobacilar, con
una pared celular gram positiva. Crecieron autotrfica y heterotrficamente, no son
mviles, no presentan flagelos y tampoco presentaron esporas, son anaerobios
estrictos y su temperatura ptima de incubacin es de 39 C, el pH ptimo es entre
6.5 a 7. No se detectaron citocromos. Con base a las caractersticas fenotipicas y
filogenticas se considera ser una nueva especie Ruminococcus schinki sp. Nov.
(Rieu-Lesme et al., 1996a).
La oxidacin del hidrgeno y la reduccin del oxigeno por bacterias
acetognicas esta presente en los diferentes ecosistemas anaerobios semejantes
como los lodos residuales, sedimentos y tracto intestinal de animales. En el rumen de
corderos, llamas y bisontes se aislaron 13 cepas gram positivos, cocoides,
formadoras de esporas, se presenta en cadenas y su fuente de energa es el H2 y
CO2 para la formacin del acetato por la va del Acetil Co-A, no es mvil ni flagelado
y su temperatura ptima de incubacin esta entre 37 a 40 C. Su pH ptimo es entre
el 6.3 a 6.8. Es capaz de nutrir heterotrficamente

con numerosos substratos

orgnicos. Se propone temporalmente el nombre de la Nueva bacteria acetogena

esperando una futura revisin del gnero Clostridium (Rieu-Lesme et al., 1996b).

21

Cinco cepas de bacterias acetognicas filamentosas se aislaron del

contenido ruminal de corderos recin nacidos. Estas bacterias fueron Gram positivas,
formadoras de esporas, crecieron organotroficamente y quimiotroficamente, con un
pH entre 6.5 a 7, a una temperatura ptima entre 35 a 40 C. Por la composicin de
su DNA, esta cercanamente relacionada con el grupo de Clostridium difficile en un
99.7% (Rieu-Lesme et al., 1998).
Selenomonas ruminatium es una bacteria anaerobia comn del rumen gram
negativa y que llega a representar arriba del 51% de las bacterias totales viables
dentro del rumen, para su crecimiento requiere de la presencia del malato y lactato
para producir acetato, propionato y succinato. El rango de la utilizacin del lactato es
entre el 77 y 80% con la presencia del malato, en comparacin del 40 y 70% cuando
hay ausencia de este. Se observ que la presencia de glucosa inhibe la utilizacin
del malato (Evan y Martin, 1997).
Un nueva bacteria se aslo del fluido ruminal de un reno, y con base al
anlisis filogentico la secuencia 16S rDNA, indica que es una nueva especie dentro
del genero Actinomyces. Falta determinar sus propiedades fisiolgicas y su patrn de
fermentacin (Praesteng et al., 2004).

2.1.7. 2 Ecosistema gastrointestinal de termitas.

Las termitas con su microbiota residente intestinal, ha emergido como un
elegante sistema modelo de estudio, para aclarar los nuevos principios del carbono y
flujo de electrones y competencia del hidrgeno dentro del hbitat anoxico. A la
fecha, solo relativamente pocos organismos han sido aislados del intestino de las
termitas, esto se atribuye principalmente al pequeo nmero de estudios
microbiolgicos realizados sobre este modelo. Esta falta de estudios cambiara
seguramente en un promisorio futuro cercano, considerando el inmenso potencial de
la biodiversidad representado por ms de 2000 especies de termitas con su largo
espectro de hbitats, tipo de alimentacin y diversificacin intestinal. La actividad
ms prominente de la microbiota intestinal de las termitas es la de suministrar

22

enzimas que despolimerizan a la mayora de los polmeros de los carbohidratos que

se encuentran dentro de la lignocelulosa (Breznak y Brune, 1994).
El papel de los microorganismos de las termitas en la digestin de la
lignocelulosa, se lleva principalmente por hongos y bacterias, que hidrolizan parte de
sus componentes por las enzimas que producen. El oxgeno molecular es necesario
para su degradacin y su ruta es desconocida. Adems las termitas tienen
protozoarios (Trichomitopsis termopsidis, tricercomitis, Hexamastix termopsidis) que
sobreviven en base de celulosa por fagocitosis, llegando a pesar una tercera parte
del peso total del insecto. Presentan los 3 tipos de bacterias que utilizan el
hidrgeno: acetognicas (Sporomusa termitida, Nasusitermes nigricep, Acetonema
longum etc), metanognicas (Zootermopsis angustiollis), y sulfato reductoras
(Desulfovibrio giganteus y otros ms). (Breznak y Brune, 1994).
Las termitas difieren en su alimentacin, unas consumen pasto, hojas y
madera, termitas bajas por ejemplo (Reticulitermes flavipes) que incluye
protozoarios y bacterias, y efecta una fermentacin especialmente homoactica de
los polisacridos de la madera (principalmente la celulosa), que es consumida por el
insecto. Los protozoarios celulolticos primero hidrolizan la celulosa y fermentan cada
monmero de la glucosa a acetato, bixido de carbono e hidrgeno.
C6H12O6 2CH3COOH + 2CO2 + 4H2
Entonces las bacterias acetognicas reducen el CO2 convirtiendo el H2 y CO2
en una molcula adicional de acetato (Breznak y Switzer, 1986).
4H2 + 2CO2 CH3COOH + 2H2O
Los tres acetatos formados por los monmeros de la glucosa son absorbidos
en el intestino grueso y oxidados por las termitas que soporta el 100% de los
requerimientos respiratorios del insecto (Breznak y Kane, 1990).
3CH3COOH + 6O2 6CO2 + 6H2O
Posteriormente el H2 y el CO2 son reducidos por las bacterias metanognicas
de las termitas altas para producir metano, el cual es eliminado por las termitas
contribuyendo as a la contaminacin global de la atmsfera (Brauman et al., 1992).
23

En los ecosistemas del tracto intestinal de las termitas Reticuletermes

flavipes, el acetato es el mayor producto final de la fermentacin microbiana en su
intestino. Puede efectuar la sntesis total de acetato a partir de CO2 ms hidrgeno y
es una importante fuente de energa oxidable y precursor biosintetico para las
termitas, la produccin de acetato soporta del 77 al 100% de los requerimientos
respiratorios de los insectos (Breznak y Switzer, 1986).
Estas termitas son uno de los pocos artrpodos terrestres que emiten metano
(1.30 umol / g (peso fresco)

-1

h-1 y derivan de los miembros de la Metanogenica

archae que se localizan en el intestino y que son una terminal de electrones de H2 del
organismo en la fermentacin del intestino grueso (Brauman et al., 1992).
La acetognesis microbiana tambin ocurre dentro del intestino grueso y su
rango de velocidad es de 0.01 a 5.96 umol g (peso fresco)1h1 de acetato. Por su
tipo de alimentacin a las que pertenecen las termitas en las que se alimentan del
suelo y cultivan hongos, prevalecen las bacterias metanognicas, y las termitas que
se alimentan de madera y pasto predominan las bacterias acetognicas. (Brauman et
al., 1992).
Se reporta el aislamiento de dos cepas de bacterias metanognicas
Methanobrevibacter cuticularis sp, nov, (cepa RFM-1) en la superficie cutcular del
epitelio del intestino grueso de las termitas. Morfolgicamente es un bacilo corto con
ligeros bordes afilados, se encuentran solos, en pares o en cadenas cortas, no son
mviles y son gram positivos, no formador de esporas. Estrictamente anaerbico,
son catalaza positivos y oxidasa negativos, el pH ptimo es el 7.7 (rango entre 6.5 y
8,5), su temperatura ptima de incubacin es de 37 C. (Leadbetter y Breznak, 1996).
El extracto de levadura y el fluido ruminal estimulan su crecimiento. El
Methanobrevivacter curvatus (cepa RFM-2) (se refiere al cuerpo curvo de la clula),
es de forma de una vara curva, que se presenta sola o en pares, no son mviles, son
gram positivos, presenta fibras polares y no son formadoras de esporas, el pH ptimo
vara entre 7.1 a 7.2, su temperatura de incubacin ptima es de 30 C, requiere de
fluido ruminal para su crecimiento, producen solamente metano (Leadbetter y
Breznak, 1996).
24

Resultados recientes enfatizan que el intestino posterior de las termitas no es

un simple fermentador anoxico, sino que el hospedero y actividades microbianas
proporcionan una estructura axial y radial de sistemas heterogneos caracterizados
por una secuencia de pasos que dentro del turno, gobiernan el arreglo espacial de
los grupos individuales metablicos de la microbiota intestinal. Esto ha sido
experimentalmente establecido para oxgeno, hidrgeno y pH. (Brune, 1998).

2.1.7. 3 Ecosistema intestinal en humanos.

Como en el rumen, el intestino grueso de los monogastricos es
esencialmente un comportamiento de fermentacin en donde el alimento es
degradado por bacterias anaerobias con niveles que van de 1010 a 1012/ g de
contenido intestinal en humanos (Coles et al., 2005: Bckhed et al., 2005).
Los tres grupos de microorganismos anaerobios utilizadores de H2 han sido
caracterizados a la fecha dentro del coln de los humanos, (las bacterias
Metanognica archae, sulfato reductoras y acetognicas). La enumeracin de los
diferentes tipos de bacterias permite clasificar a los individuos como excretores de
metano (CH4 +), cuando el metano fue detectado en el aliento (10-7, 10-8, hasta 10-10)
y no excretores de metano (CH4-).
Los correspondientes niveles de bacterias sulfato reductoras no fueron
significativamente diferentes entre los CH4+ y los CH4-. El conteo de las bacterias
acetognicas fue significativamente ms alta en los CH4- en comparacin con los
CH4+ y fue negativamente correlacionada con el conteo de las bacterias
metanognicas, lo que indica una interrelacin competitiva entre estos dos grupos de
microorganismos.
La versatilidad de las bacterias acetognicas parece una ventaja ecolgica
para el mantenimiento de una poblacin significativa dentro del coln humano. Se
enfatiza que la acetognesis reductiva en los CH4- representa hasta el 27% del
acetato producido dentro del coln (Dor et al., 1995b).

25

Se han aislado y caracterizado dos nuevas bacterias homoacetognicas

(cepas 1410 y 3110) que utilizan el hidrgeno del tracto gastrointestinal y por sus
caractersticas estan cercanamente relacionadas con Clostridium coccoides en un
99.6% (Kamlage et al., 1997).
Los componentes de la dieta que no son absorbidos en el tracto digestivo
superior alcanzan el coln, donde ellos son fermentados por una compleja microflora
anaerobia formando una cadena trfica. Esta degradacin anaerobia de la materia
orgnica conduce a la produccin de cidos grasos de cadena corta principalmente
acetato, propionato, butirato, hidrgeno, dixido de carbono y en algunos individuos
metano (Bernalier, et al., 1996b).

2.1.7.4 Ecosistema de aguas residuales.

La reconocida diversidad dentro de los grupos microbianos ha sido ampliada
debido al aislamiento de varias especies de diferentes ecosistemas, semejantes
como lodos residuales y sedimentos. A pesar de la diversidad filognetica de las
bacterias acetognicas utilizadoras de H2 todas derivan su energa por la ruta del
Acetil Coenzima A y de ese modo se dividen en un grupo especfico de actividades
enzimticas (Dor et al., 1995b).
Aunque las bacterias acetognicas son anaerobias obligadas, la deteccin
de poblaciones acetognicas viables en suelos aerbicos existen dentro de zonas
anaerbicas de suelo aerbico, y estas contribuyen a reciclar del carbono del medio
ambiente (Harriot y Frazer, 1997).

2.2 Sustentabilidad en la explotacin del avestruz.

Existen ms de 200 grandes especies herbvoras sobre la tierra y solo
aproximadamente 20 han sido domesticadas. El concepto del uso sustentable de la
vida salvaje es la poltica mundial, que sugiere y discute el rumbo de las
investigaciones para aprovechar el potencial crnico de las especies salvajes. Entre
estos se encuentra el ciervo rojo (Cervus elaphus), el antlope (Boselaphus
26

tragocamelus), el cerdo salvaje (Sus serosa), la llama (Lama glama), la Alpaca

(Lama pacos) y el avestruz (Struthio camelus). (Kile, 1994)
El cambio climtico mundial es inducido por los humanos en la composicin
atmosfrica, estas perturbaciones resultan primariamente de las emisiones
asociadas con el uso de la energa, urbanizacin y cambios en el uso de la tierra
(Thomas y Kevin, 2003). En el panel intergubernamental de 1995 se menciono que
no hay duda que debido al aumento en los gases de invernadero, la temperatura a
aumentado aproximadamente 0.3 a 0.6 C durante el vigsimo siglo (Zell, 2004).
En condiciones actuales en las que el calentamiento provocara cambios en
los patrones de lluvias, con consecuencias predecibles para la mayora de los
sistemas agropecuarios del mundo, el avestruz se presenta como un modelo de
animal que, por sus caractersticas de capacidad de adaptacin a las altas
temperaturas, facilidad de vivir con un mnimo de agua para beber y capacidad para
aprovechar alimentos con alto contenido de fibra, pudiera tener ms xito que la
mayora de los animales domsticos que hasta ahora se explotan (Lpez. 2002).
2.3 Sistema digestivo del avestruz.
El avestruz es un ave precoz que es capaz de alimentarse sola a las 48
horas de nacida, y ha desarrollado caractersticas nicas que le permiten la
degradacin de las paredes celulares en el tracto gastrointestinal. No presentan
buche, pero ha desarrollado el proventrculo y ventrculo que pueden jugar el papel
de almacn de alimento e iniciar la fermentacin de las paredes celulares como lo
demuestran la presencia de cidos grasos voltiles, 158.8 mM en el proventriculo y
139.3 mM en el ventrculo, (Fowler, 1991; Bezuidenhout, 1986; Swart, 1993a).

27

Cuadro 1. Proporcin de los segmentos del tracto digestivo.

segmento
Esfago
Prov. y Ventriculo
Intestino anterior
Duodeno
Jeyuno e leon
Intestino posterior
Ciegos
Int. Grueso
(Fowler, 1991)

Longitud
110 cm
35 cm

porcentaje
4.6%
1.5%

150 cm
700 cm

6,3 %
29.2 %

100 cm cada uno

1200 cm

8,4 %
50.1%

2.3.1 Alimentacin del avestruz.

Se han hecho varios estudios sobre los requerimientos nutricionales de los
avestruces, debido a la gran demanda de protena y energa para su rpido
crecimiento (Brown y Jones, 1996).
Se ha establecido el significado ecofisiolgico del agua y el transporte de
electrolitos por el intestino grueso del ave. Existen evidencias de pequeos cambios
en el contenido luminal de materia seca, donde la absorcin del agua esta vinculada
con el sodio y cidos grasos de cadena corta dentro del colon (Thomas, 1997).
Una investigacin preliminar en la nutricin de los pollos de avestruz en
condiciones intensivas, con cuatro dietas con diferentes niveles de protena (14%,
16%, 18% y 20%), demuestra que la velocidad de crecimiento fue ms alto con el
20% de protena promediando pesos de 9134 g, con el 18% de protena el peso fue
de 8754 g, con el 16% de protena el peso fue de 8440 g, y con el 14% de protena
promedio 5438 g. Se recomienda elevar el calcio del 1.5 al 2.5% y el nivel del fsforo
del 1 al 1.5% en la dieta, adicionando vitamina D (Gandini et al., 1986).
Poca informacin publicada est disponible sobre los valores nutricionales
de los alimentos que normalmente son usados para las dietas de avestruz. Los
valores establecidos para el maz (Zea mays) y la alfalfa (Medicago sativa) para
avestruces adultas y comparados simultneamente con gallos adultos Indican que

28

los avestruces son capaces de digerir la porcin fibrosa de las plantas (Cillier et al.,
1994).
Se investigo los valores de energa metabolizable y verdadera de cebada,
avena, triticale y maz entre avestruces y gallos adultos resultando en una mayor
digestibilidad de la materia seca en el avestruz.
Los valores de la energa metabolizable verdadera determinada por regresin
en avestruces fue de 13.92, 12.27, 13.21, y 15.22 MJ/ Kg para cebada, avena,
triticale, y maz respectivamente. Y para los gallos fue de 11.33, 10.63, 11.82, 14.07
MJ/ Kg. Lo que indica que el avestruz es capaz de utilizar ms eficazmente la fibra
que los gallos adultos (Cillier et al., 1997).
Se ha reportado que la digestibilidad de los nutrientes cambian con la edad, y
tienden a ser ms bajos en aves jvenes debido a los bajos niveles de enzimas
digestivas encontradas en el tracto intestinal al nacimiento y a las pocas semanas
despus de nacidos (ngel, 1994).
En otro estudio se determin que el paso del alimento por el tracto
gastrointestinal del avestruz es de 26 a 76 horas, promediando en conjunto 40.1 3.9
horas, y fue independiente del peso vivo (5 a 50 Kg.). De ms importancia y de modo
sorprendente fue la alta digestibilidad obtenida para la fibra neutro detergente, 47%,
y particularmente la hemicelulosa con un 66% y la celulosa con un 38%. La relativa
desaparicin de los nutrientes digeridos entre los diferentes sitios del tracto
gastrointestinal de los avestruces, demostr que cerca del 88% de la energa fue
digerida en el intestino delgado, y el 12% en el intestino grueso (Swart et al., 1993b).
Los sitios de mayor actividad y produccin de energa de cidos grasos
voltiles (AGV) en el avestruz fueron de 139.3 mM en el proventrculo, 158.8 mM en
molleja, 65-78 mM en el intestino delgado, 140 mM en los ciegos y 171-195 mM en el
colon distal. Cuantitativamente el acetato fue el AGV ms importante y esta presente
en el proventrculo, molleja e intestino delgado.
En el intestino grueso, el propionato y butirato estn tambin presentes,
junto con cantidades traza de isobutirato, isovalerato, y valerato. El cido lactico fue

29

bajo en proventrculo y molleja, 5.0 y 6.0 mM y alto en el intestino delgado, 66 y 51

mM. La concentracin de amoniaco en coln de 52-71 mM, nos indica una actividad
proteoltica bacteriana.
La velocidad de produccin de los AGV fue relativamente alta en el intestino
grueso 26 - 32.5 mM / h / 100 g de M.S. La diferencia principal entre la velocidad
proporcional de la produccin de acetato, propionato y butirato en el coln (83; 10; 7)
y la proporcin molar en las muestras de ingesta (92; 5; 3) calculado para mM / 100 g
de M.S. sugiere que la absorcin preferencial individual de los AGV puede ocurrir en
vivo en el orden de butirato, propionato y acetato.
La digestin experimental usando substratos marcado con C14 demuestra
que la produccin de acetato por la fermentacin del intestino posterior contribuye en
la produccin de energa. La digestibilidad de la celulosa fue del 38% y de la
hemicelulosa del 66%, contribuyendo con el 76% de los requerimientos de la energa
metabolizable de los pollos de avestruz en crecimiento (Swart et al., 1993a).

2.4 Biosntesis de las paredes celulares.

La variedad de caractersticas qumicas y estructurales de la pared celular
limitan su degradacin; las molculas de lignina, celulosa, hemicelulosa, molculas
de polisacridos, grupos acetilos y compuestos fenlicos, son los factores ms
consistentemente asociadas a la limitacin de la digestin de la pared celular por los
microorganismos del rumen. Existe evidencia de que la lignina y los cidos fenlicos,
son los responsables de la resistencia de las plantas a las enfermedades, a las
temperaturas bajas y a otros factores estresantes (.Akin, 1986; Carpita y Gibeaut,
1993). La presencia de iones de aluminio puede ocasionar modificaciones
estructurales que alteran su plasticidad y resistencia, as como la sobre vivencia y
crecimiento celular (Schildknecht y Benedicto 2002).
Las paredes celulares estan constituidos principalmente por: La celulosa. Es
el material orgnico ms abundante de la biosfera y como tal tiene un innegable
papel central dentro del ciclo global del carbono. Es el mayor componente del

30

material de la planta, comprendiendo del 10 al 40% de la materia seca y sobre la

mitad de las paredes celulares de la planta (Weimer, 1992).
La celulosa no se acumula en el ambiente, porque los hongos y las bacterias
degradan eficientemente la biomasa de las plantas, para proveerse de energa y
carbono, y por ltimo, reciclar el CO2 al ecosistema (tomme et al. 1995; Carpita y
Vergara, 1998).
La celulosa es uno de los constituyentes insolubles de la fraccin de fibra, y
estn unidos los polmeros con enlaces 1-4 de varios miles de unidades de glucosa
(Torre y Rodrguez, 1991), descritas como un compuesto de microfibrillas cristalinas
contenidas en una matriz amorfa similar al refuerzo de concreto, las cuales imparten
rigidez a la clula y contribuyen al tamao y a la morfologa de la pared celular
(tomme et al., 1995; Carpita, 1996; Baker et al., 2000), su hidrlisis enzimtica
plantea serios problemas y requiere la interaccin perfecta de los factores que
intervienen en su degradacin (Schwarz 2001).
La fraccin de la hemicelulosa comprende del 30 al 40% del total de
carbohidratos de la pared celular de las plantas (Atalla, 1993). La hemicelulosa es un
grupo de polisacaridos que consiste de una cadena lineal grande de xilosa, que vara
en cantidades de arabinosa, cido urnico y galactosa (Baldwin y Allison, 1983).
Su aprovechamiento depende de la formacin de enzimas producidas por los
microorganismos, como la polimeraza degradativa de los polisacaridos y la enzima
glucogenohidrolaza. Existen adems restricciones sobre su digestin (hospedero,
tipo de dieta, caractersticas de los polisacaridos y de las plantas), del nmero de
bacterias hemicelulolticas que existan en el ecosistema intestinal (rumen en los
bovinos), de la interaccin entre los diferentes microorganismos hemicelulolticos
(bacterias, protozoarios y hongos), de la capacidad de los microorganismos para
adherirse a las partculas de las plantas, y su velocidad de degradacin depender
de la localizacin celular de sus enzimas (intracelulares o extracelulares).

La

actividad especfica de las enzimas hemicelulolticas en el ecosistema intestinal,

aumenta hasta 20 veces dentro de un periodo de 24 horas, sin embargo hay un

31

periodo de retraso antes de alcanzar la mxima actividad (Williams, 1989; Chesson

et al., 1997).
La lignina, despus de la celulosa es el segundo polmero ms abundante
de la tierra, con un 30% del carbono orgnico de la biosfera. La habilidad para
sintetizar la lignina a sido esencial en la evolucin de adaptacin de las plantas de un
medio acutico a terrestre, y tiene un papel muy importante en el crecimiento de la
planta (Wout et al., 2003; Grabber, 2005)).
La lignina es una substancia de unin intraclular que se encuentra en
materia de origen vegetal, con una naturaleza amorfa muy compleja; tiene
compuestos fenolicos, polisacaridos, cido uronico, protenas y grupos metoxil e
hidroxil, (Torre y Rodrguez, 1991).
La lignina constituye un polmero de enrejado tridimensional formado por
unidades

estructurales

de

fenilpropanoides

derivados

de

los

compuestos

hidroxibenzoil (H), guaiacil (G), siringil (S) ensambladas por acoplamiento oxidativo
al alcohol hidroxicinimil. La presencia de unidades de G, G+S o H+G+S y su
concentracin dependen de su origen filogentico de las plantas vasculares. En los
pastos se considera que tienen un tipo de lignina con H, G, S. La proporcin de H, G,
S, tambin como muchas de las caractersticas estructurales varan con el origen
botnico, el rgano (tallo, hojas, vainas), el tejido y la localizacin en la pared celular,
(Atalla, 1993; Jean-Michel et al., 1994; Cornu et al., 1994).
La lignificacin limita la digestin de las paredes celulares de los pastos. La
manipulacin gentica de la lignificacin puede mejorar la degradacin de las
paredes celulares, pero el grado de xito podra depender de las bases genticas,
de las tcnicas de modificacin empleadas y de los mtodos analticos usados para
caracterizar las paredes celulares (Grabber et al., 2004b: J, Ralph 2004).
El maz es considerado como el modelo de planta ideal para realizar
investigaciones sobre lignificacin y digestibilidad de las paredes celulares (Barriere
et al., 2004).
Los polisacridos de las paredes celulares de las plantas estan parcialmente
ligados a compuestos fenolicos (Bunzel et al., 2004). Los compuestos fenolicos son
32

txicos para las bacterias, hongos y protozoarios, interfieren con la adherencia de las
partculas alimenticias. Los cidos fenolicos ms abundantes son, el cido pcoumarico (PCA), el cido ferlico (AF), unidos a la lignina por enlaces ter y ster.
Encontrndose en los forrajes a una concentracin de 93% de PCA y del 35 al 75%
de AF. Otros compuestos como cido p-OH benzoico, cido varilico, cido sirngico y
aldehidos con esqueleto de carbono C7 han sido encontrados en leguminosas y
gramineas (Cherney et al., 1989).
La pectina, es un heteropolisacarido que esta formado por una cadena
central de cido D-galacturonico, unidos por enlaces 1,4 fucosa, xilosa y
ramificaciones laterales de galactosa. Es uno de los componentes solubles de la fibra
y presentan una fuerte tendencia a la formacin del gel. Los cereales se caracterizan
por cantidades insignificantes de pectina (Torre y Rodriguez, 1991).
La cutcula, es resistente a la sujecin y algunos forrajes presentan entre el
18 al 24% de silica, que aumenta la rigidez de la capa externa impidiendo la digestin
(Akin, 1994). Normalmente las bacterias ruminales burlan estas barreras fsicas
ganando el acceso para abrigarse fcilmente en el tejido interno a travs del estoma
y reas daadas, iniciando la digestin desde el interior hacia fuera (Atalla, 1993).

33

III. MATERIALES Y MTODOS

3.1 Localizacin del rea de estudio.
El presente estudio se llev a cabo en el laboratorio de postgrado de la
Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, de la Universidad de Colima,
Ubicado en el Km 40 de la autopista Colima Manzanillo, a 1855 latitud Norte y
103 52 longitud oeste; a una altura de 33 msnm; c on una temperatura promedio
anual de 27 C y 710 mm de precipitacin (Anuario Estadstico del Estado de Colima,
1994).

3.2 Animales y condiciones de alimentacin

Se utilizaron 5 avestruces machos, los cuales fueron alimentados con una
dieta rica en paredes celulares (Cuadro 2) con una edad entre 12 a 14 meses. Cada
uno de los animales se coloc en corrales de 20 por 40 m2. En cada corral se coloco
un comedero y un bebedero. Los animales se adaptaron a la dieta por un tiempo de
30 das. El alimento se ofreci a las 8:00 y a las 16:00 h. El agua se ofreci a libre
acceso.
Cuadro 2. Composicin de la dieta de avestruces empleadas en el estudio.
Componentes
Rastrojo con maz
Alfalfa molida
Harina de pescado
Piedra caliza
Fosfato monocalcico
Cloruro de sodio

(g / Kg)
530
340
84
10
26
10

Anlisis Bromatolgico
Pc %
16.37
EM Mcal / Kg
2.25
Materia seca
86.68
Materia orgnica
87.12
Celulosa %
21.82
Hemicelulosa
14.12

34

3.3 Obtencin del inoculo

Las avestruces fueron aturdidas y sacrificadas. Despus se desangraron y
se les retir la piel, se abri la cavidad abdominal, se extrajeron las vsceras y se
separ el tracto gastrointestinal, se lig en la parte posterior del esfago y la parte
posterior del recto para evitar la salida del contenido intestinal como lo recomienda
(Sales y Oliver, 1996). Posteriormente las porciones del tracto gastrointestinal fueron
separadas utilizando dos ligaduras en cada uno de sus 5 segmentos, proventrculo,
ventrculo, intestino delgado, ciegos y colon (Swart et al., 1993a). Del contenido total
de la digesta de los diferentes segmentos se tomaron 5 g muestra, aplicando las
tcnicas de anaerobiosis, como se indica en Hungate (1966).

3.4 Preservacin y transporte de muestras.

Para la preservacin y el transporte de la muestra, se prepar el medio de
cultivo infusin cerebro-corazn, adicionando un 10% de glicerol. Se repartieron 45
ml en 5 frascos para dilucin adaptados con tapas con rosca. Se esterilizaron a 121
C por 15 minutos. A cada uno de ellos se aadi los 5 g de heces tomados
anteriormente y se procedi a aadir 1 g de agente reductor (Sulfato de Cisteina al
2.5%). Se homogenizaron las muestras e Inmediatamente los frascos fueron
etiquetados y colocados en un recipiente con hielo seco a una temperatura de 4C.
Se transportaron hasta el laboratorio donde se conservaron en refrigeracin a esta
misma temperatura, hasta el momento de siembra (Levet, 1991).

3.4.1 Preparacin de la solucin del agente reductor. (Braun et al., 1979)

Se disolvieron 12.5 g de csteina-HCl en 500 ml de agua bidestilada y gaseando con
CO2 en un frasco de Erlenmeyer; la solucin se ajust el pH a 9.5 con NaOH. Se
lavaron 12.5 g de cristales de Na2S * 9H2O en una bandeja de plstico y entonces se
transfiri hacia el frasco con cisteina. Aforando a 1000 ml con agua bidestilada y
presurizar con CO2. Se esteriliz en autoclave a 121 C por 15 minutos.

35

3.5 Preparacin de los medios de cultivo.

Para la preparacin de los medios de cultivo, se utilizo la tcnica de
anaerobiosis de Hungate (1966). Se peso en una balanza analtica los constituyentes
de cada medio de cultivo, y se clarificaron por calentamiento en una estufa de plato
caliente; al mismo tiempo se indujo la anaerobiosis con la aplicacin de bixido de
carbono. Cada medio de cultivo se esterilizo a 121 C por 15 minutos.
Posteriormente los diferentes medios de cultivo se transportaron a una
cmara de anaerobiosis, que contiene una mezcla de gases de hidrgeno, nitrgeno
y bixido de carbono. Al medio de cultivo se le agreg el sulfato de cisteina al 2.5%
como agente reductor para eliminar el oxgeno disuelto en el mismo, antes de la
inoculacin.

3.5.1 Preparacin del medio de fosfato-buffer para bacterias metanognicas.

Se disolvieron los componentes del medio (excepto vitaminas y agente
reductor) en agua bidestilada y se ajust el pH a 7.2 a 7.4, aadiendo 0.2% de la
solucin de resazurina (1 ml/1000 ml del medio). Se procedi a disolver el oxgeno
del medio por calentamiento bajo un chorro de gas de CO2. Repartiendo en los tubos
de ensayo presurizados con CO2 con un repartidor automtico 4.5 ml del medio
anaerbico. Se esterilizaron en autoclave por 25 minutos a 121 C. Una vez que los
medios se enfriaron se aadi una solucin de vitaminas filtrada y esterilizada, 0.1 ml
de fosfato buffer (15% de KH2PO4 + 29% de K2HPO4, pH de 7.0 a 7.1), y 0.2 ml de la
solucin de cistena al 2.5%. Sembrado en anaerobiosis estricta se incuba a 39 C
por 8 das (Morvan et al., 1994). Para evitar el crecimiento de otras bacterias se le
agreg penicilina y estreptomicina l mg de cada uno por cada ml del medio (Tokura
et al., 1997).
La efectividad del medio se comprob con la inoculacin de una muestra de
contenido ruminal de un caprino fistulado y alimentado con una dieta alta en paredes
celulares y con una gran poblacin de bacterias metanognicas, estas produjeron
gas metano en el espacio superior del medio de cultivo el cual produjo el
desplazamiento del embolo de una jeringa lubricada.
36

Cuadro 3. Medio general fosfato-buffer para bacterias metanognicas

Componentes
NaCl
MgCl2
NH4Cl
Sol. de minerales traza II
Sol. de vitaminas
Sulfato de cisteina al 2.5 %
Solucin de resazurina al 0.2 %
Aforr con agua bidestilada
(Levet, 1991)

Cuadro 4. Composicin de la solucin de vitaminas

Componentes
Biotina
cido Folico
B6 (Piridoxina) HCl
B1 (Tiamina) HCl
B2 (Riboflavina)
cido Nicotnico
cido Pantotenico
B12 cristalina (Cianocobalamina)
PABA (cido P-aminobenzoico)
cido lipoico
Afrar con agua bidestilada
(Greening y Leedle, 1989)

g/l
0.9 g
0.1 g
1.0 g
10 ml
10 ml
20 ml
1.0 m
1000 ml

g/l
0.002 g
0.002 g
0.010 g
0.005 g
0.005 g
0.005 g
0.005 g
0.001 g
0.005 g
0.005 g
1000 ml

Cuadro 5. Composicin de la solucin de minerales traza

Componentes
g/l
cido nitrilotriacetico
12.80 g
FeSO4 * 7 H2O
0.10 g
0.10 g
MnCl2 4 H2O
0.17 g
CoCl 2 6 H2O
0.10 g
CaCl 2 6 H2O
0.10 g
ZnCl2
0.2 g
CuCl 2 2 H2O
0.01
g
H2BO3
0.01 g
Na molybdate
1.0 g
NaCl
0.017
g
Na2SeO3
0,026 g
NiSO4 6 H2O
0.02 g
SnCl2
1000 ml
Agua bidestilada
_
(Levet 1991)
37

3.5.1.2 Procedimiento para preparar la solucin de minerales traza II

Se aadi el cido nitrilotriactico a 200 ml de agua bidestilada ajustando a
un pH de 6.5 con KOH. Agregando a esta solucin 600 ml de agua bidestilada, y
disolviendo los componentes en orden, aforando a un litro, y se almacen la solucin
presurizada con gas nitrgeno.

3.5.2 Preparacin del medio de postgates de las bacterias sulfato reductoras.

Las bacterias sulfato reductoras crecen mejor bajo condiciones ligeramente
alcalinos sobre un rango de ph relativamente limitado (7.2 a 7.8).
Cuadro 6. Medio de Postgates para el crecimiento de las bacterias sulfato
reductoras.
Componentes
g/l
KH2PO4
0.5 g
NASO4
1.0 g
NH4Cl
1.0 g
MgSO4 * 7H2O
2.0 g
1.0 g
CaCl2 * 6H2O
Lactato de sodio
3.5 g
Extracto de levadura
1.0 g
F2SO4 * 7H20
0.5 g
Arcorbato
0.1 g
Tioglicolato
0.1 g
Resazurina al 0.2%
1.0 ml
Sulfato de cisteina al 2.5%
20 ml
Aforar con agua bidestilada a
1000 ml
(Levet. 1991)

3.5.3 Preparacin del Medio de Cultivo AC-ll para Bacterias Acetognicas.

El medio de aislamiento que se utiliza para las bacterias acetognicas es el
Ac-ll, propuesto por Breznak y Switzer (1986), que se modific por Greening y Leedle
(1989).

38

Cuadro 7. Medio de cultivo Ac-II para bacterias acetognicas.

Componentes
g/l
NH4Cl
0.5 g
KH 2PO4
0.28 g
0.94 g
K2HPO4
KCl
0.16 g
0.02 g
MgSO47 H2O
Metales traza
10 ml
Vitaminas
10 ml
Extracto de levadura
0.5 g
Solucin de tungtato de sodio (10 uM)
1 ml
Incubar con fluido ruminal clarificado
100 ml
6.0 g
NaHCO3
50 mM
2-bromoetanosulfnico
Aforar con agua bidestilada a
1000 ml
(Breznak y Switzer, 1986)

3.6 Mtodo del nmero ms probable (NMP)

Una vez que se realizaron los medios de cultivo especficos para cada tipo
de bacterias. Se prepararon una serie de diluciones de 1-1 hasta 10-9 con pipetas
estriles en tubos que contenan el medio de cultivo lquido. Del mismo modo, se
inocularon 5 tubos de ensaye con medio de cultivo especfico para cada grupo
bacteriano de las 4 diluciones mas bajas, (10-8, 10-7, 10-6, 10-5). Se incubaron todas
las siembras por 7 a 14 das a 39 C evitando la luz. Al final se examin cada tubo
para evidenciar el crecimiento microbiano. La turbidez del medio de cultivo o la
presencia de un anillo superficial indica crecimiento microbiano (Dore, 1995a;
Dehority et al., 1989; M. Alexander, 1982).
Los aspectos tericos del calculo del mtodo del nmero ms probable
fueron revisados por Halvorson y Ziegler (1933) y Cochran (/1950). Citados por M.
Alexander (1982).
Para calcular el NMP de organismos de la muestra original, se selecciona
como p1 el nmero de tubos positivos dentro de la dilucin de menor concentracin,
en los que todos los tubos son positivos o en que gran nmero de tubos son
positivos, y dejar p2 y p3, que representan l nmero de tubos positivos de las dos
siguientes diluciones. Se procede a encontrar el cruce de p1 y p2 con la hilera de p3
39

que se localiza en la parte superior de la tabla. El punto de intercepcin es el nmero

ms probable de organismos dentro de la cantidad de la muestra original
representada en la inoculacin aadida en la segunda dilucin. Multiplicando este
nmero por el factor de dilucin apropiado obtenemos el valor del nmero ms
probable de la muestra original. (Anexo 1).

3.7 Diseo experimental. Para el presente estudio se utiliz un diseo

completamente al azar con un arreglo bifactorial. Donde el factor A= Cinco animales
el factor B= Cinco diferentes porcin del tracto intestinal (proventrculo, ventrculo,
intestino delgado, ciegos e intestino grueso).

3.8 Variables. Las variables a medir fueron el nmero de microorganismos de los

tres grupos de bacterias utilizadoras de hidrgeno en cada una de las porciones. La
cuantificacin fue el mtodo del NMP, con un medio de cultivo especifico para cada
grupo de bacterias.

3.9 Anlisis estadstico de los resultados. Los datos se analizaron, mediante un

anlisis de varianza. Los promedios fueron separados mediante la aplicacin de la
prueba de tukey al 0.05% de probabilidad. Lo anterior, mediante el paquete
estadstico SAS (SAS, 1985. Institute).

40

IV. RESULTADOS

4.1 Aislamiento y cuantificacin de bacterias metanognicas en las diferentes

porciones del tracto gastrointestinal del avestruz.
En el medio de cultivo especifico que se utiliz para el aislamiento y
cuantificacin de las poblaciones de bacterias metanognicas, por el mtodo del
NMP en el que se esperara la manifestacin de la presencia de bacterias
metanognicas con la produccin de metano, no se observ crecimiento durante las
4 semanas de incubacin, a 39 C por lo que los resultados de la cuantificacin de
las repeticiones, fue cero.

4.2 Aislamiento y cuantificacin de las poblaciones de bacterias acetognicas

en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz.
En el medio de cultivo Ac11 especfico para el aislamiento y cuantificacin de
las bacterias acetognicas por el NMP en el que se esperaba la manifestacin de
turbidez, presencia de sedimento o aumento en la produccin de acetato resulto
negativo durante todo el transcurso de las 3 semanas de incubacin, por lo que los
resultados en todas las repeticiones tambin fue cero para este grupo de bacterias.

4.3 Aislamiento y cuantificacin de las poblaciones de bacterias sulfato

reductoras en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz.
El medio de cultivo de postgates especifico para bacterias sulfato reductoras,
se observ crecimiento bacteriano debido a la presencia de un precipitado negro en
todos los tubos utilizados para su aislamiento y cuantificacin. Por lo que los
resultados se considero positivo para todas las porciones del TGI.

41

Cuadro 8. Anlisis de varianza para las poblaciones de bacterias sulfato

reductoras en las diferentes porciones del tracto gastrointestinal.
F.V.
Model
Error
C. Total

G. L.
4
20
24

S. C.

C. M.

78.3486534
95.3141520
173.6628054

19.5871634
4.7657076

Fc

Pr > F

4.11

0.0137

El anlisis de varianza reporta diferencias significativas entre las diferentes

porciones.
En la porcin del Intestino grueso se observa el mayor tamao de poblacin de 544 x
106, en seguida los ciego 446X106, luego el Intestino delgado con una poblacin de
157.2 x 106, le sigue proventrculo con 155.32 x106 y por ltimo el ventrculo con
110.14X106 (cuadro 9).

Cuadro 9. Nmero de bacterias sulfato reductoras / ml de muestra en las

diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz.
Porcin

Numero de bacterias

DE

Proventrculo

155320000 (ab)

2.1176428

Ventrculo

110140000 (b)

1.3572792

Intestino Delgado

157200000 (ab)

0.9648420

Ciego

446000000 (ab)

3.2829864

Intestino grueso

544000000

2.4068652

(a)

42

NMPde Sulfato reductoras/ml

Poblaciones de Sulfato reductoras

6.00E+08
6x108

(a)

5.00E+08
5x108

(ab)

4.00E+08
4x108
3.00E+08
3x108
2.00E+08
2x108

(ab)

1.00E+08
1x108

(b)

(ab)

0.00E+00
0
1

1= proventriculo, 2= ventrculo. 3= Int. Delgado, 4= ciegos, 5= int. grueso

Fig. 3. Promedio de los valores de las poblaciones de bacterias sulfato reductoras en

las porciones del TGI del avestruz.

43

V. DISCUSIN
Los resultados del estudio demuestran la hiptesis de la actividad microbiana
en cada una de las cinco porciones del tracto digestivo del avestruz est determinada
por la presencia y predominio de las bacterias sulfato reductoras utilizadoras de
Hidrgeno. Esta investigacin muestra que en el tracto digestivo del avestruz se
encuentra una gran poblacin de bacterias anaerobias que utilizan el hidrgeno, CO2
y los sulfatos como una de las rutas metablicas para proveerse de energa. La
cuantificacin por el mtodo del nmero ms probable nos da una estimacin rpida
de las bacterias utilizadoras de hidrgeno en las diferentes porciones del tracto
digestivo del avestruz. Los sulfuros es el producto final del metabolismo de las
bacterias anaerobias sulfato reductoras, y es detectado por el precipitado color
negro en el medio de cultivo (Dore et al., 1995a). Los resultados muestran que la ruta
de la sulfato reduccin es la terminal dominante en el proceso de aceptar electrones,
en las cinco porciones del tracto digestivo del avestruz. Resultados similares reporta
Ksel et al., (1999), en los sedimentos de hiervas marinas donde un rpido
ennegrecimiento de la raz de Halodule wrightii dentro del medio de agua de mar, es
indicativo de la actividad asociada de las bacterias sulfato reductoras. Resultados
similares reporta Deplancke et al., (2003) en donde la administracin de sulfatos en
el agua de bebida de ratones demostr que las bacterias sulfato reductoras se
localizan en todo el tracto gastrointestinal, y que la velocidad de la sulfato reduccin
fue significativamente ms grande en el ciego comparado con los otros segmentos
intestinales. La presencia de las bacterias SFR en el avestruz supone la existencia
de otros microorganismos anaerobios productores de hidrgeno que propician las
condiciones para reacciones bioqumicas termodinmicamente factibles como lo
indica Wolin (1982). No obstante la estabilidad de una comunidad microbiana
anaerobia depende del balance coexistente entre los microorganismos productores y
consumidores de hidrogeno Wolin y Miller (1982). Los resultados obtenidos
demuestran que las diferentes porciones del tracto gastrointestinal del avestruz
tienen diferentes tamaos poblacionales en las porciones evaluadas. La porcin del
intestino grueso presenta la mayor poblacin. Sin embargo a presencia nica de las
bacterias SFR en todas las porciones del tracto digestivo del avestruz, concuerda
44

con las encontradas en el colon de humanos por Gibson et al., (1988), donde
reportan que hay individuos con flora bacteriana SFR que predominan sobre la flora
bacteriana metangenica. Adems dentro de los individuos excretores de metano es
probable que las bacterias sulfato reductoras utilicen el lactato como equivalentes
transferidores de hidrgeno para dominar las bacterias metanognicas y sus
resultados revelan que la metanognesis y la sulfato reduccin son mutuamente
excluyentes dentro del ecosistema del colon. (Gibson et al., 1990). Huisingh, (1974),
Aisl bacterias sulfato reductoras a partir de fluido de rumen de ovejas alimentadas
con dietas conteniendo sulfato y utiliza una cepa aislada para su caracterizacin. En
los resultados presentados por este mismo autor la concentracin de bacterias
sulfato reductoras alcanza 2.1X107 bacterias por ml de fluido ruminal. Estos datos
anteriores son mas bajos que los resultados encontrados en esta investigacin ya
que las concentraciones de bacterias sulfato reductoras por gramo de contenido
intestinal es mayor y varia entre 110.14x106 en el ventrculo hasta 544x106 en el
intestino grueso. Tomando en consideracin que las avestruces presentan el habito
de la coprofaga, estas proporcionan por la descamacin epitelial del intestino,
mucina que es rica en sulfatos, lo cual propicia el medio adecuado para las bacterias
sulfato reductoras, que concuerda con los resultados que presenta Gibson et al.,
(1988), en donde en un sistema de cultivos continuos la suplementacin con mucina
aumenta significativamente el nmero de bacterias sulfato reductoras. Los resultados
presentados por lo tanto coinciden con los de Gibson et al., (1988), estos
investigadores concluyen que sus resultados obtenidos muestran que la sulfato
reduccin, la acetognesis y la metanognesis no ocurren concomitantemente, en
algunas porciones del tracto gastrointestinal de los humanos analizados, por lo tanto
en los sujetos no metanognicos al igual que en el avestruz no existe competencia
entre las bacterias sulfato reductoras y los otros dos grupos de bacterias utilizadoras
de hidrgeno. Los resultados publicados por Gibson et al., (1990) muestran que la
rutas metablicas de las bacterias sulfato reductoras, metanognicas y cetognicas
fueron fuertemente influenciadas por el pH. La sulfato reduccin fue ptima a pH
alcalino, la produccin de metano fue mxima a pH neutro y la acetognesis fue
favorecida en condiciones cidas. Estos resultados estan de acuerdo con las

45

mediciones del pH reportadas por Swarts et al., (1993a), en las diferentes porciones
del tracto gastrointestinal del avestruz. En donde el valor vara desde 1.6 en el
proventriculo, 2.1 en el ventrculo, 6.9 en intestino delgado y ciegos, colon proximal
de 7.2 y el colon distal de 8.2. Las

poblaciones de bacterias sulfato reductoras

encontradas en el colon proximal y distal en esta investigacin coinciden en que las

bacterias sulfato reductoras se ven favorecidas por los valores del pH. Sin embargo,
el tamao de las poblaciones encontradas en las dems porciones que presentaron
cambios significativos pueden explicar el hecho publicado por (Hansen, 1994), quien
menciona que las bacterias sulfato reductoras son consumidoras de cido lctico y al
parecer este compuesto se encuentra presente en concentraciones ms altas que las
dems, por lo que puede ser posible que debido a la presencia de cido lctico y
sulfatos las bacterias sulfato reductoras predominan. Christl et al., (1992) reporta que
en el colon del humano las poblaciones de bacterias sulfato reductoras,
metanognicas y acetognicas varia en cuanto a la dieta. Los resultados
presentados por Stwart et al., (1993a) mencionan que los microorganismos que
habitan el tracto gastro intestinal del avestruz son ms hemicelulolticos que
celulolticos, por lo que tienen ms capacidad de hidrolizar y fermentar el xilano. Los
resultados publicados por Butine y Leedle, (1989), muestran que en el colon existen
el doble de poblaciones de bacterias hidrolizadoras y fermentadoras del xilano y
tambin mencionan que en este porcin las bacterias sulfato reductoras, son mas
abundantes por lo que tomando en cuenta los resultados de esta investigacin, es
posible deducir que la interaccin entre bacterias hemiceluloliticas y sulfato
reductoras est presente en forma predominante en estos ecosistemas cuando las
dietas son altas en contenido de hemicelulosa. Brune, (1998), demostr que las
bacterias intestinales de las termitas pueden llevar a cabo la sntesis de acetato a
partir del CO2 e H2 y las termitas por si mismas producen una sustancia (s) que
inhibe la metanognesis o estimula la acetognesis, o ambas. Por lo que es posible
que estas condiciones y mecanismos de inhibicin estn presentes en el tracto
gastro intestinal de avestruz. Morvan et al., (1996a), reportan un leve incremento en
la degradacin de la celulosa por Ruminococcus albus en interaccin con bacterias
sulfato reductoras. A diferencia con el efecto negativo observado sobre la

46

degradacin de la celulosa por Ruminococcus. flavefaciens en interaccin con

bacterias sulfato reductoras. Tambin mencionan que la interaccin con el hongo
Necallimastix frontalis inhibe la degradacin de la celulosa, por lo que es posible que
la presencia de un mayor nmero de bacterias hemicelulolticas presentes en las
porciones del tracto gastrointestinal del avestruz y reportada por Stwart et al.,
(1993a) permita la interaccin sinrgica con las bacterias sulfato reductoras y la
inhibicin de las bacterias acetognicas y metanognicas.
En base a los resultados obtenidos es posible sugerir ms investigaciones
que aclaren cuales son los gneros y especies de bacterias que pueblan estos
ecosistemas. Del mismo modo investigaciones que aclaren si estos habitats
contienen protozoarios y hongos productores de hidrgeno y los tipos de
interacciones que se promueven.
De la misma manera investigaciones que puedan demostrar cuales son las
condiciones

ambientales

que

prevalecen

en

estas

porciones

de

tracto

gastrointestinal, cual es la fuente de azufre utilizada por estas bacterias, de donde

proviene y como se mantiene el nivel ptimo para el predominio de estas
poblaciones.
Con base a los resultados obtenidos puede suponerse que: el tracto
gastrointestinal del avestruz el contenido de azufre es alto, en relacin al nitrgeno y
carbono presente en la dieta por lo que faltaran investigaciones para determinar la
presencia de azufre y su forma qumica en que se encuentra presente, as como
tambin la fuente de suministro. As mismo estudios que demuestren el hecho que
las bacterias presentes en estos ecosistemas no son productores de metano, para
poder afirmar que esta especie es susceptible de explotar sin los efectos adversos al
ambiente en cuanto a la produccin de gases de invernadero producidos por los
rumiantes.
Por lo que es posible plantear futuras investigaciones para evaluar las
interacciones entre los diferentes microorganismos que pueblan las diferentes partes
del tracto gastrointestinal del avestruz y las bacterias sulfato reductoras. As como
tambin aislar, identificar y clasificar los diferentes gneros de bacterias utilizadoras
47

de celulosa, hemicelulosa y pectina presentes en estos ecosistemas. Adems la

densidad de poblacin de cada una de ellas.

48

VI. CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos en la presente investigacin permitieron confirmar la
hiptesis de que la fermentacin observada en el tracto gastrointestinal del avestruz
utiliza como terminales de hidrgeno a las bacterias sulfato reductoras.
Las bacterias sulfato reductoras se encuentran en todas las porciones de
tracto digestivo, aunque en menor cantidad en el ventrculo.

49

VII. LITERATURA CITADA

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(Cochram, 1950)
p1
0
0
0
0
0
0

p2
0
1
2
3
4
5

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0.17

5
0,09
0.11
0.13
0.15
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3
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