PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE OPERACIN (PNO)

Datos generales del PNO

Nombre del PNO: Hemocultivo

EQUIPO 5

Elaboracin y/o actualizacin del PNO:

Responsable: analista
Frecuencia: anual

Fecha de emisin: sbado, 11 de

diciembre de 2010

Vigente a partir de: lunes, 13 de diciembre de

2010

Departamento rea Bacteriologa

Frecuencia de aplicacin del PNO: Cada que

se recibe y procesa una muestra para
hemocultivo

Prxima revisin: martes, 13 de

diciembre de 2011

Contenido
pgina
Datos generales del PNO ............................................................................................................... 1
1.0 Autorizaciones .......................................................................................................................... 2
2.0 Objetivo ...................................................................................................................................... 2
3.0 Alcance ...................................................................................................................................... 2
4.0 Responsabilidades ................................................................................................................... 2
5.0 Definiciones ............................................................................................................................... 3
6.0 Seguridad .................................................................................................................................. 5
7.0 Equipo, materiales y reactivos................................................................................................. 5
8.0 Desarrollo del procedimiento .................................................................................................. 5
9.0 Criterios de aceptacin .......................................................................................................... 10
10.0 Referencias bibliogrficas ................................................................................................... 10
11.0 Formatos y anexos ............................................................................................................... 11

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N de revisin:

Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

1.0 Autorizaciones

Elabor:
Nombre:
Puesto:
Antonio de Jess
Estudiante
Solrzano Calvario

Firma:

Fecha:
lunes, 13 de
diciembre de 2010

Firma:

Fecha:

Revis y Aprob:
Nombre:
Q.F.B. Juan Antonio
Flores Cornejo

Puesto:
Profesor de la Materia
control de calidad
farmacutico y biolgico

lunes, 13 de
diciembre de 2010

Revis y Autoriz:
Nombre:

Puesto:
Firma:
Responsable del
MQC. Lorena
Laboratorio de vinculacin
Berenice Godoy Meja
Anlisis clnicos y
Bacteriolgicos
MQC. Ma. Dolores
Daz de Len

Responsable del area de

Bacteriologa.

Fecha:
lunes, 13 de
diciembre de 2010

lunes, 13 de
diciembre de 2010

2.0 Objetivo
Indicar los mtodos adecuados para la correcta toma y procesamiento de muestras para
Hemocultivo. Describir la tcnica de siembra de hemocultivo para el aislamiento de bacterias
causantes de infecciones del torrente sanguneo.

3.0 Alcance
Se aplica para el aislamiento bacteriano a partir de hemocultivos en el diagnstico bacteriolgico
de infecciones del torrente sanguneo. Mtodo para la toma de la muestra, conservacin y
transporte de la misma.

4.0 Responsabilidades
4.1
Es responsabilidad del jefe del laboratorio:
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N de revisin:

Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

4.1.1 Planificar las acciones, organizar, controlar y capacitar al personal para cumplir las
disposiciones contenidas en el presente PNO
4.1.2 Asegurar el control interno de la calidad, la idoneidad del personal, equipos, materiales,
reactivos e instalaciones.
4.1.3 Asegurar la correcta disposicin de los RPBIs
4.1.4 Asegurar la confiabilidad de los resultados emitidos por los analistas
4.2
Es responsabilidad del profesional analista encargado, prestadores de servicio social y
practicantes profesionales:
4.2.1 Seguir los pasos y recomendaciones indicados en este PNO al realizar un hemocultivo
4.2.2 Trabajar con higiene y cuidado para evitar contagios innecesarios
4.2.3 Manejar con precaucin las muestras biolgico-infecciosas
4.2.4 Mantenerse actualizado y capacitado en la realizacin de un hemocultivo
5.0 Definiciones. Se obtuvieron de una nica fuente bibliogrfica (10.2.2)
5.1 Absceso: Acumulacin localizada de pus en un tejido u rgano.
Aerbico: Un organismo que requiere oxgeno o aire atmosfrico para su crecimiento y
5.2
reproduccin.
Aglutinacin: Reaccin por la que se provoca la agrupacin de partculas, bacterias y
5.3
clulas suspendidas en un medio lquido.
Aislamiento primario: Desarrollo inicial de microorganismos a partir de una muestra
5.4
clnica
5.5 Antimicrobiano: Agente biolgico o qumico que inhibe el crecimiento de microorganismos
5.6 Asepsia: Desinfeccin de un tejido vivo o piel.
Bacteria: Microorganismo unicelular microscpico perteneciente a los procariotes que se
5.7
multiplica por fisin binaria y carece de clorofila. Se diferencian por la coloracin de Gram.
Bacteria Gram negativa: Aquellas bacterias que no retienen el colorante primario (violeta
5.8 de genciana o cristal violeta) en el mtodo de Gram son decoloradas por el alcohol y toman
el color del colorante contraste (safranina o fucsina) dando un color rojizo.
Bacteria Gram positiva: Aquellas bacterias que retienen el colorante primario del mtodo
5.9 de Gram, resisten la decoloracin por el alcohol y no son coloreadas por el colorante de
contraste reteniendo el color azul prpura inicial.
Bacteriemias: presencia de bacterias en la sangre. Las bacteriemias no demostradas son
frecuentes y por lo general desaparecen espontneamente. El diagnstico se realiza por
5.10
hemocultivo; cuando se instaura el tratamiento antibitico debe ser especfico para el
organismo detectado y para la localizacin de la infeccin de comienzo.
Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad
5.11 humana y del ambiente frente a diferentes riesgos producidos por agentes biolgicos,
fsicos, qumicos o mecnicos.
Cepa bacteriana: Cultivo puro de bacterias formada por los descendientes de un solo
5.12
aislamiento.
Colonia: Crecimiento visible de microorganismos, generalmente en medios slidos,
5.13 originado por la multiplicacin de un solo organismo. Todos son la progenie de una nica
bacteria preexistente.
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N de revisin:

Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

Coloracin Gram: Mtodo de tincin basado en la propiedad de retener o no el colorante

5.14 cristal violeta en la pared celular bacteriana debido a su composicin bioqumica despus
de ser sometido a un tratamiento de decoloracin
Desinfeccin: Destruccin de las formas vegetativas de las bacterias en objetos
5.15 inanimados. Se realiza con agentes qumicos en estado lquido o con agua a temperaturas
superiores a 75 C.
5.16 Desinfectante: Agente qumico utilizado para el proceso de desinfeccin.
Esterilizacin: Proceso validado que permite la eliminacin de toda forma de vida
5.17 microbiana incluyendo endosporas bacterianas. Puede conseguirse por medio de mtodos
qumicos, fsicos o gaseosos.
Hemlisis: Presencia de restos de eritrocitos lisados alrededor de una colonia desarrollada
5.18
en una placa de sangre de carnero.
Hemlisis alfa: Las colonias estn rodeadas por una destruccin parcial de los eritrocitos y
5.19 prdida de algo de hemoglobina en el agar lo que resulta en una coloracin verde
(hemlisis incompleta).
Hemlisis beta: Las colonias estn rodeadas por una zona de hemlisis completa (clara,
5.20
transparente) debido a una destruccin total de los eritrocitos.
Incubacin: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables para su
5.21
desarrollo y multiplicacin.
Infeccin: Invasin y multiplicacin de microorganismos en un husped, pudiendo
5.22 progresar hacia una enfermedad. El trmino enfermedad infecciosa se aplica cuando
aparecen signos y sntomas como resultado de la infeccin.
Medio de cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas necesarias para el crecimiento y
5.23 multiplicacin de las bacterias in vitro, que puede encontrarse en estado slido, semislido
o lquido.
Metabolismo: Proceso de degradacin y biosntesis enzimtica que tiene lugar dentro de
5.24
una clula y por medio del cual se mantienen las actividades nutricionales y funcionales.
Micraeroflico: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia de una tensin
5.25
del 5% de oxgeno, 10% de anhdrido carbnico y 85% de nitrgeno.
5.26 Microorganismo viable: Es aquel que es capaz de reproducirse.
Septicemia: infeccin sistemtica caracterizada por la aparicin de patgenos en sangre
circulante procede de una infeccin localizada en cualquier parte del organismo. Se
5.27
diagnostica por hemocultivo y debe tratarse energticamente con antibiticos. Tpicamente
la septicemia produce fiebre, escalofros, postracin, dolor, cefalea, nuseas o diarrea.
Siembra primaria: Inoculacin de una muestra a un medio de cultivo simple, selectivo o de
5.28
enriquecimiento.
Subcultivo: Pasaje de bacterias viables derivadas de otro cultivo a un medio de cultivo
5.29
nuevo.
5.30 UFC: Unidad formadora de colonia.

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N de revisin:

Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

6.0 Seguridad
6.1
Medidas de seguridad
6.1.1 Observar las precauciones universales al manejar muestras de sangre.
6.1.2 Usar guantes al manejar cualquier fluido corporal.
6.1.3 Si es posible hacer todo el procedimiento en cabinas de bioseguridad, o, en su defecto,
utilizar una pantalla transparente para manipular la muestra.
6.1.4 Descartar las jeringas, agujas y otros objetos punzantes contaminados en un recipiente
especial.
6.2
Equipo de seguridad
6.2.1 Cubre boca
6.2.2 Cofia
6.2.3 Guantes de ltex estriles
6.2.4 Lentes de seguridad
6.2.5 Bata
7.0 Equipo, materiales y reactivos

7.1 Equipo
7.1.1 Incubadora
7.1.2 Mechero Bunsen o Cabina de flujo laminar
8.0 Desarrollo del procedimiento

8.1 Fundamento
El hemocultivo es un procesamiento bacteriolgico que se practica en los casos de septicemia, y
que trabajado en forma adecuada suele ser de gran ayuda en el diagnstico de algunas
enfermedades de origen bacteriano.
Sin duda alguna el hemocultivo constituye un importante factor diagnstico en diversas y
numerosas infecciones que presentan bacteriemias transitorias e intermitentes, en las cuales las
bacterias se encuentran en pequeas cantidades.
Los hemocultivos dan una proporcin mas elevada de resultados positivos cuando el muestreo
cumple con ciertos requisitos; tal vez sea el procedimiento bacteriolgico ms exigente en lo que
representa a lo que se refiere al muestreo correcto, del cual depende grandemente el xito del
aislamiento de los microorganismos.
Dado que la tasa de mortalidad por septicemia puede ser de 40% o ms en ciertos pacientes
internados, la recuperacin a tiempo de bacterias de la sangre del paciente (bacteriemia) puede
tener un gran significado diagnstico y pronstico.

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Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

8.2 Indicaciones
8.2.1
Debe obtenerse la muestra antes de iniciar cualquier tratamiento con antimicrobianos.
8.2.2
La proporcin entre el volumen de sangre obtenida y el volumen de caldo de cultivo
debe estar en una relacin de 1:5 1:10.
8.2.3
Se debe seleccionar un sitio diferente de puncin en cada toma de muestra.
8.2.4
Evitar sangrar de va intravenosa o catter arterial a menos que haya una sospecha de
sepsis por catter.
8.2.5
El volumen de sangre depender de la edad del paciente; por cada venopuncin se
recomienda:
Adultos: 10 30 mL
Nios: 1 5 mL
Lactantes: 1 2 mL
Neonatos: 0,5 1 mL
8.2.6
En sepsis: Se debe tomar dos o tres muestras de lugares diferentes en un lapso de
diez minutos.
8.2.7
En endocarditis aguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes en un lapso de
1 a 2 horas.
8.2.8
En endocarditis subaguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes a intervalos
de al menos quince minutos. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener tres
muestras ms.
8.2.9
En fiebre de origen desconocido: Obtener dos o tres muestras de lugares diferentes
con diferencia de una hora o ms entre una y otra muestra. Si el cultivo es negativo a
las 24 horas, obtener dos a tres muestras ms.
8.2.10
Pacientes con tratamiento antimicrobiano:
a) Extraer 6 muestras durante 48 horas.
b) Recolectar muestras inmediatamente antes de la siguiente dosis de antibitico.
8.2.11
Fiebre de origen oscuro: (abscesos ocultos, fiebre tifoidea, brucelosis):
a) Obtener 2 muestras separadas al inicio. Despus de 24 a 36 horas obtener 2 ms
antes del aumento en la temperatura corporal.
b) Los rendimientos positivos ms all de 4 hemocultivos son mnimos.
8.2.12
El uso de la botella anaerbica es una prctica que se recomienda cuando hay
sospecha clnica de infeccin por anaerobios. Segn algunos autores, el uso de dos
botellas aerbicas mas el cultivo selectivo por anaerobios puede incrementar en un 6%
el nmero de aislamientos clnicamente importantes.

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Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

8.3 Recomendaciones
8.3.1
Tomar la sangre en el momento en que la temperatura del paciente se encuentra
elevada (es decir media hora antes del pico febril) u otros sntomas de infeccin activa,
y lo ms cerca del principio clnico de la enfermedad, etapa en la que se hara el
muestreo ms adecuado
8.3.2
La obtencin de rutina de tres hemocultivos en 24 horas nos da como resultado un
aumento significativo de resultados positivos.
8.3.3
Tomar las tres muestras en periodos diferentes esto es antes, durante y despus del
pico febril.
8.3.4
En los casos de bacteriemias de ser necesario practicar hemocultivos durante varios
das.
8.3.5
Alternativamente, las muestras pueden obtenerse de acuerdo con el caso. Por ejemplo:
Bacteriemias continuas: en cualquier momento, ejm. Endocarditis.
Bacteriemias intermitentes: Una hora antes del pico febril, ejm. Brucelosis.
8.4
8.4.1
8.4.2

8.4.3

8.4.4

Profesional
analista

8.4.5
8.4.6

8.4.7

8.4.8
8.4.9

Toma de la muestra
Elegir la vena palpando la piel antes de desinfectarla.
Limpiar la piel alrededor del lugar donde se har la puncin, en un crculo
de 5cm de dimetro haciendo la limpieza del centro a la periferia, con
alcohol al 70% y menthiolate, frotando vigorosamente.
Aplicar yodo al 2% crculos crecientes comenzando por el centro hasta
cubrir con yodo toda la superficie anterior. Deja actuar el yodo durante 1
minuto por lo menos. El tiempo es crtico, debe usarse un reloj o un
timbre.
Si el sitio deber ser tocado por tcnico, ste debe desinfectar sus dedos
en la misma forma.
Insertar la aguja en la vena y extraer 10ml de sangre.
Una vez extrada la aguja, debe limpiarse el rea nuevamente con alcohol
al 70% ya que muchos pacientes son sensibles al yodo.
-Transferir la sangre a los frascos a travs del diafragma o del tapn
previamente desinfectado y seco.
Utilizando los siguientes medios:
Medio slido lquido
Infusin de cerebro y corazn con o sin PABA y agar
Caldo soya tripticasa
Caldo teoglicolato 135C
Caldo glucosado con 0.05% de lquido
Mezclar la sangre con el medio de cultivo para evitar coagulacin.
Llevar 1ml de sangre extrada a un tubo conteniendo alguno de los
siguientes medios, fundidos y enfriados a 45C
Agar soya tripticasa
Eugonagar
Agar Columbia
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N de revisin:

Profesional
analista

Hemocultivo

8.4.10

Mezclar bien y hacer vaciado en placa.

8.5

Transporte
Este proceso debe ser realizado en el laboratorio o por un profesional de
la salud con el conocimiento de la tcnica.

8.5.1
8.6

Profesional
analista

Laboratorio de
Bacteriologa

8.6.1
8.7
8.7.1
8.7.2

8.7.3

8.7.4

Profesional
analista

8.7.5

8.7.6

8.7.7

8.7.8

Conservacin
Solo para el analista debe conservar los hemocultivos hasta por 30 das
antes de dar un resultado negativo
Procesamiento de la muestra
Incubar a 37C durante siete das observando si existe turbidez en el
medio.
Incubar a 37C las botellas o matraces (en posicin inclinada si el medio
es slido-lquido) y placas a 37C y en atmsfera de CO2 si se desea o
se requiere.
Observar diariamente, agitando los medios lquidos suavemente despus
de observarlos y colocar el medio slido-lquido en posicin horizontal
durante 30 minutos para baar el medio slido con la mezcla del medio
lquido y sangre y volver a incubarlo en posicin vertical.
la observacin de los medios de cultivo consiste en:
-si se observa turbidez en el caldo y el medio slido la germinacin al
frasco se le acopla un tapn o capucha por el cual saldrn solo la
cantidad de medio que se requiera sin que se contamine el resto del
medio.
-cambio de color en la sangre (normalmente depositada bajo la forma
de una capa roja en el fondo del recipiente o sobre la superficie del medio
slido en el medio doble).
-hemlisis
-formacin de burbujas en el caldo.
-cuando se observe germinacin bacteriana, preparar frotis, teidos al
Gram.
conforme los resultados obtenidos en la observacin microscpica.
Proseguir la identificacin mediante subcultivos en agar sangre, medios
de aislamiento selectivo diferencial (EMB, agar sulfito de bismuto, agar
MacConkey) y medios para las pruebas bioqumicos diferenciales.
Los hemocultivos deben examinarse de menos cada 48 horas. Despus
de las 24 horas de incubacin.
se retira una gota del cultivo, con todas las precauciones de asepsia, con
un asa o jeringa pequea, con este material se siembra en una agar
sangre una placa en anaerobiosis y otra en aerobiosis o incluye en CO2
si los cultivos son negativos a las 24 horas.
se repite el estudio a los 14 y 21 das antes de desechar los medios.
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N de revisin:

Hemocultivo

8.7.9

Antes de desechar el frasco del medio slido-lquido se recomiendo hacer

una resiembra en un caldo teoglicolato observar germinacin y realizar la
identificacin.

8.7.10

Practicar antibiograma a las cepas patgenas aisladas.

8.7.11

No debe de dar por negativo un hemocultivo hasta despus de 30 das de

no observar crecimiento alguno.

8.8
8.8.1

Reporte de hemocultivos
Reporte verbal.
a) Telefonear inmediatamente despus de confirmar un cultivo positivo
por Gram.
b) Indicar el nombre de la persona que llam, la fecha y hora de la
llamada.
c) Proveer el mximo de informacin posible: nmero de muestras
positivas, morfologa y arreglo microscpico, cultivos positivos de otros
sitios anatmicos. Un reporte de cocos Gram-positivos en cadenas es
ms til que uno de cocos Gram-positivos solamente. Un reporte de E.
coli a partir de un urocultivo y un bacilo Gram-negativo en el hemocultivo
pueden sugerirle al clnico la posible fuente de infeccin.
Reporte escrito.
a) Proveer una copia de todos los resultados preliminares (no crecimiento
o positivos por Gram).
b) Proveer una copia de los resultados finales.
c) Indicar la duracin de la incubacin en los reportes negativos: No
crecimiento a los 7 das
d) Reportar identificacin y antibiograma de los cultivos positivos.

8.8.1.1
8.8.1.2

Profesional
analista

Laboratorio de
Bacteriologa

8.8.1.3

8.8.2
8.8.2.1
8.8.2.2
8.8.2.3
8.8.2.4

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N de revisin:

Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

9.0 Criterios de aceptacin

9.1

Flora normal y flora patgena

FLORA NORMAL

9.2

GRAM POSITIVOS

Negativo

GRAM NEGATIVOS

Negativo

FLORA PATGENA
Cualquier bacteria que se
encuentra
Cualquier bacteria que se
encuentra

Valores normales

9.2.1 Negativo
Al observar los medios, si no se observan las alteraciones el cultivo es negativo, que son
evidentes en los casos positivos.
Debe tenerse presente que la incubacin prolongada de la sangre en un hemocultivo,
9.2.3 usualmente provoca la desintegracin de los eritrocitos lo que causa turbiedad y cambios
de color, an en presencia de germinacin bacteriana.
Es fcil comprobar la contaminacin de un hemocultivo por el aspecto del crecimiento y
morfologa microscpica de los grmenes banales, cuyo resultado puede ser la causa de
9.2.4
una esterilizacin incorrecta del equipo, aseo deficiente de la piel, exposicin prolongada al
aire fuera de la llama, la siembra del medio de cultivo e inoculo.
9.2.2

10.0 Referencias bibliogrficas

10.1
10.1.1
10.1.2
10.1.3
10.2

10.2.1

10.2.2
10.2.3

Documentos mandatorios
NORMA Oficial Mexicana NOM-045-SSA2-2005, Para la vigilancia epidemiolgica,
prevencin y control de las infecciones nosocomiales.
Koneman E, Allen S, Dowell V, Sommers H. Diagnstico microbiolgico. 3a ed., Buenos
Aires. Editorial Mdica Panamericana. 1992.
Murray, P. R. (Ed.). Manual of Clinical Mcrobiology, Sixth Edition. 1995. American Society
for Microbiology: Washington,D.C.
Fuentes bibliogrficas adicionales consultadas
Miller J. Michael, Holmes H. Specimen collection, transport and storage. En: Murray PR,
Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC. Yolken RH. Manual of Clinical Microbiology. 7a ed.
Washington DC: American Society for Microbiology; 1999. pp 33 63.
Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico
de infecciones respiratorias agudas. Curso Terico Prctico. En: Diagnstico de
laboratorio de infecciones respiratorias agudas y enterovirus. Lima. 1999.
Bone, R. C. Gram-negative sepsis: a dilemma of modem medicine. 1993. Clinical
Microbiology Reviews, 6:57-68.
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N de revisin:

Laboratorio de
Bacteriologa

Hemocultivo

11.0 Formatos y anexos

11.1 Formatos
Nombre del formato

11.2 Anexos
Anexo

A
B
C
D
E
F
G

Cdigo

Nombre
Cuadro 1. Definiciones en la sepsis por Gram-negativos
Cuadro 2. Factores de nesgo en sepsis
Cuadro 3.Manejo clnico de la sepsis
Cuadro 4. Agentes etiolgicos de endocarditis infecciosa
Cuadro5. Sistemas de hemocultivos automatizados y
computarizados
Cuadro 6. Signos visibles de crecimiento en hemocultivos
Diagrama de flujo

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N de revisin:

Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

ANEXO A

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Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

ANEXO B

ANEXO C

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Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

ANEXO D

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Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

ANEXO E

ANEXO F

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Hemocultivo

Laboratorio de
Bacteriologa

ANEXO G

Diagrama de flujo:

Muestra
Obtenida

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