INTRODUO

O diagnstico de certeza de um processo infeccioso a demonstrao do patgeno ou

de seus produtos nos tecidos ou fluidos biolgicos do hospedeiro. Porm nem sempre isso
possvel, quer pela ausncia do agente infeccioso, quer pela falta de sensibilidade dos
mtodos utilizados, ou por falhas tcnicas ou pelos longos perodos exigidos para uma
resposta do laboratrio. Os mtodos imunolgicos diretos ou indiretos tm sido
amplamente utilizados para suprir as deficincias dos mtodos parasitolgicos ou
microbiolgicos na pesquisa de antgenos, anticorpos ou imunocomplexos, pela rapidez,
simplicidade de execuo, possibilidade de automao e baixo custo operacional. O
conhecimento da aplicao dos testes sorolgicos e a interpretao correta dos resultados
obtidos so fundamentais para clnicos, patologistas e laboratoristas orientarem seu
trabalho visando o diagnstico correto, associando sempre os resultados obtidos s
investigaes clnicas e epidemiolgicas.
Na pesquisa de anticorpos, os testes sorolgicos tm sido utilizados com sucesso como
auxiliares importantes no diagnstico individual ou em inquritos soroepidemiolgicos,
devido s suas mltiplas possibilidades de emprego.

PRECIPITAO
As tcnicas de imunoprecipitao, baseadas na quantificao de precipitados formados
pela reao antgeno-anticorpo, comearam em 1897, Rudolf Kraus, em Viena, ralatou a
precipitao que ocorria pela interao de antgenos solveis e seus anti-soros
correspondentes e, em 1905, Bechhold, na Alemanha, apresentou seus experimentos
sobre imunoprecipitados em gis.
A quantidade de precipitado formado quando, a uma concentrao constante de
anticorpo, se vai adicionando antgeno caracterizada por uma curva parablica, descrita
por Heidelberger e Kendall em 1935. Essa quantidade de precipitado depende de vrios
fatores fsico-qumicos e imunolgicos, mas principalmente das concentraes relativas
do antgeno e do anticorpo. Quando as quantidades de antgeno e de anticorpo so
equivalentes, a precipitao mxima, decrescendo quando h excesso de antgeno ou de
anticorpo. Precipitados j formados podem se dissolver quando expostos a um excesso de
um dos reagentes, devido reversibilidade da ligao antgeno-anticorpo. O fenmeno de
prozona ocorre quando h um excesso de anticorpo e pode causar um erro de interpretao
dos resultados, sendo necessrio que se faa uma titulao do anticorpo com quantidades
fixas de antgeno, para evitar tais erros.

Imunodifuso
A difuso de uma substncia solvel em um meio fluido um processo pelo qual a
substncia transportada, de uma parte para outra, como resultado do movimento
molecular ao acaso. A difuso pode ser efetuada em meio gelificado, que impede a
formao de correntes, por diferenas de temperatura. Se os poros do gel so
consideravelmente maiores do que o tamanho das partculas, a difuso se realiza em meio
fluido. Quando os imunoprecipitados so formados no gel gar, o tamanho dos agregados
fica maior do que o dimetro dos poros e evita-se a difuso dos complexos de antgenoanticorpo. As tcnicas de imunodifuso detectam a reao antgeno-anticorpo atravs da
formao de um precipitado.
A imunodifuso pode ser simples ou dupla. Na imunodifuso simples, ou o antgeno
ou o anticorpo permanecem fixados ao suporte e o outro se difunde, at haver a
precipitao do complexo. Na imunodifuso dupla, tanto o antgeno como o anticorpo se
movem, um me direo ao outro, at haver a precipitao. Em ambos os casos, a difuso
pode ser linear (unidimensional) ou radial (bidimensional).

Imunodifuso Simples em uma dimenso

O mtodo de Oudin para a anlise qualitativa e quantitativa dos sistemas de
precipitao baseia-se na difuso simples em uma dimenso. Nesta tcnica, o anti-soro
incorporado ao gar, sendo essa mistura colocada em um tubo at formar uma coluna de
35-45 mm de altura. Aps a gelificao, o antgeno colocado no topo da coluna. Os
tubos so selados, para evitar evaporao, e deixados a uma temperatura constante
durante o perodo de observao, que , em geral, de uma semana. A fim de induzir a
difuso do reagente externo no gel, sua concentrao deve ser bem maior do que a do
reagente contido no gel.

Imunodifuso Radial Simples

Mancini introduziu uma tcnica de difuso simples para a determinao quantitativa
de antgenos. Neste mtodo, o gar misturado com a diluio apropriada do anticorpo
especfico para determinado antgeno e a mistura colocada em placa de Petri ou lmina
de vidro. Em locais apropriados do gel so feitos orifcios em que se colocam volumes
preciosos das solues de antgeno a serem testadas, bem como solues-padro com pelo
menos trs concentraes conhecidas do antgeno. O suporte incubado em cmara
mida at que ocorra a difuso (48 a 72 horas), sendo ento determinada rea do halo de
precipitao formado. Para uma dada concentrao de anticorpo, a rea do halo formado,

ao trmino da difuso diretamente proporcional concentrao do antgeno. A

sensibilidade do teste pode variar com a concentrao do anti-soro. Uma concentrao
baixa de anti-soro aumenta a sensibilidade, mas no permite a medida de concentraes
de antgeno em excesso. Por outro lado, uma alta concentrao de anti-soro diminui a
sensibilidade, mas permite a quantificao de concentraes maiores de antgeno.
Pelo mtodo de Fahey, os halos de precipitao podem ser medidos antes do trmino
da difuso e, neste caso, o logaritmo da concentrao do antgeno proporcional ao
dimetro do halo. Empregando-se antgenos-padro diludos em srie possvel construir
curvas-padro, e as equaes que descrevem tais curvas podem ser utilizadas para a
determinao da concentrao de antgeno correspondente a qualquer dimetro. A
sensibilidade destes mtodos varia de 1 a 3 g/ml de antgeno. Uma importante aplicao
desta tcnica a quantificao das concentraes de imunoglobulinas sricas.

Dupla Imunodifuso de Ouchterlony

O mtodo baseia-se na precipitao que ocorre na regio de equivalncia quando o
antgeno e o anticorpo se difundem no gar. O complexo antgeno-anticorpo se apresenta
sob a forma de linha ou arco de precipitao. A velocidade de difuso de cada substncia
regida pelas leis da difuso e depende da concentrao e do tamanho da molcula, do
tamanho dos poros do gel, da temperatura, da concentrao do gar e de sua pureza.
O teste realizado colocando-se uma camada de gar em lminas de vidro ou placas
de Petri previamente recobertas com uma fina camada de gar. Aps a gelificao, so
feitos orifcios no gar, de acordo com o sistema a ser analisado. As solues contendo o
antgeno e o anticorpo so colocadas nos orifcios do gar, as placas ou lminas so
incubadas em cmara mida com vedao a uma temperatura conveniente e constante por
18 a 24 horas.
Cada linha em um espectro de precipitao corresponde a um par de antgenoanticorpo. A ausncia do antgeno ou do anticorpo indicada pela ausncia da linha. Cada
precipitado funciona como uma barreira para os reagentes que o formam e impede sua
difuso alm do stio da precipitao. Essa barreira imunoespecfica e a difuso de
outros reagentes no impedida, a menos que a densidade dos agregados provoque um
obstculo mecnico.
O mtodo de Ouchterlony permite a comparao de vrios sistemas antignicos, desde
que colocamos em orifcios adjacentes contra um mesmo sistema de anticorpos, formando
vrios padres que indicam a existncia, ou no, de determinantes antignicos comuns.
As linhas formadas podem ser completamente coalescentes, no caso de antgenos com os

mesmos determinantes (identidade imunolgica); podem apresentar um esporo, como

no caso de antgenos parcialmente relacionados (identidade parcial); ou podem formar
uma interseo, indicando a ausncia de relao entre os antgenos (no-identidade).
Quando os reagentes esto em quantidades balanceadas, a linha de precipitao formada
ter a curvatura voltada para o orifcio que contm a substncia de maior peso molecular,
que se difunde mais lentamente.
O mtodo pode ser utilizado para avaliaes semiquantitativas quando se conhece a
especificidade das linhas de precipitao, como, por exemplo, na titulao de antgenos
ou de anticorpos. Podem-se caracterizar antgenos de vrios agentes infecciosos
empregando-se anticorpos de especificidade e reatividade conhecidas. A formao de
uma nica linha de precipitao d indcios da pureza do antgeno ou do anticorpo, porm
de um modo muito preciso.
O mtodo apresenta vrias limitaes pois requer 18 a 24 horas de difuso para que a
reao se processe, no sendo til em casos em que se necessita de um mtodo rpido de
diagnstico. Ao mesmo tempo, apresenta uma sensibilidade baixa e limita-se deteco
de reaes antgeno-anticorpo em que h formao de precipitados.

Eletroimunodifuso
Nas tcnicas de imunodifuso, o antgeno e o anticorpo entram em contato e precipitam
no gar por um processo de difuso. Porm, a velocidade de precipitao pode ser muito
aumentada se a migrao for dirigida por um campo eltrico, como no caso da
eletroimunodifuso. Est tcnica tem sido empregada na deteco de antgeno.

Eletroimunodifuso Dupla Unidimensional

O princpio bsico do mtodo a eletroforese do antgeno e do anticorpo
simultaneamente, que migram em direes opostas a partir dos orifcios separados do gel,
resultando na precipitao em um ponto intermedirio entre as suas origens.
Este mtodo requer que o antgeno e o anticorpo em teste apresentem diferentes
mobilidades eletroforticas. O pH do tampo deve ser escolhido a fim de otimizar os
efeitos eletroendosmticos do anticorpo para o catodo (plo negativo), enquanto o
antgeno se move em direo do anodo (plo positivo).

Eletroimunodifuso Simples Unidimensional

Nesta tcnica, o anti-soro especfico para o antgeno ou antgenos que se quer
quantificar incorporado ao gel, que colocado em lmina de vidro numa posio fixa
de modo que o anticorpo no migre. O material contendo o antgeno colocado em um

pequeno orifcio e submetido a uma eletroforese. O padro de imunoprecipitao

resultante se assemelha a um foguete. Esse padro ocorre porque a precipitao se forma
nas margens laterais dos limites do antgeno vai precipitando, sua concentrao diminui,
e as margens laterais convergem para uma ponta. A distncia total de migrao do
antgeno para uma dada concentrao de anti-soro linearmente proporcional
concentrao do antgeno.

AGLUTINAO
A reao de aglutinao caracteriza-se pela formao de agregados visveis como
resultado da interao de anticorpos especficos e partculas insolveis que contm
determinantes antignicos em sua superfcie.
A aglutinao pode ocorrer tanto com partculas que apresentam determinantes
antignicos naturais em sua superfcie (hemcias, bactrias, protozorios, etc.) como com
partculas inertes (partculas de ltex, poliestireno, bentonita, etc.), ou mesmo com clulas
antigenicamente no relacionadas (hemcias, bactrias) s quais se adsorvem ou se fixam
antgenos solveis. No primeiro caso, a reao dita aglutinao direta, e no segundo,
aglutinao indireta ou passiva.
As reaes de aglutinao so muito empregadas para o diagnstico laboratorial de
doenas causadas por vrus, bactrias, protozorios e fungos, doenas auto-imunes, na
deteco de hormnios, na tipagem de grupos sanguneos dos sistemas ABO e Rh, etc.
Os testes de aglutinao podem ser realizados em tubos ou placas. Se o soro possuir
um elevado ttulo de anticorpos aglutinantes, pode-se observar o fenmeno de prozona,
obtendo-se falsos resultados negativos. Esse efeito eliminado empregando-se diluies
seriadas do soro.

Teste de Aglutinao Direta

Na reao de aglutinao direta utilizam-se partculas antignicas insolveis em sua
forma ntegra ou fragmentada. Hemcias, bactrias, fungos, protozorios podem ser
aglutinados diretamente por anticorpo. Os testes para detectar anticorpos especficos so
realizados empregando-se diluies em srie do anticorpo, frente a uma quantidade
constante de antgeno. Aps um perodo de incubao, a aglutinao se completa e o
resultado geralmente expresso como o ttulo do anti-soro, isto , a mxima diluio em
que ocorre a aglutinao.

Teste de Inibio de Hemaglutinao Direta

A inibio da hemaglutinao direta baseada na capacidade que certos antgenos
virais tm de, espontaneamente, aglutinarem certos tipos de hemcias. Os anticorpos, se
presentes na amostra, revestem as partculas virais, resultando na inibio da aglutinao,
indicando um teste positivo para a presena de anticorpos. Estes testes no distinguem
entre IgG e IgM. Este mtodo usado para detectar anticorpos contra o vrus da rubola,
sarampo, influenza e certos enterovrus.

Teste de Aglutinao Passiva ou indireta

Para o teste de aglutinao passiva, as hemcias e as partculas inertes (ltex, bentonita,
sepharose, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por adsoro passiva, devida ao
contato direto com os antgenos solveis, por adsoro via agentes qumicos, como cido
tnico, cloreto de cromo e por conjugao do antgeno, por meio de ligaes qumicas
covalentes, fornecendo reagentes estveis. Devido grande diversidade de antgenos que
podem se ligar s clulas ou partculas, a aplicao dos testes de aglutinao passiva
muito variada.

Teste de Hemaglutinao Passiva

A verificao de Boyden, em 1951, de que protenas podiam ser adsorvidas a hemcias
tratadas com cido tnico e que essas clulas podiam ser aglutinadas por anticorpos
especficos possibilitou o emprego dos mtodos de aglutinao para a deteco de
anticorpos contra vrias substncias.
Hemcias esto entre os melhores suportes de antgenos para os testes de aglutinao,
pois h uma srie de antgenos que pode ser ligada sua superfcie para fornecer um
sistema indicador sensvel na deteco de anticorpos. Alm disso, os testes em placa
permitem que a determinao do ponto final da reao seja feita diretamente. Hemcias
possuem uma superfcie complexa, o que facilita a ligao de muitos antgenos e,
freqentemente, acarreta a presena de anticorpos heterfilos no soro de muitos animais.
Tais anticorpos devem ser removidos antes da execuo do teste.
Antgenos polissacardeos prontamente aderem a hemcias, enquanto antgenos
proticos requerem pr-tratamento com cido tnico ou cloreto de cromo.
O teste em placa utiliza pequenas quantidades de reagentes e considerado positivo
quando se verifica a formao de tapete cobrindo o fundo da cavidade da placa em V,
e negativo quando as hemcias sedimentam formando um boto compacto. O ttulo da
amostra testada ser a mxima diluio em que ainda se observa a formao do tapete.

O teste detecta anticorpos das classes IgG e IgM e, embora os anticorpos IgM sejam
750 vezes mais eficientes na aglutinao que os IgG, a quantidade de antgeno necessria
para se obter a mxima reatividade com IgM muito maior do que a necessria para a
mxima reatividade com IgG. Empregando-se hemcias sensibilizadas com antgenos
proticos, quando adequadamente padronizado, o teste detecta anticorpos em nveis de
concentrao de 0,01 g/ml. H vrios sistemas comerciais para a pesquisa de anticorpos
que utilizam esta tcnica, entre eles, os sistemas de Trypanossoma cruzi, Treponema
pallidum, Toxoplasma gondii, etc.

Teste de Inibio de Hemaglutinao Passiva

O teste de inibio de hemaglutinao passiva sensvel e especfico na deteco de
pequenas quantidades de antgenos solveis, haptenos ou anticorpos que competem com
a substncia homloga com que a hemcia foi sensibilizada.
O princpio do teste baseia-se na competio, pelos stios de combinao do anticorpo,
entre o antgeno fixado hemcia e o antgeno solvel ou o hapteno. O grau de inibio
relaciona-se com a quantidade do antgeno presente na amostra e, tambm com a
afinidade pelos stios de combinao do anticorpo.
Este mtodo requer pequenas quantidades de reagentes, detecta antgeno na ordem de
0,1 a 10 g/ml, apresenta especificidade elevada e pode ser empregado em sistemas em
que antgenos solveis ainda no foram obtidos. Tem sido empregado na deteco de
antgeno na hepatite e na hemofilia.

Teste de Aglutinao do Ltex

Partculas de ltex so esferas de poliestireno que podem ser utilizadas como suportes
na adsoro de protena solvel e antgenos polissacardicos, funcionando como sistema
indicador da reao antgeno-anticorpo.
O teste pode ser empregado na pesquisa de antgenos ou de anticorpos. A aplicao
mais comum na deteco do fator reumatide , que anticorpo da classe IgM
pentamrico dirigido contra IgG. Adsorvendo IgG passivamente s partculas do ltex,
haver a exposio dos determinantes de IgG que reagem com o fator reumatide,
resultando em aglutinao. Este mtodo mais sensvel e menos especfico que a
hemaglutinao passiva para a deteco de fator reumatide. O fator reumatide deve ser
um auto-anticorpo poro Fc de IgG agregada ou alterada, ocorrendo doenas autoimunes, em processo agudos ou crnicos, em doenas reumticas, em doenas
infecciosas, degenerativas, etc..Tambm empregada na pesquisa da protena C que

aparece no soro de pacientes na fase aguda de vrias infeces, como estafiloccica ou

estreptoccica, febre reumtica, etc.

ENSAIOS LTICOS

Teste de Fixao do Complemento

A ligao antgeno-anticorpo promove a fiao do complemento, cujo consumo,
invitro, pode ser empregado para detectar a presena de anticorpos, antgenos ou ambos.
O teste utiliza um sistema homogneo (no preciso a separao entre fases) e
realizado em duas etapas. Na primeira etapa, o antgeno incubado, na fase fluida, na
presena de uma quantidade definida de complemento. Se o antgeno e o anticorpo
correspondentes estiverem presentes, a cascata do complemento ser ativada pela via
clssica e haver consumo de complemento. Na segunda etapa, adiciona-se o sistema
indicador da reao que consiste em hemcias de carneiro sensibilizadas com hemolisina
(anticorpo anti-hemcias de carneiro obtido em coelhos). A medida da atividade
hemoltica do complemento no sistema indicador permite determinar a presena ou no
de antgeno ou anticorpo na mistura inicial e sua quantidade. A atividade hemoltica
remanescente pode ser quantificada empregando-se diluies seriadas da amostra a ser
analisada. Tanto o anticorpo como o antgeno devem ser destitudos de ao
anticomplementar, ou seja, no podem ativar o complemento separadamente. O
complemento deve ser obtido de soro de cobaia e colhido e estocado de maneira
apropriada para preservao da atividade hemoltica. Anticorpos humanos IgM, IgG1,
IgG2 e IgG3 fixam complemento pela via direta, enquanto o IgA fixa complemento pela
via alternativa.
O teste pode ser qualitativo ou quantitativo. O mtodo qualitativo baseia-se na titulao
do complemento residual que no foi consumido pela reao antgeno-anticorpo com o
sistema indicador. Esse mtodo, embora sensvel, muito laborioso para fins
diagnsticos. O mtodo quantitativo possui muitas variaes tcnicas, entre as quais o
micromtodo, que permite revelar quantidades mnimas de complemento fixado.
Atualmente, embora haja testes bem mais sensveis, ainda utilizado na sorologia da
doena de Chagas, da sfilis e de vrios vrus, rickettsias e fungos. Apresenta a vantagem
de poder ser empregado para diferentes sistemas sem mudar os parmetros do teste,
porm complexo e trabalhoso.

TESTE DE IMUNOFLUORESCNCIA
O teste de imunofluorescncia um dos mais utilizados no diagnsticos de laboratrio
para a pesquisa de anticorpos e cada vez mais com anticorpos monoclonais para a
pesquisa de microrganismos e seus componentes em espcimes clnicas. Baseia-se na
capacidade das molculas de anticorpo se ligarem covalentemente a fluorocromos sem
perder sua reatividade especfica com o antgeno.

Teste de Imunofluorescncia Direta

O teste de imunofluorescncia direta empregado na pesquisa e na localizao de
antgenos em clulas ou tecidos atravs de um anticorpo especfico marcado com
fluorocromo (conjugado). O conjugado se fixa ao antgeno, formando um
imunocomplexo estvel. O anticorpo no ligado removido por lavagens e o preparado
observado em microscpio de fluorescncia.
O teste tem sido utilizado para a pesquisa de Chlamydia trachomatis, Treponema
pallidum, Legionnella sp, Escherichia coli,estreptococos -hemoltico do grupo A e
vrios vrus, com os do herpes simples tipo 1 e 2, o citomegalovrus, os da influenza tipo
A e B, os da parainfluenza 1,2 e 3, o da varicela-zoster e o adenovrus.

Teste de Imunofluorescncia Indireta

A sensibilidade dos testes de imunofluorescncia limitada ao nvel de fluorescncia
detectvel pelo olho humano; por isso, o teste de imunofluorescncia indireta tem sido
empregado para amplificar o sinal e aumentar a sensibilidade. Pode ser empregado na
pesquisa de antgenos ou de anticorpos.

Para a Pesquisa de Antgenos

Consiste na incubao da clula ou tecido em que se quer pesquisar o antgeno com o
anticorpo especfico obtido em animal conhecido ou monoclonal, levando a formao de
um imunocomplexo. Aps a lavagem, a preparao incubada com um conjugado de
antiimunoglobulina produzida em outra espcie de animal.

Para a Pesquisa de Anticorpos

Antgenos padronizados so fixados a lminas de vidro. O soro do paciente diludo,
colocado sobre o antgeno e incubado para permitir a formao do complexo antgenoanticorpo. Aps lavagens, a preparao incubada com o conjugado fluorescente e, se
houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo especfico para o antgeno.

TCNICAS COM MARCADORES RADIOATIVOS

Radioimunoensaio
O radioimunoensaio um dos mtodos mais sensveis para a anlise quantitativa das
reaes antgeno-anticorpo, permitindo medidas rpidas e precisas; mesmo em
preparaes no purificadas, apresenta limiar de deteco da ordem de nanogramas ou
picogramas. Com limitaes destacam-se o custo do teste, a vida mdia dos reagentes e
o risco operacional.
O radioimunoensaio pode ser utilizado para quantificar hormnios, drogas, marcadores
tumorais, alrgenos e anticorpos e antgenos em doenas parasitrias. H muitas
variaes, mas o princpio o mesmo: a quantidade de reagente marcado (antgeno ou
anticorpo) quantifica o antgeno ou anticorpo no-marcado na amostra.

Radioimunoensaio Direto
No radioimunoensaio direto, uma quantidade fixa e limitada de anticorpo ligada a
um suporte slido. Adiciona-se uma quantidade fixa e pequena de antgeno marcado,
misturada com uma amostra em teste ou com as solues padro que contm
concentraes conhecidas do antgeno no-marcado. Aps um perodo de incubao,
remove-se o antgeno no ligado e faz-se a medida da radioatividade da fase slida.
A partir da resposta obtida, a concentrao do antgeno em teste estimada por
interpolao na curva.

Radioimunoensaio de competio
No radioimunoensaio de competio, uma quantidade fixa do antgeno imobilizada
em um suporte slido. Adiciona-se uma quantidade fixa de anticorpo marcado especfico,
misturada com a amostra em teste ou uma srie de solues padro com concentraes
variadas do antgeno solvel. Aps um perodo de incubao, o anticorpo marcado que
no se ligou fase slida e o antgeno solvel so removidos por lavagem e faz-se a
medida da radioatividade da fase slida.
A partir da resposta obtida, a concentrao do antgeno em teste estimada por
interpolao na curva.

Radioimunoensaio de captura
No radioimunoensaio de captura, uma quantidade fixa de anticorpo imobilizada em
um suporte. A soluo teste, com quantidade desconhecida de antgeno, ou as solues
padro, com concentraes conhecidas do antgeno so adicionadas. Aps a incubao,
remove-se o antgeno no-ligado e adicionam-se anticorpos marcados especficos para o

antgeno, com stio de ligao diferente do stio do anticorpo de fase slida. O anticorpo
marcado no-ligado removido por lavagem e faz-se a medida da radioatividade da fase
slida.
A partir da resposta obtida, a concentrao do antgeno em teste estimada por
interpolao na curva.

TCNICAS IMUNOENZIMTICAS
As tcnicas imunoenzimticas so baseadas na utilizao de antgenos ou anticorpos
marcados com enzimas e permitem a deteco, titulao e quantificao de substancias
de interesse biolgico.

Imunoperoxidase
As tcnicas para localizao de constituintes celulares seguem o mesmo princpio da
imunofluorescncia, com a diferena de que, em vez do fluorocromo, emprega-se a
enzima, que tem maior capacidade de amplificao. A enzima converte o componente
cromgeno (substrato+doador de hidrognios) em produto insolvel que precipita no stio
da reao. Esses precipitados podem ser visveis ao microscpio eletrnico.

Enzimaimunoensaio
O enzimaimunoensaio um mtodo quantitativo em que a reao antgeno-anticorpo
monitorada por medida da atividade enzimtica. Desempenha um papel muito
importante no laboratrio clnico, pois, alm da elevada sensibilidade comparvel do
radioimunoensaio, apresenta vantagens de utilizar reagentes estveis, estar livre das
exigncias de trabalhar com radioistopos e poder ser adaptado tanto a testes simples
como automao sofisticada.
Uma caracterstica comum entre radioimunoensaio e enzimaimunoensaio que ambos
medem, diretamente, a interao entre o antgeno e o anticorpo, no dependendo de um
segundo fenmeno como precipitao, aglutinao ou fixao de complemento.
O enzimaimunoensaio foi classificado em dois tipos: homogneo e heterogneo. Nos
ensaios homogneos no necessria a separao entre os complexos antgeno-anticorpo
e o antgeno e/ou o anticorpo livres, pois a interao antgeno-anticorpo modula a
atividade da enzima. Nos ensaios heterogneos, a separao necessria, pois a atividade
da enzima no alterada pela reao antgeno-anticorpo. Os ensaios homogneos so

mais utilizados para a deteco de haptenos e os heterogneos para a deteco de

molculas maiores.

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

Esse teste foi desenvolvido como uma alternativa ao radioimunoensaio para a deteco
de antgenos e anticorpos. O seu princpio bsico a imobilizao de um dos reagentes
em uma fase slida, enquanto outro reagente pode ser ligado a uma enzima, com
preservao tanto da atividade enzimtica como da imunolgica do anticorpo.
O teste detecta quantidades extremamente pequenas de antgenos ou anticorpos,
podendo ter elevada preciso se os reagentes e os parmetros do ensaio forem bem
padronizados. Especial ateno deve ser dada a fase slida, cujas propriedades podem
variar de acordo com a composio. O grau de pureza do antgeno ou do anticorpo da fase
slida muito importante, pois qualquer material heterlogo competir pelo espao na
placa.
O objetivo do ensaio a quantificao ou verificao da presena de um antgeno ou
anticorpo

SLFIA (Substrate-Labelled Fluorescent Immunoassay)

Pode ser utilizado para detectar reagentes de alto e baixo peso molecular. Foi
desenvolvido pela Ames Company of Miles Laboratories. No ensaio, um substrato
fluorognico da -galactosidase ligado covalentemente a um antgeno protico ou
hapteno. Se o anticorpo especfico reage com antgeno, a enzima -galactosidase no
cliva o substrato, por impedimento estrico. Se a amostra tiver antgeno, este se ligar ao
anticorpo e o substrato ligado ao antgeno ficar livre e reagir com a enzima para formar
o produto fluorescente. O grau de fluorescncia proporcional quantidade de antgeno
na amostra.