Desarrollo, Supervivencia y muerte de

los microorganismos
Supervivencia de los microorganismos en el ambiente natural.
La poblacin de microorganismos en la biosfera se mantiene ms o
menos constante: el contrapeso del crecimiento es la muerte. Para
que cualquier grupo microbiano sobreviva en su nicho, debe competir
de manera satisfactoria por los nutrientes y mantener un fondo de
clulas vivas durante la privacin de Alimentos. Cada vez resulta ms
evidente que muchos microorganismos existen en consorcios
formados por representantes de diferentes gneros. Otros
microorganismos, a menudo caracterizados como clulas aisladas en
el laboratorio, forman colonias aglutinadas en el ambiente natural. La
mayor parte de nuestros conocimientos sobre la fisiologa microbiana
proviene del estudio de lneas celulares aisladas y cultivadas en
condiciones ptimas y estos conocimientos forman la base de esta
seccin. No obstante, se debe recordar que muchos microorganismos
compiten en el ambiente natural cuando amenaza su alimentacin,
circunstancia que genera un estado fisiolgico distinto del que se
observa en el laboratorio. Adems, tambin es importante reconocer
que cuando un nicho microbiano se vaca en el ambiente, se llena
rpidamente. Las tcnicas de salud pblica que aniquilan
microorganismos patgenos eliminando su nicho probablemente son
menos eficacesque los mtodos que dejan el nicho ocupado por otros
competidores no patgenos.
Importancia Del Crecimiento.
El crecimiento es el aumento ordenado en la suma de todos los
componentes de un microorganismo. Por lo tanto, el aumento en el
tamao como resultado de la captacin de agua por parte de la clula
o el depsito de lpidos o polisacridos no constituye un desarrollo
verdadero. La multiplicacin celular es consecuencia del desarrollo;
en los organismos unicelulares, el desarrollo provoca incremento en el
nmero de individuos que constituyen una poblacin o cultivo.
Las concentraciones microbianas se miden en trminos de
concentracin celular o concentracin de biomasa. Estos dos
parmetrosno siempre son equivalentes, puesto que el peso seco
celularpromedio vara durante las distintas etapas en la historia de
uncultivo. Tampoco tienen la misma importancia: en los estudiossobre
gentica microbiana o desactivacin celular, la concentracincelular
es la cantidad significativa; en los estudios sobrebioqumica o
nutricin microbiana, la cantidad importante es laconcentracin de la
biomasa.
Proliferacin Exponencial.

La tasa de proliferacin de las clulas sin limitacin de nutrientes es

de primer orden: la tasa de proliferacin (en gramos de biomasa
producidos por hora) es el producto de la constante de la tasa de la
proliferacin, k, y la concentracin de la biomasa, B
Curva De Proliferacin.
Cuando un volumen fijo de medio lquido es inoculado con clulas microbianas
obtenidas a partir de un cultivo que fue colonizado hasta la saturacin y se mide
peridicamente el nmero de clulas viables por mililitro para obtener una grfica,
las etapas de la curva de proliferacin bacteriana que se muestran reflejan los
acontecimientos en una poblacin de clulas, no en cada clula. Este tipo de cultivo
se denomina cultivo semicontinuo. La curva tpica de proliferacin se puede
describir en trminos de cuatro etapas:
Etapa latente:La

etapa latente es el periodo durante el cual las clulas,

ya sin metabolitos ni enzimas a causa del ambiente poco favorable al
final de su historia previa en cultivo, se adaptan a su ambiente nuevo.
Se forman y acumulan enzimas y sustancias intermedias hasta que su
concentracin es tal que permite la reanudacin del desarrollo.
Etapa exponencial:Durante

la etapa exponencial, cuya matemtica ya

se describi, las clulas se encuentran en estado constante.
Sintetizan material celular nuevo a una velocidad constante, pero
este material nuevo es cataltico y la masa aumenta en forma
exponencial. Esto persiste hasta que sucede una de dos cosas: se
agota uno o ms nutrientes en el medio o bien se acumulan
productos metablicos nocivos que inhiben la proliferacin. Para los
organismos aerobios, el nutriente que se limita es casi siempre
oxgeno.
Etapa estacionaria mxima:Finalmente,

el agotamiento de nutrientes o
la acumulacin deproductos nocivos provoca que la proliferacin se
detenga por completo. Sin embargo, en la mayor parte de los casos,
durante esta etapa se lleva a cabo un recambio celular: se pierden
lentamente clulas que mueren pero esto se contrarresta por la
formacin de clulas nuevas a travs de desarrollo y divisin. Cuando
esto ocurre, la cuenta celular total aumenta lentamente aunque la
cuenta viable permanece constante.
Etapa de declinacin o etapa de muerte: Despus

de un tiempo en etapa
estacionaria, que vara segn el microorganismo y las circunstancias
del cultivo, el ndice de muerte se eleva hasta alcanzar un nivel
estable En la mayor parte de los casos, la tasa de muerte celular es
mucho ms lenta que la de proliferacin exponencial. Con frecuencia,
una vez que muere la mayor parte de las clulas, la tasa disminuye
en forma espectacular, de manera que persiste un pequeo nmero
de supervivientes durante varios meses o incluso aos.
Mantenimiento de las clulas En etapa exponencial.
Es posible mantener a las clulas en etapa exponencial
transfirindolas en repetidas ocasiones a un medio fresco de una

composicin idntica mientras an se desarrollan en forma

exponencial. Esto se denomina cultivo continuo; el tipo de dispositivo
ms frecuente para el cultivo continuo es el quimiostato.
Quimiostato:Este

dispositivo est compuesto por un contenedor para

cultivoequipado con un rebosadero con sifn y un mecanismo
paradestilar medio fresco a partir de un reservorio a una
velocidadregulada. El medio en el contenedor del cultivo se agita a
travsde un chorro de aire estril; cada gota de medio fresco que
entraprovoca la salida de una gota de cultivo a travs del sifn.El
medio se prepara de manera que un nutriente limite latasa de
proliferacin. El contenedor es inoculado y las clulas sedesarrollan
hasta que el nutriente limitante se agota; luego se permiteque el
medio fresco del contenedor fluya a una velocidadtal que las clulas
utilicen el nutriente limitante con la mismarapidez con la que se
suministra.
Definicin Y Valoracin De La Muerte.
Importancia de la muerte: Para una clula microbiana, la muerte
significa la prdida irreversible de su potencial reproductivo. La
prueba emprica de la muerte es el cultivo de las clulas en un medio
slido: una clula se considera muerta cuando no genera una colonia
en ningn medio. Evidentemente, la confiabilidad de la prueba
depende del medio elegido y las circunstancias: un cultivo en el que
99% de las clulas parece estar muerta en trminos de su potencial
para formar colonias en un medio, quiz ser 100% viable si se coloca
en otro medio. Adems, en algunos casos no es posible detectar unas
cuantas clulas viables en una muestra clnica grande baando
directamente una muestra, puesto que en ocasiones el lquido mismo
inhibe el desarrollo microbiano.
Valoracin de la muerte:muerte

de una sola clula, sino la muerte de

una poblacin.
Este es un problema estadstico: en cualquier
circunstancia que pueda provocar la muerte celular, la probabilidad
de que cualquier clula muera es constante por unidad de tiempo. Por
ejemplo, si se utiliza alguna condicin que provoque la muerte de
90% de las clulas en los primeros 10 min, la probabilidad de que
cualquiera de las clulas muera en un intervalo de 10 min es de 0.9.
Por lo tanto, es de esperarse que 90% de las clulas que sobrevive
morir en cada intervalo sucesivo de 10 min y se obtendr una curva
de muerte.
Esterilizacin: En la prctica, se habla de esterilizacin como el

proceso de aniquilar todos los microorganismos en una preparacin.

Sin embargo, si se toman en cuenta las consideraciones anteriores, se
ver que no existe ningn grupo de circunstancias que garantice la
esterilizacin de una preparacin. Por ejemplo, se examina la fi gura
4-3. A los 60 min, queda un microorganismo por mililitro. A los 70 min
habra 101, a los 80 min 102, etc. Al hablar de 102

microorganismos por mililitro significa que en un volumen total de

100 ml, slo sobrevive un microorganismo. Por lo tanto, cunto tarda
la esterilizacin del cultivo? Lo que se puede decir es que despus de
determinado periodo de tratamiento, la probabilidad de que persistan
microorganismos viables en 1 ml es la que se observa en la curva

Cuando se utilizan sustancias

antimicrobianas (frmacos) para desactivar a las clulas microbianas,
a menudo se observa que la concentracin del frmaco utilizado es
directamente proporcional al intervalo necesario para aniquilar a
determinada fraccin de la poblacin por medio de la expresin
siguiente: CnT=K
Efecto de la concentracin farmacolgica:

En esta ecuacin, C es la concentracin del frmaco, T es elintervalo

necesario para aniquilar determinada fraccin de clulas N y K son
constantes.
Antimicrobianos.
Los trminos siguientes se utilizan a menudo en relacin con
losAntimicrobianos y sus aplicaciones:
Biocida:Sustancia qumica o fsica, por lo general de amplio espectro,

que desactiva microorganismos. Dos biocidas qumicos son el

perxido de hidrgeno y los fenoles y dos biocidas fsicos son el calor
y las radiaciones. Por lo general los biocidas son de amplio espectro, a
diferencia de los anti-infecciosos, que poseen una actividad
antimicrobiana menor.
Bacteriosttico:Trmino

especfico que se refiere a la propiedad por

medio de la cual un biocida puede inhibir la multiplicacin bacteriana;
la multiplicacin se reanuda una vez que se elimina la sustancia.
Bactericida:Trmino

especfico que se refiere a la propiedad por medio

de la cual un biocida aniquila bacterias. La accin bactericida difiere
de la bacteriosttica slo en el sentido de que es irreversible; esto es,
los organismos aniquilados ya no se pueden reproducir, aunque se
retiren del contacto con la sustancia. En ciertos casos, la sustancia
provoca lisis (disolucin) de las clulas; en otros, la clula permanece
intacta y en ocasiones incluso con actividad metablica.
Esterilizacin:Tcnica

utilizada para eliminar los organismos viables de

una superficie o producto, incluidas las esporas bacterianas.
Desinfectantes:Productos

o biocidas utilizados para reducir el nmero

de microorganismos viables o carga biolgica, en un producto o
superficie hasta obtener una concentracin que se considera
adecuada para su uso o aplicacin ulterior. Los desinfectantes no son

necesariamente esporicidas, pero son esporostticos, o sea que

inhiben la germinacin o la proliferacin.
Sptico:Caracterizado

por la presencia de microbios patgenos en

tejidosvivos.
Antisptico:Biocida

o producto que destruye o inhibe el desarrollo de

losmicroorganismos en un tejido vivo. Ej., la piel
Asptico:Libre

de microorganismos
permanecer sin microorganismos.

utilizando

mtodos

para

Preservacin:Prevencin

de la multiplicacin de los microorganismos

en productos preparados, incluidos frmacos y alimentos.
Antibiticos:Son

compuestos orgnicos naturales o sintticos que

inhiben o destruyen ciertas bacterias, por lo general a una
concentracin reducida.
Modos De Accin.
Dao al DNA:Diversas sustancias tanto fsicas como qumicas actan
daando al DNA; stas comprenden a las radiaciones ionizantes, luz
ultravioleta y sustancias qumicas que reaccionan con el DNA. Esta
ltima categora comprende a las sustancias alquilantes y otros
compuestos que reaccionan de manera covalente con las bases
purina y pirimidina para formar aductos de DNA o enlaces cruzados
entre tiras.
Las protenas existen en un estado
plegado tridimensional que depende de enlaces disulfuro covalentes
intramoleculares y de variosenlaces no covalentes como puentes
inicos, hidrfobos y de hidrgeno. Este estado se denomina
estructura terciaria de la protena; se desorganiza fcilmente con
diversas sustancias fsicas o qumicas y la protena deja de funcionar.
La desorganizacin de la estructura terciaria de una protena se
denomina desnaturalizacin.
Desnaturalizacin de protenas:

La membrana celular
acta como barrera selectiva, puesto que permite el paso de algunos
solutos y excluye el de otros. Muchos compuestos se transportan de
manera activa a travs de la membrana, con lo que se concentran
dentro de la pared. La membrana tambin contiene a las enzimas que
participan en la biosntesis de los componentes de la cubierta celular.
Desorganizacin de la membrana o pared celular:

Sustraccin de los grupos sulfhidrilo libres:Las

protenas enzimticas
que contienen cistena poseen cadenas laterales que terminan en
grupos sulfhidrilo. Adems, las coenzimas como la coenzima A y el
dihidrolipoato contienen grupos sulfhidrilo libres. Tales enzimas y
coenzimas no pueden funcionar a menos que los grupos sulfhidrilo
permanezcan libres y reducidos.

La interferencia de una sustancia qumica con la

reaccin normalentre cierta enzima y su sustrato se conoce como
antagonismo qumico. El antagonista acta combinndose con una
parte de la holoenzima, evitando de esa manera unin con el sustrato
normal.
Antagonismo qumico:

Inversin de la accin antibacteriana

Eliminacin del frmaco: Cuando las clulas que son inhibidas por la
presencia de un bacteriosttico se eliminan por medio de
centrifugacin, se lavan en la centrfuga y se suspenden de nuevo en
un medio de desarrollo fresco; reanudarn su multiplicacin normal.
Cuando un antagonista qumico de tipo anlogo
se une de manera reversible con la enzima, es posible desplazarla
agregando una concentracin elevada del sustrato normal. Estos
casos se denominan inhibicin competitiva. La proporcin entre la
concentracin del inhibidor y la concentracin del sustrato que
invierte la inhibicin se denomina ndice antimicrobiano.
Inversin por sustrato:

A menudo es posible desactivar al frmaco

agregando al medio una sustancia que se combine con ste,
impidiendo su combinacin con los componentes celulares. Por
ejemplo, el ion mercrico se desactiva agregando a los medios
compuestos de sulfhidrilo como cido tiogliclico.
Desactivacin del frmaco:

posible prevenir la lisis osmtica

transformando al medio en un elemento isotnico para los
protoplastos bacterianos desnudos. Se necesita una concentracin de
sacarosa de 10 a 20%. En estas circunstancias, los protoplastos
inducidos por penicilina permanecen viables y siguen proliferando
como formas L.
Proteccin

contra

la

lisis:Es

Elementos fsicos.
Calor: La aplicacin de calor constituye el mtodo ms sencillo
paraesterilizar materiales, siempre y cuando el material mismo
searesistente al dao por calor. Una temperatura de 100C aniquilaa
todos los tipos de bacterias con excepcin de las esporas enun lapso
de 2 a 3 min en cultivos de laboratorio; para aniquilaresporas se
utiliza una temperatura de 121C durante 15 min.
La luz ultravioleta y las radiaciones ionizantes tienen
diversas aplicaciones como esterilizadores.
Radiacin:

Sustancias qumicas.
Alcoholes: El alcohol etlico, alcohol isoproplico y el n-propanol
exhiben una actividad antimicrobiana rpida de amplio espectro
contra las bacterias vegetativas, virus y hongos, pero no son

esporicidas. Su actividad es mejor cuando se diluyen a una

concentracin de 60 a 90% con agua.
a una temperatura reducida de los endoscopios y equipo
quirrgico. Normalmente se emplea en solucin al 2% para lograr
actividad esporicida. El formaldehdo es bactericida, esporicida y
virucida.
Aldehdos:

La clorhexidina se utiliza ampliamente en el lavado de

manos y en productos bucales como desinfectante y conservador. Las
micobacterias son muy resistentes.
Bisfenoles: Los bisfenoles se utilizan ampliamente en jabones
antispticos y enjuagues de manos. En general, son de amplio
espectro pero tienen poca actividad contra Pseudomonas aeruginosa
y mohos. El triclosn y el hexaclorofeno son bactericidas y
esporostticos.
Biguanidas:

liberadoras de halgeno: Las principales sustancias

liberadoras de cloro son hipoclorito de sodio, dixido de cloro y
dicloroisocianurato de sodio, que son oxidantes que destruyen la
actividad celular de las protenas. El cido hipocloroso es el
componente activo encargado del efecto bactericida y virucida de
estos compuestos.
Sustancias

La sulfadiazina de plata,
combinacin de dos antibacterianos, Ag+ y sulfadiazina, posee
actividad de amplio espectro. Probablemente sus propiedades
inhibidoras son secundarias a su unin a los componentes celulares
como el DNA.
Derivados

de

los

metales

pesados:

Los cidos orgnicos se usan como conservadores en

las industrias tanto farmacutica como alimentaria. El cido benzoico
es fungisttico; el cido propinico es bacteriosttico y fungisttico.
cidos orgnicos:

El perxido de hidrgeno posee actividad de amplio

espectro contra virus, bacterias, levaduras y esporas bacterianas. Su
actividad esporicida requiere de concentraciones ms elevadas de
H2O2 y un periodo de contacto ms prolongado.
Peroxgenos:

El fenol y muchos compuestos fenlicos tienen propiedades

antispticas, desinfectantes o conservadoras.
Fenoles:

Estos compuestos tienen dos

regiones en su estructura molecular, un grupo repelente al agua
(hidrfobo) y otro grupo que atrae agua (hidrfilo). Los detergentes
catinicos, ejemplificados por los compuestos de amonio cuaternario
(QAC, quaternary ammonium compounds) son antispticos y
desinfectantes tiles.
Compuestos de amonio cuaternario:

Los aparatos mdicos sensibles al

calor e instrumentos quirrgicos se esterilizan con sistemas de fase
de vapor que utilizan xido de etileno, formaldehdo, perxido de
hidrgeno o cido peractico.
Esterilizadores en fase de vapor: