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Objetivos

Relacionar el consumo de glucosa al cambio de pH


Interpretar el efecto de los inhibidores y los desacoplantes de la cadena de
transporte de electrones.
Describir como es que la glucosa genera cambios de pH.

Conclusin
Se observ un aumento en el pH debido al consumo de glucosa por la levadura ya
que libero hidrogeniones a la matriz extracelular de esta para utilizarlos para la
produccin de ATP.
Anlisis.
El desacoplante no inhibe directamente a cualquiera de los transportadores de
electrones de la cadena respiratoria.
Es por esto, que a pesar de la presencia del desacoplante en la levadura, el pH
del medio extracelular segua bajando, porque la clula segua produciendo ATP
por medio de las vas metablicas anaerbicas, y ste se hidrolizaba en la ATPasa
de la membrana plasmtica para permitir el bombeo de protones.

Puede observarse claramente una variacin en el pH al comparar las tres graficas;


observndose una disminucin gradual del pH que es mas pronunciada en el
experimento 3 en el que se uso el inhibidor azida de sodio. Estos resultados reflejan lo
planteado en la hiptesis, es decir hay un consumo constante y disminucin en la
concentracin de glucosa lo que se deduce por la disminucin del pH el cual indica un
aumento en la concentracin de H+ y por tanto la hidrlisis de la glucosa.
La glucosa entra en las clulas por medio de protenas transportadoras especficas y
tiene un destino principal: fosforilarse mediante el ATP y formar glucosa-6-fosfato.
Este paso se realiza por dos razones: la glucosa-6-fosfato no puede difundirse a
travs de la membrana porque no es sustrato de los transportadores de glucosa, as
que no puede salir de la clula una vez que ha entrado; adems la adicin del grupo
fosforilo comienza a desestabilizarla, facilitando as su metabolismo posterior. La
transferencia del grupo fosforilo del ATP al grupo hidroxilo del carbono 6 de la glucosa
est catalizada por la enzima hexoquinasa[2] . A partir de este momento comienza la
gluclisis. La gluclisis es la ruta metablica principal que permite la transformacin
metablica de lashexosas en piruvato, y sirve de base para la sntesis anaerbica de
ATP en muchas clulas. El piruvato procedente de este proceso y otros azcares
relacionados y que tiene lugar en el citosol, es transportado dentro de la mitocondria,
donde el complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa lo transforma en Acetil-CoA, el
cual entra en el ciclo de Krebs de la matriz mitocondrial, oxidndose a CO2 y
generando NADH+ + H y FADH2 para la cadena respiratoria [3]. Consiguientemente,
el NADH y el FADH2 formados durante la gluclisis, en la oxidacin de cidos grasos
y en el ciclo del cido ctrico, son molculas ricas en energa que poseen un par de
electrones con elevado potencial de transferencia. Cuando los hidrgenos son
sustrados de estos por la accin de las deshidrogenasas, estas donan sus electrones
a la cadena, la cual los transfiere al oxigeno molecular para producir agua. Cuando
estos electrones se transfieren al oxgeno molecular, se libera una gran cantidad de
energa, el cual genera un gradiente de concentracin de protones H+ a travs de la
membrana la descarga de este gradiente se encuentra acoplada enzimticamente a la
formacin de ATP a partir de ADP y Pi (el proceso inverso a la hidrlisis de ATP). Este
proceso se denomina fosforilacin oxidativa.
La fosforilacin oxidativa resulta influida por cierto nmero de agentes qumicos.
Durante la prctica se utilizaron el dinitrofenol y la azida de sodio, y se observ que al
agregar estas sustancias a la mezcla con levadura, la disminucin de pH no era tan
evidente, por lo que el bombeo de protones estaba siendo intervenido de alguna
forma. Adems se observo tambin en los resultados que la azida de sodio hacia que
la disminucin del pH en comparacin con el dinitrofenol fuera mayor; si se observan
los datos (tablas 1 y 2) y las graficas (grafica 2 y 3), el dinitrofenol mantiene casi que
constante el pH en comparacin con la azida de sodio, esta diferencia puede
explicarse por la forma en que acta cada uno de estos compuestos en la fosforilacin
oxidativa. El dinitrofenol es un agente desacoplante que permite la continuacin del
transporte electrnico, pero impide la fosforilacin de ADP a ATP; es decir, desacopla
a las reacciones que producen energa de las que la conservan [4]. Su caracterstica
es que estimula la velocidad de consumo de oxgeno de las mitocondrias intactas en

ausencia de ADP. Adems provoca en aquellas un gran aumento de actividad


hidroltica sobre el ATP, mientras que en ausencia de este agente desacoplante, la
actividad ATPsica de la mitocondria es muy dbil, es decir, sintetiza ATP en vez de
gastarlo. Los agentes desacoplantes actan rompiendo o eliminando un intermediario
o un estado de energa elevada generado por el transporte electrnico; en este caso,
el dinitrofenol acta a nivel del complejo I donde impide el paso de los 2 electrones del
NADH a la ubiquinona - oxidorreductasa[5] .Los agentes desacoplantes, no
desacoplan la fosforilacin glucoltica ni afectan, de modo directo, a otras reacciones
celulares que no sean la fosforilacin oxidativa. Es por esto, que a pesar de la
presencia del desacoplante en la levadura, el pH del medio extracelular segua
bajando, porque la clula segua produciendo ATP por medio de las vas metablicas
anaerbicas, y ste se hidrolizaba en la ATPasa de la membrana plasmtica para
permitir el bombeo de protones.
La azida de sodio es un inhibidor de la fosforilacin oxidativa. ste impide tanto la
estimulacin del consumo de oxgeno por el ADP, como la fosforilacin de ADP aATP.
Sin embargo, este tipo de agentes no inhiben directamente a cualquiera de los
transportadores de electrones de la cadena respiratoria; en lugar de ello, impiden el
mecanismo de formacin de ATP que utilice el intermediario de energa elevada, o sea
el estado producido por el transporte electrnico [5]. En este caso, la azida de sodio
acta a nivel del Complejo IV citocromo c-oxidasa haciendo un enlace irreversible con
el grupo hemo, impidiendo el transporte de los electrones hacia el oxgeno.