us vol.18 no.3 Valencia dic.

2014
Actividad antimicrobiana in vitro del extracto foliar de zabila (Aloe vera L.) e
n microorganismos de inters clnico.
Doris Reyes de Fuentes, Rafael Fernndez Da Silva
Universidad de Carabobo. Facultad Experimental de Ciencias y Tecnologa (FACYT). D
epartamento de Biologa, Unidad de Biotecnologa Aplicada. Campus Brbula. Venezuela.
(UBA).
Autor de correspondencia: Doris Reyes. E-mail: dreyes@uc.edu.ve
RESUMEN
La zabila es una planta de gran inters mdico-farmacutico, por las diversas y numero
sas propiedades medicinales en enfermedades de distinto origen, corroborndose el
efecto de sus extractos en estudios in vitro e in vivo. Se evalu mediante el mtodo
de macro dilucin, la actividad antimicrobiana del extracto etanlico foliar del Al
oe vera L. (5% a 80%), cualitativamente por la turbidez del cultivo en medio lqui
do y cuantittivamente en unidades formadoras de colonia (UFC) en medio slido, det
erminando la concentracin mnima inhibitoria (CMI), bactericida (CMB) y fungicida (
CMF) en 50 L del inoculo de microorganismos de inters clnico, tales como: complejo
Candida albicans, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aure
us a 37C a 24 y 48 h. A las 24 horas, la CMI fue 35, 40 y 55% y la CMB fue 40, 45
y 60%, para E. coli, P. aeruginosa y S. aureus respectivamente, mientras que en
C. albicans, la CMI y CMF fueron 55 y 60% respectivamente. A las 48 horas de cu
ltivo la CMI fue 30, 35 y 25% y la CMB fue 35, 40 y 30%, para E. coli, P. aerugi
nosa y S. aureus, respectivamente, mientras que en C. albicans, la CMI y CMF fue
ron 40 y 45% respectivamente. Los resultados encontrados con la exposicin a 48 h
al extracto foliar de Aloe vera L. de estos microrganismos, permite concluir que
los mismos son erradicados, plantendose a futuro como una eficaz y econmica alter
nativa natural para el tratamiento de las afecciones causadas por estos organism
os tan importantes clnicamente, luego que se realicen las validaciones legales in
vivo, que permitan su definitivo uso comercial.
Palabras clave: Bactericida, fungicida, extracto etanlico, zabila.
Antimicrobial activity of leaf extract of zabila (Aloe vera L.) in growth of cli
nical microbes
ABSTRACT
The zabila is a plant of great medical and pharmaceutical interest, for its vari
ous and numerous medicinal properties in diseases of different origin, corrobora
ting the effect in vitro and in vivo of extracts. This study evaluated the antim
icrobial activity with macro dilution method, in the ethanol extract of Aloe ver
a leaf (5-80%), qualitatively by the turbidity of the culture in liquid medium a
nd quantitatively in colony forming units (CFU) on solid medium, determining the
minimum inhibitory concentration (MIC), bactericidal (BIC) and fungicidal (FIC)
, in 50 uL of the inoculum of microorganisms of clinical interest such as Candid
a albicans complex, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus
aureus at 37C for 24 and 48 h. Found that at 24 hours, MIC was 35, 40 and 55% and
BIC was 40, 45 and 60% for E. coli, P. aeruginosa and S. aureus, respectively,
whereas C. albicans, the MIC and MFC were 55 and 60% respectively. After 48 hour
s of culture MIC was 30, 35 and 25% and BIC was 35, 40 and 30% for E. coli, P. a
eruginosa and S. aureus, respectively, whereas C. albicans, the MIC and MFC were
40 and 45% respectively. The 48 h exposure to the leaf extract of Aloe vera L h
as great potential biocide for these clinically important microorganisms, can be
effectively used in the production of generic drugs of low economic value to tr
eat conditions caused by them in the future, once the legal validation in vivo,
allowing their final commercial use are made.
Key words: Bactericidal, fungicidal, ethanol extract, zabila.

Recibido: Junio 2014 Aprobado: Noviembre 2014

INTRODUCCIN
El Aloe vera L. (sinonimia con Aloe barbadensis Miller) es la especie herbcea, xe
rfila y suculenta ms popular e importante de la familia Asphodelaceae, originaria
de las regiones secas y calientes del norte y este de frica, debiendo su nombre A
loe al rabe "alloech" o hebreo "halal" que significa sustancia amarga brillante (
1), mientras que vera es verdad en latn (2); conocida entre muchas denominaciones
comunes, como lirio del desierto en frica, doctor Aloe en Amrica y elixir de vida
en Rusia (2). Esta planta de rpida multiplicacin vegetativa, con una altura prome
dio de 50 a 70 cm en su madurez (de cuatro a cinco aos), de tallo corto y hojas s
uculentas dispuestas en forma de roseta, presenta mltiples propiedades mdico-farma
cuticas tanto de uso veterinario como humano (1, 3). En este sentido, es usada de
sde hace milenios por diferentes civilizaciones antiguas, tales como Egipto, Bab
ilonia, India, Grecia, Japn y China (3). En la actualidad distintas partes (races,
tallo y hoja) de la planta son empleadas para el tratamiento de diferentes afec
ciones, pero en mayor grado es utilizado el gel o cristal de la hoja para la obt
encin de los ms de 100 diversos compuestos bioactivos, tales como vitaminas (A, C,
E, B1, B2, B6 B12, cido flico y colina), minerales (Ca, Cr, Cu, Se, Mg, Mn, Na, K
, P, Zn, Al, Ba, Sr y Fe), azucares (glucosa, fructosa, acemanano, entre otros)
enzimas (amilasa, lipasa, bradiquinasa, catalasa, peroxidasa y superoxido-dismut
asa), aminocidos (20 de los 22 aminocidos del ser humano y 7 de los 8 aminocidos es
enciales), esteroides (colesterol, campesterol, -sisosterol y lupeol) y antroquin
onas (cido alotico), que son empleados en enfermedades, tales como dia etes, difer
entes pro lemas gstricos, tumores, as como por su actividad inmunolgica, ansioltica,
hipoglicmica, antioxidante, antiinflamatoria, cicatrizante, antiviral y antimicr
o iana (2-7).
En la actualidad se est dando una verdadera revolucin en medicina, volviendo al us
o de las plantas ancestrales, como potenciales alternativas teraputicas econmicas
y eficaces contra numerosas y diversas enfermedades, por ello el Aloe vera, una
planta tropical perteneciente a la antigua familia Liliaceae (8) representa un i
cono en este sentido, ya que desde hace muchos aos es utilizada en la ela oracin d
e medicamentos destinados a tratar quemaduras (9, 10), ulceras ppticas (11), lesi
ones de la mucosa gstrica (12), as como antiinflamatorio y de proliferacin celular
(13-15), psoriasis, herpes, acn y pie de atleta (16). De igual manera en la fa ri
cacin de frmacos antimicticos, anti acteriales y antivirales (17, 18).
En este orden de ideas, hoy en da se uscan medicamentos alternativos econmicos, s
encillos, verstiles y novedosos para el tratamiento de diversas enfermedades infe
cciosas, de ido a la rpida aparicin de nuevas cepas micro iales resistentes a los
anti iticos convencionales. Por lo cual, muchos investigadores evalan diferentes m
eta olitos vegetales, como potencial solucin en el control del crecimiento de nue
vas cepas de microorganismos. En este sentido, en funcin de los antecedentes ya d
escritos acerca del Aloe vera como antimicro iano natural, el presente estudio e
valu el efecto iocida del extracto etanlico foliar del Aloe, so re los microorgan
ismos de inters clnico: complejo Candida al icans, Escherichia coli, Pseudomonas a
eruginosa y Staphylococcus aureus, con la finalidad de ofrecerle directamente a
las comunidades un sencillo preparado teraputico genrico que sea efectivo para uso
externo, seguro al am iente y a ajo costo, en aras de su sanar en atencin prima
ria en las mismas, las diversas infecciones en heridas ocasionada por diversos m
icroorganismos de inters clnico.
MATERIALES Y MTODOS
Material Vegetal. Las pencas u hojas carnosas de za ila (Aloe vera L.) donadas d
el campus experimental de la Facultad de Agronoma de la Universidad Central de Ve
nezuela (UCV) (Municipio Atanasio Girardot. Edo. Aragua), previamente lavadas co
n agua corriente, se cortaron para extraer el cristal o gel de la cu ierta folia
r externa que es descartada, posteriormente se secaron en estufa a 70C durante 7
das, para luego molerlas hasta o tener 25 g del polvo foliar, el cual fue disuelt

o en 25mL de etanol al 80% en agitacin continua por 24 horas, luego de las cuales
se procedi a la evaporacin del etanol, o tenindose una solucin a una concentracin de
l 100%, a partir de la cual se prepararon una serie de diluciones para concentra
ciones inferiores (5-80%), empleando el mtodo de dilucin, usando como disolvente c
aldo infusin cere ro corazn (BHI) para realizar la evaluacin de la actividad antimi
cro iana (19).
Microorganismos. Cepas liofilizadas ATCC (American Type Culture Collection) de c
omplejo Candida al icans (CVCM1363), Pseudomonas aeruginosa (CVCM43) y Staphyloc
occus aureus (CVCM691) suministradas por el Centro Venezolano de Colecciones de
Microorganismos (CVCM) del Instituto de Biologa Experimental (IBE) de la Universi
dad Central de Venezuela (UCV), as como Escherichia coli (U9-41) donada por la Es
cuela de Bioanlisis de la Universidad de Cara o o.
Preparacin de las suspensiones micro ianas. Las cepas liofilizadas se hidrataron
en caldo BHI, para luego incu arse por 24 horas a 37C para su reproduccin en condi
ciones normales de gases. Luego se sem raron en agares selectivos (MacConkey, Ma
nitol salado, Cetrimide y Sa ouraud con clorafenicol) dependiendo del microorgan
ismo, incu ndose por 24 horas a 37C. Posteriormente, se seleccionaron colonias ais
ladas suspendindolas en Caldo BHI , incu ndose nuevamente por 24 h a 37C, despus se
ajustar la tur idez de las mismas al patrn de 0,5% Mc. Farland (medida a 540 nm),
equivalente a 1.5 x 10 8 UFC/mL.
Preparacin de las diluciones. A partir del extracto concentrado o tenido, se real
izaron diluciones puntuales (0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 6
5, 70, 75 y 80%) con Caldo BHI estril en tu os 13x100.
Determinacin de la CMI, CMB y CMF. Se tom una alcuota de 750 L de la suspensin microb
iana, ya ajustada (Mc. Farland), la cual se adicion en 2250 L de caldo BHI, para q
ue interacte con la dilucin del extracto respectiva durante 24 y 48 h a 37C. Transc
urrido el tiempo de exposicin de los microorganismos ya descritos, se procedi a in
ocular 50 L de la suspensin microbiana con el extracto a diferentes concentracione
s en Agar BHI en placas de Petri, utilizando la tcnica de siembra en superficie c
on esptula de Drigalski, adems de inocular en tubos con caldo BHI, empleando asa d
e platino calibrada de 10 L (19). Se evalu cuantitativamente el primero a travs del
nmero de unidades formadoras de colonias (UFC) y cualitativamente el segundo med
iante la turbidez del medio (20), establecindose para las tres cepas bacterianas
la concentracin mnima inhibitoria (CMI) que determina el efecto bacteriosttico y la
concentracin mnima bactericida (CMB), as como la CMI y CMF para la levadura, que e
stablece respectivamente el efecto fungisttico y fungicida.
Controles. Se utiliz un control negativo (medio de cultivo con solo extracto), pa
ra verificar la presencia de contaminantes microbianos y un control positivo (me
dio de cultivo con la cepa pura sin extracto), para verificar la viabilidad celu
lar. Adicionalmente, se realizaron evaluaciones microscpicas (tincin Gram) y prueb
as bioqumicas convencionales para constatar la pureza de los cultivos. Por ltimo,
se verifico que posibles remanentes del etanol en la solucin concentrada final, n
o tuviera efecto antimicrobiano, asegurando que dicho solvente se haba evaporado
por completo durante el proceso de obtencin del extracto al 100%, realizando para
ello los ensayos con diluciones de una solucin sin polvo foliar de Aloe vera, ev
idencindose crecimiento microbiano de todas las cepas en todas las concentracione
s.
Anlisis de los resultados. Los ensayos se realizaron por cuadruplicado obteniendo
reproducibilidad de los resultados, que se analizaron mediante el programa esta
dstico: Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) 18, empleando como est
adsticos clsicos las medias y desviaciones estndar.
RESULTADOS
La evaluacin del extracto etanlico foliar de Aloe vera en el crecimiento de microo
rganismos de inters clnico, mostr una respuesta diferencial significativa (p<0,05)
en el tiempo de cultivo (24 y 48 horas) y la especie microbial. Evidencindose tan
to en el medio lquido como en el slido, un crecimiento similar en funcin a la conce
ntracin del extracto, en el efecto bacteriosttico y bactericida en E. coli, P. aer

uginosa y S. aureus, as como el efecto fungisttico y fungicida en el complejo C. a

lbicans. En este sentido, se encontr que a las 24 horas la CMI fue 35, 40 y 55% y
la CMB fue 40, 45 y 60%, para E. coli, P. aeruginosa y S. aureus, respectivamen
te, mientras que en C. albicans, la CMI y CMF fueron 55 y 60% respectivamente. A
las 48 horas de cultivo la CMI fue 30, 35 y 25% y la CMB fue 35, 40 y 30%, para
E. coli, P. aeruginosa y S. aureus, respectivamente, mientras que en C. albican
s, la CMI y CMF fueron 40 y 45% respectivamente (Tabla 1).
DISCUSIN
La actividad antimicrobiana, utilizando extractos (de diversos solventes), obten
idos fundamentalmente del gel o cristal de la hoja; es una de las propiedades ms
importantes del Aloe vera, tal como lo han evidenciado numerosos estudios, tanto
in vitro (mtodo de difusin en agar) como in vivo en diferentes especies de microo
rganismos Gram positivos (Bacillus cereus, Bacillus sphaericus, Bacillus subtili
s, Enterococcus bovis, Micrococcus luteus, Mycobacterium smegmatis, Staphylococc
us aureus y Streptococcus pyogenes) y Gram negativos (Escherichia coli, Enteroba
cter cloacae, Klepsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Pseudo
monas aeruginosa, Salmonella typhi y Shigella flexneri) (2; 20).
La CMI es la menor concentracin de una sustancia que inhibe total o parcialmente
el desarrollo microbial en medio slido, mas no en el medio lquido, ya que en el me
dio slido por el mtodo de difusin en agar, no hay una dilucin como tal, por tanto en
ciertas circunstancias los microorganismos que vienen estresados por la presenc
ia de alguna sustancia inhibidora pueden no crecer en el agar, observndose as el e
fecto bacteriosttico o fungisttico, mientras que en el medio lquido el factor de di
lucin es mayor, de tal forma, que los microorganismos que vengan estresados, en e
l caldo se elimina por completo la sustancia inhibidora y por ello crecen, por l
o cual, la CMB o CMF es la concentracin mnima, en la que no se observa el crecimie
nto en medio slido y lquido de bacterias y hongos, corroborndose el efecto bacteric
ida y fungicida respectivamente (21).
En este sentido, con el mtodo de macro dilucin utilizado en este estudio, se obtuv
ieron resultados promisorios en comparacin a los resultados indicados en trabajos
que emplean el mtodo de difusin en agar. As se muestra que el extracto etanlico fol
iar de zabila empleado, es de alta efectividad, ya que posee actividad bacterios
ttica y bactericida en las bacterias Gram positiva S. aureus y Gram negativas E.
coli y P. aeruginosa, as como el efecto fungisttico y fungicida en el complejo C.
albicans, tal como se ha evidenciado en diversos trabajos publicados con extract
os acuosos, etanlicos, metanlicos y acetnicos de distintos rganos vegetales de esta
planta (22). Asimismo, a mayor tiempo de exposicin (48 h) al extracto se obtuvo u
na actividad superior, ya que el crecimiento de todas las cepas de microorganism
os estudiadas fue erradicado a bajas concentraciones del mismo (19), lo que podra
ser debido a lo lento del proceso de desacople o inhibicin de los sistemas estru
cturales o funcionales de la clula microbial, por parte de los metabolitos secund
arios presentes en el extracto (23, 24). Por lo cual, en este estudio se logr vis
ualizar la actividad antimicrobiana con las cuatro cepas microbiales empleadas,
utilizando el extracto etanlico a una concentracin inferior al 60% a ambos tiempos
de exposicin (24 y 48 h), respuesta por debajo a la reportada por otros investig
adores (25) con los mismos microorganismos, evaluando extractos acuosos y etanlic
os, indicando la inhibicin del crecimiento de los mismos a concentraciones del 70
% a 24h de exposicin.
En este orden de ideas, para el complejo C. albicans, se observa el efecto fungi
cida a las 24 h de exposicin con 60% del extracto, disminuyendo a 45% el CMF al t
iempo de 48 h, concentracin inferior a la indicada por otro investigador (9) que
seala la accin funguicida a 90% del extracto etanlico a las 24 h, utilizando el mtod
o de difusin en agar. Asimismo, con este extracto se logr una mejor respuesta bact
ericida que la indicada con extractos acuosos o metanlicos al 50% (26). No obstan
te, otros autores (27), plantean una mejor accin funguicida a las 24 h, con el ex
tracto acuoso (12.5%) y etanlico (6,25%), pudiendo deberse dicha respuesta al emp
leo de una cepa distinta a la utilizada en este trabajo.

En el caso de E. coli, se encontr una tendencia similar, donde un incremento en e

l tiempo de exposicin determina un mayor efecto bactericida, no encontrando creci
miento bacteriano con el extracto al 35%, concentracin inferior a la indicada por
otros investigadores, donde reportan una accin bactericida a 40% (28), 50% (27),
90 % (9) y 100% (29; 30) del extracto etanlico a las 24 h utilizando el mtodo de
difusin en agar.
Para S. aureus se encontr una respuesta marcadamente superior al aumentar el tiem
po de exposicin, pasando la accin bactericida de 60% a las 24h a 30% a las 48h, co
ncentracin inferior a la indicada por otros investigadores (28), donde reportan u
na accin bactericida a 40% (28), 95% (9) y 100% (31; 29; 30; 32) del extracto eta
nlico a las 24h utilizando el mtodo de difusin en agar. Es importante resaltar, que
con este extracto se obtuvo una mayor respuesta bactericida que la sealada por o
tros investigadores al emplear extractos acuosos o metanlicos al 50% (26). No obs
tante, otros autores (27), describen una mejor accin bactericida a las 24h con el
extracto etanlico (6,25%), pudiendo deberse dicha respuesta al empleo de una cep
a diferente.
Por ltimo, con P. aeruginosa, se obtuvo una respuesta parecida a las indicadas en
las dos cepas bacterianas anteriores, donde un incremento en el tiempo de expos
icin influyo en un mayor efecto bactericida a 35%, no encontrando crecimiento bac
teriano con un extracto al 40% a las 48 horas, concentracin similar (28) o inferi
or (90%; 9; 100%; 29; 30; 32) a la reportada por otros investigadores a las 24h
utilizando el mtodo de difusin en agar. Es importante resaltar que solo con extrac
to acuoso o etanlico de hoja se presenta la inhibicin del crecimiento de este micr
oorganismo, tal como lo sealaron algunos autores al ensayar extractos a base de r
aces, tallo y hojas (33), siendo mayor al emplear el extracto a base de etanol, y
a que es un solvente que permite la extraccin de ms de 21 compuestos qumicos con po
tencial biocida, principalmente taninos, flavonoides y antroquinonas (34), que a
ctan sobre los distintos componentes de la membrana plasmtica y pared celular, par
ticularmente lpidos, adhesinas y protenas de transporte (35-38), as como ocasionand
o la prdida de sus funciones e incrementando la permeabilidad de los protones e i
ones de la misma (22).
Finalmente, se puede concluir que la mayor actividad antimicrobiana se logra a l
as 48 horas de exposicin a bajas concentraciones del extracto etanlico foliar. A e
ste tiempo de cultivo, a partir del extracto al 30%, la cepa ms sensible fue S. a
ureus, a diferencia de las cepas E. coli, P. aeruginosa y complejo C. albicans q
ue fueron ms resistentes, dado que se requirieron mayores concentraciones del ext
racto (40-45%). De tal forma, que sustentndose en los resultados hallados con est
e extracto in vitro, se refuerza la potencialidad de la medicina natural de esta
ancestral planta, sugirindose para un futuro no lejano la posibilidad de su empl
eo en la elaboracin de formulaciones de uso tpico para el tratamiento de las afecc
iones causadas por estos microorganismos, previa evaluacin farmacolgica y toxicolgi
ca en modelos in vivo con animales y/o humanos, para asegurar su eficacia y segu
ridad, permitiendo as su uso en atencin primaria en salud, como preparado popular
en las comunidades.
Agradecimiento. Este trabajo fue subvencionado por el Consejo de Desarrollo Cien
tfico y Humanstico de la Universidad de Carabobo (CDCH-UC) segn oficio N CDCH-156-20
14 del 08/05/2014. Asimismo al personal asistente de la Unidad de Biotecnologa Ap
licada (UBA) del Departamento de Biologa de la Universidad de Carabobo (Naguanagu
a-Edo. Carabobo) por el apoyo en la ejecucin de esta investigacin.
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