TRAVAUX PRATIQUES DE BIOLOGIE CELLULAIRE

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TP N1 DE BIOLOGIE CELLULAIRE : INITIATION A LA MICROSCOPIE

Introduction :
Lil humain ne peu distinguer des objets mesurant moins de 0,2 mm. Le microscope devient
donc ncessaire pour lobservation de certains lments biologiques et organismes dont les
dimensions sont de lordre de micron (m). Le problme fondamental, que les biologistes ont
eu rsoudre lors de ltude des cellules, est leur petite taille qui ne permet pas de les
observer lil nu. Par consquent, les connaissances sur les cellules ont progresss avec la
mise au point dinstruments dobservation (microscopes), de plus en plus perfectionns, ainsi
quavec llaboration de techniques appropries. Le dveloppement de la cytologie est donc
li aux progrs techniques accomplis dans le domaine de loptique. En effet, si les lentilles
optiques (loupes) taient dj connues du temps des Grecs, les premiers microscopes,
composs des 02 lentilles, nont t mis au point qu la fin du 16me sicle.
Le microscope est un appareil optique muni de lentilles qui permet de grossir l'image et donc
de voir de petits dtails. Il est surtout utilis en biologie, pour observer les cellules, les tissus.
Un certain nombre de rgles de base sont respecter ds la premire observation: les
habitudes se gardent, mme les mauvaises.

1- Dfinition :
Le mot microscope est compos de 02 racines tymologiques diffrentes, du Grec (micro=
petit et scopein= voir). Le microscope est un instrument optique permettant dobserver des
objets trs minces (qui peuvent tre traverss par la lumire) en les grossissant (32 1000 X).
Lobjet observer appel prparation est entre une lame et une lamelle de verre.
Il existe dautres microscopes, dits microscopes lectroniques, qui permettent des
grossissements plus importants.

2- Principe physique du microscope optique :

Cet instrument rapproche donc les objets de notre il en nous permettant de les observer.
Le principe est le suivant, la prparation est claire par une lampe. Les molcules observer
vont interagir avec la lumire de plusieurs faons :
- soit en absorbant certaines longueurs d'onde de la lumire. C'est la microscopie en lumire
directe.
- soit en provoquant un dphasage des diffrents rayons lumineux. C'est la microscopie en
contraste de phase.
- soit en mettant de la lumire une autre longueur d'onde que celle d'origine. C'est la
microscopie fluorescence.
Le microscope photonique utilisent un flux ondulatoire de particules (FP) non charges, les
photons, au travers dun systme de lentilles (L1, L2 et L3) de manire former dun objet
(O) tudier (AB) une image agrandie (AB) sur un cran E

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S : source de lumire
L1 : lentille condensatrice
O : objet tudier de dimension AB
a : Demi-angle douverture de lobjectif
L2, L3 : respectivement lobjectif et loculaire
FP : faisceau de particule
E : cran permettant de voir limage AB obtenue de lobjet O tudier.

3- fonctionnement du microscope :
La plupart des cellules sont trs petites pour tre observes lil nu. Le microscope optique permet
dobtenir des grossissements de lordre de 1000.
Dans le cadre de la microscopie optique classique, la prparation observer est dpose sur la platine
du microscope. Pose sur une plaquette de verre appele porte objet ou lame et couverte dun couvre
objet ou lamelle, la prparation est maintenue en place par deux pinces ou valets.
La lumire fournie par une lampe ou miroir, est concentre par le condensateur avant de traverser
lobjet. La lumire transmise est capte par lun des objectifs du microscope. Ces objectifs sont
monts sur une pice tournante appele tourelle revolver. Finalement limage agrandie par lobjectif
parcourt le tube porte oculaire et est encore magnifie par loculaire sur lequel lobservateur pose son
il. Le grossissement de loculaire multipli par celui de lobjectif fournit le grandissement total de
limage par le microscope.
La mise au point seffectue laide dune ou plusieurs vis de rglages : vis macro mtrique pour le
rglage grossier et la vis micromtrique pour le rglage fin.

* Remarques :
1) Il est signaler que lexamen des chantillons biologiques au microscope optique doit
rpondre deux exigences :
- Les objets examiner doivent tre minces
- Leurs diffrents lments doivent prsenter un certain contraste.
2) Il est noter quun bon clairage est essentiel si on veut faire de bonnes observations.
Selon un principe doptique on obtient une meilleure rsolution quand le condensateur et
lobjectif sont coupls, c'est--dire quand ils ont la mme ouverture numrique. Pour y arriver
il suffit :
- de faire la mise au point sur le spcimen observer.
- de fermer le diaphragme et de louvrir lentement jusqu ce que la lentille postrieure de
lobjectif soit remplie de lumire.

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4- Prsentation du microscope optique :

Le microscope optique classique se compose de 02 parties essentielles :
* Un systme optique
* Une partie mcanique
a)- Systme optique :
Il comporte loculaire, lobjectif et le systme dclairage (source lumineuse).
Loculaire : cest la lentille suprieure au niveau de laquelle nous plaons notre il lors de
lobservation.
Lobjectif : cest la lentille infrieure qui nous rapproche de la prparation examiner, il y a
habituellement 03 objectifs correspondant aux grossissements 10X, 40X, 100X, ils sont
interchangeables par simple rotation de leur base commune (tourelle revolver).
Systme dclairage : il se compose dune source lumineuse (lampe ou miroir). Lobjet
examiner est clair par transparence du condensateur qui est menu sa base par un
diaphragme qui permet de varier louverture du faisceau clairant.
b)- partie mcanique :
La partie mcanique comporte les lments suivants : un pied, une potence, une platine une
crmaillre et la vis macro et micromtrique.
Le pied : il permet dassurer la stabilit du microscope.
La potence : cest le bras de lappareil qui supporte le tube optique et la platine.
La platine : cest le plateau ou lon fixe la lame examiner au moyen des valets. La platine
est quipe dune ouverture permettant le passage des rayons lumineux.
La crmaillre : commande par un ou deux boutons (vis macro et micromtrique).
La vis macro et micromtrique : permet des mouvements rapides et de grande amplitude du
tube optique tan disque la vis micromtrique communique au tube optique un mouvement lent
et de faible amplitude

1 : oculaire
2 : tube oculaire
3 : tourelle revolver
4 : bras ou potence
5 : objectif
6 : valet
7 : platine
8 : condensateur
9 : vis macro mtrique
10 : vis micromtrique
11 : source lumineuse
12 : pied ou bas

Schma dun microscope optique monoculaire

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On peut classer les diffrentes parties dun microscope selon leur fonction en cinq catgories :
Fonction de maintien de la prparation : le maintien de la prparation microscopique
est assur par la platine et les deux valets.
Fonctions de grossissement de la prparation : on distingue dans cette catgorie les
lments suivants :
L'oculaire grossit la prparation comme une loupe. Un chiffre grav dessus indique son
pouvoir grossissant (ex : X12).
Les objectifs : Ils sont en gnral au nombre de 3 et situs l'extrmit infrieure du tube
optique. Ils compltent le systme grossissant. Sur chacun d'eux, un chiffre indique le
pouvoir grossissant (ex. x40, x100). Pour en changer, il suffit de tourner le revolver.
Fonction dclairage de la prparation : lclairage de la prparation microscopique est
assur par une lampe halogne qui envoie la lumire vers la prparation microscopique
via le condenseur. La lumire traverse l'objet et ''emporte'' son image vers des lentilles de
verre (places dans l'objectif et l'oculaire) qui l'agrandissent. C'est en plaant son il sur
l'oculaire que l'on voit cette image.
Fonction de mise au point : La mise au point s'effectue en tournant la vis macromtrique
qui permet les mouvements rapides et importants du tube optique. Cette mise au point est
souvent complte par l'utilisation de la vis micromtrique dont la rotation assure des
mouvements trs lents (invisible l'il nu) du tube optique.
Fonction de soutien : La potence supporte l'ensemble des pices du microscope (tube
optique, platine et miroir). Souvent, il est possible de l'incliner par rapport la base ou
socle qui reste fixe et qui maintient le microscope sur la table.

5- Mode opratoire :
Disposer sur la platine une lame portant un objet suffisamment contrast (lame dj prpare).
Cette lame monte de faon permanente, constitue un bon test chaque fois que l'on aura
compltement drgl son clairage ou que l'on utilisera un nouveau microscope.
Deux possibilits se prsentent selon que l'on possde un clairage externe par miroir ou un
clairage intgr.
Pour l'clairage par miroir, diriger la lumire d'une ampoule dpolie sur la prparation en
basculant le miroir. Dans le cas d'un clairage intgr, mettre simplement sous tension et
rgler le rhostat sur une valeur moyenne ou faible.
Ouvrir les diaphragmes moiti.
Positionner le condenseur mi course
Mettre en place l'objectif le plus faible (par exemple celui qui est marqu 10 X) en faisant
attention ce que le clique soit bien enclench dans le cas d'un objectif mont sur revolver.
Chaque objectif de microscope sa propre distance de mise au point, d'autant plus courte que
l'objectif est puissant. Certains objectifs monts sur revolver sont quilibrs entre eux, c'est
dire que quand la mise au point est faite pour l'un, elle l'est aussi quand on en positionne un
autre.
Mfiez-vous, il peut arriver qu'un objectif soit dpareill ou bien lgrement dviss ou
qu'entre temps on ait mis une lame plus paisse et on risque l'accident. D'autre part certains
objectifs sont munis d'un systme "pare-choc", ce n'est pas une protection absolue !
A l'aide du mouvement rapide, et en tenant la tte sur le ct du microscope, les yeux

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hauteur de la platine, positionner l'objectif une distance de la prparation claire,

lgrement infrieure la distance focale de l'objectif.
Maintenant, et uniquement maintenant, mettre l'il l'oculaire. Sans toucher la mise au
point, amliorer l'clairage puis toujours l'il l'oculaire, l'aide du mouvement rapide,
loigner l'objectif de la prparation d'une petite quantit ne s'loignant pas trop de la distance
thorique de mise au point.
Des ombres sombres de plus en plus nettes doivent apparatre, puis l'image. En cas d'chec
recommencer la srie d'opration de pr-mise au point. Recentrer ventuellement votre aile de
mouche. L'image tant obtenue, vous pouvez utiliser le mouvement lent.

Rgles respecter.
Utiliser une prparation bien contraste (lame prpare) !
Eclairer convenablement la prparation !
Faire une pr-mise au point l'oeil la hauteur de la platine !
Commencer toujours une observation avec le plus faible grossissement !
Ne pas essayer d'utiliser pour le moment l'objectif immersion !!

6- Entretien du microscope :
Le microscope, mme le plus simple, est un instrument merveilleux, fruit de recherches de
nombreux savants au cours des sicles .Il n'a cess d'voluer pour atteindre aujourd'hui un
quasi perfection. Il comprend des parties mcaniques d'une trs grande prcision et des
optiques tout aussi fragiles.
Rfrez-vous son mode d'emploi fourni, pour connatre la manire de le dplacer et de
l'entretenir. Par exemple il est gnralement recommand de le soulever par sa potence et non
par le tube optique ou la platine ce qui pourrait endommager les mcanismes dlicats.
La salet sous toutes ses formes est le pire ennemi du microscope. Un microscope sale reflte
un mauvais entretien. Pour enlever la poussire sur les pices optiques sales, utiliser un
pinceau. Si les lentilles sont couvertes de salets tenaces (huile immersion, empreintes
digitales sches..), utiliser du papier lentille.
La platine ainsi que les autres pices mcaniques leur tour doivent tre toujours propres,
pour cela, on recommande quaprs usage de bien recouvrir le microscope avec un cache
poussire appropri.

7- But du TP :
Le but de ce TP est de mettre ltudiant devant un instrument qui laccompagnera durant toute
sa formation, pour cela, il est donc indispensable de le familiariser cet outil de travail.
Pour cela, il est indispensable de lui faire une prsentation des diffrentes pices dont il est
compos ainsi que les rglages ncessaires pour obtenir une bonne mise au point.

8- travail faire :
Donner ltudiant une lame prpare afin de sexercer et de sassurer quil maitrise
parfaitement les diffrents rglages.