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COLORACIONES : GRAM Y MANEVAL

I.

INTRODUCCIN
En 1884 el mdico Dans, Christian Gram, desarroll un mtodo
de tincin que lleva su nombre y que es de valiosa utilidad en cualquier
Laboratorio de Bacteriologa. La tcnica, adems de revelar detalles
referentes a la forma y agrupacin bacterianas como cualquier otra
tcnica de tincin, permite clasificar a las bacterias en dos grandes
grupos: gram positivas y gram negativas. Las paredes celulares, de ambas
poseen una capa basal de peptidoglicano responsable de la rigidez
caracterstica de la pared. Sin embargo, existen diferencias estructurales
en lo que respecta a las capas ms externas .Garca, R.(1988)
As en las Gram Negativas, existe una membrana externa cuya
constitucin qumica es similar a la de cualquier otra membrana biolgica
(fosfolpidos y protenas) pero que posee adems un alto contenido de
lipopolisacridos (endotoxina). Durante el proceso de tincin, tanto las
bacterias Gram positivas como las Gram negativas, toman el colorante
primario. Sin embargo al aplicar el agente decolorante, la pared de las
bacterias Gram positivas sufren una deshidratacin que impide la salida
del colorante. En el caso de las bacterias Gram negativas, el agente
decolorante destruye la membrana externa, incrementando as su
permeabilidad, lo cual permite la salida del colorante primario Lpez, A. J.
Barajas, R. J. A. (1982).
Al aplicar el colorante de contraste, este no puede penetrar
fcilmente en las bacterias Gram positivas debido a la deshidratacin de
su pared; adems de que estas bacterias quedaron previamente teidas
con el colorante primario. Mac Faddin, J. (1984).
Por el contrario las bacterias GRAM (-) se tien fcilmente con el colorante
de contraste. El resultado final es que las bacterias Gram (+) se tien de
color violeta y las Gram (-) de rojo. La tincin de Gram es aplicada en
forma universal como primer paso en la identificacin de las bacterias.
Desafortunadamente existen algunos grupos bacterianos en los cuales la
tincin de Gram no es de utilidad taxonmica, por ejemplo: las
espiroquetas, los micoplasmas, las micobacterias, las clamidias y las
riquetsias.
El mtodo de la tincin de Gram ha sufrido varias
modificaciones y algunas de estas son incluso mejores que el mtodo
original. Los objetivos principales para modificar la tincin han sido:
Obtener un colorante primario ms estable que el original, ya que este se
deteriora rpidamente y reducir el tiempo requerido para completar la
tcnica. Miranda, E( 1994 ).
Muchas bacterias estn rodeadas por compuestos qumicos
superficiales que se ties con mucha dificultad y que ha sido denominada

cpsula. La mayora de las cpsulas bacterianas estn constituidas


qumicamente por polisacridos, aunque en el gnero Bacillus consiste en
un polipptido del cido D-Glutmico. La cpsula desempea un papel
importante en la virulencia de algunas bacterias patgenas, ya que les
confiere propiedades antifagocticas que interfieren con los mecanismos
de defensa del organismo. El grosor de la cpsula vara no solo de una
especie de microorganismos a otra, sino que tambin entre las diferentes
cepas de la misma especie y dependiendo de la fase de la curva de
crecimiento en que se encuentra el cultivo. El dimetro de la cpsula
puede ser varias veces mayor al dimetro del cuerpo celular, como en el
caso de Streptococcus pneumoniae y Klebsiella pneumoniae. Por el
contrario, en otras bacterias su dimetro puede ser mucho menor,
ponindose de manifiesto solamente mediante procesos bioqumicos y
serolgicos como en el caso de algunas cepas de Pasteurella spp. Las
bacterias con cpsula, en los medios de cultivo, forman colonias lisas y
mucoides mientras que las bacterias no capsuladas producen colonias
rugosas. Las cpsulas bacterianas no pueden observarse en frotis teidos
con las tcnicas usuales porque son incapaces de retener el colorante y
porque los procesos de fijacin al calor y lavado las disuelven. Por lo tanto
l mejor mtodo para observarlas es el de las tinciones negativas. Prez; M
(1994).
El objetivo de la presente prctica es conocer el fundamento y realizacin
de la coloracin
de Gram y la observacin de capsula bacteriana
coloreada por el mtodo Maneval.
II.

MATERIALES Y MTODO
II.I MATERIALES
Lminas y laminillas
Hisopo de madera
Mechero
Reactivos
Microscopio
Material de todas las prcticas
II.II MTODO
1. Extraer la muestra de sarro dentario con un hisopo de madera
2. Realizar el frotis en la lmina portaobjeto
3. Cubrir con Violeta de Genciana a la muestra , dejar actuar por 2
minutos
4. Agregar Lugol , y dejar reposar por 2 minutos ; se formar el
complejo Cristal Violeta
5. Eliminar el colorante y decolorar con alcohol /acetona
6. Lavar para detener la accin del decolorante
7. Cubrir la muestra con safranina y dejar actuar por dos minutos
8. Lavar y secar al ambiente
9. Observar al microscopio

Para la observacin de cpsula colocar la lmina montada


microscopio y observar en el objetivo a inmersin.

III.

RESULTADOS

en el

IV.

COMENTARIO
La coloracin Gram es de gran importancia en el desarrollo de los anlisis
clnicos ,ya que
permite observar bacterias que son causantes de
producir el cuadro clnico como son cocos Gram positivo entre ellos se
destaca :Streptococcus neumoniae, Streptococcus sp y Estafilococos; o
bacilos Gram negativo como:Haemophylus influenzae y Klebsiella
,
tambin permite diferencia la poblaciones de leucocitos, si son
polimorfornucleares
indicara
un
proceso
supurativo;
si
son
mononucleares implicara un posible proceso no bacteriano adems de
evaluar la calidad de la muestra, es decir si es una muestra apta para el
cultivo bacteriano.
Por otra parte la coloracin Maneval nos permite conocer la resistencia de
las bacterias al poseer cpsula , frente a los antibiticos suministrados.

V.

CONCLUSIONES
1. Se logr conocer el fundamento y realizacin de la coloracin de Gram y
la observacin de capsula bacteriana coloreada por el mtodo Maneval.
2. La coloracin gram permite diferenciar dos tipos de bacterias.
3. La coloracin Maneval es importante ya que permite conocer si una
bacteria posee cpsula, que la hace resistente.

VI.

BIBLIOGRAFA
1 Garca, R.Manual Ilustrado para Laboratorio de Bacteriologa y
Micologa Veterinaria. Instituto Interamericano de Cooperacin para
la Agricultura. Mxico D. F. 1988.
2 Lpez, A. J. Barajas, R. J. A. Manual de Laboratorio para Bacteriologa
y Micologa Veterinaria. Departamento de Bacteriologa. FMVZUNAM. 1982.
3 Mac Faddin, J. F. Pruebas Bioqumicas para la Identificacin de
Bacterias de Importancia Clnica. Mdica Panamericana. Mxico, D.
F. 1984.
4 Miranda, E. Material didctico para Laboratorio de Bacteriologa Y
Micologa. Departamento de Bacteriologa. FMVZ_ UNAM. 1994
5 Prez; M. Procedimientos de Laboratorio para bacteriologa y
Micologa Veterinarias. Departamento de Bacteriologa. FMVZ_
UNAM. 1994.

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