METODO VOLUMTRICO DEL 2,6-DICLOROFENOLINDOFENOL (Mtodo 967.

21,
45.1.14, de la AOAC)
El cido ascrbico (vitamina C) puede ser determinado qumicamente en el laboratorio basndose
en su fuerte capacidad reductora. La cuantificacin de vitamina C en el alimento es dada por la
cantidad de cido L- dehidroascrbico. El mtodo volumtrico recomendado por la AOAC es la
titulacin con el indicador redox 2,6diclorofenolindofenol. El anlisis implica la oxidacin del
cido ascrbico con un colorante redox, como el 2,6-diclorofenolindofenol (azul en medio bsico
y rojo en medio cido), el cual se reduce en presencia de un medio cido, a un compuesto incoloro
(Zago et. al, 2010).
Segn Nielsen (2003), el cido ascrbico reduce el tinte indicador a una disolucin incolora. El
punto final de la valoracin con este tinte, de una muestra que contenga cido ascrbico, el exceso
de tinte no reducido confiere una coloracin rosada a la disolucin acida. La concentracin de
tinte valorante se puede determinar utilizando una disolucin patrn de cido ascrbico. A
continuacin, se puede valorar con el tinte las muestras de alimentos en disolucin, y utilizar el
volumen consumido en la valoracin para calcular el contenido de cido ascrbico.
Segn Nielsen (2003), el cido L-ascrbico se oxida al acido L-deshidroascrbico por medio del
tinte indicador.
En el punto final, el exceso de tinte no reducido es de color rosa-rosado, en la disolucin acida.
El cido L-deshidroascrbico puede ser determinado convirtindolo primero a acido L-ascrbico
con un agente reductor conveniente.
En presencia de cantidades significativas de hierro o cobre en la matriz biolgica que se va a
analizar, es aconsejable incluir un agente quelante, tal como el cido etilenodiaminotetraactico,
con la extraccin.
El punto final de color rojo debera persistir, al menos durante 10 segundos para ser vlido. En el
caso de las muestras coloreadas, tales como las remolachas o los productos profundamente pardos,
el punto final resulta imposible de detectar para el ojo humano. Por consiguiente, en tales casos
debe ser determinado observando el cambio de la transmitancia, utilizando un espectrofotmetro
con la longitud de onda fijada a 545 nm.
III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Materiales
- Muestra alimenticia: naranja, manzana, nctar de naranja
- Erlenmeyer
- Pipetas
- Homogenizador
- Buretas
3.2.

Reactivos

- Estndar de trabajo
- Solucin de 2,6-diclorofenolindofenol
- Solucin de cido oxlico al 0.5%

Procedimiento
Anlisis del estndar de trabajo

Calculo del equivalente en cido ascrbico por ml de solucin de 2.6diclorofenolindofenol (T):

X mg de cido ascrbico por Y ml de solucin de 2.6-diclorofenolindofenol
T=X/Y

Anlisis de la muestra

Hacer la titulacin de un blanco sobre 30 ml de la solucin de cido oxlico al 0.5% y restar este
valor de las otras titulaciones.
Determinacin de cido ascrbico
Calcular el contenido de cido ascrbico segn la siguiente formula:

Donde:
V = ml de 2.6-diclorofenolindofenol utilizados para titular una alcuota de muestra
T = equivalente en cido ascrbico de la solucin del 2.6-diclorofenolindofenol expresado en
mg por ml de colorante.
W = gramos de muestra en la alcuota analizada