Análise Fitoquímica - Artigos de Farmácia - Portal Educação

09/10/2016
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ANLISE FITOQUMICA
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As plantas tm sido uma rica fonte para obteno

de molculas para serem exploradas
terapeuticamente. Muitas substncias isoladas de
plantas continuam sendo fontes de medicamentos
e o interesse da pesquisa nesta rea tem
aumentado nos ltimos anos.
Dentre os fatores que tm contribudo para um
aumento nas pesquisas est a comprovada
e ccia de substncias originadas de espcies
vegetais e por muitas plantas serem matria-prima
para a sntese de frmacos.
A pesquisa toqumica busca conhecer os
constituintes qumicos das plantas ou conhecer o
grupo de metablitos secundrios relevantes nas
mesmas.
Quando no se dispe de estudos qumicos sobre
as espcies de interesse, a anlise toqumica
Anlise toqumica
preliminar pode indicar o grupo de metablitos
secundrio relevante da mesma. Caso o interesse
esteja restrito a uma classe espec ca de constituintes ou s substncias responsveis por certa
atividade biolgica, a investigao dever ser direcionada para o isolamento e a elucidao
estrutural da mesma
Os estudos toqumicos abrangem a pesquisa de vegetais, e no apenas de plantas medicinais,
para obteno ou desenvolvimento de medicamentos, ou seja, como fonte de matria-prima
farmacutica, a descoberta de substncias ativas de plantas como prottipo de frmacos, bem
como o desenvolvimento de toterpicos.
As anlises toqumicas fornecem informaes relevantes da presena de metablitos
secundrios nas plantas, para que assim possa chegar ao isolamento de princpios ativos
importantes na produo de novos toterpicos.
uma rea multidisciplinar, e tem como objetivo a extrao, isolamento, puri cao e elucidao
estrutural dos constituintes presentes em plantas, e que apresentam atividade biolgica. Entre as
classes de princpios ativos vegetais podemos citar os metablitos secundrios: alcalides,
cumarinas, esterides, avonides, glicosdeos cardioativos, lignanas, leos essenciais,
saponinas, triterpenos, entre outros.
Caractersticas gerais dos produtos do metabolismo secundrio:
http://www.portaleducacao.com.br/farmacia/artigos/56896/analisefitoquimica
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- Abundncia muito baixa (inferior a 1% do C total).

- A estocagem ocorre em uma clula ou tecido espec co.
- Distribudos esparsamente nos reinos animal e vegetal, neste caso muitas vezes espec co
para uma espcie de plantas.
- Apresentam uma gama de atividades biolgicas nas plantas as quais os produzem.
O Estudo de produtos naturais (PN) bioativos deve ser feito necessariamente em equipes
multidisciplinares. O sucesso do estudo depender do conhecimento e compreenso que cada
um dos membros da equipe tem dos objetivos e suas etapas. Deve-se evitar super valorizao
do uso e necessidade de equipamentos So sticados, j que, muitas vezes, consegue-se
isolamento com tcnicas mais simples e baratas.
Alguns pontos devem estar esclarecidos entre a equipe de pesquisadores:
1. Qual atividade biolgica esperamos? Devemos usar um nico ensaio ou mais de um para
investigar a bioatividade de interesse?
2. Qual ou quais as tcnicas de separao so mais para isolamento se pretendemos fazer a
determinao estrutural e realizao de testes biolgicos em grande escala?
3. Quais so os requisitos mnimos para a elucidao estrutural do composto bioativo?
4. As informaes obtidas na separao do composto(s) bioativo(s) de interesse podem ser
relacionadas e integradas para o desenvolvimento de um mtodo de deteco e anlise dos
componentes?
Duas questes so fundamentais quando se planeja uma metodologia de extrao e isolamento
de princpios ativos vegetais:
1. O que eu estou tentando isolar?
- um composto desconhecido responsvel por uma atividade biolgica em particular.
- um composto j conhecido produzido por um organismo em particular.
- um grupo de compostos dentro de um organismo, os quais esto todos Relacionados com
uma mesma via metablica possuindo, por exemplo, uma Estrutura bsica comum.
2. Por que eu estou tentando isolar? As razes para uma extrao podem ser:
- puri car uma quantidade su ciente do composto para caracteriz-lo parcialmente ou
totalmente.
- fornecer uma quantidade su ciente do composto para permitir a con rmao ou excluso de
uma estrutura proposta.
O isolamento de produtos naturais com atividade biolgica tem vrias vantagens, entre elas
podemos destacar:
Os compostos puros podem ser administrados em doses reprodutivas e precisas.
Eles podem levar ao desenvolvimento de mtodos analticos para o composto de interesse ou
para uma classe de compostos em particular.
- A elucidao estrutural do composto bioativo pode fornecer as bases para:
- A produo sinttica do composto.
- A modi cao estrutural visando desenvolver anlogos mais efetivos e com menor toxicidade.
- O estudo do mecanismo de ao do composto ativo.
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Importncia da identi cao do material vegetal

A identi cao segura do vegetal empregado no preparo de toterpicos garante o efeito
teraputico pretendido, pois este est relacionado com as propriedades farmacodinmicas da
droga indicada, caracterstica de uma determinada espcie. No caso de uma identi cao
positiva, tambm o grau de pureza da droga deve ser controlado, avaliando-se no s os
princpios ativos como tambm as possveis adulteraes, falsi caes e impurezas. No mbito
de pesquisa em toqumica, a identi cao positiva e segura da do material vegetal sob
investigao garante a padronizao dos mtodos e a reprodutibilidade dos resultados, os quais
podem vir a ter aplicao prtica.
Deve-se, ainda, atentar para o fato de que uma mesma espcie botnica pode possuir diferentes
nomes populares ou, ao contrrio, diferentes espcies botnicas com um mesmo nome popular,
segundo a regio ou populao que as usa.
Portanto, essencial que se prepare uma exsicata para a identi cao botnica e que a seleo
do material coletado seja feita adequadamente, evitando coletar partes do vegetal afetadas por
doenas, parasitas e tambm materiais estranhos, tais como outras plantas ou mesmo partes
da prpria planta que no sejam de interesse para a investigao. Parte integrante de uma
identi cao precisa e segura do material a ser utilizado na pesquisa toqumica, a
determinao da poca da coleta e da procedncia do material pode evitar divergncias na sua
anlise qumica, condicionada sazonalidade e s condies do solo e do ar onde o vegetal
cresce. A planta escolhida deve ser seguramente identi cada por um botnico ou um tcnico
especializado.
Ao coletar-se uma planta para anlise botnica deve-se coletar o material o mais completo
possvel, com pelo menos um ramo orido com 20 a 30 cm de altura. O material vegetal coletado
deve ser distendido e colocado entre folhas de papel absorvente - papel jornal, por exemplo - o
conjunto deve ser ento acondicionado entre placas de papelo para ser em seguida prensado. A
prensa deve ser rmemente amarrada com cordas. A secagem deve acontecer em estufa a 37C
por um ou dois dias ou temperatura ambiente, por um tempo mais longo. Material suculento
necessita de mais tempo para secagem.
As seguintes informaes devem constar em uma etiqueta que acompanha a exsicata: Nome da
Instituio, Nmero da Amostra e Data da Coleta; Classi cao Botnica; Famlia, Nome
Cient co (espcie) e Nome Popular; Procedncia, Observaes, Nome do Coletor e Nome do
Especialista que identi cou.
Preparao do material vegetal (MV)
A utilizao de MV fresco pode ser indispensvel para a deteco de alguns componentes
espec cos. Seu emprego traz a vantagem de evitar a presena de substancias oriundas do
metabolismo de fenecimento do vegetal. Caso no seja utilizado imediatamente, o MV deve ser
processado ou conservado, at a anlise posterior.
O emprego de MV seco bastante interessante, devido a sua maior estabilidade qumica, porm
exige cuidados a m de interromper os processos metablicos que ocorrem aps coleta da
planta.
Estabilizao e secagem
A estabilizao do MV impede a atividade enzimtica e, assim, evita a alterao dos compostos
qumicos originalmente presentes no vegetal. Consiste na desnaturao protica das enzimas
celulares, atravs da destruio das suas estruturas quaternria e terciria, seja pela ao de
agentes desidratantes, tais como etanol, ou por ao do calor. Imerso do MV em etanol em
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ebulio ou por operao de secagem em alta temperatura (acima de 60C) e curto tempo de
exposio (15 a 30 min).
A secagem tem por nalidade a retirada de gua e com isso, impedir reaes de hidrolise e
crescimento microbiano. A umidade residual dependera do tipo de rgo que constitui o MV.
Propicia a reduo de volume e de peso e facilita a moagem dos materiais.
Caracteriza-se pela exposio a temperaturas relativamente baixas, inferiores a 60C, e longo
tempo de exposio, em torno de 7 dias.
A secagem ser tanto mais rpida quanto mais dividido estiver o MV, devido a maior superfcie
de evaporao. Pelo mesmo motivo, o MV devera ser disposto em camadas nas. Pode ser
realizada ao ar livre ou em estufas.
Ar livre: mais econmica, mas exige maior vigilncia para garantir a uniformidade das condies
durante a operao. Preferencialmente a sombra, j que a irradiao solar pode alterar a
constituio qumica do material. Local seco e livre de insetos ou contaminantes ambientais.
Dispor o MV sobre papel para absoro da umidade.
Estufas: temperatura constante durante o processo. Ar circulante para evitar a saturao com
vapor dgua que vai sendo desprendido do material a secar.
Moagem
Tem por nalidade reduzir, mecanicamente, o MV a fragmentos de pequenas dimenses,
preparando-o para a extrao. O aumento da rea de contato entre o MV solido e o liquido
extrator torna mais e ciente a operao. A escolha das dimenses mais adequadas depende
tambm da textura do rgo vegetal. Quanto mais rgidos os tecidos, maior ser o grau de
diviso necessrio.
Diviso grosseira: seccionamento (tesouras, podes, facas), impacto (reduo a fragmentos por
meio de choques repetidos, em gral), rasurao (raspadores ou processadores de alimentos).
Pulverizao: em gral, com opo de emprego de um intermdio para facilitar a pulverizao. Em
moinhos, de diversos tipos, escolhidos considerando trs aspectos: principio de funcionamento,
caractersticas do MV, como dureza, elasticidade e friabilidade, e as propriedades qumicas dos
constituintes de interesse. Ideal realizar a pulverizao momentos antes da utilizao do
material vegetal.
Analise toqumica preliminar
Para algumas substancias, em certos vegetais, podem-se realizar reaes de caracterizao
diretamente sobre os tecidos do MV. Entretanto, na maioria das vezes, para se proceder a
caracterizao de um determinado grupo de substancias presentes em um vegetal, deve-se
primeiro extrair essas substancias com um solvente adequado, para ento caracteriz-las no
extrato.
Testes histoqumicos: permitem a caracterizao de certos grupos de constituintes qumicos.
Baseia-se na adio de reativos espec cos sobre a lmina com uma seco de amostra,
diretamente sobre o MV.
Grupo analisado
Reativo
Resultado
Amido
Lugol
Colorao azul-violeta
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Carbonato de clciocido actico + HCl
Efervescncia
Taninos
Cloreto frrico
Colorao azul-esverdeada
Saponinas
cido sulfrico
Colorao amarela
Lipdeos
Sudam III
Colorao laranja-avermelhada
Reaes qumicas de caracterizao: a caracterizao dos principais grupos de metablitos

secundrios de interesse tem sido conseguida pela realizao de reaes qumicas que resultam
no desenvolvimento de colorao ou precipitao.
Para algumas reaes o extrato pode ser utilizado diretamente, para outras o solvente deve ser
previamente removido.
Essas reaes so realizadas em tubos de ensaio ou placas, podendo tambm ser utilizada a
deteco cromatogr ca com reagentes espec cos.
A realizao de reaes de caracterizao diretamente no extrato bruto pode eventualmente
mascarar o resultado. O fracionamento do extrato e a realizao dos testes nas fraes obtidas
possibilitam reaes mais ntidas.
Os roteiros clssicos para anlise sistemtica de misturas complexas baseiam-se em dois
princpios:
Partio de substncias entre duas fases imiscveis, uma aquosa e outra orgnica
Formao de sais com diferenas de solubilidade em relao as bases ou cidos que lhes deram
origem.
Baseiam-se nas propriedades qumicas das substancias qumicas presentes na droga vegetal.
Algumas reaes so consideradas especi cas, no entanto so pouco e cazes como nico
mtodo de identi cao.
Principais reaes:
Cumarinas: no extrato pode ser feita pela observao do mesmo sob luz UV 360nm, pois a
maioria possui uorescncia azul-brilhante ou verde. Em soluo alcalina desenvolvem cor
amarela, devido ao rompimento do anel lactonico, que pode ser revertido pela adio de soluo
acida.
Polifenis: so substancias redutoras e, portanto, oxidam-se com facilidade, resultado em
substncias coradas. Oxidantes como o cloreto frrico (FeCl3) so empregados para
caracterizacao de polifenois. Positivo: colorao azul ou azul-esverdeada. Cada classe especi ca
de polifenois pode ser melhor caracterizada com reaes especi cas:
Flavonides: teste da cianidina ou Shinoda (HCl concentrado e magnsio em p). Para
compostos com nucleo -benzopirona, desenvolvimento de cor laranja a vermelha.
Taninos: reaes tradicionais de precipitao com gelatina ou p-de-pele, sais de alcalides e
metais pesados. Taninos hidrolisveis e condensados so diferenciados pela reao de Stiasny
(HCl concentrado e formol). Ocorrendo precipitao dos condensados. No sobrenadante pode-se
detectar os hidrolisveis com a reao com cloreto frrico, desenvolvimento de cor azul.
Antraquinonas: os derivados antraquinonicos ocorrem em vrios nveis de oxidao e por isso o
material deve ser tratado para que ocorra uma oxidao total destes ate antraquinonas,
submetendo o ao aquecimento com mistura de KOH 0,5M e perxido de hidrognio diludo.
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Reao de Brntrager que detecta agliconas antraquinonas e, assim, anteriormente a reao,

deve-se proceder a hidrolise.
Triterpenos e esterides: reao de Liebermann-Burchard (anidrido actico-acido sulfrico).
Triterpenos desenvolvem colorao mutvel com o tempo. Esterides colorao estvel. Reao
de Salkowsky (acido sulfrico concentrado) para esterides insaturados.
Saponinas: teste de formao de espuma, estvel na presena de cidos minerais diludos.
Glicosdeos cardiotnicos: reao de Kedde (soluo etanolica do acido 3,5-dinitrobenzoico e
KOH alcolico) para deteco do ncleo esteroidal. Reao de Keller-Killiani (acido actico glacial
cloreto frrico e acido sulfrico concentrado) que detecta presena de lactona insaturada em C17 e desxi-acucares.
Extrao
Antes de executar uma extrao deve se levar em considerao uma serie de fatores que
interferem na operao:
Caractersticas do MV: A estrutura histolgica das diversas partes componentes de uma planta
bastante heterognea; existem rgos, como as razes e caules, cujos tecidos so extremamente
compactados (xilema), ao passo que em folhas e ores os tecidos se apresentam com textura
mais delicada. Como o poder de penetrao dos solventes depende , entre outros fatores, da
consistncia dos tecidos que formam o material a extrair, as caractersticas do MV inuencia
diretamente na e cincia de extrao.
Grau de diviso do MV: Inuencia diretamente a e cincia de extrao. Quanto mais rgido o
material a extrair, menor deve ser a granulometria do MV. No geral, o aumento da rea super cial
conseguida pela diminuio da granulometria do MV favorece uma extrao mais e ciente.
O meio extrator (solvente): O solvente escolhido deve ser o mais seletivo possvel, para conseguir
extrair somente as substncias desejadas ou em maior quantidade. Como a seletividade
depende da polaridade, o conhecimento do grau de polaridade do grupo de substancias que se
deseja preferencialmente extrair determina o solvente ou mistura de solventes seletivos para
aquela extrao.
Em anlises toqumicas, quando no se conhece previamente o contedo do MV, costuma-se
submeter o MV a sucessivas extraes, com solventes de polaridade crescente, conseguindo-se
assim uma extrao fracionada, em que as diferentes fraes contem compostos de polaridade
tambm crescente.
Tabela 1. Exemplos de solventes, em ordem crescente de polaridade e os respectivos grupos de
metabolitos majoritariamente encontrados nos diferentes extratos.
A extrao de determinadas substancias ainda pode ser inuenciada pelo pH do liquido extrator.
Ex: extrao de alcalides (substancias de natureza alcalina) com solues cidas.
No geral, praticamente todos os constituintes de interesse para anlise toqumica apresentam
alguma solubilidade em misturas hidroetanlicas ou metanlicas a 80%, de tal modo que estas
costumam ser empregadas com freqncia.
Na escolha dos solventes, alem dos fatores relacionados com a e cincia do processo extrativo,
devem ainda ser considerados a toxicidade e riscos que seu manuseio representa, a estabilidade
das substncias extradas, a disponibilidade e custo do solvente.
Metodologia
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Os fatores relacionados com a metodologia de extrao dizem respeito a agitao, temperatura

e ao tempo necessrio para execut-los.
Considerando que os processos de extrao dependem, em grande parte, de fenmenos de
difuso e que a renovao do solvente em contato com as substancias a dissolver desempenha
um papel de grande inuencia na velocidade da dissoluo, pode-se concluir que a agitao
pode abreviar consideravelmente a durao de um processo extrativo.
O aumento na temperatura provoca um aumento da solubilidade de qualquer substncia, motivo
pelos quais os mtodos de extrao a quente so sempre mais rpidos do que aqueles
realizados a temperatura ambiente. Entretanto o calor nem sempre pode ser empregado, j que
muitas substncias so instveis em altas temperaturas.
Na escolha do mtodo de extrao, deve-se avaliar: a e cincia, a estabilidade das substancias
extradas, a disponibilidade e o custo do processo escolhido, considerando a nalidade do
extrato que se quer preparar.
Deve-se ainda de nir, com maior preciso possvel, o que se deseja obter, j que a composio
qumica dos MVs extremamente complexa e ocorre a extrao concomitante de vrios tipos de
substncias, farmacologicamente ativas ou no, desejadas ou no.
Assim, levando-se em considerao os fatores envolvidos no processo extrativo, pode-se
escolher o mtodo e o solvente que sero empregados.
Mtodos de extrao slido lquido
Extraes a frio
Turbolizao: A reduo drstica do tamanho das partculas e o conseqente rompimento das
clulas favorecem a rpida dissoluo das substncias ativas, resultando em tempos de
extrao de minutos e quase esgotamento da droga. Os equipamentos turboextratores esto
disponveis em diversos tamanhos e em laboratrio, para pequenas quantidades, utiliza-se o
liquidi cador, sempre atentando para a estabilidade da soluo extrativa. Alem da e cincia do
mtodo, somam-se a simplicidade, rapidez e versatilidade, que permitem a fcil utilizao dessa
tcnica em processamentos de pequena e media escala. Inconvenientes: difcil separao da
soluo extrativa por ltrao, gerao de calor durante o procedimento, que obriga a controlar a
temperatura, restringindo o emprego de lquidos volteis e a limitao da tcnica, quando se
trata de caules, razes ou materiais de elevada dureza.
Macerao: A extrao do MV se da em recipiente fechado, em temperatura ambiente, durante
perodo prolongado (horas ou dias), sob agitao ocasional e sem renovao do liquido extrator.
No conduz ao esgotamento do MV, seja devido a saturao do liquido extrator ou ao
estabelecimento de um equilbrio difusional entre o meio extrator e o interior da clula. Principais
fatores que inuenciam o processo: MV (quantidade, natureza, teor de umidade, tamanho de
partcula, capacidade de intumescimento); Lquido extrator (seletividade, quantidade); Sistema
(proporo droga: liquido extrator, temperatura, agitao, pH, tempo de extrao).
Preferencialmente para MV ricos em substancias ativas e que no apresentam uma estrutura
celular, como goma, resinas e alginatos. Utilizada para preparao de tinturas em homeopatia,
tinturas o cinais. Lquidos extratores preferenciais so o etanol e misturas hidroetanlicas. No
se recomenda a utilizao de misturas hidroetanlicas inferiores a 20%, para evitar proliferao
microbiana. Lquidos muito volteis so raramente utilizados.
Percolao: Tem como caracterstica a extrao exaustiva das substancias ativas. O MV modo
colocado em recipiente cnico ou cilndrico (percolador), de vidro ou de metal, atravs do qual
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feito passar o liquido extrator. O produto obtido denomina-se percolado. uma operao
dinmica, indicada na extrao de substncias farmacologicamente muito ativas, presentes em
pequenas quantidades ou pouco solveis e quando o preo da droga relevante.
Extraes em sistemas abertos
Infuso: A extrao do MV utilizando como solvente gua fervente, durante certo tempo, e
recipiente tapado. aplicvel a partes de vegetais de estrutura mole, as quais devem ser
contundidas, cortadas ou pulverizadas grosseiramente para facilitar a extrao.
Turbolizao: Ver acima.
Decoco: Consiste em manter o MV em contato, durante certo tempo, com um solvente
(normalmente gua) em ebulio. Tem emprego restrito, pois muitas substncias ativas so
alteradas por aquecimento prolongado. Costuma-se empregar para MV duros e de natureza
lenhosa.
Extraes a quente em sistemas fechados
Extrao sob reuxo: Consiste em submeter o MV a extrao com um solvente em ebulio,
acoplado a um condensador, de forma que o solvente evaporado durante o processo seja
recuperado e retorne ao conjunto. Precaues com a termolabilidade de algumas substncias
devem ser observadas.
Extrao em aparelho de Soxhlet: til para extrair slidos com solventes volteis, empregando o
aparelho de Soxhlet. Em cada ciclo o MV entra em contato com solvente renovado, assim
possibilita uma extrao altamente e ciente, empregando uma quantidade reduzida de solvente,
em comparao com outros processos extrativos.
Fracionamento, isolamento e puri cao de substncias
Fracionamento
Para o fracionamento pode-se utilizar diferentes tcnicas:
- a partio lquido lquido, que explora a imiscibilidade de alguns solventes orgnicos com
gua;
- a partio cido-base
- a cromatogra a de coluna, s vezes sob presso (freqentemente dispensvel), que est
fundamentada na capacidade de um eluente (uma mistura de solventes em propores
de nidas) de deslocar, arrastando sucessivamente, substncias, que se adsorvem ao suporte
inerte segundo suas polaridades.
A partio lquido-lquido bastante utilizada para fracionamento de extratos vegetais e implica
uma dissoluo seletiva e distribuio entre as fases de dois solventes imiscveis, visando uma
separao (semipuri cao) das substncias atravs de suas polaridades. A e cincia da
extrao entre as fases depende da a nidade do soluto pelo solvente de extrao, da razo das
fases e do nmero de extraes. Os melhores rendimentos so obtidos quando o volume total
de solvente a ser utilizado na partio dividido em alquotas. A concentrao de cada um dos
componentes em cada fase esta relacionada com o coe ciente de partio ou distribuio
apresentado por cada substncia.
Melhores rendimentos so obtidos quando o volume total de solvente a ser utilizado na partio
dividido em alquotas. Esse fracionamento por partio, que um mtodo de extrao
liquido/liquido, realizado em funil de separao.
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J a partio cido-base acontece por formao de sais com diferenas na solubilidade em

relao as bases ou cidos que lhes deram origem, podendo separar os sais da substancia de
interesse em certas condies. Ex: extrao de alcalides, onde se obtm uma mistura bruta doa
alcalides totais da droga vegetal que posteriormente pode passar por procedimentos de
isolamento e identi cao estrutural de cada alcalides em particular.
A cromatogra a de coluna de uma mistura complexa de substncias qumicas pode fornecer,
em etapas iniciais, fraes semipuri cadas, que separadamente podem ser analisadas quanto a
sua constituio qumica e atividade biolgica. Ento, somente as fraes de interesse so
submetidas a tcnicas de isolamento e identi cao.
Uma vez que se obtm fraes semipuri cadas, os mtodos de partio eliminam uma grande
parte do material indesejado.
O fracionamento de extratos vegetais com objetivos de isolamento de substncias qumicas
pode ser monitorado:
Por ensaios direcionados para avaliao da atividade biolgica
Monitoramento das fraes por cromatogra a (CCD, CLAE/UV, CLAE/EM, CLAE/RMN)
A utilizao da cromatogra a possibilita direcionar as operaes de fracionamento para o
isolamento dos compostos considerados de maior interesse em funo dos dados obtidos.
Pode-se iniciar o fracionamento de um extrato vegetal atravs da partio por solventes
orgnicos de polaridade crescente ou atravs de partio cido-base.
A partio implica uma dissoluo seletiva e distribuio entre as fases de dois solventes
imiscveis, podendo ser aplicado para separao de componentes de uma mistura. A
concentrao de cada um dos componentes em cada fase esta relacionada com o coe ciente
de partio ou distribuio apresentado por cada substancia.
Melhores rendimentos so obtidos quando o volume total de solvente a ser utilizado na particao
dividido em alquotas. Esse fracionamento por partio, que um mtodo de extrao
liquido/liquido, realizado em funil de separao.
J a partio cido-base acontece por formao de sais com diferenas na solubilidade em
relao as bases ou cidos que lhes deram origem, podendo separar os sais da substancia de
interesse em certas condies.
Separao e isolamento (mtodos cromatogr cos)
Basicamente, a metodologia mais amplamente utilizada para isolamento de metabolitos
secundrios a seguinte:
O extrato selecionado dever ser submetido diferentes tcnicas cromatogr cas. A princpio,
geralmente empregada a cromatogra a em coluna aberta (CC), com slica gel como fase
estacionria, onde, dependendo do extrato, a mesma eluda com uma mistura de solventes que
deve ser previamente determinada por cromatogra a em camada delgada (CCD). Outros
suportes cromatogr cos podem ser usados, como alumina, celulose, poliamida e sephadex.
As fraes obtidas devem ser reunidas segundo seu per l cromatogr co, veri cado por CCD.
Em muitos casos, se obtm compostos puros numa nica CC, ou utilizando a cromatogra a
ash60 ou ainda aps uma simples recristalizao da substncia isolada. As fraes reunidas,
se ainda no estiverem puras, devem ser novamente submetidas CC ou, dependendo da
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complexidade da mistura, tcnicas cromatogr cas especiais, como cromatogra a lquida de

alta e cincia (CLAE), cromatogra a de contra-corrente (CCC), etc.
Portanto, os mtodos cromatogr cos so os procedimentos de separao e isolamento mais
amplamente utilizados. Servem, tambm, para ns de identi cao e anlise de misturas e de
substncias isoladas (cromatogra a analtica) alm de isolamento de compostos (cromatogra a
preparativa).
Uma vez isolados os compostos ativos, deve-se proceder a elucidao estrutural dos mesmos.
Uma ferramenta que seria importante para a identi cao rpida e e ciente de misturas,
consiste no uso de cromatogra a gasosa ou cromatogra a lquida de alta e cincia acoplada ao
espectrmetro de massa, onde grande parte dos componentes de uma mistura pode ser
identi cada e quanti cada.
Cromatogra a
A cromatogra a um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao
diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre
duas fases imiscveis, a fase mvel (FM) e a fase estacionria (FE). A grande variedade de
combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de
grande aplicao. A FE pode encontrar-se empacotada em coluna (aberta ou fechada) ou
constituir uma superfcie plana, como na cromatogra a em papel ou CCD.
A cromatogra a pode ser utilizada para a identi cao de compostos, por comparao com
padres previamente existentes, para a puri cao de compostos, separando-se as substncias
indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura.
Cromatogra a lquida
A cromatogra a lquida em coluna uma das tcnicas mais utilizadas para separao ou
isolamento de constituintes de extratos vegetais. bastante verstil, uma vez que se podem
utilizar colunas de diferentes tipos e dimenses. Pode ser realizada em colunas de vidro, sob
presso atmosfrica, mas tambm utilizando equipamentos espec cos que permitem trabalhar
com presses maiores, aumentando a velocidade e a e cincia do processo de separao.
A cromatogra a lquida em coluna apresenta uma importante subdiviso: a cromatogra a lquida
clssica (CLC), na qual a fase mvel arrastada atravs da coluna apenas pela fora da
gravidade, e a cromatogra a lquida de alta e cincia (CLAE), na qual se utilizam fases
estacionrias de partculas menores, sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso
para a eluio da fase mvel.
A cromatogra a liquida divide-se em quatro modalidades, de acordo com o processo no qual se
baseia a separao dos componentes da mistura a ser analisada:
Cromatogra a de partio: Separao com base nos coe cientes de partio entre dois
solventes imiscveis que constituem as fases: mvel e estacionria.
Cromatogra a de adsoro: Adsoro dos componentes de uma soluo sobre a FE solida
constituda por partculas nas de adsorventes polares ou apolares. O componente que for mais
fortemente atrado pelo adsorvente ser deslocado pela FM de forma mais lenta.
Cromatogra a de troca inica: Aplicada na separao de substancias contendo grupos
ionizveis, como aminocidos, alcalides. Baseia-se no intercambio de ons entre FM e resinas
contendo grupos funcionais do tipo sulfnico ou amnio quaternrio.
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Cromatogra a de excluso ou de ltrao molecular: Baseia-se no tamanho das molculas do

soluto que passa atravs da FE, constituda por um gel poroso. As molculas maiores no
conseguem penetrar nos poros e so arrastadas pela FM, enquanto as molculas de menor
tamanho, capazes de entrar nos poros da FE so retidas por mais tempo no interior da coluna.
Utilizam-se gis derivados do dextrano (ex: Sephadex).
Nessas categorias acima se enquadram as vrias tcnicas de cromatogra a lquida que se
diferenciam entre si pelos equipamentos e tambm pelo tipo de material usado como fase
estacionria.
Cromatogra a em Coluna Cromatogra a lquida clssica
Esta tcnica muito utilizada para isolamento de produtos naturais. As fases estacionrias mais
utilizadas so slica e alumina, entretanto estes adsorventes podem servir simplesmente como
suporte para uma fase estacionria lquida. Fases estacionrias slidas levam separao por
adsoro e fases estacionrias lquidas por partio. Suportes quimicamente modi cados
tambm tm sido usados, sendo o processo de separao misto neste caso.
Esses suportes so acondicionados em tubos cilndricos geralmente de vidro, de dimetros
variados, os quais possuem uma torneira em sua extremidade inferior.
Os adsorventes possuem partculas na faixa de 60-230 mesh, de modo a possibilitar um uxo
razovel do solvente atravs da coluna. O uso de slica de partcula menor (230-400 mesh) como
adsorvente para essas colunas requer a utilizao de um sistema de bombeamento para o
empacotamento e eluio, sendo conhecido como Cromatogra a Flash.
A principal etapa ao se utilizar essa tcnica o empacotamento, o qual, entre outros fatores,
de nir a e cincia da separao. Enquanto a alumina empacotada em sua forma original, a
slica deve s-lo na forma de suspenso.
coluna adiciona-se uma pequena quantidade de solvente e deposita-se na sua extremidade
inferior um chumao de algodo com espessura de aproximadamente 0,5 cm para impedir a
passagem de partculas da fase estacionria. A adio de slica deve ser feita com a torneira
semi-aberta. O adsorvente adicionado lentamente coluna xada na posio vertical, batendose continuamente ao longo da mesma para que todo o ar seja expulso, de modo a se obter uma
compactao uniforme. A existncia de ar entre as partculas leva formao de canais na
coluna, os quais alargam as bandas eludas.
Nunca se deve permitir que o nvel do solvente desa abaixo do nvel do adsorvente, o que
poderia acarretar rachaduras, comprometendo a e cincia da coluna.
Aps o empacotamento conveniente que se passe certa quantidade do eluente (duas a trs
vezes o volume da coluna) a ser utilizado atravs da coluna antes da introduo da amostra.
Esta adicionada coluna com o auxlio de uma pipeta no momento em que o nvel do eluente
esteja o mais prximo possvel do adsorvente. Esse procedimento ameniza o alargamento das
bandas a serem eludas. Tendo a amostra penetrado no adsorvente, o eluente ento
adicionado cuidadosa e continuamente.
A escolha do eluente segue os princpios discutidos em CCD, mas neste caso ele pode ser
mudado durante o processo cromatogr co. Se, por exemplo, a amostra constituda por duas
substncias, uma apolar e outra polar, utiliza-se primeiramente um eluente apolar e em seguida
um eluente polar.
O volume das fraes a serem recolhidas funo da quantidade de amostra e do grau de
di culdade da separao. Para anlise das mesmas, recorre-se a alguma tcnica auxiliar,
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usualmente CCD.
Em vista de que geralmente algumas partculas da amostra permanecem irreversivelmente
adsorvidas fase estacionria, a cada separao necessrio um tratamento para a
recuperao do adsorvente.
Cromatogra a em coluna - Cromatogra a Lquida de Alta E cincia
A CLAE utiliza colunas contendo FE de partculas extremamente nas (m), esfricas ou
irregulares, homogneas e densamente compactadas e requer uma alta presso e uxo livre de
pulsao para que a FM ua a uma velocidade razovel atravs da coluna, o que torna a tcnica
mais cara. possvel trabalhar com presses inferiores, em equipamentos mais simples, como
na cromatogra a lquida a vcuo ou ainda cromatogra a lquida de mdia presso.
FE mais comumente utilizadas:
- Substncias inorgnicas como gis de slica e alumina (xido de alumnio): compostos
lipoflicos
- Materiais orgnicos como celulose, poliamida e gis de dextrano: substncias hidroflicas como
aminocidos e acares.
- Materiais modi cados quimicamente, como a celulose acetilada ou gel de slica substitudos
por cadeias alifticas de C8 a C18.
As fases mveis utilizadas em CLAE devem possuir alto grau de pureza e estar livres de oxignio
ou outros gases dissolvidos, sendo ltradas e desgasei cadas antes do uso.
A bomba deve proporcionar ao sistema vazo contnua sem pulsos com alta reprodutibilidade,
possibilitando a eluio da fase mvel a um uxo adequado.
As vlvulas de injeo usadas possuem uma ala de amostragem para a introduo da amostra
com uma seringa e duas posies, uma para o preenchimento da ala e outra para sua liberao
para a coluna. Existem alas de diversos volumes, sendo utilizadas geralmente alas na faixa de
5-50 mL para injees analticas e 0,5-2 mL para preparativas.
As colunas utilizadas em CLAE so geralmente de ao inoxidvel, com dimetro interno de cerca
de 0,45 cm para separaes analticas e na faixa de 2,2 cm para preparativas. O comprimento
varivel, sendo comuns colunas analticas de 10-25 cm e preparativas em torno de 25-30 cm.
Essas colunas so reaproveitveis, sendo empacotadas com suportes de alta resoluo, no
sendo necessria sua regenerao aps cada separao.
O detector mais utilizado para separaes por CLAE o detector de ultravioleta simples ou DAD,
sendo tambm empregados detectores de uorescncia, de ndice de refrao, e eletroqumicos,
entre outros. Detectores de polarimetria para CLAE diferenciam compostos quirais, atravs da
rotao de seus estereoismeros frente luz plano-polarizada.
O registro de dados pode ser feito atravs de um registrador, um integrador ou um
microcomputador. A versatilidade desta tcnica reside no grande nmero de fases estacionrias
existentes, as quais possibilitam anlises e separaes de uma ampla gama de compostos com
alta e cincia.
Tem sido utilizada em vrias reas da cincia, no acompanhamento de snteses, em anlises de
pesticidas, ferormnios, no isolamento de produtos naturais e sintticos e na produo e
controle de qualidade de medicamentos, dentre tantas outras aplicaes.
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As separaes em CLAE podem ser por adsoro, partio ou ambos. O suporte mais
comumente utilizado a slica. O uso de fases estacionrias lquidas adsorvidas a um suporte
no tem grande aplicao devido perda de fase estacionria, mas o uso de suportes
modi cados, os quais foram desenvolvidos como conseqncia do problema acima, possibilita a
produo de uma imensa variedade de colunas com diferentes propriedades e tipos de
seletividade. As fases assim obtidas so chamadas de quimicamente ligadas.
Essas fases, dependendo da modi cao feita ao suporte, podem atuar no modo normal,
reverso ou ambos. Na cromatogra a em fase normal, a fase estacionria mais polar que a fase
mvel, e em fase reversa, a fase mvel mais polar.
Separaes analticas so predominantemente realizadas em fase reversa, sendo a fase C18
(octadecilslica) a mais usada, ao passo que so preferidas fases que atuem no modo normal
para ns preparativos. Entre as fases quimicamente ligadas, merecido destaque deve ser dado
s fases estacionrias quirais, as quais possibilitam a separao direta de enantimeros. Para
tanto, necessria a presena de um seletor quiral como parte integrante da fase estacionria.
Cromatogra a lquida - Cromatogra a em contra-corrente (CCC)
uma tcnica de cromatogra a de partio lquido-lquido, cuja fase estacionria est retida no
aparelho pela fora gravitacional ou pela fora centrfuga sem a utilizao de uma matriz porosa
adsortiva, um dos lquidos ca parado e o outro segue movendo-se. A distribuio do soluto em
cada uma das fases determinada atravs de seus respectivos coe cientes de partio entre
dois lquidos imiscveis, ou seja, que no se misturam. Essa tcnica amplamente utilizada no
fracionamento de extratos vegetais pela e cincia na separao de vrias classes de produtos
naturais. A ausncia de fase estacionaria solida elimina certas inconvenincias, como a
interao da amostra com a matriz acarretando perda de material. Essa tcnica cromatogr ca
muito verstil por apresentar uma ampla faixa de separao (Kd = 0,2 a 3,5), alm de ser
utilizada na separao de substncias de baixa a alta polaridade. uma tcnica preparativa,
possibilitando a utilizao de grande quantidade de amostra (na escala de miligramas a gramas
de material e mais modernamente, na escala de kilogramas) sem a necessidade de prpuri caes. uma tcnica econmica, pois o consumo de solventes orgnicos txicos para
quem os manipula baixo.
Cromatogra a planar - Cromatogra a em Camada Delgada
A cromatogra a em camada delgada (CCD) uma tcnica de adsoro lquidoslido. Nesse
caso, a separao se d pela diferena de a nidade dos componentes de uma mistura pela fase
estacionria.
Por ser um mtodo simples, rpido, visual e econmico, a CCD a tcnica predominantemente
escolhida para a identi cao de fraes coletadas em cromatogra a lquida clssica, sendo
tambm muito utilizada para a puri cao de substncias.
A CCD amplamente utilizada para anlise, tanto de extratos vegetais brutos quanto para avaliar
o resultado de um processo de separao. Eventualmente pode ser utilizada com ns
preparativos, usando suportes de maior espessura, que comportam quantidade maior de
amostra. Podem-se escolher diversos suportes, tanto de fase normal como reversa, dependendo
da polaridade dos componentes da amostra.
As placas de CCD podem ser confeccionadas no prprio laboratrio, atravs de um dispositivo
que facilita o espalhamento uniforme sobre as placas de vidro, da suspenso aquosa do suporte.
bastante econmico, mas requer certa pratica, pode ser muito satisfatrio em certas anlises
de rotina, utilizando suportes comuns como gel de slica.
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H disponvel grande variedade de placas cromatogr cas preparadas industrialmente,

padronizadas quanto ao tamanho de partculas do suporte, a espessura da camada a ativao
do suporte, possibilitando resultados mais reprodutveis do que com as placas preparadas
manualmente. Podem conter indicadores uorescentes em 254 nm (F254), sobre placa de vidro,
celulide ou alumnio. As placas de celulide e alumnio alem de inquebrveis possibilitam que se
recortem as placas em tamanho menor, se desejado.
O desenvolvimento da CCD ocorre em cuba fechada, saturada com FM. A aplicao da amostra
feita a partir de solues relativamente concentradas, com capilares, a uma distancia
adequada das bordas laterais e inferior, bem como das demais amostras. A placa deixada na
cuba, onde o solvente ir subir por capilaridade, at que ele esteja a aproximadamente 2 cm da
extremidade superior. Ao ascender, o solvente ir arrastar mais os compostos menos adsorvidos
na fase estacionria, separando-os dos mais adsorvidos. A linha de chegada da fase mvel deve
ser marcada e a placa deve estar seca. Como a maioria dos compostos orgnicos incolor, fazse necessria a utilizao de um processo de revelao para que se possa analisar o resultado.
O parmetro mais importante a ser considerado em CCD o fator de reteno (Rf), o qual a
razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase
mvel.
Na CCD preparativa pode-se utilizar maior numero de placas com a mesma amostra, que
aplicada em linha ou barra.
A seleo da fase mvel, que geralmente constituda por um ou mais solventes, no tarefa
simples. No entanto, uma vez que as fases estacionrias mais usadas so extremamente
polares, no devem ser utilizados solventes pouco polares, que no removeriam os compostos
do ponto de aplicao, nem solventes muito polares, capazes de arrastar os componentes da
amostra at o topo da placa. Em vista disso, melhores resultados so obtidos com misturas de
solventes, de modo a se obter uma polaridade mdia em relao polaridade dos componentes
da amostra.
A Revelao/visualizao pode ser por mtodos fsicos ou qumicos. Compostos UV-ativos, que
aparecem como manchas escuras em fundo uorescente, se a placa F254 for iluminada com
lmpada de luz ultravioleta (Mtodo fsico). Quase todas as classes de substncias orgnicas
(exceto alcanos e haletos alifticos) reagem com iodo formando complexos. A formao desses
complexos reversvel. As placas tambm podem ser borrifadas com outros reveladores (cido
sulfrico/metanol, vanilina sulfrica, tricloreto de antimnio, permanganato de potssio/cido
sulfrico, etc.) (Mtodo qumico).
Cromatogra a Gasosa
No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatogra a gasosa
(CG) e por cromatogra a gasosa de alta resoluo (CGAR). A diferena entre os dois tipos est
na coluna. Enquanto na CGAR so utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria
um lme depositado na mesma, a CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a
fase estacionria.
A CG til para separar compostos a partir de misturas de compostos volteis. Atravs de
reaes qumicas com derivados do silano, como o trimetilsilano, substncias no volteis
podem ser transformadas em produtos de baixo ponto de ebulio. possvel o acoplamento
com EM (CG/EM) que til na separao e identi cao de estruturas, como por exemplo, de
leos volteis.
Alm de possuir um alto poder de resoluo, muito atrativa devido possibilidade de deteco
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em escala de nano a picogramas (10-9-10-12 g). A grande limitao deste mtodo a

necessidade de que a amostra seja voltil ou estvel termicamente, embora amostras no
volteis ou instveis possam ser derivadas quimicamente. Pode ser utilizada para separaes
preparativas apenas na faixa de microgramas a miligramas, no sendo muito empregada para
esse m.
Colunas de CGAR so maiores em comprimento, menores em dimetro, possuem a fase lquida
como um lme aplicado diretamente s paredes do tubo da coluna e so mais e cientes. Essas
colunas so tubos longos de metais como ao ou cobre, vidro ou teon.
Colunas de CG tm dimetro de cerca de 3 mm e comprimento em torno de 3 m, ao passo que
colunas de CGAR tm dimetro na faixa de 0,15-0,75 mm e comprimentos variados, usualmente
entre 10 m e 100 m.
Os gases utilizados como fase mvel devem ter alta pureza e ser inertes em relao fase
estacionria. Hidrognio, nitrognio e hlio so os mais usados.
A injeo da amostra feita atravs de microsseringas ou vlvulas semelhantes s utilizadas em
CLAE.
Os detectores de maior aplicao so o detector por ionizao em chama e o detector de
condutividade trmica. Os dados podem ser obtidos atravs de um registrador potenciomtrico,
um integrador ou um microcomputador, sendo as amostras identi cadas por seus tempos de
reteno.
Como a temperatura um fator extremamente importante, grande parte das anlises por
cromatogra a gasosa feita com programao de temperatura, obtendo-se melhor separao
com picos mais simtricos em menor tempo.
A escolha da fase estacionria de fundamental importncia, sendo ela o componente crtico da
coluna. As fases estacionrias podem ser polares, apolares ou quirais. Fases polares so
baseadas em polietileno glicol puro ou modi cado e apolares em metilsiloxano puro ou
modi cado. As fases quirais mais comuns so compostas de ciclodextrinas.
Atualmente, espectrmetros de massa tm sido acoplados a equipamentos de cromatogra a
gasosa, possibilitando a identi cao imediata das substncias presentes na amostra.
Elucidao estrutural
Entre os mtodos de analise para determinao estrutural utilizados atualmente esto: a
espectrometria de massas, a espectroscopia no UV, no visvel e no infravermelho, a ressonncia
magntica nuclear de prton e carbono 13.
A interpretao de cada um desses espectros pode fornecer diferentes informaes qualitativas
e quantitativas a respeito da estrutura da substncia. Geralmente, com o conjunto de dados
espectrais o pesquisador consegue elucidar completamente a estrutura de uma substancia
desconhecida. Servem tambm como instrumentos importantes para a avaliao de qualidade
de toterpicos, tanto do ponto de vista qualitativo como quantitativo.
O espectro de absoro se uma substancia no UV indica a presena de certos grupos funcionais,
bem como a posio dos constituintes no esqueleto da molcula. Assim, por exemplo, os
espectros de UV de avonides proporcionam informaes obre a presena e a posio de
grupamentos hidroxila no sistema de anis, ao mesmo tempo que possibilitam a diferenciao
entre os vrios tipos de avonides.
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O espectro de IV de uma substncia orgnica corresponde ao conjunto de bandas de absoro

apresentadas pela amostra submetida a radiao IV e estas bandas correspondem as
mudanas na energia vibracional dos compostos orgnicos. A energia seletivamente absorvida
da radiao IV provoca alteraes transitrias nas ligaes interatmicas, que podem sofrer
estiramentos ou deformaes nos ngulos de ligao. As freqncias em que ocorrem as
vibraes dependem da natureza das ligaes em particular, e afetadas tambm pela vizinhana
qumica e pela molcula como um todo. Se um espectro de IV de uma substancia desconhecida
for sobreponvel ao de uma amostra autentica conhecida isso pode servir como uma prova de
identidade.
O espectro de massas (EM) pode fornecer importantes informaes relacionadas com a
estrutura, como massa molecular e padres de fragmentao. O peso molecular estabelece a
formula molecular da substancia, e o padro de fragmentao pode ajudar a caracterizar a
presena, bem como a localizao de certos grupos funcionais e cadeias laterais. O
espectrmetro de massas pode ser acoplado ao CLAE e ao CG, que permitem tanto a
identi cao quanto a quanti cao de componentes de baixo peso molecular, mesmo em
misturas complexas.
A RMN extremamente til na determinao estrutural de compostos orgnicos, contribuindo
para o estabelecimento do esqueleto da molcula. Submete-se a amostra a um campo
magntico externo, de forma que determinados ncleos que apresentam um momento
magntico nuclear (ncleos com numero de massa impar como 1H, 13C, 31P) podem entrar em
ressonncia com a radiofreqncia aplicada, absorvendo energia eletromagntica em
freqncias caractersticas para cada ncleo, conforme sua vizinhana qumica. importante
para a elucidao estrutural de praticamente todas as classes de produtos naturais, incluindo
metabolitos secundrios vegetais.
Espectros de RMN de 1H e 13C so os mais utilizados e sua interpretao permite caracterizar o
numero e o tipo de tomos de H e C, em funo da localizao e do desdobramento dos sinais
correspondentes a absoro de energia eletromagntica. A grande variedade de tcnicas
disponveis de RMN (COSY, NOESY, HETCOR, HMBC, INEPT, INADEQUATE, COLOC, etc) permite
identi car a proximidade espacial ou mesmo a conectividade de alguns tomos em particular,
auxiliando, dessa maneira, na montagem da molcula.
A determinao da atividade ptica e a cristalogra a por raios-X podem ser necessrias para o
estabelecimento da estereoqumica de molculas apresentando centros de assimetria.
O conjunto de informaes obtidas atravs da interpretao de diferentes espectros que se
consegue estabelecer, de forma inequvoca, as estruturas de molculas desconhecidas.
PARTE EXPERIMENTAL: PRINCIPAIS CUIDADOS E DIFICULDADES
Um dos fatores importantes no estudo de plantas consiste na experincia dos pesquisadores
envolvidos. Muitas vezes, a falta de experincia leva a erros que podem tanto comprometer os
resultados experimentais como dispender maior tempo e recursos e no atingir os objetivos
almejados. Assim, pode-se enumerar alguns cuidados que devem ser tomados em laboratrio
quando se busca obter compostos bioativos:
1) Seleo do material vegetal: Um dos cuidados que deve ser levado em considerao envolve
informaes sobre possveis efeitos txicos da planta a ser selecionada. Plantas que tenham o
nome popular de mata-boi, mata-cavalo, etc, devem ser vistas com restries, j que a presena
de constituintes txicos pode comprometer todo o estudo realizado. A planta a ser investigada
deve ser classi cada com segurana e a coleta deve ser feita com muito cuidado para no
serem agregadas outras espcies diferentes. Tambm deve ser levada em considerao a
quantidade de planta que viceja no local de coleta, para que os estudos no quem prejudicados.
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A secagem, em estufa (40 C) ou sombra temperatura ambiente deve ser procedida logo
aps a coleta para evitar a proliferao de fungos. Caso se deseje armazenar o material vegetal,
o mesmo pode ser acondicionado em freezer. Na preparao dos extratos, a planta deve estar
completamente fresca ou totalmente seca para de nir com melhor exatido o rendimento tanto
da massa bruta como dos constituintes qumicos.
2) Solvente: A escolha do solvente de fundamental importncia tanto para a obteno de
extratos como para utiliz-lo como eluente em cromatogra a em coluna. Impurezas, como
ftalatos, usados como estabilizantes de plsticos, podem ser transferidas para o extrato e
tambm di cultar o isolamento dos constituintes naturais. Outro aspecto que deve ser veri cado
a presena de gua, que inuencia signi cativamente nas separaes cromatogr cas. A
formao de artefatos na preparao de extratos muito comum. Isto ocorre, geralmente,
quando se aquece demais determinado extrato ou se usa um solvente inadequado para
extrao. Por exemplo, o clorofrmio, que geralmente contm HCl, quando usado para extrao,
pode fornecer produtos no naturais formados pela ao do cido. A acetona tambm deve ser
usada com restrio, j que pode reagir com alguns compostos que contm o grupo amino.
3) Testes biolgicos: A avaliao dos efeitos biolgicos tanto in vitrocomo in vivo depende de
vrios fatores, tanto estruturais quanto experimentais. essencial que a Instituio de pesquisa
possua um bom biotrio e um laboratrio exclusivo para a realizao dos experimentos, e a
escolha dos modelos deve ser de maneira que possam ser reproduzidos corretamente e
evitados os resultados falso-positivos. Os experimentos devem ser repetidos vrias vezes para
se obter dados estatsticos que comprovem a e ccia do material testado.
Referncias bibliogr cas
Barbosa WLR, Quignard E, Tavares ICC, Pinto LN, Oliveira FQ, Oliveira RM. Manual para anlise
toqumica e cromatogr ca de extratos vegetais. Universidade Federal Do Par. Revista
Cient ca da UFPA http://www.ufpa.br/rcienti ca Vol 4, 2004.
Cechinel Filho V, Yunes RA. Estratgias para a obteno de compostos farmacologicamente
ativos a partir de plantas medicinais. Conceitos sobre modi cao estrutural para otimizao da
atividade. Qumica Nova, 21(1), 99-105, 1998.
Degani ALG, Cass QC, Vieira PC. Cromatogra a um breve ensaio. Qumica Nova na Escola,
Cromatogra a n 7, 1998.
Simes CMO, Schenkel EP, Gosmam G, Mello JCP, Mentz LA, Petrovick PR. Farmacognosia: da
planta ao medicamento. 6 ed. Porto Alegre: Editora da UFRGS; 2007.
Artigo por Traudi Klein - quarta-feira, 14 de maio de 2014.
Esta apresentao reete a opinio pessoal do autor sobre o tema, podendo no reetir a posio o cial do Portal
Educao.
COLUNISTA
Traudi Klein
Traudi Klein
Farmacutica Industrial pela UEM (2004), especialista em Biotecnologia com enfase em meio
ambiente e sade (2005), mestre em Cincias Farmacuticas pela UNESP (2007) e doutora
pela UEM (2011). Experincia em farmacotecnia, tecnologia farmacutica e de toterpicos,
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farmacognosia, extratos vegetais, cromatogra a lquida de alta e cincia. Atualmente

farmacutica no LAPMED/UEPG.
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As plantas tm sido uma rica fonte para obteno

- Abundncia muito baixa (inferior a 1% do C total).

Importncia da identi cao do material vegetal

Carbonato de clciocido actico + HCl

Reaes qumicas de caracterizao: a caracterizao dos principais grupos de metablitos

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