Anlisis cuantitativo del metabolito de acetaminofen en orina.

Se tomaron de 2 individuos muestras de orina, los cuales haban

ingerido acetaminofen (Innovador y Genrico) las muestras fueron
tomadas a las 0, 4, 8,16, y 24 horas.

Reactivos utilizados en la prctica:

Hidrxido de amonio
Acido clorhdrico
Fenol cristal
Preparacin de solucin Fenolica.
Se Pesaron 4 g de fenol cristal se colocaron en un tubo de ensayo
y se aadi 0.32 ml de agua destilada, se calent a Bao de Maria
para diluir las partculas, luego de calentado se tomaron 2.3 ml de la
solucin y se coloco en un matraz de 50 ml y se procedi aforar.
Preparacin de la solucin madre y toma de alicuotas.
Se pesaron 40.3mg de acetaminofen se colocaron en un matraz
volumtrico y se aforo a 200ml.
Luego con una bureta se tomaron alcuotas de 2.5ml, 5.0ml, 10.0ml,
20,0ml, 30.0ml, 40.0ml 50.0ml en un matraz y se aforaron a 100ml.
De estas dilucines se coloco en un tubo de ensayo 1 ml de cada
dilucin se aadio 0.2 ml de Hcl concentrado, se mezclo en vortex
por 10 segundos y se calento a bao maria por 35 min. Luego de
enfriar los tubos se adiciono 2.5ml de hidroxido de amonio
concentrado y se agito por 10 segundos en vortex. Se Adiciono
2ml de la solucin fenolica, se agito en voltex y dejo reposar por 30
minutos protegido de la luz.

Muestra.
Se tomo con una pipeta 3ml de las muestras de orina y se aforaron
a 250ml.
De las diluciones se tomaron 3 ml de solucin en tubos de ensayos,
se le aadi 0.2 ml de Hcl concentrado y se mezclo por 10 Seg en
voltex se calento a bao maria por 35 minutos (Para acelerar la
reaccin hidrolisis). Luego de enfriar los tubos se adiciono 2.5ml de
hidroxido de amonio concentrado y se agito por 10 segundos en
vortex. Se Adiciono 2ml de la solucin fenolica, se agito en voltex y
dejo reposar por 30 minutos protegido de la luz.
Se ley en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 640 nm.
El blanco de orina (tomado antes de ingerir el acetaminofen) se ley
como muestra y dicho resultado del rango observado se le resto a
los valores de las absorbancias de las dems muestras.

Aplicacin de los reactivos en la prctica.

Acido clorhdrico
Se calienta a bao maria y se adiciona acido clorhdrico con la finalidad de
producir una hidrlisis acida del acetaminofen y sus metabolitos para obtener
de esta manera el p-aminofenol.
Hidrxido de amonio
Se le agrega el hidrxido de amonio para que se forme el grupo Azo (N=N) de
esta manera al agregar la solucin fenolica y favorecida por un pH dbilmente
bsico medio en el cual los fenoles se disocian dejando libre el ion fenoxido, un
componente que reacciona con el grupo Azo (N=N) formando un Diazobenceno
(tinte azoico) de un color azul estable que se mide espectrofotomtricamente.