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Del Libro de los proverbios.

PRACTICA No. 3
METODOS PARA EL AISLAMIENTO DE BACTERIAS EN CULTIVO PURO
Objetivos.
1. Familiarizar al estudiante con los principales tipos de siembra.
2. Lograr el aislamiento de las colonias en cultivo puro.
Marco terico
En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrados en
poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus propiedades, es
necesario separar unos de otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axnicos o
puros. Un cultivo axnico o puro es aquel que contiene un slo tipo de microorganismo y que procede
generalmente de una sola clula; el crecimiento de sta origina, en medio slido, una masa de clulas
fcilmente visible que recibe el nombre de colonia.
Para obtener cultivos axnicos o puros a partir de una poblacin microbiana mixta, se utilizan las
denominadas tcnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el siglo XIX. En un principio,
Lister utiliz diluciones seriadas en medio lquido con esta finalidad, pero la presencia de
contaminacin de microorganismos no deseados, dificult el aislamiento. La escuela de Robert Koch
introdujo los medios slidos, complementados con agar y las placas de Petri en Bacteriologa,
permitiendo as la separacin fsica de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el
interior del mismo. El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas.
Medios de Cultivo bacteriano
Los medios de cultivo son ambientes artificiales compuestos por soluciones de nutrientes en los que es
posible el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. Sern ms adecuados en cuanto ms se
parezcan a las condiciones naturales en las que las bacterias viven. Son una de las herramientas ms
valiosas en el diagnstico de la microbiologa mdica.
Los medio slidos son hechos a base de agar-agar que es una sustancia inerte obtenida de las algas
marinas, no aporta nutrientes nicamente se utiliza para dar la consistencia slida al medio de cultivo.
Permite la obtencin de colonias separadas y la visualizacin de las diferencias macroscpicas entre
una cepa y otra. Ej: agar nutritivo, Agar Mac conkey, agar sangre.
A los medios lquidos se les conoce como caldos.
Los medios de cultivo se pueden clasificar por:
Consistencia

Origen

composicin

Otros

Lquidos

Naturales

Comunes

Selectivos

Slidos

Sintticos

Enriquecidos

Especiales

Semislidos

Semisintticos

TIPOS DE SIEMBRA O TCNICAS DE AISLAMIENTO

Biqumicos

1. Siembra por agotamiento o cuatro llamas.

Se toma la caja de petri en la mano izquierda ligeramente inclinada; con la derecha el asa quemada y
enfriada se recoge el material de cultivo (muestra) y se trazan estras paralelas hasta la tercera parte
de la caja; se quema el asa, se enfran, se gira la caja y se hacen estras en la misma forma, se quema
y enfra nuevamente el asa y se hace girar la caja, se trazan estras perpendiculares a las anteriores
pero sin tocar las primeras.

2. Siembra de estras o zig- zag.

Deslizar el asa sobra la superficie del medio haciendo surcos o estras.

3. Siembra por puncin o picadura.

Se realiza con el asa recta generalmente en tubos de medios
slidos o semislidos; se introduce el asa cargada con la muestra por el centro de la superficie hasta
tocar el fondo.
4. Siembra mixta.
Generalmente usada para medios inclinados.
Se realiza
siembra por puncin hasta el Fondo del tubo y luego se desliza
sobre la superficie inclinada haciendo zig-zag.

5. Siembra en masa.
Puede hacerse con el medio aun lquido (45 C) mezclando la muestra con este,
de forma que las columnas se desarrollaran en todo el medio y no solo sobre la
superficie.
En caso de medios slidos se extiende la muestra sobre toda la superficie del agar con ayuda de una
pipeta o un escobilln estril
Con este mtodo se obtienen colonias aisladas si previamente se hace una dilucin conveniente del
material.
6. Siembra en medio lquido.
Para ello se pueden usar pipetas estriles o asa; en el primer caso unas pocas gotas (2-3) son
suficientes para el desarrollo bacteriano; si se practica con un asa, una o dos asadas son suficiente.
7. Siembra para urocultivo

Inoculacin primaria

Conteo de colonias

Estrias en ngulos rectos

Estrias para producir un

crecimiento en enrejado.

Cualquiera que sea el tipo de siembra se deben seguir las siguientes instrucciones:
- El asa de cultivo o aguja de siembra debe calentarse al rojo sobre la llama inmediatamente antes y
despus de hacer la transferencia. Se mantiene la aguja abajo sobre la llama para calentar la totalidad
de la aguja y la parte inferior del mango
- trabajar cerca al mechero.
- Rotular adecuadamente las cajas y tubos

- Llevar a incubacin los cultivos durante un periodo de 24 horas a temperatura de 37C. Incubar las
cajas en posicin invertida (con el medio hacia arriba) para evitar la condensacin del agua sobre el
medio. En esa posicin se debe incubar.
Procedimiento:
Cada grupo de trabajo traer una muestra (orina, leche, etc) ojal patolgica con sus correspondientes
anamnsicos, a fin de ser sembrado en los medios de cultivo, para posteriormente hacer el estudio e
identificacin de las colonias aisladas.
Realizar los diferentes tipos de siembra. Sembrar la muestra utilizando las diferentes tcnicas
demostradas.
Realizar el INFORME
Cuestionario
1.
Anotar que muestra sembr y en que medio
2. Qu importancia tiene trabajar con cultivos puros
3. Qu es una colonia bacteriana?
3. Donde se cultivan las bacterias en el laboratorio? Realice la clasificacin.
4. a.Qu el el agar. b. Mencione tres medios que contengan agar.
5. Cmo sabe Ud. Que un cultivo bacteriano corresponde a una sola especie de bacteria?
6. Con que fin los cultivos bacterianos se incuban a 37C?
7. Por qu razn los cultivos bacterianos se deben leer a los 24h de sembrados?.
8. Mencione dos medios lquidos para crecimiento bacteriano.
9. Mencione dos medios semislidos.
10. Para qu sirve el agar sangre.